Aktivitas Antioksidan Suatu Produk Pangan
Aktivitas Antioksidan Suatu Produk Pangan
Aktivitas Antioksidan Suatu Produk Pangan
e-mail: [email protected]
Pusat Litbang Keteknikan Kehutanan dan Pengolahan Hasil Hutan,
Jl. Gunung Batu No.5 Bogor 16610
2
Pusat Litbang Konservasi dan Rehabilitasi,
Jl. Gunung Batu No.5 Bogor 16610
ABSTRACT
Research on natural medicinal plants has been growing due to the increasing interest to natural medicinal material
that is considered safer than synthetic medicines. In North Sumatera, bark of Cotylelobium sp which is locally known
as raru, has been widely utilized by the local community. The skin bark of this species is commonly used as a mixture of
nira to produce tuak (Batak's traditional alcoholic liquor). In addition, local community has been using this species
for traditional healing as well. This research is to study the potency of raru's skin bark in producing antioxidant using
DPHH method. The toxicity activity of the material was also examined using Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
method. Results show that the yield extract of Cotylelobium melanoxylon Pierre was 30.11% and Cotylelobium
lanceolatum Craib was 14.50%. Both extracts contains flavonoid, tanin, saponin, triterpenoid and hidroquinon. The
extract of Cotylelobium melanoxylon Pierre has antioxidant activity against DPPH radical with value of IC50 as much
as 108.487 ppm and 77.909 ppm for Cotylelobium lanceolatum Craib. Furthermore, the toxicity of Cotylelobium
melanoxylon Pierre was 643.550 ppm and Cotylelobium lanceolatum Craib was 767.191 ppm LC50.
Keyword : Medicinal plant, raru, antioxidant, toxicity
ABSTRAK
Penelitian tumbuhan obat terus berkembang seiring dengan minat masyarakat pada bahan obat
yang berasal dari alam yang berhubungan dengan keamanannya dibanding dengan obat sintetik. Salah
satu kulit kayu yang berasal dari Kabupaten Tapanuli Tengah dan Tapanuli Utara yang lebih dikenal
dengan sebutan raru diidentifikasi sebagai Cotylelobium sp, sudah sangat luas dimanfaatkan oleh
masyarakat di Sumatera Utara. Kulit kayu ini biasanya digunakan oleh masyarakat sebagai campuran
minuman tuak (minuman tradisional Batak). Masyarakat juga meyakini kulit kayu raru dapat digunakan
sebagai obat penurun kadar gula darah (anti diabetes). Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan data
potensi antioksidan dari kulit kayu raru dengan metoda DPPH dan mengetahui toksisitas ekstrak
menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Hasil penelitian menunjukkan bahwa
rendemen ekstrak Cotylelobium melanoxylon Pierre adalah 30,11% dan Cotylelobium lanceolatum Craib
sebesar 14,50%. Uji fitokimia menunjukkan kedua jenis ekstrak mengandung flavonoid, tanin, saponin,
triterpenoid dan hidrokuinon. Ekstrak Cotylelobium melanoxylon Pierre memiliki aktivitas antioksidan
322
Aktivitas Antioksidan dan Toksisitas Ekstrak Kulit ..... (Gunawan Pasaribu & Titiek Setyawati)
terhadap radikal DPPH dengan nilai IC50 sebesar 108,487 ppm dan Cotylelobium lanceolatum Craib
memiliki nilai IC50 sebesar 77,909 ppm. Selanjutnya, toksisitas Cotylelobium melanoxylon Pierre memiliki
nilai LC50 sebesar 643,550 ppm and Cotylelobium lanceolatum memiliki LC50 sebesar 767,191 ppm.
Kata kunci : Tumbuhan obat, raru, antioksidan, toksisitas
I. PENDAHULUAN
Salah satu faktor yang mempengaruhi kesehatan manusia dalam pengobatan adalah
keseimbangan antara kandungan radikal bebas dan antioksidan di dalam tubuh. Kurangnya asupan
antioksidan yang cukup dari makanan yang dikonsumsi oleh sebagian besar masyarakat saat
ini merupakan penyebab ketidakseimbangan tersebut. Ketidakseimbangan ini menjadi
penyebab radikal bebas dominan di dalam tubuh, sehingga timbul berbagai macam penyakit
seperti, jantung koroner, kanker, diabetes, hati, dan penuaan dini (Widjaya, 1996).
