ISOLASI JAMUR ENDOFIT DARI AKAR MANGROVE

KABUPATEN BENGKALIS

REPOSITORY

OLEH

DITA JUWITA
NIM. 1403114040

PROGRAM STUDI S1 KIMIA

JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS RIAU
PEKANBARU
2019

0
 ISOLASI JAMUR ENDOFIT DARI AKAR MANGROVE KABUPATEN
BENGKALIS

Dita Juwita1*, Fifi Puspita2, Yuli Haryani3

1
Mahasiswa Program S1 Kimia FMIPA Universitas Riau
2
Dosen Jurusan Agroteknologi FAPERTA Universitas Riau
3
Dosen Jurusan Kimia FMIPA Universitas Riau
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Riau
Kampus Binawidya, Pekanbaru, 28293, Indonesia
*[email protected]

ABSTRACT

Mangroves strives under extreme conditions such as highly fluctuating salinities,

extreme tide actions, strongwinds, high temperatures, muddy and anaerobic soils.
This study aims to isolate endophytic fungi from the roots of mangrove.
Endophytic fungi isolation was carried out by sterilizing samples using 70%
alcohol, 5.25% NaOCl and sterile distilled water, then inoculated samples on PDA
media using direct inoculation techniques and scatter plates. In this study, 28
isolates of endophytic fungi were isolated from mangrove root samples identified
as Bruguiera sp. and Ceriops tagal (Perr.) C.B.Rob. Among the 28 isolates of
fungi, 17 isolates (60.71%) were obtained from direct plating method and 11
isolates (39.28%) from the scatter method.

Keywords : endophytic fungi, isolation, mangrove

ABSTRAK

Mangrove dapat hidup pada kondisi ekstrim seperti tingkat salinitas yang tinggi,
aksi pasang surut, angin kencang, suhu tinggi, daerah berlumpur dan tanah
anaerob. Penelitian ini bertujuan untuk untuk mengisolasi jamur endofit dari akar
tanaman mangrove. Isolasi jamur endofit dilakukan dengan cara sterilisasi sampel
menggunakan alkohol 70%, NaOCl 5,25% dan akuades steril kemudian sampel
diinokulasi pada media PDA menggunakan teknik inokulasi langsung dan cawan
sebar. Pada penelitian ini, sebanyak 28 isolat jamur endofit berhasil diisolasi dari
sampel akar mangrove yang diidentifikasi sebagai Bruguiera sp. dan Ceriops
tagal (Perr.) C.B.Rob. Diantara 28 isolat jamur tersebut, 17 isolat (60,71%)
diperoleh dari metode inokulasi langsung (direct plating) dan 11 isolat (39,28%)
dari metode cawan sebar.

Kata kunci : isolasi, jamur endofit, mangrove

PENDAHULUAN daerah pesisir laut. Hutan mangrove

Tanaman mangrove merupakan adalah ekosistem unik, tumbuhannya
kelompok tanaman yang hidup di mampu beradaptasi dengan kondisi
lingkungan yang ekstrim seperti

