TOXICOLOGIA

Symara Rodrigues Antunes

Conceitos de
toxicologia e
suas aplicações
OBJETIVOS DE APRENDIZAGEM

>> Definir a toxicologia e seus princípios.

>> Reconhecer as áreas de estudo da toxicologia.
>> Identificar os métodos laboratoriais aplicados nas análises toxicológicas.

Introdução
O uso de substâncias tóxicas pode não ser feito de maneira intencional pela
população, porém essa é uma realidade de praticamente todos nós, que esta-
mos inseridos em uma comunidade moderna. Você já se deu conta de quantos
produtos químicos, de origem animal ou vegetal, você entra em contato dia-
riamente? São muitos, com toda certeza. Da hora que acordamos até a hora
que dormimos, seja por via respiratória, seja por via dérmica ou por ingestão,
somos bombardeados por estimulações que podem ser a sensibilização para
uma reação adversa severa em uma próxima exposição.
Por outro lado, o uso consciente de produtos químicos com as mais va-
riadas finalidades é antigo. Na história humana temos vários relatos de uso
de substâncias, especialmente de origem vegetal e mineral, com proprieda-
des medicinais, cuja dose poderia levar o indivíduo a óbito se fosse errada.
Há também relatos do uso de venenos com fins de causar, propositalmente,
a morte de alguém.
Neste capítulo, você vai estudar a história da toxicologia, bem como seus
conceitos iniciais. Também vai ver quais são as áreas de estudo da toxicologia
e identificar os métodos laboratoriais utilizados nas análises toxicológicas.
2 Conceitos de toxicologia e suas aplicações

História da toxicologia e conceitos iniciais

A toxicologia é uma ciência muito antiga, que acompanha os seres humanos
na sua jornada de evolução na face da Terra desde os seus primórdios. Somos,
acima de tudo, animais dotados de inteligência, mas também somos muito
frágeis e vulneráveis. Há a necessidade de estarmos preparados para as di-
versas formas de injúria ao nosso corpo, buscando saúde e bem-estar. Dessa
forma, o conhecimento acerca de quais substâncias podem ser potencialmente
danosas ao nosso corpo se faz necessário para a sobrevida.
A toxicologia pode ser facilmente definida como a “ciência dos vene-
nos”. Contudo, a toxicologia moderna vai muito além disso: há o estudo de
bioquímica molecular, biologia, química, farmacologia, patologia, fisiologia,
entre tantas outras áreas correlatas. Isso mostra a natureza interdisciplinar
da toxicologia, que precisa se alimentar de conceitos dessas áreas para que
possa chegar a dados mais completos e precisos. Mais recentemente, o uso
de ferramentas de bioinformática tem sido primordial para a realização
de análises mais robustas e cada vez mais precisas, com menores custos
(financeiros e de tempo) para a realização de pesquisas (GREIM; SNYDER, 2019).
O estudo de substâncias consideradas tóxicas possibilitou a descoberta
de medicamentos e substâncias letais aos seres humanos e/ou animais e
plantas. A definição hoje mais aceita para a toxicologia é a de que se trata
de uma ciência que estuda substâncias (químicas ou biológicas) e radiações
que podem gerar eventos danosos à saúde do ser humano. Essas substâncias
podem ser chamadas de toxinas ou xenobióticos. As toxinas são de origem
de origem vegetal, animal ou mineral. Já os xenobióticos são produzidos por
vias artificiais, sendo a base da indústria farmacêutica. Não podemos ainda
deixar de citar a importante atuação da toxicologia no estudo de antídotos
e tratamentos aos agentes toxicantes (KLAASSEN; WATKINS III, 2012).
O uso de tóxicos, ou os chamados “venenos”, é mais antigo do que a escrita.
Na China, Índia e Egito antigos são encontrados registros de venenos, que
eram, em sua maioria, plantas que apresentavam algum tipo de toxicidade.
Nos registros antigos também são encontradas diversas formas de se referir
a substâncias toxicas (KLAASSEN; WATKINS III, 2012).
Também encontramos registros históricos da toxicologia durante a Idade
Média e a Renascença, empregada das mais diversas formas. Venenos pro-
venientes de animais peçonhentos, de minerais ou de plantas ganhavam
muito espaço na sociedade e nas artes. Paracelso (1493–1541) foi uma figura
importante para a toxicologia, pois trouxe a noção de que é preciso expe-
rimentação para a obtenção de respostas acerca da origem química dos
 Conceitos de toxicologia e suas aplicações 3

venenos. Também é dele a ideia de que há distinção entre o uso medicinal

e o uso tóxico de várias substâncias, e que, muitas vezes, a única diferença
entre elas é a dose. Suas observações foram cruciais para a formulação das
teorias de dose–respostas dos tóxicos e fármacos, base da toxicologia. Tanto
é que, devido aos seus estudos e observações, Paracelso é considerado o pai
da toxicologia (GREIM; SNYDER, 2019).
O uso de venenos permeava o imaginário e a prática popular. Não eram
poucos os relatos de uso de soluções e misturas de substâncias que acabavam
por findar a vida de desafetos e inimigos. Shakespeare retrata um uso trágico
de substâncias em Romeu e Julieta, desde um provável uso indevido de dose
elevada de beladona por Julieta, que conferiria um estado de coma, até o
uso de cianureto por Romeu, que, no auge de seu desespero ao ver Julieta
em estado de coma e confundi-la como morta, toma e tem seu fim trágico
quase que instantaneamente.