Antioksidan yang berasal dari luar tubuh antara lain dapat diperoleh dari tumbuhan
seperti asam fenolat, flavonoid, tokoferol dan tanin tersebar pada berbagai bagian tumbuhan
seperti daun, akar, batang, biji, dan bunga (Sidik, 1997 dalam Kurtubi, 2006). Salah satu
tumbuhan yang diduga kaya akan flavonoid dan tanin yang memiliki aktivitas sebagai
antioksidan adalah raru.
Raru merupakan sebutan untuk kelompok jenis kulit kayu yang ditambahkan pada nira
aren yang bertujuan untuk meningkatkan cita rasa dan kadar alkohol minuman tuak. Menurut
laporan Hildebrand (1954), disebutkan bahwa ada beberapa jenis kayu yang digolongkan
sebagai kayu raru, antara lain Shorea maxwelliana King, Vatica songa V.Sl. dari famili
Dipterocarpaceae dan Garcinia sp. dari famili Guttifera. Penelitian Erika (2005), menyebutkan
bahwa jenis Shorea faguetiana Heim. termasuk juga sumber kulit raru. Penelitian Pasaribu, dkk
(2007), menemukan bahwa salah satu kulit kayu raru yang berasal dari Kabupaten Tapanuli
Tengah diidentifikasi sebagai Cotylelobium melanoxylon Pierre. Lebih lanjut disebutkan bahwa
jenis ini memiliki komponen kimia kayu berturut-turut adalah sebagai berikut : hemiselulosa
29,26%, alphaselulosa 37,35%, lignin 22,26% dan pentosan 17,31 %. Selanjutnya kadar
ekstraktif kayu raru yang larut dalam air dingin 3,19%, air panas 9,08%, alkohol benzena
1,76%, NaOH (1%) 19,27%. Menurut pengalaman masyarakat lokal, sudah dipakai untuk
keperluan pengobatan tradisional.
Dalam rangka mengelola sumber daya hutan tropis Indonesia yang berkelanjutan,
pemanfaatan hasil hutan selain kayu atau yang lebih dikenal sebagai HHBK, salah satunya
adalah potensi sebagai obat-obatan. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan data potensi
antioksidan dari kulit kayu raru (Cotylelobium sp.) dengan metoda DPPH dan mengetahui
toksisitas ekstrak menggunakan metode BSLT.
II. BAHAN DAN METODE
A. Bahan dan Alat
Bahan penelitian berupa kulit kayu raru (Cotylelobium sp) dari dua lokasi yang
berbeda yang diambil dari Kawasan Hutan Kabupaten Tapanuli Tengah dan Tapanuli Utara,
323
Provinsi Sumatera Utara. Bahan lain yang dibutuhkan antara lain : kloroform, diklorometana,
etil asetat, etanol, metanol, aquades, eter, NH4OH, NaOH, HCl, H2SO4, kertas saring,
anhidrida asetat, pereaksi Meyer, Dragendrof, Wagner, vitamin C, DPPH 1mM.
Peralatan yang diperlukan antara lain hammer mill, alat-alat kaca, alat-alat ekstraksi, vacuum
0
rotary evaporator, botol uji, pipet ukur, mikropipet, neraca analitik, inkubator suhu 37 C,
spektrofotometer UV-VIS Hitachi U-2800, oven, vortex, hot plate, kertas saring.
B. Metode Penelitian
1. Penyiapan bahan
Bahan penelitian berupa sampel kulit kayu sebanyak 5 kg yang diperoleh dengan cara
menguliti pohon yang masih hidup. Di samping itu daun diambil untuk keperluan identifikasi
jenis di Herbarium Puslitbang Konservasi dan Rehabilitasi Bogor. Sampel kulit kayu
selanjutnya dikeringkan dengan oven pada suhu 400C.
2. Ekstraksi
Sampel kulit kayu digiling menggunakan hammer mill dan disaring untuk menghasilkan
serbuk 40-60 mesh. Serbuk kulit kayu raru diekstraksi dengan teknik maserasi (perendaman)
dengan etanol 70%. Ekstrak kemudian disaring dan dipekatkan dengan rotary vacum evaporator.
Melalui proses ini, diperoleh rendemen ekstrak jenis raru dari dua lokasi yang berbeda.