1
salinitas, suhu dan kelembaban yang (Hanna Instrument H18014), Orbital
tinggi, serta kondisi tanah anaerob. shaker (Daihan Labtech CO., LTD),
Sisi menarik lainnya dari hutan serta peralatan gelas laboratorium
mangrove ini adalah fungsinya lainnya yang dibutuhkan sesuai
sebagai feeding, nursery, dan prosedur kerja.
spawning ground bagi berbagai biota Bahan yang digunakan dalam
perairan. Hal tersebut mengindikasi- penelitian ini adalah akar tanaman
kan adanya senyawa kimia yang mangrove, alkohol 70%, natrium
dihasilkan oleh tanaman di hutan hipoklorit (NaOCl) 5,25%, akuades
mangrove yang dilepaskan ke steril, aluminium foil, kain kasa,
perairan sebagai nutrisi dan menjadi tissue steril, plastik wrapping, Potato
perlindungan hewan terhadap Dextrose Agar (PDA), kloramfenikol
mikroorganisme patogen. Selain 1%, dan natrium klorida (NaCl).
dihasilkan oleh tanaman, senyawa
tersebut potensial juga dihasilkan b. Sterilisasi Permukaan Sampel
oleh mikroorganisme endofit yang Akar tanaman mangrove
tumbuh di jaringan tanaman dipotong menjadi segmen-segmen
mangrove. Peneliti terdahulu berukuran 1x1 cm dan kemudian
melaporkan bahwa endofit yang dicuci dengan air mengalir hingga
hidup di dalam jaringan mangrove bersih. Sterilisasi pemukaan
memiliki peran dalam adaptasi dilakukan dengan cara sampel bagian
mangrove terhadap kondisi akar tanaman mangrove direndam
lingkungannya sehingga menjadi dalam alkohol 70% selama 2 menit,
sumber potensial untuk memperoleh dilanjutkan direndam dalam larutan
senyawa baru dengan bioaktivitas natrium hipoklorit (NaOCl 5,25%)
yang baik (Noraida et al., 2018) selama 3 menit kemudian sampel
Indonesia memiliki hutan dibilas dengan akuades steril
mangrove sekitar 27% dari hutan sebanyak 3 kali. Sampel akar
mangrove dunia. Kawasan hutan dikeringkan menggunakan tisu steril.
mangrove di Provinsi Riau cukup Sebagai kontrol sterilitas, sampel
luas, yaitu 234.517 Hektar. Beberapa dibilas menggunakan akuades steril,
peneliti telah melaporkan tentang selanjutnya sebanyak 1 mL akuades
diversitas mangrove Riau, namun hasil bilasan diinokulasikan pada
belum ada laporan mengenai cawan petri berisi media PDA dan
mikroba endofit dari mangrove Riau. diratakan menggunakan batang L
Pada penelitian ini akan dilakukan kemudian diinkubasi pada suhu
skrining potensi antibakteri jamur ruang. Media PDA yang tidak
endofit mangrove di sekitar ditumbuhi oleh mikroorganisme
Kabupaten Bengkalis, Provinsi Riau mengindikasikan permukaan segmen
(Hasugian et al., 2014). sampel sudah steril.

METODE PENELITIAN c. Isolasi Jamur Endofit

a. Alat dan Bahan Isolasi jamur endofit
Alat yang digunakan dalam menggunakan 2 cara yaitu teknik
penelitian ini adalah laminar air inokulasi langsung dan teknik cawan
flow, autoclaf (All America model sebar. Teknik inokulasi langsung
1925/KY-23D), waterbath (Grant dilakukan dengan cara masing-
Instrument Type SUB 28), pH meter masing segmen akar yang telah steril