Shakespeare escreveu inúmeras peças que falavam de amor, paixões

ardentes, amores proibidos, traições e uso de poções mágicas e
venenos poderosos. As análises das obras do autor trouxeram muitas dúvidas
e questionamentos sobre quais seriam as substâncias usadas que teriam efeito
tal qual descrito pelo artista.
O site do British Council Brasil traz um texto que discute justamente os
venenos e poções mencionados por Shakespeare em suas obras: “Shakespeare
Lives nas ciências; Venenos, poções e drogas — As receitas shakespearianas
funcionam na vida real?”. Para encontrar esse texto, pesquise pelos termos
“Shakespeare” e “venenos” em seu mecanismo de busca na internet — o texto
deve aparecer entre os primeiros resultados de busca.

Na Idade Média ainda havia muito obscurantismo, charlatanismo e crenças

em magia. O irreal se misturava com o sobrenatural e mágico, o que faz com
que tenhamos que ter muito cuidado nas análises dos dados provenientes dos
registros de tóxicos dessa época. Mas é inegável que inúmeras observações
sobre os efeitos de extratos de plantas ou até mesmo a exposição ocupacional
foram revolucionários (KLAASSEN; WATKINS III, 2012).
Com o fim dos anos 1700, houve então um aumento da valorização das
ciências e da comprovação cientifica. Contudo, não devemos imaginar que
a crença na alquimia e em algumas poções mágicas se dissiparam com o
virar do ano no calendário. Várias práticas persistiram (e até podemos dizer
4 Conceitos de toxicologia e suas aplicações

que persistem) mesmo com todo o avanço científico da época, chamada de

Iluminismo. Muitos cientistas contribuíram para o desenvolvimento da toxico-
logia como ciência. A habilidade de sintetizar novos químicos e de detectar a
presença de outros — em alimentos, líquidos ou ambientes —, mesmo que em
pequenas quantidades, inaugurou o início da chamada toxicologia moderna
(GREIM; SNYDER, 2019).
A implementação de técnicas de detecção das substâncias tóxicas, sem
a necessidade de uma testemunha ocular, ajudou muito a desvendar casos
de contaminações e envenenamentos criminosos. Três expoentes desse
período merecem destaque: François Magendie (1783–1878), Mathieu-Joseph-
-Bonaventure Orfila (1787–1853) e Claude Bernard (1813-1878).
Orfila foi um médico espanhol que obteve grande sucesso tanto na Espa-
nha quanto na França, onde veio a falecer. Realizou diversos experimentos
e descobertas com modelos animais e fez grande contribuição para a área
criminal, ao exportar suas expertises médicas e toxicológicas para a resolução
e comprovação de casos de envenenamento. Ele realizava autópsias e testes
toxicológicos nos cadáveres, que revelavam se havia comprovação possível
às suspeitas de envenenamento. Seus trabalhos, que resultaram em uma
obra literária importante em 1815, renderam-lhe o compartilhamento da
paternidade da toxicologia com Paracelso — embora Orfila também possa
ser chamado de pai da toxicologia forense.
Magendie desenvolveu importantes conhecimentos na área de neuroci-
ências e neurocirurgia. Seus estudos também lhe proporcionaram observar
os efeitos de substâncias químicas no sistema nervoso, como estricnina e
morfina. Os estudos e observações dessas substâncias o fizeram experimentar
o uso na área médica com sucesso. Seu pupilo mais famoso, Bernard, fez
também importantes contribuições no campo da toxicologia aplicada à me-
dicina e lançou um livro, Uma introdução ao estudo da medicina experimental
(GREIM; SNYDER, 2019).
O final do século XIX, na toxicologia, é marcado por estudos envolvendo
a radiação e os efeitos deletérios ao corpo. Ao longo do século XX, o uso de
radiação trouxe inúmeros benefícios, com desenvolvimento de exames de
imagem, tratamentos e produção de energia. Contudo, os efeitos sobre nossa
saúde, devido à uma exposição indevida, são enormes. Três dos grandes aci-
dentes mundiais envolvendo radiação ocorreram nesse período da história:
as bombas nucleares de Hiroshima e Nagasaki, durante a Segunda Guerra
Mundial; o acidente com a usina nuclear de Chernobyl; e o acidente radioativo
de Goiânia, no Brasil. As observações e análises das pessoas afetadas, direta
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ou indiretamente, nessas tragédias proporcionaram estudos sobre os potentes

