RoteiroDeAulasPráticas HistoMedI ICSF99 2022.2
RoteiroDeAulasPráticas HistoMedI ICSF99 2022.2
RoteiroDeAulasPráticas HistoMedI ICSF99 2022.2
Professores:
Este roteiro vem sendo revisto e atualizado a cada ano e foi inicialmente elaborado pelos
Professores Dr. Márcio Cajazeira Aguiar e Dra. Maria Isabela Guimarães Campos em 2004,
com a colaboração dos monitores Ana Luiza Vilar Guedes, Daniel Carvalho, Felipe Renê
Garcia, Gustavo Andrade Tedesqui, Igor Teixeira Brito, Júlio César de Oliveira Leal, Marcella
Flores, Priscila Fonseca L. Jorge, Rachel Oliveira Santos Haine, Ramon Campos
Nascimento, Rodrigo Castro Guimarães, Sávio Pastor, Tássia Joana Carvalho Lopes, Thaynã
Souto S. de Santana e Vinícius Oliveira Novais.
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1) MICROSCOPIA E TÉCNICA HISTOLÓGICA BÁSICA
Óptica
Sistema de aumento:
- oculares (10x)
- objetivas (4x, 10x, 40x, 100x)
Sistema de iluminação:
- espelho
- condensador
- diafragma
- filtro
Observações:
1. A imagem proporcionada pelo M.O. é aumentada, virtual e invertida em relação ao objeto
examinado.
2. Calcula-se o aumento da imagem obtida ao M.O. multiplicando-se o valor do aumento da
ocular pelo valor do aumento da objetiva.
3. Campo microscópico é a área da preparação que se está observando ao M.O. Quanto
maior o aumento da imagem, menor é a abrangência do campo.
4. Em virtude do último item, sempre se inicia a observação ao M.O. com uma combinação
de lentes que proporcione o menor aumento, a fim de se ter uma visão panorâmica da
região que se quer observar com maior aumento.
Manejo do Microscópio
1. Acender a lâmpada do sistema de iluminação.
2. Abrir totalmente o diafragma e colocar o sistema condensador - diafragma na posição
mais elevada, pois é aquela que permite melhor iluminação.
3. Movimentar o revólver, colocando em posição a objetiva de menor aumento (4X).
4. Tomar a lâmina com a lamínula para cima e colocá-la na platina, prendendo-a com os
grampos.
5. Movimentar o charriot, fazendo com que o preparado fique em baixo da objetiva.
6. Com o parafuso macrométrico, elevar a platina ao máximo, observando que a objetiva
não toque na lamínula, pois poderá quebrá-la.
7. Focalizar a preparação para a obtenção de uma imagem nítida, movimentando o
parafuso macrométrico e abaixando a platina até que se possa visualizar a imagem.
8. Aperfeiçoar o foco com o parafuso micrométrico.
9. Colocar a região do preparado que se quer ver com maior aumento bem no centro do
campo visual da lente.
10. Movimentar o revólver, colocando em posição a objetiva de 10X (aumento médio).
11. Repetir o procedimento do item 6.
12. Para focalizar a nova imagem, repetir o procedimento do item 7.
13. Repetir o item 8.
14. Repetir o item 9.
15. Colocar a objetiva de 40X (maior aumento) em posição e repetir os itens 6, 7 e 8.
16. A objetiva de 100X é chamada de imersão e seu uso será explicado posteriormente.
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OBSERVAÇÕES IMPORTANTES:
1. A maior parte de nossos microscópios possuem lentes parafocais. Isto significa que, uma
vez obtido o foco com a objetiva de menor aumento, basta girar o revólver, colocar a objetiva
10X em posição e acertar o foco apenas com o parafuso micrométrico.
2. Procede-se da mesma forma, ao focalizar a objetiva 40X, desde que a imagem esteja em
foco com a objetiva 10X.
2. Fixação - o tratamento assim denominado visa impedir a destruição das células por suas
próprias enzimas (autólise) ou bactérias. Este tratamento é feito imediatamente após a
retirada do material (biópsia), ou até antes (fixação por perfusão do animal). A fixação visa
ainda endurecer os tecidos, tornando-os mais resistentes e favoráveis às etapas
subsequentes da técnica histológica. Resumindo, pode-se dizer que a fixação é o tratamento
da peça histológica a fim de que possamos observar ao microscópio os componentes
teciduais, com a morfologia e a composição química semelhantes às existentes no ser vivo.
