2013

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE INGENIERIA DE MINAS

ESPECIALIDAD INGENIERIA AMBIENTAL Y SEGURIDAD INDUSTRIAL

2014

Compromiso Climtico

ALUMNO:
Reyes Cornejo Diego Alonso
DOCENTE:
Ticona Michilot Julia Mercedes
CURSO:
Microbiologa Ambiental
TEMA:
El antibiograma: accin de los antibiticos
FACULTAD:
Ingeniera de Minas.
ESPECIALIDAD:
Ingeniera Ambiental y Seguridad Industrial.

SULLANA - 2014

Blga. Julia M. Ticona Michilot

EL ANTIBIOGRAMA: ACCIN DE LOS ANTIBITICOS

Ao de la Promocin de la Industria Responsable y del

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2014

PRACTICA DE LABORATORIO N07

I.

Introduccin:

Podemos definir en lneas generales como agentes antimicrobianos a aquellas

sustancias que inhiben el crecimiento de los microorganismos o producen su
inactivacin. Por lo tanto, y dependiendo de la accin que dichos agentes
ejercen sobre los microorganismos, podemos dividirlos en:
son aquellos que producen una accin letal irreversible sobre los
microorganismos.
Dependiendo de su naturaleza y procedencia, las sustancias antimicrobianas
pueden ser productos qumicos de sntesis o bien productos naturales
producidos por microorganismos u otros organismos vivos. A estos ltimos se
les considera Antibiticos si bien algunos de ellos, que fueron primero
descubiertos en la naturaleza, se obtienen en la actualidad sinttica o
semisintticamente, de una forma ms sencilla y barata. Entre las sustancias
antimicrobianas qumicas de sntesis se ha englobado dentro del concepto de
Quimioterpico a aquellas que pueden interferir directamente en la
proliferacin de los microorganismos a concentraciones toleradas por el
husped. Por lo tanto, al ser sustancias que poseen una toxicidad selectiva,
pueden utilizarse teraputicamente (de ah su nombre) para inhibir a un
determinado microorganismo sin ocasionar lesiones importantes en el
hospedador.
Esta serie de propiedades (toxicidad selectiva, especificidad y extremada
actividad) justifican la aplicacin de este tipo de sustancias en la clnica cuando
las defensas corporales no bastan para que el individuo supere la enfermedad.
De esta manera, el individuo puede recuperarse sin consecuencias graves,
permitiendo la destruccin o eliminacin del agente etiolgico sin excesivos
riesgos (o por lo menos menores que los producidos por la infeccin) en el
hospedador.
La resistencia bacteriana a quimioterpicos y antibiticos tom su verdadera
importancia cuando se comprob la posibilidad de su adquisicin por
mecanismos de transformacin, conjugacin y transduccin. De esta manera se
obtiene la resistencia a gran cantidad de antibiticos y quimioterpicos al
contactar cepas patgenas con cepas saprofitas que, al ser huspedes habituales
del hombre y los animales, estn continuamente expuestas a gran cantidad
de estas sustancias. El suministro de estos agentes antimicrobianos a los
animales y hombre provoca la seleccin (que no el acostumbramiento) de los
mutantes resistentes a estas sustancias.
Si esta resistencia es extracromosmica, puede ser transferida a otros
microorganismos menos frecuentes y ms patgenos.
En nuestros das han sido puestos a nuestra disposicin para la lucha contra las
enfermedades bacterianas gran cantidad de agentes antibacterianos.

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EL ANTIBIOGRAMA: ACCIN DE LOS ANTIBITICOS

EL ANTIBIOGRAMA: ACCIN DE LOS ANTIBITICOS

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Todas las bacterias no tienen la misma sensibilidad a los distintos antibacterianos.

La evaluacin de esta sensibilidad nos va a ayudar en la seleccin del compuesto
ms adecuado para el tratamiento de una infeccin bacteriana. Las pruebas ms
utilizadas para evaluar la sensibilidad de una bacteria a un agente antibacteriano
estn basadas en el enfrentamiento in vitro de la bacteria con distintas
concentraciones del agente.
Agentes microbiostticos: se define como la menor concentracin de
antimicrobiano capaz de inhibir el desarrollo de una cepa bacteriana dada.
Agentes microbicidas: se define como la menor concentracin de
antimicrobiano capaz de destruir una cepa bacteriana dada.
Existen vanos mtodos para probar la susceptibilidad de los microorganismos a
los antibiticos siendo la difusin en disco el ms utilizado, fue ideada por
Kirby y Bauer; se realiza en un medio transparente y simple como el agar de
Meller Hinton Se fundamenta en la liberacin del antibitico al medio e
inhibicin del crecimiento bacteriano en reas concntricas a la del disco.
TABLA 1:CRITERIOS PARA ESTABLECER CATEGORAS EN ANTIBIOGRAMAS
Antimicrobiano