efeitos tóxicos que altas taxas de radiação podem ocasionar ao nosso corpo
(GREIM; SNYDER, 2019).
Contudo, tão importante quanto as análises dos efeitos da radiação,
ganharam importância no período pós-Segunda Guerra Mundial os cuidados
e análises dos alimentos, remédios e cosméticos, a fim de evitar possíveis
contaminações. A agência reguladora de alimentos e medicamentos dos
Estados Unidos, FDA (Food Drug Administration), criada em 1930, ganha cada
vez mais força, não só dentro de seu país de atuação, mas também interna-
cionalmente. Inúmeros países utilizam as normativas do FDA como um guia
para suas normativas internas.
As análises de alimentos e medicamentos quanto a potenciais efeitos tóxi-
cos possibilitou a identificação de tragédias como a da talidomida, na década
de 1960. O fármaco era utilizado por mulheres gestantes para o controle das
náuseas e enjoos, comuns durante a gravidez.; entretanto estudos toxicoló-
gicos e epidemiológicos demonstraram um importante efeito deletério desse
agente sobre a formação fetal, podendo levar a uma interrupção prematura
da gestação ou à má formação fetal (GREIM; SNYDER, 2019).

No campo da toxicologia moderna há uma intensa rede de intersec-

ções com outros campos de estudo (genética e biologia molecular,
farmacologia, diagnóstico por imagem, biotecnologia, bioengenharia, entre
outras), que possibilitam a incorporação de técnicas nas análises toxicológicas
mais sofisticadas, tornando-as mais precisas. O campo da toxicologia continua
a crescer e a se expandir nos dias atuais.

Áreas de estudo da toxicologia

A toxicologia não deve ser entendida como uma área única, sem nuances
e subáreas. Podemos destacar três grandes áreas de estudo: toxicologia
mecanicista, toxicologia descritiva e toxicologia regulatória.
A toxicologista mecanicista é aquela que procura entender e descrever os
mecanismos celulares, moleculares e bioquímicos de atuação de um tóxico.
Os dados obtidos pelos toxicologistas mecanicistas são importantes para
todas as demais áreas da toxicologia.
6 Conceitos de toxicologia e suas aplicações

Tomemos mais uma vez o exemplo da talidomida. A substância foi

retirada do uso clínico quando os estudos demonstraram sua asso-
ciação com as severas más formações de crianças e as centenas de abortos e
natimortos. A talidomida era, originalmente, utilizada como uma droga sedativa
para mulheres grávidas.
Os estudos de toxicologia mecanicista demonstraram que a talidomida
estava envolvida na expressão de genes ligados ao desenvolvimento de vasos
sanguíneos. Os estudos de seus mecanismos de atuação levaram a um reapro-
veitamento do medicamento no tratamento de certas doenças infecciosas e
no tratamento de mieloma múltiplo. Obviamente, o uso clínico é feito com as
cautelas necessárias, no que diz respeito ao uso em mulheres grávidas. Este
é somente um exemplo do impacto que o conhecimento dos mecanismos de
atuação tem sobre as demais áreas de estudo.

A toxicologia descritiva atua na testagem de toxicidade, fornecendo

informações acerca da segurança do químico e do alimento. Atualmente,
os fármacos e alimentos precisam passar por um rigoroso processo de análise
para serem liberados para consumo. Esta área fornece informações para a
área de toxicologia regulatória, que passa a tomar as decisões de liberação
de determinado medicamento ou alimento com relação à sua segurança
para consumo humano ou animal, com base nas informações fornecidas pela
toxicologia mecanicista e descritiva.
Outras áreas especializadas surgem a partir de áreas de intersecção das
três grandes áreas citadas anteriormente. A toxicologia forense é um campo
de atuação que visa a cruzar dados da ação biológica de substâncias tóxi-
cas com dados médicos, para que possam ser desvendados casos policiais.
A toxicologia clínica, por sua vez, visa a aplicações dos conceitos de química
analítica para avaliar as ações de substâncias tóxicas em nosso organismo.
Mais recentemente, com o avanço da industrialização dos países e dos grandes
centros, além das crescentes preocupações com as questões ambientais,
tem crescido a área da toxicologia ambiental, que avalia os impactos das
substâncias no meio ambiente.
A toxicologia ainda tem outras importantes áreas de atuação para a so-
ciedade. Temos a toxicologia social, que atua investigando os efeitos nocivos
das drogas de abuso ou outras substâncias que possam ser utilizadas. Entre
as drogas de abuso podemos citar os seguintes:
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„„ Opioides: muitos usados como analgésicos, exceto a heroína.

„„ Benzodiazepínicos: terapeuticamente usados como sedativos ou
ansiolíticos.
„„ Álcool: seu uso e venda é legalmente liberado para maiores de idade
na maioria dos países.
„„ Nicotina: presente no cigarro comum, que também é liberado para uso
e venda por maiores de idade em vários países.
„„ Feniletilaminas: aqui está a droga ilícita ecstasy, uma droga psicodélica.