2
permukaannya diinokulasikan pada dihancurkan lebih dahulu, sedangkan
cawan petri berisi medium PDA pada metode inokulasi langsung
(Potato Dextrose Agar) yang sudah sampel steril yang akan digunakan
ditambahkan kloramfenikol sebanyak langsung diletakkan pada medium.
1 g/100 mL, sedangkan teknik cawan Pada metode cawan sebar koloni
sebar dilakukan dengan cara sampel jamur tumbuh menyebar, sedangkan
steril dihaluskan dengan mortar steril pada metode inokulasi langsung
dan dimasukkan ke dalam tabung pertumbuhan koloni jamur hanya
reaksi berisi 5 mL NaCl fisiologis tumbuh di sekeliling sampel
0,85% kemudian dihomogenkan (Nurnaini, 2004).
dengan vortex. Sebanyak 1 mL Sterilisasi permukaan akar tanaman
suspensi yang sudah dihomogenkan mangrove dilakukan sebelum jamur
tersebut diambil dan diinokulasi pada endofit diisolasi. Sterilisasi
media PDA (spread plate). Masing- permukaan ini bertujuan untuk
masing perlakuan dilakukan dengan menghilangkan mikroorganisme
3 kali pengulangan dan diinkubasi epifit yang berada di permukaan
pada suhu ruang selama 5-7 hari. akar, sehingga koloni yang diperoleh
merupakan koloni endofit yang
d. Pemurnian Jamur Endofit berasal dari dalam jaringan akar
Pemurnian jamur endofit tumbuhan (Larran et al., 2001).
dilakukan dengan cara masing- Sterilisasi pada penelitian ini
masing isolat murni jamur endofit dilakukan berturut-turut mengguna-
yang diperoleh dipindahkan ke dalam kan larutan alkohol 70% sebagai
media PDA miring. Pengamatan wetting agent. Alkohol 70%
morfologi dilakukan kembali setelah digunakan sebagai bahan untuk
diinkubasi selama 5-7 hari dan sterilisasi permukaan karena alkohol
apabila masih ditemukan 70% bekerja dengan cara merusak
pertumbuhan koloni yang berbeda lapisan membran sel
secara makroskopik maka harus mikroorganisme. Alkohol dapat
dipisahkan kembali hingga diperoleh melarutkan lipid dan mendenaturasi
isolat murni. Setiap isolat murni protein yang ada pada membran sel.
dibuat duplo pada agar miring. Hal tersebut dapat mengganggu
Masing-masing sebagai stok (stock fungsi membran sel dalam mengatur
culture) dan kultur untuk penelitian transportasi cairan ke dalam dan
(working culture) dan diinkubasi keluar sel sehingga membuat sel
pada suhu ruang selama 5-7 hari. mikroorganisme menjadi lisis
(McDonnell dan Russell, 1999).
HASIL DAN PEMBAHASAN Kemampuan alkohol untuk
Metode yang digunakan untuk mensterilkan permukaan organ
isolasi jamur dari sampel akar tumbuhan tersebut mempunyai
tanaman mangrove menggunakan 2 spektrum yang sempit sehingga perlu
metode yaitu metode cawan sebar dikombinasikan dengan bahan kimia
dan metode inokulasi langsung lainnya dan biasanya sering
(direct plating). Kedua metode ini dikombinasikan dengan larutan
pada prinsipnya sama yaitu untuk natrium hipoklorit (Agusta, 2009).
mengisolasi jamur endofit dari Larutan natrium hipoklorit (NaOCl
sampel. Pada metode cawan sebar 5,25%) digunakan sebagai agen
sampel steril yang digunakan sterilisasi. Larutan NaOCl pada