Disco

cido Nalidxico

NA 30g

cido Oxolinico

OA 2g

Ampicilina

AM 10g

Amoxicilina

AMX 25g

Amoxicilina+cla

AMC 30g

Amikacina

AN 30g

Apramicina

APR 40g

Aztreonam

ATM 30g

Ceftazidima

CAZ 30g

Ceftiofur

EFT 30g

Dimetro (Interpretacin)
S
19
13
11
10

I
14 18

17
29
28
17
16
26
18

14 16
-

21
14
20
19
18
13

Aplicable en:

Referencia

Enterobacterias

NCCLS 2002(V)

Enterobacterias
Estafilococos
Enterococos
Estreptococos
(salvo S.
pneumoniae)

NCCLS 2002(V)

13

19 25

14 17

SFM 2001
Estafilococos
Otros
organismos

NCCLS 2002(V)

17
14
14
13

15 16

22
15
18
14
21
17

16 21

Enterobacterias

NCCLS 2002(H)

15 17

Enterobacterias

NCCLS 2002(H)

18 20

Actinobacilluspl
europneumoniae

NCCLS 2002(V)

NCCLS 2002(V)

VAV

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Cefotaxima

CTX 30g

Cefoxitina

FOX 30g

Ciprofloxacina

Cip 5 g

Cloranfenicol

C 30g

Colistina

CL 50g

Doxiciclina

D 30g

Enrofloxacina

ENR 5g

Eritromicina

E 15g

23
14
18
14
21
15
18
12
21
17
15
15
16
12

15 22

Enterobacterias

NCCLS 2002(H)

15 17

Enterobacterias

NCCLS 2002(H)

16 20

Enterobacterias

NCCLS 2002(H)

13 17

Salvo
Estreptococos
Estreptococos
(no S.
pneumoniae)

NCCLS 2002(V)

18 20

<
13 15

SFM 2001
Estafilococos,
Enterobacterias y
Pseudomonas

NCCLS 2000(H)

23
16
21
16

17 22
17 20

P. multocida, E.
coli (Aves)
Mannheimia
haemolytica,
P.multocida
H. somnus
(bovino)

NCCLS 2002(V)

23
13
21
15

14 22

NCCLS 2002(V)

16 20

Salvo
Estreptococos
Estreptococos

15
11
14
10

12 14

Enterobacterias

NCCLS 2002(H)

11 13

M. haemolytica,
P. multocida y
H. somnus
(bovino)

NCCLS 2002(V)

M. haemolytica,
P. multocida y
H. somnus
(Bovino)

NCCLS 2002(V)

Estreptomicina

S 10g

Espectinomicina

SPC 100g

Florfenicol

FFC 30g

19
14

15 18

Flumequina

AR 30g

19
13

14 18

Gentamicina

GM 10g

13 14

NCCLS 2002(V)

Imipenem

IMP 10g

14 15

NCCLS 2002(V)

Kanamicina

K 30g

15
12
16
13
18

14 17

NCCLS 2002(V)

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Pasteurella
multocida
Salmonella
enterica

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MAR 5g

13
21
17
18

Marbofloxacina

MAR 5g

Neomicina

<

SFM 2001

15 17

14

ROSCO

18

15 17

14

VTOQUINOL

N 30g

17

13 16

12

LIOFILCHEM

Penicilina

P 10g

29
15
28

Sulfafurazol
(sulfamidas)

SF 300g

17
12

13 16

Tetraciclina

TE 30g

19
14
23
18

15 18

Lincomicina

L 15g

Marbofloxacina

Tiamulina

T 30g

Tilmicosina

TIL 15g

Tilosina

TY 30g

Trimetoprim

TM 30g

20
16
14
10
11
10
20
16
16
10

20 - 27

28
14
19

Estafilococos
Enterococos
Estreptococos
(salvoS.pneumon
iae)

NCCLS 2002(V)

Otros salvo
Estreptococos
Estreptococos

19 22

11 13

NCCLS 2002(V)

LIOFILCHEM
M. haemolytica
(Bovino)
P. multocida, A.
Pleuropneumoni
ae (Porcino)

11 15

NCCLS 1999(V)

NCCLS 2002(V)

LIOFILCHEM
Enterobacterias
Estafilococos

II.

NCCLS 2002(H)

Objetivos:
Determinar la sensibilidad bacteriana utilizando una
metodologa sencilla y asequible a cualquier laboratorio
de Microbiologa.
Mostrar la sensibilidad in vitro de los microorganismos
frente a diferentes antibiticos.
III.
Marco teorico:
El antibiograma por el mtodo de difusin en agar es una prueba en
la que se enfrenta la bacteria inoculada sobre la superficie de un
medio de agar con una solucin antibitica absorbida en discos de
papel de filtro. Este mtodo est estandarizado y los halos de
inhibicin han sido obtenidos correlacionndolos con las CMI y
aparecen en unas tablas.
Hay varios factores que afectan al halo de inhibicin: la carga del
antibitico en los discos, la difusin del antibitico en el medio de
cultivo, el tamao del inculo bacteriano, la composicin y grosor del

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medio de cultivo, la velocidad del crecimiento bacteriano y el tiempo

de incubacin.
Los discos de antibiticos son adquiridos comercialmente. Deben
contener la cantidad establecida de antibitico y ser conservados a
4C protegidos de la humedad.
El inculo bacteriano debe tener una turbidez similar al 0,5 de la
escala de McFarland, aproximadamente 108 UFC/ml y ser preparado
en solucin salina estril o caldo de cultivo.