A fixação pode ser feita por processos físicos ou químicos. A fixação química, mais usada
em Histologia, é feita por fixadores que podem ser simples ou compostos. Como exemplo de
fixador simples temos o formol e, de composto, citamos o líquido de Bouin (uma mistura de
formol, ácido pícrico e ácido acético).
3. Desidratação - visa retirar a água dos tecidos, a fim de permitir a impregnação da peça
com parafina. Para isto, a peça é submetida a banhos sucessivos em álcoois de teor
crescente (ex.: álcool a 70%, 80%, 90% e 100%).
4. Diafanização - visa impregnar a peça com um solvente de parafina. O mais usado é o xilol.
9. Coloração - tem a finalidade de dar contraste aos componentes dos tecidos, tornando-os
visíveis e destacados uns dos outros. Para realizá-la, são observados 3 itens:
a) Eliminação da parafina - por meio de banhos sucessivos em xilol, benzol ou toluol.
b) Hidratação - é executada quando o corante utilizado é solúvel em água. Deve ser gradativa,
com álcoois de teor decrescente, para evitar o rompimento dos tecidos.
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c) Coloração - os corantes são compostos químicos com determinados radicais ácidos ou
básicos que possuem cor e apresentam afinidade de combinação com estruturas básicas ou
ácidas dos tecidos. Rotineiramente, usa-se hematoxilina, corante básico que se liga aos
radicais ácidos dos tecidos, e eosina, corante ácido que tem afinidade por radicais básicos
dos tecidos. Os componentes que se combinam com corantes ácidos são chamados
acidófilos e os componentes que se combinam com corantes básicos são chamados
basófilos. Por exemplo, os núcleos das células, onde predominam substâncias ácidas
(DNA), são basófilos, ou seja, coram-se pela hematoxilina (corante básico de cor roxa); por
sua vez, o citoplasma, onde predominam substâncias básicas (proteínas estruturais), é
acidófilo, corando-se pela eosina (corante ácido de cor rosa).
10. Desidratação - visa retirar a água, quando os corantes utilizados forem soluções
aquosas, a fim de permitir perfeita visualização dos tecidos, pois a água possui índice de
refração diferente do vidro, e ainda prevenir a difusão dos corantes. Para isto usam-se banhos
em álcoois de teor crescente.
11. Diafanização - a diafanização é feita com xilol, a fim de tornar os cortes perfeitamente
transparentes.
A mucosa do reto é revestida por células cilíndricas absortivas, pois apresenta uma
única camada de células, e estas possuem forma e núcleo alongados (40x). Este epitélio
pode também ser chamado de colunar ou prismático simples. Observar que estas células
epiteliais são polarizadas (40x), possuindo seus núcleos no pólo basal que é o pólo nutritivo
da célula. Abaixo desse epitélio existe a lâmina própria ou córion constituído por tecido
conjuntivo frouxo.
Na lâmina própria são observadas inúmeras glândulas exócrinas tubulares
simples. Cada glândula tem uma única luz tubular, dentro da qual os produtos de secreção
são liberados (observar que neste espécime a luz das glândulas pode estar obliterada).
Cada glândula é um tubo circundado de tecido conjuntivo, que desemboca no epitélio de
revestimento. Dentre as células epiteliais que constituem esta glândula, destacam-se as
células caliciformes, cuja porção apical do citoplasma não é corada e os núcleos se
localizam na porção basal (40x). Nesta preparação as glândulas aparecem em cortes
longitudinais (semelhantes a um dedo de luva) e em cortes transversais (aspecto
circular).
Ainda nesta lâmina, observa-se o epitélio estratificado pavimentoso não
queratinizado. Neste existem várias camadas celulares, as células epiteliais justapostas à
lâmina basal são cilíndricas ou cúbicas e constituem a camada germinativa ou basal.
Acima desta, as camadas intermediárias são formadas por células poligonais ou
poliédricas que vão se tornando mais achatadas ao se aproximarem da superfície.
Finalmente, as células achatadas da camada mais superficial caracterizam o epitélio
denominado pavimentoso. A superfície deste epitélio não está revestida por queratina, por
esse motivo é considerado não queratinizado (40x).
