UNIVERSITATEA DIN BUCURESTI

CICLUL 1. LICENTA IN BIOCHIMIE

Biochimie metabolica

12/10/13

12/10/13

Piruvatul format in glicoliza

patrunde in mitocondrie
(transportor) si sufera
decarboxillare oxidativa la
acetil CoA (complexul piruvat
dehidrogenaza)
Acetil CoA este oxidata total
(cu NAD+ si FAD) in ciclul
acizilor tricarboxilici (TCA) cu
formare de CO 2 , NADH,
FADH2, ATP.
ANT transportor ADP/ATP;
GDH- glutamat dehidrogenaza; KG - cetoglutarat; OAAoxaloacetat; PC - piruvat carboxilaza; PDH - piruvat dehidrogenaza; Suc-CoA,
succinil-CoA; SDH - succinat
dehidrogenaza; UCP2- proteina de decuplare 2.

12/10/13

Prof. Dana Iordachescu

Complexul piruvat dehidrogenazei

Complex multienzimatic care catalizeaza reactia de decarboxilare oxidativa:

CH3
C=O

NAD+

CoA-SH

COOH

CH3-CO~SCoA

NADH

CO2

Transformarea ireversibila, transformarea lipide

glucide imposibila

Nr.catene

L. Reed

Complex
E,coli

Grupari prostetice
E1-Componenta A
TPP
24
realizeaza decarboxilarea oxidativa a piruvatului
E2 Dihidrolipoil
24
transacetilaza
..transferul gruparii acetil pe CoASH
E3 Dihidrolipoil
dehidrogenaza

12/10/13

Lipoilamida

FAD
12
regenerarea formei oxidate a lipoilamidei
4

E1

H+

Tiamin pirofosfat (TPP)

carbanion

CH3
C=O
COOH

piruvat

HO-C-CH3

COOH

HO-C-CH3
CO2

H+

Hidroxietil-TPP-E1

a) Componenta A a complexului piruvat dehidrogenaza catalizeaza

decarboxilarea piruvatului (3C) cu formarea unui derivat hidroxietil (2C)

12/10/13

HO-C-CH3

TPP-E1

E1-TPP
Lipoilamida E2
H

Are loc transferul unei grupari cu 2 C si un

proces de oxidare alcool compus
carbonilic, de unde si caracterul
macroergic al legaturii tioesterice

CH3-CO~

H
CH3-CO~

b)

CoASH

CH3-CO~SCoA

Tot in etapa b are loc transferul gruparii acetil pe coenzima A

12/10/13

H
H

E3-FAD

E3-FADH2 + NAD+

E3-FADH2

E3-FAD + NADH+H+

Interactii necovalente intre E1, E2 si E3

Avantaj evolutiv: creste viteza totala a reactiilor,
scad reactiile secundare
Complex
Lipoilamida 14 mobilitate,
stabileste contacte cu E1 si E3
enzima E2 are pozitie centrala

pH>7

E1

La pH neutru, dupa dializa,

are loc o reasamblare
sponana

E2.E3
uree

E2
E3

12/10/13

Etapele decarboxilarii oxidative catalizata de piruvat dehidrogenaza

12/10/13

Controlul piruvat dehidrogenazei

PDH-OP
inactiva

PDH-OH

12/10/13

activa

Transformari alternative ale acetil CoA

12/10/13

10

Ciclul Krebs
Ciclul
acizilor tricarboxilici Ciclul
acidului citric

Are loc in matricea

mitoncriala
Gruparea acetil din acetil CoA este
oxidata total la 2 moli CO2
Agenti oxidanti: 3 moli NAD+ si
un mol FAD
Reactie totala:

CH3COSCoA + 3 NAD+ + FAD + GDP+Pi

2
2

3
7

2CO2 + CoASH + 3NADH+3H++FADH2 +

GTP

6
6

Reactiile 1,3,4 - ireversibile

4
5

4
5

Reactia 5 fosforilare oxdativa la nivel

de substrat
Reactia 6 este legatura cu CTEM

12/10/13

11

Reactiile ciclului Krebs

ENZIME
Etapa 1- citrat sintaza
Etapa 2- aconitaza
Etapa 3-izocitrat
dehidrogenaza
Etapa 4-complexul 2oxoglutarat dehidrogenazei
Etapa 5-succinil CoA
sintetaza
Etapa 6-succinat
dehidrogenaza
Etapa 7-fumaraza
Etapa 8-malat
dehidrogenaza
Atentie sintaza clasa 4 Enzime; sintetaza clasa 6 Enzime !
Complexele omoloage: 2-oxoglutarat dehidrogenaza si piruvat dehidrogenaza !
12/10/13

