1

DISCURS LICEN

Bun ziua! M numesc Pnzaru Andreea, prezint lucrarea cu tema Clonarea genic i aplicaii. Lucrarea este structurat n 4 capitole i anume: 1. Istoricul cercetrilor de clonare genic 2. Consideraii generale 3. Metode i tehnici de clonare genic 4. Tehnici de analiz a genelor Interesul pentru a rspunde la ntrebrile despre fiziologia vieii, a fost nc de acum cteva mii de ani, cnd Aristotel a ncercat s rspund la ntrebarea cum sunt creai copiii, el a ajuns la concluzia corect, ns, nu toi au aderat la teoria sa. Abia n 1609 odat cu apariia primelor microscoape s-au putut observa celulele, nucleele, etc., tiina avansnd semnificativ, de la descoperirea cromozomului n 1869 de ctre Frederick Miescher, pn la descoperirea structurii ADN n 1962, cnd James Watson, Maurice Wilkins i Francis Crick primeau Premiul Nobel n medicin aceast reuit inaugurnd epoca geneticii. Un subiect de mare interes rmne clonarea, nc insuficient cunoscut i prea puin prezentat publicului larg, clonarea fascineaz prin faptul c mult timp a fost de domeniul science fiction, iar acum pare s devin o realitate pe care trebuie s o acceptm.

Intens dezbtut, din punct de vedere moral, etic i religios, clonarea va fi un capitol important al viitorului.

M-am oprit asupra acestei teme, ntruct doresc s mi mbuntesc cunotinele asupra acestei tehnici att de mediatizat i controversat, concentrnd ntr-un mic volum de sintez, aspecte teoretice i aplicative ale tiinei despre clonare. Aspectele clonrii sunt foarte variate, astfel: -la animalele vertebrate, clonarea se realizeaz prin transplantarea nucleilor din celulele somatice n ovule din care s-au ndeprtat nucleii. Este bine cunoscut cazul celebrei oi clonate Dolly, 1997. Ea a fost obinut prin fuzionarea unui ovul fr nucleu, provenit de la o oaie cu capul negru, cu o celul somatic provenit din glanda mamar a unei oi cu capul alb. Doar 1 % din clonrile animale efectuate pn n prezent au avut rezultat pozitiv, restul sufereau de diferite deficiene.(ex.) n schimb, clonarea la plante se bazeaz pe fenomenul de totipoten, care const n capacitatea de a genera, prin diviziuni succesive, ntregul organism. Pentru obinerea clonelor se utilizeaz, fie prelevarea meristemelor, fie nmulirea vegetativ. Apariia Ingineriei genetice care mai este denumit i modificare genetic, transformare genetic, transgenez, a nsemnat o adevrat revoluie asupra altor domenii ale tiinelor biologice i medicale; fiind un domeniu relativ tnr, reprezint una dintre ramurile cele mai dinamice ale

tiinelor biologice, aceasta urmrind transferul unor noi informaii genetice n structura celulei unei fiine vii. Astfel, se obin, microorganisme, plante i animale reprogramate genetic, n al cror genom sunt incluse gene strine, utile, exprimabile i transmisibile stabil la descendeni. Ca metode ale ingineriei genetice, avem: Metoda plasmidelor utilizat pentru modificarea bacteriilor Metoda vectorului viral gene inserate prin intermediul unui virus i clonarea metod de duplicare a genelor.

Etapele acestei tehnici, 1. izolarea ADN-ului corespunztor unei anumite gene 2. multiplicarea sa 3. construirea unor molecule de ADN hibride 4. transferul de la o specie la alta (chiar de la procariote la eucariote) n urma transferului rezult organisme transgenice. n continuare, Capitolele 3 i 4 suprind metode i tehnici de analiz a genelor. Tehnica modern i rapid de amplificare in vitro a secvenelor ADN PCR Reacia de Polimerizare n lan, permite o variat aplicare practic n studii de antropologie moleculara i paleogenetic. Acesta implic urmtoarele etape, etapa iniial de denaturare ataarea primerilor polimerizarea propriu-zis

extensia final Marele avantaj al tehnicilor PCR, l reprezint faptul c permite obinerea unor cantiti mari dintr-o secven ADN, fr a necesita clonarea acesteia n prealabil, intr-o molecul de tip vector. Acesta permite, - diagnosticul unor boli monogenice - detectarea de noi tipuri de mutaii n gene importante n anumite boli - diagnosticul unor infecii umane - studii privind mecanismele genetice ce acompaniaz procesele maligne - studii de taxonomie, sistematic i filogenie molecular - studii de antropologie tehnica PCR permite n prezent recuperarea i analiza unor secvene de ADN fosile - medicina legal cu ajutorul reaciilor PCR pot fi n prezent analizate la nivel molecular o serie ntreag de probe biologice. Dei este o tehnic foarte eficient i precis, aceasta ntmpin i dificulti contaminarea cu ADN de alt provenien, atunci cand nu se asigur condiii riguroase de sterilizare. Principala metod de analiz genomic este Metoda Southern-blot Este o tehnic pentru determinarea formelor specifice de ADN din diferite celule - n prealabil ADN este extras din celule i fragmentat cu ajutorul unor enzime de restricie - urmeaz, separarea fragmentelor de ADN prin electroforez, si transferarea acestora pe un supor solid de hrtie

- moleculele specifice sunt apoi identificate cu o sond nucleotidic radiomarcat. Tehnica de biologie molecular prin care sunt detectate moleculele specifice de ARN mesager, n scopul analizrii expresiei genice celulare este metoda Northern-blot, este similar tehnicii anterioare, doar c procedeul are la baz extragerea de ARN mesager din celule i denaturarea lor. Tehnica Westtern-blot const n identificarea unei proteine specifice din amestecul de proteine celulare. Pentru acesta, proteinele sunt separate prin electroforez, apoi transferate pe filtre de nailon i supuse tratrii cu anticorpi specifici marcai radioactiv sau fluorescent. Prin aceast metod se poate identifica prezena sau lipsa proteinei, dimensiunile ei i rata de expresie a genei.

n urma celor spuse, consider c lumea geneticii este o lume fascinant, iar clonarea poate fi vazut ca un pas uria n tehnologia tiinei. clonarea are ca avantaj aplicaiile n activitile de conservare a speciilor pe cale de dispariie, acest lucru reprezentnd o oportunitate pentru refacerea echilibrului natural. este bine cunoscut faptul c cercetrile de inginerie genetic i noile biotehnologii necesit laboratoare speciale, aparatur i utilaje de laborator sofisticate i extrem de scumpe, substene i reactivi de mare puritate, dar mai ales, cercettori i specialiti de nalt calificare. n aceste condiii este evident c cercetrile de inginerie genetic s-au dezvoltat prioritar n rile cu mari resurse financiare i umane!

ingineria genetic utilizeaz cultura in vitro a celulelor, esuturilor animale i vegetale i tehnica ADN recombinant. Aceast tehnic prezint avantajul c poate depi barierele de specie, adic, permite transferul ADN-ului de la o specie la alta. aplicarea tehnicii clonrii plantelor i animalelor se poate dovedi util i prin obinerea de copii perfecte ale unui individ valoros din punc de vedere economic. Literatura de specialitate a constituit un punct de sprijin n prezentarea principalelor aspecte ale acestei teme i, astfel, n elaborarea lucrrii.