UNIVERSIDAD DE CARABOBO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE BIOANÁLISIS
SEDE ARAGUA
EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE CEFALINA
PARA LA DETERMINACIÓN DE TIEMPO
PARCIAL DE TROMBOPLASTINA

Realizado por:
Tu t o r e s C i e n t í f i c o :
B r. P u m e r o G r e i l y
Prof. Freddy Albarrán
B r. R a m i r e z D a n i e l a
Prof. Girolamo Barrera
Tu t o r a M e t o d o l ó g i c a :
P r o f . Ya s m i n R u b i o P a l i s
La Morita, enero 2018
 PLANTEAMIENTO DEL
PROBLEMA
Hay en la sangre un
COAGULACIÓN conjunto de células y
proteínas que interactúan
con la pared vascular
SANGUINEA

• Defensa
COÁGULO Actúa como • Integridad
Tapón HEMOSTASIA • Evitar la pérdida
de sangre

J:Jaime y D.Almaguer.La coagulación sanguínea. Hematología La sangre y sus enfermedades. 2da ed.
 PLANTEAMIENTO DEL
PROBLEMA
LA
TROMBOPLASTINA
CEFALINA
La
Glicoproteína de membrana
fosfatidiletanolamina
(PE) o cefalina es un
fosfolípido compuesto TIEMPO PARCIAL DE
por etanolamina, TROMBOPLASTINA
glicerol, ácidos grasos (PTT)
y ácido fosfórico.
• Tiempo que tarda en formarse un coágulo
en una muestra sanguínea (32-46
segundos)

• Detección de anormalidades en la vía

intrínseca

S,B.Mckenzie.Trastornos de la hemostasia secundaria. Hematología Clínica 2ª. Ed. Manual

 JUSTIFICACIÓN

Necesidad de obtener un reactivo propio

Procesamiento de reactivos para pruebas de

hemostasia

Independencia en suministros
en el laboratorio de hematología de la UCNA

Reducción de costos en reactivos de casas

comerciales
 OBJETIVO
GENERAL
Estudiar la cefalina obtenida a partir de cerebro de conejo en la
activación de la vía intrínseca de la coagulación sanguínea.

OBJETIVOS
ESPECIFICOS
• Obtener cefalina a partir del cerebro de conejo.
 
• Evaluar la actividad biológica de la cefalina obtenida de cerebro de conejo en
la activación de la vía intrínseca de la coagulación sanguínea.

• Comparar la actividad biológica de la cefalina obtenida a partir de cerebro de

conejo con otra cefalina de uso comercial.
 BASES
TEORICAS
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

HEMOSTASIA
Es un conjunto de procesos que previenen la
hemorragia, y ayudan a mantener la integridad
vascular , además restablece la circulación
sanguínea luego que un vaso ha sido obstruido por
un coágulo.

Hemostasia Hemostasia
Primaria Secundaria

• Vasoconstricción • Mecanismos de coagulación

• Formación del tapón • Reparación del tejido dañado
plaquetario
S,B.Mckenzie.Trastornos de la hemostasia secundaria. Hematología Clínica 2ª. Ed. Manual
BASES
TEORICAS • Precalicreina
FACTORES DE
COAGULACIÓN
• Cininógenos APM I Fibrinógeno
• Factor XII II Protrombina
VÍA
INTRÍNSECA
• Factor XI III Factor tisular
• Factor IX IV Calcio
• Factor VIII V Proacelerina
VII Proconvertina
VIII Factor
VÍA • Factor tisular (III) Antihemofilico A
CASCADA DE LA EXTRÍNSECA • Factor VII IX Factor
COAGULACIÓN Antihemofilico B
X Factor Stuart -
Prower
• Factor X XI Factor
• Factor V Antihemofilico C

VÍA COMÚN
• Factor II XII Factor de
(Protrombina) Hageman
• Factor I XIII Estabilizador de
fibrina
(Fibrinógeno)

S,B.Mckenzie.Trastornos de la hemostasia secundaria. Hematología Clínica 2ª. Ed. Manual

 BASES
LA PRUEBA
DE PTT TEORICAS
Consiste en una
recalcificación del plasma en
presencia de un reactivo
lipídico (cefalina) en
sustitución del factor
plaquetario.

Mide todos los factores a

excepción
del VII y el XIII

la cefalina de tejido encefálico

es más activa que el fosfolípido
plaquetario purificado.

Detecta anormalidades en la
vía intrínseca de la
coagulación

Wiener Laboratorios S.A.I.C.Riobamba http://www.wiener-lab.com.arA.N.M.A.T 2000 Rosario - Argent

 ANTECEDENTES DE LA
INVESTIGACIÓN
Jay Mclean “La acción tromboplasmatica de la cefalina”
(1916)

“Ácidos grasos insaturados de las cefalinas

del cerebro”
Levene y
Rolf (1922)
 ANTECEDENTES DE LA
INVESTIGACIÓN

Jordi “Cefalina de cerebro, una mezcla de fosfátidos.

Folch Separación de fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina y
(1942) una fracción que contiene fosfatida de inositol”
 MARCO METODOLÓGICO

Tipo de investigación Experimental

La muestra en estudio está

representada por un cerebro
fresco, obtenido de un conejo
joven sano, proveniente de los
Muestra criaderos agrícolas de conejos
de la población de San
Francisco de Asís, Estado
Aragua. También será utilizado
el pool de plasma para hacer el
análisis de la actividad de la
cefalina.
 MARCO METODOLÓGICO
MARCO METODOLÓGICO
Muestra

Criterios de inclusión
 
- Conejo sin distinción de sexo nacido por parto normal y natural de una coneja adulta sana

- Conejo joven sano de talla y peso acorde a su edad

 
- Conejo previamente inmunizado sano.
 
 
Criterios de exclusión
 
- Conejos con antecedente de enfermedades cerebrovasculares.
 
- Conejos que presenten epilepsia o algún trastorno cerebral
 
- Conejos con tratamiento que alteren los procesos de coagulación.
 
 
 MARCO METODOLÓGICO

Técnicas e instrumentos de - Cuantificar proteínas

recolección de datos - Cromatografía
- Actividad Biológica

Procedimiento experimental Obtención de cefalina

Lavar y repetir Mantener a 4°C

varias veces por 24h

pesar Secar
Sol. Salina
0,9%

Trasladar al
(CIADANA) a 4°C
4 °C Pesar y homogenizar la
muestra
Sol. Salina 0,9%
 MARCO METODOLÓGICO
Procedimiento experimental Obtención de cefalina
pesar

triturar Ebullición por

3min
50mL

alcohol etílico

Lecitina, cefalina, grasas, colesterol,

esfingomielina y cerebrosidos.

1
Se toman 30mL

Fracciones
Con 55mL de
éter
2
Esfingomielina y cerebrosidos
 MARCO METODOLÓGICO
Purificación de la cefalina

Colesterol y grasas
Centrifugar a
2000rpm
1min
25mL (fracción 1)
Con
25mL de acetona

(Cefalina y lecitina)
Lavar con 20mL
Precipitado
(Cefalina y lecitina)
de alcohol

50 °C

Pesar cefalina cefalina

obtenida

lecitina
 ASPECTOS
ADMINISTRATIVOS
• Laboratorio de Hematología Clínica,
Universidad de Carabobo Sede
Recursos
Aragua.
institucionales
• Criaderos de conejos de San
Francisco de Asís del Estado Aragua.

Recursos humanos >Licenciados en Bioanálisis.

> Personal de laboratorio.

Los fondos para la realización del trabajo

serán cubiertos por la colaboración de
instituciones, laboratorio de hematología y
Recursos financieros química orgánica de la universidad de
Carabobo sede Aragua en conjunto con los
investigadores que lo desarrollaran.
 ASPECTOS
ADMINISTRATIVOS

Columna de cromatografía, envase de vidrio

de 2 Litros, pinza, tijera, 1 vaso precipitados
Recursos materiales
de 200 ml, guantes, papel de filtro, viales de
vidrio, pipeta Pasteur, soporte universal.

Nevera, estufa, centrifugas de tubo, baño de

Equipos
maría.
 CRONOGRAMA DE
ACTIVIDADES
 
PROGRAMADO
  2017 2018

ACTIVIDAD/MES 10 11 12 1 2 3 4 5 6 7

Revisión Bibliográfica                    

Entrega escrita del proyecto de                    

investigación completo
Sustentación Oral del proyecto de                    

investigación
Toma de muestra                    

Comparaciones de los métodos                    

Análisis de los resultados obtenidos                    

Análisis estadísticos de los datos                    

Redacción y Entrega del informe                    

Final
Presentación del trabajo Final