12

1. Reactia citrat sintazei condensarea acetil CoA cu oxaloacetat cu

formarea acidului tricarboxilic - citratul

2. Reactia aconitazei izomerizarea citratului (C6) la izocitrat

Aconitaza
are un cluster 4Fe-4S in centrul catalitic activ
catalizeaza hidratarea reversibila a cisaconitatului
12/10/13

13

12/10/13

14

3) Reactia izocitrat dehidrogenazei decarboxilarea oxidativa a izocitratului

2 izoenzime (citosol, mitocondrie)
care colaboreaza in transferul H+
prin membrana interna
mitocondriala

4) Transformarile catalizate de complexul 2-oxoglutarat dehidrogenazei ce

conduc la formarea complexului macroergic succinil CoA
E1- Componenta A a complexului
2-oxoglutarat decarboxilaza (TPP)
E2- dihidrolipoat transsuccinilaza
E3-dihrolipoat dehidrogenaza (FAD)
comuna

5) Reactia succinil CoA sintetaza fosforilare oxidativa la nivel de substrat

Reactie reversibila scindeaza si se
formeaza un compus macroergic
Echiibrul deplasat spre sinteza
succinil CoA-nomenclatura enzimei
12/10/13

GTP + ADP

GDP + ATP

15

6) Reactia succinat dehidrogenazei oxidarea succinatului la malat

FAD legat covalent
Are 3 clustere Fe-S
2Fe-2S; 3Fe-4S; 4Fe-4S
Succinat

FADH2

Fe-S

Singura enzima plasata in membr mit interna face legatura cu CTEM

7) Reactia fumarazei specifica pentru izomerii trans (fumarat) si L (malat)

8) Reactia malat dehidrogenazei refacerea acceptorului initial C4

Izoenzime citosol-mitocondrie care
colaboreaza in transferul echivalentilor de
reducere prin membrana interna
mitocondriala

12/10/13

16

Reglarea fluxului ciclului Krebs

Viteza fluxului ciclului Krebs este reglata
de nivelul ATP, la 3 puncte control:
Piruvat dehidrogenaza- inhibata de
NADH, acetil CoA si ATP
Izocitrat dehidrogenaza stimulata de
ADP, inhibata de ATP si NADH
Complexul 2-oxoglutarat DHaza inhibat
de NADH, succinil CoA, NADH
Citrat sintaza enzima reglatoare - 2,
fiecare subunitate are un domeniu mare,
un domeniu mic, legate printr-o fanta la
nivelul careia este centrul catalitic activ
Mecanismul induced fit oxaloacetatul se
leaga primul, induce o modificare conform.
soldata cu formarea centrului catalitic activ,
dupa care se leaga acetil CoA senzor
pentru accesibilitatea oxaloacetatului
12/10/13

17

Sinteza asimetrica in ciclul Krebs

CH3-CO~SCoA

CH2-COOH

O=C-COOH

HO-C-COOH

CH2-COOH

CH2-COOH

CH2-COOH

H-C-COOH

CH2-COOH

CH2

HO-CH-COOH

CH2

O=C-COOH

CO2

In prima runda a ciclului, CO2 provine din

oxaloacetat, nu din acetil CoA

CH2-COOH

COOH
CO2

Reinoire - turnover
CH2-COOH

Teoria lui Ogston

C
HO

COOH

Aconitaza deosebeste
intre cele doua grupari
carboximetil datorita
structurii centrului
catalitic activ

CH2-COOH
12/10/13

18

Natura amfibolica a ciclului Krebs

glucoza

gluconeogeneza

Ciclul Krebs furnizeaza metaboliti si pt

multe cai anabolice sinteza de acizi grasi
colesterol,
corpi cetonici,
aminoacizi si
proteine,
porfirine,
nucleotide,
glucide

5
Corpi cetonici

2
3

4
12/10/13

Prof. Dana Iordachescu

19

+ Acetil CoA

Reactii anaplerotice ciclului Krebs

Mn2+

1. Pir + CO2 + ATP piruvat carboxilaza

oxalacetat + ADP + Pi
3

Mitocondrie
650 kDa, 4 subunitati
1 mol biotina/subunitate

2. PIR + CO2+NADPH

3. Transaminari
4. Ciclul glioxilat

malic enzima

malat + NADPH
Malat: NADP oxidoreductaza
decarboxilanta

Comparatie ATP vs NADPH

compusi macroergici
12/10/13

20

Ciclul glioxilat
Plante, microorganisme
In glioxizomi
5

CH2-COOH

Izocitrat liaza

CH2-COOH

CH-COOH
4

HO-CH-COOH

CH2-COOH
CHO

succinat

COOH glioxilat

0=CH-COOH
+
CH3-CO~SCoA
+
H 2O

malat

HO-CH-COOH

sintaza

CH2-COOH
+
CoA-SH

Reactie totala:
2 Acetil CoA + NAD+ + H2O
Acizi grasi

12/10/13

Succinat + NADH+ 2 CoASH

Glucoza

21

Ciclul Krebs si ciclul glioxilat

decurg concomitent, in organite
intracitoplasmatice diferite, intre
care exista schimburi de
metaboliti