✓ Check-List
(Confira se você identificou todas as estruturas importantes neste preparado histológico)
( ) Epitélio colunar ou prismático simples
( ) Glândulas exócrinas tubulares com presença de células caliciformes
( ) Epitélio estratificado pavimentoso não queratinizado e queratinizado
✓ Check-List
(Confira se você identificou todas as estruturas importantes neste preparado histológico)
( ) Epitélio pavimentoso simples (endotélio)
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Lâmina J1 – Epitélio estratificado pavimentoso
queratinizado (pele / nervo periférico, HE)
Observa-se um epitélio estratificado, ou seja, várias
camadas que recebem nomenclatura específica. No estrato
basal as células apresentam morfologia cúbica ou
cilíndrica e têm a função germinativa. Em seguida, no
estrato escamoso as células assumem forma poligonal
com núcleo central. As células pavimentosas mais
superficiais constituem o estrato granuloso e
apresentam grânulos basófilos em seu citoplasma
(40x).
Externamente, pode-se observar uma espessa
camada de material acidófilo e filamentoso, constituída de
queratina e denominada estrato córneo.
✓ Check-List
(Confira se você identificou todas as estruturas importantes neste Objetiva:
preparado histológico)
( ) Estrato basal cúbico ou cilíndrico
( ) Estrato escamoso (espinhoso)
( ) Estrato granuloso
( ) Estrato córneo
QUESTÕES:
Objetiva:
✓ Check-List
(Confira se você identificou todas as estruturas importantes neste preparado histológico)
( ) Derme papilar (tecido conjuntivo frouxo)
( ) Derme reticular (tecido conjuntivo denso não modelado)
( ) Hipoderme (tecido adiposo unilocular)
QUESTÕES:
✓ Check-List
(Confira se você identificou todas as estruturas importantes neste preparado histológico)
( ) Pericôndrio com condroblastos
( ) Matriz cartilaginosa contendo condrócitos em lacunas
( ) Grupos isógenos
( ) Matriz territorial e matriz interterritorial
✓ Check-List
(Confira se você identificou todas as estruturas importantes neste preparado histológico)
( ) Matriz extracelular acidófila com feixes de fibras colágenas
( ) Condrócitos isolados
Ainda nesta lâmina é possível observar o tecido adiposo unilocular que constitui a
medula óssea amarela. Os adipócitos são células grandes, esféricas que apresentam os
núcleos achatados na periferia, devido à presença de uma única gotícula lipídica, dissolvida
durante o processamento histológico (40x). Entre as células existe um tecido conjuntivo
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frouxo vascularizado, porém só é possível visualizar os vasos maiores contendo hemácias
acidófilas (40x).
✓ Check-List
(Confira se você identificou todas as estruturas importantes neste preparado histológico)
( ) Trabéculas de osso esponjoso
( ) Osso compacto
( ) Sistema de Havers
( ) Medula óssea amarela (adipócitos)
QUESTÕES:
✓ Check-List
(Confira se você identificou todas as estruturas importantes neste preparado histológico)
( ) Corpo do neurônio e células da neuroglia
( ) Aracnóide e Pia-máter
( ) Células ependimárias cúbicas
( ) Plexo coróide
✓ Check-List
(Confira se você identificou todas as estruturas importantes neste preparado histológico)
( ) Córtex cerebelar (substância cinzenta)
( ) Camada molecular do córtex do cerebelo
( ) Camada das células de Purkinje do córtex do cerebelo
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( ) Camada granular do córtex do cerebelo
( ) Medula central (substância branca)
✓ Check-List
(Confira se você identificou todas as estruturas importantes neste preparado histológico)
Secção longitudinal
( ) Perineuro
( ) Disposição em zigue-zague da bainha de mielina e o axônio
Secção transversal
( ) Perineuro
( ) Endoneuro
( ) Área clara referente à bainha de mielina circundando axônios acidófilos
QUESTÕES:
✓ Check-List
(Confira se você identificou todas as estruturas importantes neste preparado histológico)
( ) Endomísio e perimísio
( ) Secção longitudinal das células multinucleadas com estriações transversais
( ) Secção transversal das células musculares
✓ Check-List
(Confira se você identificou todas as estruturas importantes neste preparado histológico)
( ) Fibras musculares ramificadas (anastomoses)
( ) Secção longitudinal das células musculares com estriações transversais
( ) Discos intercalares
( ) Núcleos esféricos e centrais
( ) Secção transversal das células musculares
✓ Check-List
(Confira se você identificou todas as estruturas importantes neste preparado histológico)
( ) Fibra fusiforme com núcleo central e único (longitudinal)
( ) Fibra circular com núcleo central e único (transversal)
( ) Ausência de estriações
QUESTÕES: