Amplificación de DNA: PCR (Polymerase Chain Reaction) : in Vitro
Amplificación de DNA: PCR (Polymerase Chain Reaction) : in Vitro
Amplificación de DNA: PCR (Polymerase Chain Reaction) : in Vitro
Laboratorio de Gentica
BIOL 3300L
Objetivos
Conocer:
La PCR se realiza
en un Thermo
Cycler
Termociclador.
Es una mquina
que calienta y enfra
la reaccin en
periodos cortos de
tiempo.
El proceso de PCR incluye 3 pasos
bsicos que se repiten 25 veces o ms:
1. Desnaturalizacin: Consiste en separar la doble hebra de
DNA y convertirla en hebra sencilla.
-Tpicamente se usa una temperatura de 95C - 97C, por 15 a
40 segundos el tiempo depende del tamao del genoma-
2. Apareamiento o anneling:
Los cebadores primers previamente diseados,
reaccionan con la hebra sencilla de DNA y se pegan
en lugares especficos por complementariedad de
bases. Para esto, se baja la temperatura -ej: 55C
por 30 segundos-. La temperatura y el tiempo
puede variar entre cebadores segn sea el caso.
3. Polimerizacin o Extensin.
Una Polimerasa de DNA extiende los primers, en el
espacio comprendido entre ambos primers, y coloca
dinucleotidos trifosfatados (dNTPs) de 5a 3 leyendo el
DNA de 3a 5. De estas forma sintetiza la secuencia
complementaria de las hebras de DNA molde
Direccin PCR
http://www.sumanasinc.com/webcontent/anisa
mples/molecularbiology/pcr.html
Direccin de secuenciacin
http://smcg.cifn.unam.mx/enp-unam/03-
EstructuraDelGenoma/animaciones/secuenci
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