12/10/13

22

UNIVERSITATEA DIN BUCURESTI

CICLUL 1. LICENTA IN BIOCHIMIE

Biochimie metabolica

GLUCONEOGENEZA
Cale anabolica generala sinteza glucozei din precursori neglucidici
Decurge cu viteza maxima in ficat; Vmax in cortexul renal; viteze
mici in creier, muschi
Rol

Mentinerea glicemiei
Alimentarea cu glucoza a tesuturilor nehepatici
Creier glucoza este combustibilul principal; consum de
120 g glc/zi din cele 160 g glc necesare omului adult/zi

Esential in perioade lungi de inanitie si exercitii

musculare

Lactat

Propionat

Metabolitii glicolizei
surse neglucidice

Piruvat

Alanina

Oxalacetat

Aspartat

GAP, DHAP

Alte surse
gluconeogenice

Glucoza

Gluconeogeneza poate fi considerata inversul glicolizei, cu care are

metaboliti si enzime comune cu mici exceptii

Glicoliza
Glc + 2 NAD+ + 2 (ADP+Pi)
2 Pir + 2 NAD + 2 ATP
Go = - 20 kcal/mol
3 etape ireversibile
Hexokinaza
Fosfofructokinaza
Piruvat kinaza
Gluconeogeneza
2 Pir + 2 NADH + 4 ATP + 2 GTP
Glc + 2 NAD+ + 4 ADP + 2 GDP +
6Pi
Go= - 9 kcal/mol
4 reactii ireversibile
4

Prima reactie in mitocondrie, restul

citosol

Etapele gluconeogenezei
1) Carboxilarea piruvatului piruvat carboxilaza mitocondrie
reactie anaplerotica ciclului Krebs
CH3
C=O

COOH
+ CO2 + ATP + H2O

CH2 + ADP + Pi

COOH

C=O
COOH

piruvat

oxalacetat

acetil CoA
Biotin-E + CO2 + ATP

CO2~biotin-E + ADP + Pi

CO2~biotin-E + Piruvat

Biotin-E + oxalacetat
O
-O

C
C

NH

lysine
residue

CH CH
H2C

CH
S

(CH2)4

carboxybiotin

O
C

NH

(CH2)4 CH
NH

Cand [ATP] mare, acetil CoA

stimuleaza intrarea oxaloacetatului
in gluconeogeneza

Urmatoarele reactii ale gluconeogenezei au loc in citosol

Gluconeogeneza

Mitocondrie

PIR

citosol

Piruvat carboxilaza

ATP

OA

OA
MDHc

MDHm
NADH

NADH

Malat

Malat

OA oxalacetat
MDH-malat dehidrogenaza
MMI membrana mit.interna

MMI

2) Transformarea oxaloacetatului in fosfoenol piruvat, sub actiunea PEP

carboxikinazei in citosol
COOH
CH2
C=O

PEP carboxikinaza
+ GTP

CH2
C~OP + CO2 + GDP

COOH

COOH

Oxalacetat

Fosfoenol piruvat (PEP)

Suma reactiilor 1 + 2
PIR + ATP + GTP

PEP + ADP + GDP + Pi

Transformarile ulterioare sunt comune cu cele ale glicolizei:

PEP

2-PG

3-PG

ATP

1,3-DPG

NADH

GAP

glyceraldehyde-3-phosphate
NAD+ + Pi
Glyceraldehyde-3-phosphate
Dehydrogenase
NADH + H+

Suma reactiilor 1-6 x 2

2 PIR + 4 ATP + 2 GTP +2 NADH

1,3-bisphosphoglycerate
ADP
Phosphoglycerate Kinase
ATP
3-phosphoglycerate
Phosphoglycerate Mutase
2-phosphoglycerate
2 GAP + 4 ADP +2 GDP + NAD+ + 5 Pi
Enolase
H2O
phosphoenolpyruvate
CO2 + GDP