Rendemen ekstrak dihitung dengan rumus :
bobot ekstrak pekat (g)
Rendemen =
x 100%
bobot sampel yang diekstrak (g)
3. Uji kualitatif fitokimia (Harborne, 1987)
a. Uji alkaloid
Sebanyak 2 g contoh ditambah 10 ml kloroform dan beberapa tetes amoniak. Fraksi
kloroform dengan cara menghisap fraksi kloroform perlahan-lahan dengan pipet tetes.
Selanjutnya fraksi kloroform diasamkan dengan H2SO4 2M. Fraksi H2SO4 diambil
kemudian ditambahkan pereaksi Meyer, Dragendorf, Wagner. Jika terdapat endapan putih
dengan pereaksi Meyer, endapan merah jingga dengan pereaksi Dragendorf dan endapan
coklat dengan pereaksi Wagner, maka positif terdapat alkaloid.
b. Uji saponin
Sebanyak 1 g contoh ditambah air secukupnya dan dipanaskan selama 5 menit. Setelah
itu didinginkan dan dikocok kuat. Adanya saponin ditandai dengan timbulnya busa yang
stabil selama 10 menit.
c. Uji flavonoid dan senyawa fenolik
Sebanyak 1 g contoh ditambah metanol sampai terendam lalu dipanaskan. Filtrat diuji
pada spot plate. Jika setelah ditambahkan NaOH 10% (b/v) timbul warna merah, maka
positif tedapat flavonoid.
d. Uji triterpenoid atau steroid
Sebanyak 2 g contoh ditambahkan 25 ml etanol lalu dipanaskan dan disaring. Filtrat
diuapkan lalu ditambah eter. Lapisan eter dipipet dan diuji pada spot plate. Jika
ditambahkan pereaksi Liberman Buchard (3 tetes) terbentuk warna merah/ungu, positif
mengandung triterpenoid. Jika terbentuk warna hijau, maka positif mengandung steroid.
324
Aktivitas Antioksidan dan Toksisitas Ekstrak Kulit ..... (Gunawan Pasaribu & Titiek Setyawati)
e. Uji tanin
Sebanyak 10 g contoh ditambah air, lalu dididihkan selama beberapa menit, kemudian
disaring. Filtrat ditambah FeCl3 1% (b/v). Jika terbentuk warna biru atau hitam kehijauan,
maka positif mengandung tanin.
4. Uji aktivitas antioksidan
Pengujian antioksidan sesuai dengan metode dari Blois (1958) yaitu Metode Diphenyl-2picrylhydrazyl (DPPH). Ekstrak kasar kulit kayu raru dari 2 lokasi yang berbeda dibuat dalam
berbagai konsentrasi (5, 7.5, 10, 15, 25, 50, dan 75 ppm). Masing-masing dimasukkan
kedalam tabung reaksi. Kedalam tiap tabung reaksi ditambahkan 500 l larutan DPPH
0
1mM dalam metanol. Volume dicukupkan sampai 5 ml, kemudian diinkubasi pada suhu 37 C
selama 30 menit, selanjutnya serapan diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang 517 nm. Sebagai kontrol positif digunakan vitamin C (konsentrasi 2, 4, 6, 8, dan 10
ppm). Nilai IC50 dihitung masing-masing dengan menggunakan rumus persamaan regresi dan
dilakukan sebanyak 3 kali ulangan. Mekanisme reaksi dari metode DPPH (Molyneux, 2004)
ditunjukkan pada Gambar 1.
Jenis/ Species
Cotylelobium melanoxylon
Pierre
Ulangan/ Replication
1
2
3
Rataan/ Average
Simpangan/ St.Dev
1
2
3
Rataan/ Average
Simpangan/ St.Dev
326
Aktivitas Antioksidan dan Toksisitas Ekstrak Kulit ..... (Gunawan Pasaribu & Titiek Setyawati)
Jenis / species
Cotylelobium melanoxylon Pierre
Standar (Vitamin C)
Ulangan/Replication
1
2
3
Rataan (Average )
Simpangan (St.Dev)
1
2
3
Rataan (Average )
Simpangan (St.Dev)
IC50 (ppm)
125,65
114,38
85,41
108,48
20,75
78,01
78,54
77,17
77,91
0,69
5,35
melanoxylon Pierre. Akan tetapi kedua ekstrak tergolong memiliki aktivitas antoksidan yang
kuat karena IC50 kurang dari 200 ppm (Winarsi, 2007). Jika dibandingkan dengan aktivitas
antioksidan dari vitamin C, aktivitasnya masih lebih rendah dimana vitamin C memiliki IC50
sebesar 5,35 ppm.
Hasil penelitian tentang aktivitas antioksidan yang lain di antaranya pada buah dan
bunga burahol (Stelechocarpus burahol Blume Hook & Thomson) yang dilaporkan oleh
Tisnadjaja, dkk (2006), menyatakan bahwa hasil analisis antioksidan menggunakan metode
DPPH, menghasilkan IC50 terendah pada ekstrak n-butanol pada bunga sebesar 22,44 ppm
dan ekstrak etil asetat pada buah sebesar 29,12 ppm. Bagian bunga dengan ekstrak etil asetat
menunjukkan IC50 sebesar 35,07 ppm.
Daya antioksidan dari ekstrak daun kemuning (Murraya paniculata Jack) yang dilakukan
oleh Rohman dan Sugeng (2005) dengan metode DPPH menunjukkan bahwa ekstrak daun
ini mempunyai nilai IC50 sebesar 126,17 ppm. Kuncahyo dan Sunardi (2007) melaporkan
aktivitas antioksidan belimbing wuluh dengan metode DPPH menghasilkan nilai IC50 pada
fraksi eter sebesar 50.36 ppm dan fraksi air sebesar 44,01 ppm. Selanjutnya Hasan et.al. (2009)
melaporkan aktivitas antioksidan beberapa bahan alam dari tumbuhan obat yang berasal dari
Bangladesh seperti pada Tabel 4.
Tabel 4. Aktivitas peredaman radikal DPPH pada beberapa tumbuhan obat
Bangladesh
Table 4. DPPH radical scavenging activities of some Bangladeshi medical plants
Nama tumbuhan/
Plant name
Famili/
Family
Moraceae
Phyllanthaceae
Papilionaceae
Ceasalpiniaceae
Arecaceae
Commelinaceae
Zingiberaceae
Rutaceae
Dipterocarpaceae
Convolvulaceae
Magnoliaceae
Punicaceae
Myrtaceae
Menispermaceae
Asteraceae
328
IC 50
Daun/Leaves
Kulit buah/ Fruit pericarp.
Kulit buah/ Fruit pericarp Daun/
Leaves
Daun/ Leaves
Kernel/ kernel
Aerial parts
Daun/ Leaves
Daun/ Leaves
Daun/ Leaves
Bag. Menggantung/ Aerial parts
Daun/ Leaves
Kulit buah/ Fruit peel
Biji/Seeds
Bag. Menggantung/Aerial parts
Daun/ Leaves
54,74
39,93
31,38
25,96
16,00
13,67
21,53
18,72
17,60
33,03
25,96
22,43
10,82
4,25
29,87
23,44
Aktivitas Antioksidan dan Toksisitas Ekstrak Kulit ..... (Gunawan Pasaribu & Titiek Setyawati)
D. Pengujian Toksisitas
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) merupakan salah satu metode skrining untuk
menentukan toksisitas suatu ekstrak ataupun senyawa. Kematian Artemia salina Leach
digunakan sebagai parameter untuk menunjukkan adanya kandungan zat aktif tanaman yang
bersifat sitotoksik. Metode ini juga sering dikorelasikan dengan potensi ekstrak sebagai anti
kanker.
Hasil pengujian tingkat toksisitas pada dua jenis ekstrak diperoleh hasil LC50 masingmasing untuk Cotylelobium melanoxylon Pierre memiliki nilai LC50 sebesar 643,550 ppm dan
Cotylelobium lanceolatum memiliki LC50 sebesar 767,191 ppm. Suatu zat dikatakan aktif atau
toksik bila nilai LC50 <1000 ppm untuk ekstrak dan <30 ppm untuk suatu senyawa. Sehingga,
berdasarkan data yang didapatkan, kedua ekstrak termasuk dalam kategori toksik berpotensi
sebagai bahan obat (Meyer, 1982). Akan tetapi dalam pemanfaatannya perlu kehati-hatian
dalam hal pembuatan konsentrasi atau dosis sediaan obatnya.
Penelitian Juniarti, dkk (2009) menyebutkan bahwa hasil uji sitotoksik ekstrak daun saga
menggunakan metode BSLT diketahui bahwa fraksi yang bersifat toksik adalah fraksi metanol
dengan nilai LC50 606,736 ppm.
IV. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
1. Rendemen ekstrak Cotylelobium melanoxylon Pierre adalah 30,11% dan Cotylelobium
lanceolatum Craib sebesar 14,50%.
2. Kedua jenis ekstrak mengandung flavonoid, tanin, saponin, triterpenoid dan
hidrokuinon.
3. Ekstrak Cotylelobium melanoxylon Pierre memiliki aktivitas antioksidan terhadap radikal
DPPH dengan nilai IC50 sebesar 108,487 ppm dan Cotylelobium lanceolatum Craib memiliki
nilai IC50 sebesar 77,909 ppm, sehingga potensial dikembangkan sebagai sumber
antioksidan alami.
4. Toksisitas Cotylelobium melanoxylon Pierre memiliki nilai LC50 sebesar 643,550 ppm and
Cotylelobium lanceolatum memiliki LC50 sebesar 767,191 ppm.
B. Saran
Perlu dilakukan analisis kuantitatif terhadap kandungan metabolit sekunder kulit kayu
raru (Cotylelobium sp.) sebelum dikembangkan lebih lanjut sebagai tumbuhan obat alami
(produk jamu) atau sebagai obat herbal terstandar.
DAFTAR PUSTAKA
Blois, M.S. 1958 Antioxidant determinations by the use of a stable free radical. Nature, 181
1199-1200
329
Erika, S.S., 2005. Uji Toksisitas Ekstrak Kulit Batang Raru (Shora faguetiana Heim)
Menggunakan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) [skripsi]. Departemen Teknologi
Hasil Hutan, Fakultas Kehutanan IPB. Bogor.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan. Edisi ke-2.
Penerjemah Padmawinata K. Bandung: ITB.
Haygreen, J.G. and J.L. Bowyer. 1985. Forest products and wood science. Fourth ed. Ames.
Iowa. The Iowa State University Press.
Hildebrand, F.H., 1954. Daftar Nama Pohon-Pohonan 'Tapanuli' Sumatera Utara. Laporan
Balai Penyelidikan Kehutanan No.67. Balai Penyelidikan Kehutanan Bogor. Indonesia.
Juniarti, Delvi Osmeli, dan Yuhernita. 2009. Kandungan Senyawa Kimia, Uji Toksisitas (Brine
Shrimp Lethality Test) dan Antioksidan (1,1-Diphenyl-2-Pikrilhydrazyl) dari Ekstrak Daun
Saga (Abrus precatorius L.). Makara, Sains, Vol. 13, No. 1, Hal. 50-54
Kuncahyo I. Dan Sunardi. 2007. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Belimbing Wuluh
(Averrhoa ilimbi, L.) terhadap 1,1-Diphenyl-2-Picrylhidrazyl (DPPH). Seminar Nasional
Teknologi 2007 (SNT 2007). Yogyakarta.
Kurtubi M. 2006. Potensi Ekstrak Bawang Dayak (Eleutherine palmifolia (L) Merr) sebagai
Antioksidan. [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Institut Pertanian Bogor.
Meyer, B.N. 1982. Brine Shrimp : A convenient general Bioassay for Active Plant Constituent.
Journal of Medicinal Plant Research, Vol.45
Pasaribu, G., Bonifasius S., dan Gustan P. 2007. Analisis Komponen Kimia Empat Jenis
Kayu Asal Sumatera Utara. Jurnal Penelitian Hasil Hutan Vol. 25 N0.4, Agustus 2007.
Pusat Penelitian dan Pengembangan Hasil Hutan. Badan Litbang Kehutanan. Bogor.
Rohman, A. dan Sugeng, R. 2005. Daya Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Kemuning
(Murraya paniculata Jack) secara in vitro. Majalah Farmasi Indonesia, 16 (3), 136-140, 205.
Tisnadjaja, D., Edward S., Silvia dan Partomuan S. 2006. Pengkajian Burahol (Stelechocarpus
burahol Blume Hook & Thomson) sebagai Buah yang Memiliki Kandungan Senyawa
Antioksidan. Biodiversitas. Vol. 7 No.2. Hal 199-202.
Widjaya, A. 1996. Radikal Bebas dan Parameter Status Antioksidan. Forum Diagnosticum 4: 1-6.
Winarsi, H. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Potensi dan aplikasinya dalam
Kesehatan. Penerbit Kanisius.
Zuhud, E.A.M dan Haryanto. 1994. Pelestarian Pemanfaatan Keanekaragaman Tumbuhan
Obat Hutan Tropika Indonesia. Kerjasama Jurusan Konservasi Sumber Daya Hutan,
FAHUTAN IPB dan Lembaga Alam Tropika Indonesia.
330