3
konsentrasi 5,25% digunakan karena
telah diketahui sebagai
dekontaminan yang efektif terhadap
bakteri gram positif, bakteri gram
negatif dan bentuk spora dari
mikroorganisme (Tilakchan et al.,
2014). Terakhir sampel dibilas
menggunakan akuades steril untuk
membersihkan sisa-sisa alkohol
(Sinaga, 2016). Gambar 1. Isolat jamur yang sudah
Isolasi jamur endofit dari akar murni.
tumbuhan mangrove dilakukan pada
media PDA. Media PDA Bruguiera sp. dan Ceriops tagal
mengandung ekstrak kentang yang (Perr.) C.B.Rob. Diantara 28 isolat
merupakan salah satu sumber jamur tersebut, 17 isolat (60,71%)
karbohidrat. Jamur dapat tumbuh diperoleh dari metode inokulasi
pada media PDA karena jamur langsung (direct plating) dan 11
mempunyai enzim untuk memotong isolat (39,28%) dari metode cawan
polisakarida tersebut menjadi sebar. Semua isolat jamur endofit ini
monosakarida yang bisa digunakan dianggap sebagai jamur endofit bila
jamur untuk kelangsungan hidupnya. memiliki ciri-ciri, waktu tumbuh
Media PDA juga tersusun dari lebih dari 5 hari, tumbuh disekitar
dextrose atau yang biasa disebut sampel akar yang diinokulasi pada
dengan gugusan gula, baik media PDA dan memiliki morfologi
monosakarida maupun polisakarida yang berbeda dari jamur yang
yang merupakan penambah nutrisi tumbuh pada cawan petri kontrol
bagi biakan pada media PDA (Handayani, 2015).
(Pratiwi, 2015). Media PDA yang
digunakan untuk isolasi jamur telah UCAPAN TERIMA KASIH
ditambahkan kloramfenikol 1 g/100 Penulis mengucapkan terimakasih
mL. Kloramfenikol digunakan kepada DIPA Universitas Riau yang
sebagai antibakteri untuk telah membantu membiayai
menghambat pertumbuhan bakteri penelitian ini atas nama Ibu Yuli
sehingga mengurangi kemungkinan Haryani, M.Sc., Apt sebagai ketua
kontaminasi bakteri pada media tim peneliti dengan nomor kontrak
tersebut. Inkubasi dilakukan pada 804/UN.19.5.1.3/PP/2018.
suhu ruang selama 5-7 hari yang
merupakan waktu optimal
DAFTAR PUSTAKA
pertumbuhan jamur. Setiap isolat
Agusta, A. 2009. Biologi dan Kimia
murni dibuat duplo pada agar miring,
Fungi Endofit. Jakarta:
masing-masing sebagai stok (stock
Erlangga.
culture) dan kultur untuk penelitian
Hasugian, E., Adriman dan Fajri,
(working culture) (Handayani, 2015).
N.E. 2014. Community structure
Pada penelitian ini sebanyak 28
of mangrove in sungai alam
isolat jamur endofit berhasil diisolasi
village bengkalis sub regency,
dari sampel akar mangrove yang
bengkalis begency, riau
diidentifikasi sebagai
province. JOM. Pekanbaru:
Universitas Riau.

4
Handayani, P.N. 2015. Isolasi, mangrove species Rhizophora
seleksi dan uji aktivitas mucronata and identification of
antimikroba kapang endofit dari potential antagonists against the
daun tanaman jamblang soil-Borne fungus, Fusarium
(Syzygium cumini L.) terhadap solani. Frontiers in
Escherichia coli, Pseudomonas Microbiology. 9: 1-17.
aeroginosa, Bacillus subtilis, Pratiwi, A.E. 2015. Isolasi, seleksi
Staphylococcus aereus, Candida dan uji aktivitas antibakteri
albicans dan Aspergillus niger. mikroba endofit dari daun
Skripsi. Jakarta: UIN Syarif tanaman Garcinia benthani
Hidayatullah. Pierre terhadap Staphylococcus
Larran, S., C. Monaco, dan Alippi, aureus, Bacillus subtilis,
H.E. 2001. Endophytic fungi in Escherichia coli, Shigella
leaves of Lycopersicon dysenteriae, dan Salmonella
esculentum. Biotechnol. 17:181- typhimurium. Skripsi.
184. Pekanbaru: Universitas Riau.
McDonnell, G. dan Russell, A.D. Sinaga, N. 2016. Isolasi dan
1999. Antiseptic and karakterisasi bakteri endofit
disinfectants: activity, action, batang tanaman paku harupat
and resistance. Clinical (Nephrolepis bisserata) dari
Microbiology Review. 12(1): tanah gambut. Skripsi.
147-179. Pekanbaru: Universitas Riau.
Nurnaini. 2004. Identifikasi dan uji Tilakchand, M., Naik, B. dan Shetty,
antagonistik Fusarium sp. dan A.S. 2014. A comparative
Trichoderma sp. yang diisolasi evalution of the effect of 5,25%
dari pohon pisang (Musa sodium hypochlorite and 2%
paradisiaca) yang terkena chlorhexidine on the surface
penyakit layu di rengat inhu. texture of gutta-percha and
Skripsi. Pekanbaru: Universitas resilon cones using atomic force
Riau. microscope. J Conserv
Noraida, T., Hamzah, T., Lee, S.Y., Dent.17(1): 18-21.
Hidayat, A. dan Terhem, R.
2018. Diversity and
characterization of endophytic
fungi isolated from the tropical