PEP Carboxykinase

GTP
oxaloacetate
Pi + ADP

HCO3

+ ATP
pyruvate

Pyruvate Carboxylase
Gluconeogenesis

glucose
Pi

Gluconeogenesis

Glucose-6-phosphatase

H2O
glucose-6-phosphate

Phosphoglucose Isomerase
fructose-6-phosphate
Pi
Fructose-1,6-bisphosphatase
H2O
fructose-1,6-bisphosphate
Aldolase
glyceraldehyde-3-phosphate + dihydroxyacetone-phosphate
Triosephosphate
Isomerase
(continued)

Glucozo 6-fosfataza este o

enzima inglobata in sistemul
membranar al reticulului
endoplasmic (ER) din ficat.
Situsul catalitic este expus
lumenului ER.
De fapt in hidroliza Glc-6-P sunt implicate si alte 4 proteine: 1) transportorul
glucozo-6-P (T1); 2) transportorul fosfatului (T2); 3) transportorul glucozei (T3)
si proteina SP (Ca-binding stabilizing protein)
10

Se cunosc maladii de stocare a

glicogenului GSD (glycogen storage
disease) datorita unor defecte
genettice la nivelul acestui sistem:
Tip 1a defect la nivelul G6Paza
Tip 1b defect la nivelul transportorului T1 (Glc 6-P)

11

Cicluri futile
ATP

ADP

100

B
90

Pi

Flux metabolic A

100

90

Viteza neta
H 2O

A + ATP

B + ADP

B + H 2O

A + Pi

ATP + H2O

ADP + Pi

10

Daca un efector activeaza cu 20 %

transformarea A
B, inhiba cu
20 % transformarea B
A
v
Fluxul metabolic A
B
Viteza neta

12

B 120
A

72
48

13

Situsul major de reglare a

gluconeogenezei si glicolizei prin
nivelul fructozo 2,6-bis fosfat
(F-2,6-BP).
Hiperglicemie

+fosfructokinaza
glicoliza

[F-2,6BP] creste

- F-2,6-BP
fosfataza
neogeneza

Inanitie

[F-2,6BP] scade
Invers!

14

15

6 ATP ficat + 2 ADP eritrocit

6 ADP ficat

+ 2 ATPeritrocit

Deplasari energetice (ATP) de la ficat (tesut bogat in mitocondrii) spre

eritrocit (tesut lipsit de mitocondrii)

In ficat, ciclul ureogenic

10 ATP ficat + 8 ADP muschi + O2

Mai avantajos energetic!
16

10 ADPficat + 8 ATP muschi

CITOSOL

17

PIR

MITOCONDRIE

Glu

Glu

NAD+

GPTc

NH3
OG

Ala

GLUONEOGENEZA

malat
NAD+

OA

CO2

ATP

Glu

Ala
malat

OA
NADH

MDHm

NAD+
malat

Glu

GPTc

OA

Pir carboxilaza

NADH

PIR

Glu DHaza

NADH

OG
PIR

MDHc

Ala principalul
aminoacid
gluconeogenic

OA
GOTm

OG
OG

Asp
Pir carboxlaza

PIR

OA
La fel!

malat
OG 2-oxoglutarat; OA oxalacetat; MDH malat dehidrogenaza; GPT alanin aminotransferaza; GOT
glutamat aminotransferaza

Glucide

Piruvat

PDH

Acetil~CoA

Lipide

Datorita in principal ireversibilitatii reactiilor catalizate de complexul PDH,

Lipidele nu pot fi transformate in glucide (nu sunt surse gluconeogenice)
1-a exceptie
CH2-O-CO-R1
CH-O-CO-R2

CH2-OH

lipaza tisulara
hormon sensibila

CH-OH

CH2-O-CO-R3

CH2-OH
ADP

R1-COOH
+

R2-COOH
R3-COOH

ATP

CH2-OH
CH-OH
CH2-O- P
Glicerol 3-P
dehidrogenaza

DHAP

Glicerol
kinaza

NAD+
NADH

18

19

A 2-a exceptie
Aminoacizii ramificati (Val, Ile)
catabolism

Acizii grasi cu numar impar de atomi de carbon

Propionat

Colesterol

ATP, CoA

CO2

AMP+PP

ATP

Propionat

Propionil
CoA sintetaza

Propionil
CoA

ADP
COOH
CH-CH3

Vit B12

Propionil
mutaza
CoA
CO~SCoA
carboxilaza
Metil malonil CoA

Succinil CoA
Succinil
CoA
sintetaza

CITOSOL
fumaraza

Oxalacetat

Malat

Malat

Fumarat

succinat

Succinat

dehidrogenaza

MITOCONDRIE
GLUCONEOGENEZA