O estudo dessas substâncias e seus efeitos sobre o corpo permite iden-

tificar mais rapidamente indivíduos intoxicados, estabelecer protocolos de
tratamento para dependentes e, algumas vezes, identificar usos terapêuticos.
Foi o que aconteceu mais recentemente com os canabinoides. A partir de
estudos toxicológicos de caracterização química e análises de seus efeitos
e de suas frações, pode-se chegar a propostas de tratamentos para doenças
de difícil controle com o uso desses produtos químicos. Até mesmo o nosso
hábito de tomar café é foco de estudos toxicológicos: é relatado um ciclo
de dependência da cafeína, e os estudos dos efeitos dessa substância em
nosso corpo traz importantes correlações, especialmente em indivíduos com
condições clínicas específicas, como hipertensão.
Relacionando-se intimamente com a toxicologia social temos a toxicologia
de medicamentos. Você deve ter percebido que muitas das substâncias citadas
anteriormente como drogas de abuso têm uso terapêutico. O uso não tera-
pêutico é que as caracteriza, nessas situações, como drogas de abuso. Mas a
indústria farmacêutica tem um alto investimento na pesquisa dos efeitos das
drogas que serão utilizadas para tratamentos, com a finalidade de documentar
possíveis efeitos de dependência, que precisam ser relatados e investigados
com relação a formas de evitar, controlar e de retirar os indivíduos do vício.
A toxicologia ocupacional, por sua vez, tem a função de analisar os im-
pactos de atividades laborais sobre o organismo dos trabalhadores. Ela terá
como função a caracterização físico-química do tóxico ao qual o trabalhador
está exposto, a interação desses agentes com o organismo humano e com
o próprio meio ambiente, as formas de introdução desse agente nos orga-
nismos, os sintomas de intoxicação e os limites de tolerância do organismo.
Isso fundamenta a decisão de criação de legislações que visem à saúde e
ao bem-estar dos trabalhadores que necessitem trabalhar em contato com
agentes toxicantes, o estabelecimento de medidas de segurança específicas
ao trabalho e o estabelecimento de protocolos a serem seguidos em casos
de intoxicação.
8 Conceitos de toxicologia e suas aplicações

Por último temos a toxicologia química ou analítica, que tem como obje-
tivo estabelecer quais são as metodologias para identificação e separação
de compostos químicos presentes em amostras biológicas ou ambientais.
Pela sua própria definição, podemos corretamente concluir que ela se inter-
-relaciona com todas as demais áreas da toxicologia, sendo importante na
identificação de indivíduos que necessitam de intervenções clínicas devido
a intoxicações ou até mesmo na intervenção na atuação de indústrias e
empresas que estejam causando danos ambientais.
Fica claro que os estudos toxicológicos têm um grande impacto na so-
ciedade, determinando quais produtos são seguros ou não, do ponto de
vista toxicológico, para consumo/uso do ser humano ou de outros animais,
estabelecendo regras e legislações para o exercício laboral mais seguro e es-
tabelecendo metodologias que visem à identificação dos compostos químicos.

Métodos laboratoriais aplicados nas

análises toxicológicas
A classificação de um agente tóxico depende das necessidades e interesses de
quem os classifica. Isso gera uma infinidade de possibilidades de classifica-
ções, de acordo com órgãos-alvo, origem, uso e efeito, ou uma combinação de
um ou mais desses fatores. Usamos a palavra toxina para designar substâncias
de origem animal (biológica), enquanto o termo toxicante ou agente tóxico
refere-se à uma substância química, de estrutura química definida, capaz de
produzir um efeito nocivo (efeito tóxico) por meio de sua interação com um
organismo vivo. Veneno pode ser definido como uma substância que causa
injúria ou até a morte de um sistema biológico.
Existe uma grande variedade de métodos laboratoriais que podem ser
aplicados nas análises toxicológicas. A seguir, veremos os principais métodos
e suas fundamentações teóricas.

Espectro de efeitos indesejáveis

A utilização de produtos químicos pelos seres humanos, sejam eles de ori-
gem animal, sejam de origem vegetal, data de muito tempo. Com os avanços
dos processos industriais, tivemos a inserção do uso de produtos químicos
sintéticos, produzidos pelos homens a partir de pesquisas científicas. Hoje,
essas utilizações tomaram proporções tão cotidianas que muitas vezes nem
percebemos que estamos utilizando um produto químico.
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Após uma refeição, devemos escovar os dentes. Para isso, precisamos

ir até uma pia, pegar a escova e a pasta de dentes. Realizamos a
escovação e, algumas vezes, ainda utilizamos um enxaguante bucal. Uma ação
rotineira, simples, que nos é ensinada desde a mais tenra idade. Você alguma vez
já parou para pensar que a pasta de dentes e o enxaguante bucal são produtos
químicos? E se utilizados de maneira equivocada podem trazer prejuízos a nossa
saúde? Mas calma, utilizados adequadamente, os benefícios do uso da pasta
de dente e do enxaguante bucal superam os riscos (BAST; HANEKAMP, 2017).

De forma geral, todo produto químico, mesmo que seja medicamento, tem
efeitos desejáveis e efeitos indesejáveis associados ao seu uso. A indicação
de uso seguro pelo ser humano se baseia na avaliação de uso e na avaliação
de se os benefícios dos efeitos desejáveis superam os efeitos indesejáveis.
A pasta de dentes, por exemplo, causa desgaste do esmalte dentário, mas
o desgaste do esmalte dentário é superado pelo efeito protetor de retirar
bactérias indesejáveis da boca que poderiam causar cárie.
Esses efeitos indesejáveis, especialmente quando falamos de medica-
mentos, podem ser chamados de efeitos adversos. Muitas vezes, os efeitos
adversos, secundários aos efeitos desejáveis a que determinado medica-
mento foi pensado e estudado, podem levar a um redirecionamento do uso
terapêutico. Um famoso caso é relacionado ao citrato de sildenafila. Esse
princípio ativo foi estudado com indicação clínica para a redução da pressão
sanguínea; contudo um efeito adverso curioso foi observado nos sujeitos
da pesquisa do sexo masculino (ENGLERT; MAYNARD, 2020), que reportavam
que havia uma sustentação da ereção quando faziam o uso da medicação.
A empresa responsável pela pesquisa e desenvolvimento do medicamento
rapidamente solicitou uma mudança na indicação clínica do medicamento,
realizando mais testes clínicos e comprovando sua eficácia para tratamento
de disfunção erétil em homens. A droga foi lançada no mercado sob o nome
de Viagra (BOOLELL et al., 1996).
Entretanto, infelizmente, a maioria dos efeitos adversos de drogas e me-
dicamentos não pode ser considerada “benéfica”, ou ao menos aproveitável,
como no caso relatado, sendo eles deletérios, adversos ou efeitos tóxicos.
Tais efeitos podem ser os seguintes (GREIM; SNYDER, 2019):

„„ Reações alérgicas: este efeito em geral ocorre devido a uma sensibili-

zação prévia do sistema imune no indivíduo. Quando a pessoa sensibi-
lizada ao químico entra em contato novamente com ele, ainda que em
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pequenas doses, o sistema imune dela responde com uma reação de

hipersensibilização. Essas reações podem ser dose-dependentes, isto é,
quanto maior a dose de contato, maior a reação. Podem gerar urticárias,
conjuntivite, edema, indução de crises asmáticas, entre outros efeitos.
„„ Reações idiossincráticas: são aquelas geradas em indivíduos que
apresentam, devido a características próprias e únicas (podendo ser
até genéticas), reações a pequenas doses de determinada substância,
mesmo nunca tendo entrado em contato com ela para uma possível
sensibilização prévia. São propostos vários mecanismos que explicam
essas reações, muitos envolvem alterações individuais em enzimas
associadas com as reações de metabolização do medicamento no orga-
nismo. Podem causar diversos efeitos, mas os que envolvem o sistema
hematopoiético, hepático, pele e sistema imune são os mais comuns.
„„ Toxicidade imediata ou retardada: diz respeito ao tempo que leva para
haver resposta tóxica à exposição. Se a toxicidade é imediata, ela é
desenvolvida em poucos minutos ou em poucas horas, normalmente
não se aceitando mais do que 24 horas após a exposição. Já se for
mais demorada ou retardada (normalmente acima de 24 horas após a
exposição), é desenvolvida com a passagem de dias a anos. É o caso,
por exemplo, dos carcinógenos, que, de forma geral, levam anos de
exposição para causarem câncer, ao contrário do efeito de um veneno
como o cianureto, que em poucos minutos pode levar o indivíduo à
morte.
„„ Efeitos reversíveis e irreversíveis: esta classificação está intimamente
ligada à capacidade do tecido afetado de se regenerar. Caso o tecido
tenha essa capacidade, então podemos classificar o efeito como reversí-
vel; caso não tenha, o efeito será irreversível. Os efeitos carcinogênicos
ou teratogênicos são sempre considerados irreversíveis.
„„ Toxicidade local ou sistêmica: diz respeito ao sítio de atuação do quí-
mico. Se gerar efeito em todo o organismo, ou se afetar sistemas como
o sistema nervoso central (SNC) ou o hematopoiético, podemos consi-
derar como um efeito sistêmico. Se afetar um ou dois órgãos, podemos
considerar que houve efeito em órgão-alvo, e é uma toxicidade local.
„„ Tolerância: ocorre quando o indivíduo consegue diminuir a ação tóxica
da substância, devido a uma exposição prévia. Isso gera um menor
efeito tóxico.

O conhecimento desses efeitos adversos pode ainda ser associado à

capacidade de interação entre substâncias químicas. Em alguns casos,
 Conceitos de toxicologia e suas aplicações 11

as substâncias podem gerar efeito adverso (ou quaisquer outros efeitos

orgânicos, benéficos ou não) somente quando combinadas — esse efeito
é chamado de sinergismo. De outra forma, as substâncias podem anular
seus efeitos, sendo esse efeito chamado de antagonismo. Entender como os
químicos causam efeitos no nosso organismo é fator crucial para propormos
uma ação de rastreio desses tóxicos, a fim de identificá-los corretamente
(BAST; HANEKAMP, 2017).

Testes de toxicidade
Os testes de toxicidade, em laboratório, são feitos com uso de modelos ani-
mais. Obviamente, todas as normativas éticas de uso de animais devem ser
obedecidas. Dois principais conceitos são a base do uso de animais nesses
testes. Primeiro, a extrapolação dos resultados obtidos com os testes em
modelos animais pode ser feita para humanos quando são executados de
maneira propriamente qualificada. Os carcinógenos para humanos são car-
cinógenos para algumas espécies, mas o inverso nem sempre é verdadeiro.
Apesar disso, quando determinada substância é testada como positivamente
carcinogênica em modelos animais, ela é tida como potencialmente carcino-
gênica para humanos. Segundo, os animais utilizados para testes recebem
altas doses do produto, a fim de validar o estudo, pois sabemos que, em uma
população, os riscos de efeitos tóxicos aumentam quando aumentamos a dose
da exposição. Dessa forma, o uso de elevadas doses nos testes de toxicidade
em animais é necessário e válido (GREIM; SNYDER, 2019).

Os testes de toxicidade não têm a finalidade de avaliar se a subs-

tância testada é segura ou não para uso humano, mas sim visam a
avaliar os potenciais efeitos tóxicos gerados devido ao uso pelo ser humano
ou simplesmente pelo seu contato acidental. Além disso, não há um conjunto
predefinido de testes que devem ser feitos em todos os produtos químicos que
queiram adentrar o mercado para consumo humano, mas sim cada produto deve
ser testado de acordo com a natureza química, as possíveis reações adversas
que possam produzir devido ao produto em si e também por seus subprodutos
de degradação (OLSON, 2014).

Apesar de, como já mencionado, não haver um pacote de testes preesta-

belecidos, o teste de letalidade aguda é feito como primeiro teste em muitas
avaliações de produtos químicos. Constitui-se da aplicação de uma dose da
12 Conceitos de toxicologia e suas aplicações

substância a ser testada por qualquer via de administração previamente

estabelecida para o teste em questão. O modelo animal a ser utilizado pode
ser variado, misturando diferentes espécies para melhor avaliação de resul-
tados. Os animais são testados e avaliados diariamente, com anotação de
quantos animais vão a óbito até o período de 14 dias. A concentração aguda
é calculada para uma estimativa de letalidade de 50% de mortalidade dos
animais intoxicados. Os resultados obtidos com esse teste são capazes de
identificar o seguinte (OLSON, 2014):

„„ sintomas da intoxicação aguda;

„„ órgãos-alvo que são afetados em uma intoxicação aguda;
„„ susceptibilidade de diferentes espécies;
„„ parâmetros de possíveis formas de reversibilidade;
„„ dose de intoxicação aguda, que orientará os demais testes.

Há, dentro da comunidade científica, uma discussão acerca das

questões éticas envolvidas nesse tipo de teste. Uma vez que há
inúmeras variáveis envolvidas no processo de identificação da letalidade do
produto químico, ainda é imprescindível que tais testes sejam feitos em modelos
animais. São feitos estudos prévios que tentem minimizar o número de cobaias a
serem utilizadas, permitindo, ainda assim, a obtenção de resultados satisfatórios.
Muitos esforços estão sendo feitos para que se estabeleçam novos testes com a
mesma eficácia, mas que não utilizem modelos animais (MOREAU; SIQUEIRA, 2017).

Como são vários os fatores que podem influenciar esse teste — idade do
animal, peso, tipo de alimentação, entre outros —, é considerada somente
a testagem para descobrir a letalidade aguda, que acabe por levar a óbito
50% da população aplicada, em uma escala entre 5 a 50mg/kg, 50 a 500mg/kg
e assim por diante.
O teste de Draize ou teste de irritação dérmica e ocular tem sido satisfa-
toriamente substituído, em muitos casos, por modelos de culturas de células,
que oferecem dados acerca da toxicidade do produto químico para a pele
e olhos. No teste com animais, em geral é utilizado o coelho como modelo
experimental: a aplicação ocorre em um olho, e o outro é utilizado como con-
trole negativo. Na pele, o produto é aplicado em uma área intacta e em duas
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áreas escarificadas, ficando cobertas por 4 horas. São avaliados vermelhidão,

edema, formação de cicatriz e ação corrosiva (MOREAU; SIQUEIRA, 2017).
Os testes de sensibilização são feitos com porquinhos da índia, que rece-
bem uma dose aplicada em via dérmica. Duas a três semanas após o primeiro
contato, os animais são expostos a doses não irritantes do produto testado, e
é avaliado o surgimento de reações de eritema (KLAASSEN; WATKINS III, 2012).
Os ensaios subagudos também podem ser realizados em busca de infor-
mações de toxicidade de determinado produto com doses repetidas. Pode
também ser executado para a testagem de doses para o teste subcrônico
(KLAASSEN; WATKINS III, 2012).
Os ensaios subcrônicos têm duração de cerca de 90 dias, e buscam estabe-
lecer o LOAEL (lowest observed adverse effect level), a menor dose com efeito
detectável; e o NOAEL (no observed adverse effect level), e a maior dose que
não apresente efeito adverso identificável. O grande dilema deste teste é que
é necessário um grande número de animais, que receberão doses repetidas.
Os resultados podem sofrer influência pela proximidade entre as doses. São
feitas três doses: uma de alta toxicidade, mas que não cause mais do que 10%
de morte dentro da população, uma dose baixa e uma dose intermediária.
Os animais são então avaliados diariamente, com relação a quaisquer sinais
de efeitos tóxicos. Também devem ser avaliados o tecido hematopoiético e
os parâmetros bioquímicos (OLSON, 2014).
Os animais utilizados diferem entre os órgãos de fiscalização no mundo.
O FDA americano (cujas indicações são seguidas por inúmeros outros países)
instrui que os testes sejam feitos em ratos e cães. Já o EPA (Environmental
Protection Agency), a agência de proteção ambiental dos Estados Unidos,
indica o uso de camundongos e ratos.

A fim de garantir resultados confiáveis e preservar eticamente os

animais, ao sinal de qualquer sintoma de sofrimento animal, deve-se
encaminhar o animal ao sacrifício, tanto para preservar os tecidos para futuras
análises quanto para poupar o animal de sofrimento.

Os ensaios crônicos têm uma duração mais elevada, com período de ex-
posição entre 6 meses a 2 anos. O objetivo deste tipo de ensaio é avaliar o
potencial carcinogênico do produto químico testado e a toxicidade cumulativa.
As regulamentações de vários países indicam que a dose do produto seja a
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chamada dose máxima tolerável. São ainda aplicadas, comumente, duas outras
doses, com 50% da dose inicial e outra com 25%. As avaliações baseiam-se
na busca de formações tumorais (tanto malignas quanto benignas) e são
reportadas para análise (KLAASSEN; WATKINS III, 2012).
Mais recentemente surgiram testes de toxicologia molecular, que avaliam a
interação do tóxico com genes e outras moléculas intracelulares. Esse tipo de
análise tem uma ampla gama de possibilidades de ensaios, que permitem uma
grande variedade de avaliações. A bioinformática tem sido uma importante
aliada para essas análises (GREIM; SNYDER, 2019).

Técnicas básicas para detecção de tóxicos em

amostras biológicas
Nas análises de toxicologia clínica de amostras biológicas, algumas técnicas
são tidas como básicas e são muito utilizadas para identificar agentes toxi-
cantes em diversos tipos de amostra. Para cada agente deve ser executado
um ensaio específico, utilizando-se substratos próprios de identificação, mas
a base técnica se mantém a mesma. Dois tipos de técnica ganham destaque:
as análises imunoquímicas e as cromatográficas.
As análises imunoquímicas podem ser subdivididas em técnica imuno-
lógica mediada por enzima (EMIT, enzyme-multiplied imunoassay technique)
e imunoensaio de fluorescência por polarização (FPIA, fluorescence pola-
rization immunoassay). Na EMIT, é adicionada uma enzima à amostra a ser
analisada, e essa enzima forma um complexo enzima-composto, que é poste-
riormente incubado com um anticorpo monoclonal contra o complexo. Quando
o anticorpo se liga a esse complexo, há a inibição da atividade enzimática.
Quanto maior a quantidade de droga a ser analisada presente na amostra,
mais enzima livre haverá na solução analisada, pois haverá competição entre
o composto a ser analisado, a enzima e o anticorpo. O excesso de enzima
livre causa uma reação na solução e uma mudança de cor.
No FPIA, em vez de haver ligação a uma enzima, há a ligação a uma molé-
cula fluorescente. Quando essa molécula fluorescente, que está na solução,
é exposta a uma luz polarizada, a emissão resultante também será similar-
mente polarizada. Quando a molécula fluorescente é ligada ao composto
a ser detectado, diminui a emissão de fluorescência — portando, essa di-
minuição é diretamente proporcional à quantidade presente do composto.
As emissões são então captadas por um detector. Essa técnica tem capacidade
(sensibilidade) de identificação de quantidades nanomolares de substâncias.
Ambas as técnicas são utilizadas para a identificação de drogas de abuso e
 Conceitos de toxicologia e suas aplicações 15

também para monitoramento de drogas de uso farmacológico em amostras

de soro e urina (LEVINE, 2020).
As análises cromatográficas, ou de cromatografia, na maioria das vezes
consistem em análises qualitativas, sendo uma técnica físico-química de
separação dos componentes de uma solução. Elas podem, normalmente em
conjunto com outras técnicas, permitir a quantificação das substâncias de
interesse na mistura ou na amostra biológica.
Em linhas gerais, a cromatografia consiste em uma fase sólida (estacionária)
e uma fase líquida (móvel), que passa através da fase estacionária. Existem
três principais técnicas cromatográficas:

„„ cromatografia em camada delgada (TLC, thin-layer chromatography);

„„ cromatografia líquida de alto desempenho (HTLC, high -performance
liquid chromatography);
„„ cromatografia gasosa acoplada à espectroscopia de massa (GC-MS,
gas chromatography mass spectrometry).

A GC-MS é considerada o padrão ouro para detecção de produtos

tóxicos voláteis, contudo, existem outras duas técnicas que podem
ser utilizadas: a eletroforese capilar e a cromatografia líquida acoplada à es-
pectroscopia de massa.

A cromatografia em camada delgada (TLC) tem por finalidade separar os

compostos químicos presentes em uma amostra. Em toxicologia analítica
ela é muito utilizada para a identificação de compostos químicos presentes
na urina. Para a sua realização, é utilizada uma placa de cobre, plástico ou
folha de alumínio; sobre ela, há uma substância adsorvente feita de sílica-gel,
óxido de alumínio ou celulose. Esse conjunto consiste na fase estacionária.
A amostra a ser analisada é aplicada sobre a placa, que é posta em contato com
a fase móvel, constituída de um solvente. O solvente pode ser, por exemplo,
uma solução de metanol a 10% em clorofórmio.
Em análises de urina, é feita, primeiramente, a concentração e extração
de compostos tóxicos ácidos e básicos presentes na amostra. Normalmente,
o objetivo dessas análises toxicológicas na urina é identificar traços de drogas
de abuso, que costumam ser básicas. Para esses casos, há kits disponíveis no
mercado, como o Toxi-lab, que já tem padronização para as principais substân-
16 Conceitos de toxicologia e suas aplicações

cias tóxicas a serem pesquisadas na amostra biológica. Para a identificação

das substâncias, a placa é submetida a reações de cor, normalmente sendo
utilizadas três reações, que resultarão em um padrão de cor reconhecível em
exposição à luz UV (CHENG; HUANG; SHIEA, 2011).
A cromatografia líquida de alto desempenho (HTLC), por sua vez, é uma
separação de compostos químicos de alto peso molecular, mas de baixa
volatilidade em uma solução. É muito utilizada na toxicologia clínica para a
identificação e quantificação de antidepressivos tricíclicos e seus metabólicos;
apesar de seu uso farmacológico, esses medicamentos podem também ser
utilizados como droga de abuso e até mesmo estar relacionados a casos de
suicídio por uso em quantidade excessiva.
A fase líquida da análise tem a função de separar os componentes da
amostra a ser analisada. Essa mistura é bombeada em uma coluna revestida
por partículas de sílicas esféricas de tamanho padrão de cerca de 35µm; esta
é a fase estacionária. Há um detector do tempo de retenção da interação
entre os compostos da fase líquida e as partículas da fase sólida. Diferentes
substâncias reagem de maneira diferente, o que resulta em dados que serão
analisados pelo detector e plotados em gráficos, propiciando a identificação
das substâncias presentes na amostra (QIU et al., 2011).
Considerada uma técnica padrão ouro para a identificação de tóxicos em
amostras biológicas, a cromatografia gasosa acoplada à espectroscopia
de massa (CG-MS) é utilizada para a identificação de drogas de abuso. Esta
técnica é utilizada após as técnicas de triagem TLC e EMIT. A CG-MS tem alta
sensibilidade e confiabilidade, e envolve duas técnicas: cromatografia líquida-
-gasosa e espectroscopia de massa.
Na primeira parte da técnica, há o aquecimento dos compostos a se-
rem analisados, o que facilita a volatilização e torna os compostos lábeis.
Em seguida, eles são inseridos em uma coluna (fase estacionária), que contém
uma coluna recoberta por hidrocarboneto ou óleo de silicone. A separação
dos compostos ocorre mediante as diferentes capacidades de adsorção dos
compostos presentes na amostra analisada na fase estacionária.
Na segunda parte, a fase gasosa do composto é analisada pelo espec-
trômetro de massa. Para isso é feito um bombardeamento de íons à amos-
tra, que atravessa um gás inerte, criando espécies de moléculas iônicas.
Na sequência, a amostra é submetida a um campo de aceleração de íons e
então atravessa um campo elétrico quádruplo. Os íons com faixas estreitas
 Conceitos de toxicologia e suas aplicações 17

de proporção massa/carga passam por esse campo ajustado e são captados

pelo detector, que transmite as informações para um computador, onde serão
feitas as análises (HITES, 2016).

Referências
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BOOLELL, M. et al. Sildenafil: an orally active type 5 cyclic GMP-specific phosphodies-
terase inhibitor for the treatment of penile erectile dysfunction. International Journal
of Impotence Research, v. 8, n. 2, p. 47–52, 1996.
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Journal of Chromatography A, v. 1218, n. 19, p. 2700–2711, 2011.
ENGLERT, N.; MAYNARD, R. L. Adverse effects versus non-adverse effects in toxicology. In:
REICHL, F.-X.; SCHWENK, M. Regulatory toxicology. 2. ed. New York: Springer, 2020. p. 1–8.
GREIM, H.; SNYDER, R. (ed.). Toxicology and risk assessment: a comprehensive intro-
duction. 2. ed. Hoboken: Wiley, 2019.
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KLAASSEN, C. D.; WATKINS III, J. B. Fundamentos em toxicologia de Casarett e Doull.
2. ed. Porto Alegre: AMGH, 2012.
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of forensic toxicology. New York: Springer, 2020. p. 3–13.
MOREAU, R. L. M.; SIQUEIRA, M. E. P. B. Ciências farmacêuticas: toxicologia analítica.
2. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2017.
OLSON, R. K. Manual de toxicologia clínica. 6. ed. Porto Alegre: AMGH, 2014. (Lange).
QIU, H. et al. Development of silica-based stationary phases for high-performance
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