antibiograma por tcnica de difusin en agar:

Esta prueba consiste en enfrentar a un microorganismo a diversas sustancias
antimicrobianas a una concentracin determinada para establecer la sensibilidad
o resistencia de dicho microorganismo a las mismas. Hay que sealar que el
antibiograma se debe realizar con un solo tipo de microorganismo cada vez, es
decir, con un microorganismo en cultivo puro, no debindose utilizar una
poblacin mixta de microorganismos para realizar el antibiograma.
Por tanto, debern realizarse tantos antibiogramas como microorganismos
significativos encontremos en la muestra clnica.
* Medio de cultivo: el medio que se utiliza es el Mueller-Hinton.
IV.

Materiales, equipos y reactivos :

a. Materiales:

V.

01Mechero
Cultivo puro de Escherichia coli.
01 piceta
Hisopos estriles
Pinzas de laboratorio
papel para envolver
algodn y gasa
Pinzas estriles.

b. Equipos y reactivos :
Discos comerciales de antibiticos.
agua destilada
incubadora
Alcohol 70%
Procedimientos:

La profesora proporcionar el cultivo puro de Escherichia coli. Cada

equipo trabajar con el mismo cultivo puro, que inocularn en
diferentes medios de cultivo (por estras) para evaluar diferentes
actividades metablicas.

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1. Preparacin del inculo. Partiendo de un cultivo puro tomar con el

hisopo esteril la bacteria de Escherichia coli e introducirlas en el
caldo de cultivo .
2. Inocular la superficie de una placa de agar con el hisopo
pasndolo uniformemente por toda la superficie. Por ltimo, pasar el
hisopo por el reborde de la placa de agar. Dejar secar 10 minutos.
Colocar los discos de antibiticos sobre la superficie del agar
utilizando unas pinzas estriles y apretndolos suavemente sobre la
superficie del agar. Los discos no deben estar a menos de 15 mm de
los bordes de la placa y lo bastante separados entre ellos para que
no se superpongan sus zonas de ihnibicin. Dejar las placas 15
minutos a temperatura ambiente para que comiencen a difundir los
antibiticos.
3. Incubar la placa en posicin invertida a 35 - 37C durante 18horas.
4. Medir los dimetros de los halos de inhibicin con una regla(en
este caso se har una excepcin durante la prctica de laboratorio)
Ensayo cualitativo: un mismo cultivo se enfrenta a distintas
soluciones antibiticas.
Ensayo cuantitativo: un mismo cultivo se enfrenta a un slo
antibitico, preparado a distintas concentraciones.

ANTIBIOGRAMA POR TECNICA DE DIFUSION EN AGAR

a) Medio de cultivo: el medio que se utiliza es el Mueller-Hinton. Las
placas se secan 30 minutos a 37C antes de su empleo.
b) Inculo: la cepa que se estudia se cultiva durante 24 horas en medio de
cultivo slido, normalmente a la temperatura de 37C; posteriormente
se realiza una suspensin en solucin salina estril, de manera que
obtengamos aproximadamente una concentracin de 10 de bacterias/ml.
c) Discos de antibiticos.
Tcnica:
1. Siembra: se realiza una siembra por estria, utilizando 3-5 ml de la dilucin
preparada. Se deja reposar 10 minutos a 37C
2. Aplicacin de los discos antibiticos: los discos se ponen a unos 15 mm de la
periferia de la placa con ayuda del aplicador, apretando ligeramente los discos
que no hayan entrado totalmente en contacto con el medio usando para tal fin el
asa dehisopo esterilizada. Se pueden colocar aproximadamente 6 discos por
placa, teniendo en cuenta que las zonas de inhibicin de los diferentes discos no
deben entrecruzarse para que se puedan efectuar la lectura de los dimetros de
los halos de inhibicin en varias direcciones.
3. Incubacin de las placas a 37C durante 18-24 horas.
Tras este periodo se observar el crecimiento bacteriano y los halos de
inhibicin, si los hubiera.
* Lectura de la zona de inhibicin: se mide el dimetro (en milmetros) de la
zona de inhibicin con una regla o comps. Cuando el borde no es neto, la
lectura se realiza en la zona que corresponda aproximadamente al 80% de
6

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inhibicin. Ciertos antibiticos producen a veces extensas colonias perifricas

que no hay que tener en cuenta en la medicin del dimetro si stas son escasas.
* Interpretacin del antibiograma: se comparan los dimetros de los halos de
inhibicin producidos por cada uno de los antibiticos. En esta tabla se
relacionan las zonas de inhibicin con la potencia de los discos y la
sensibilidad bacteriana, por lo que debemos asegurarnos que la potencia de los
discos que refleja la tabla coincide con la usada por nosotros.
Para el uso clnico se han clasificado las bacterias en tres grandes grupos, segn
su sensibilidad antibitica:
- Cepa sensible: es aquella que puede ser afectada por un tratamiento a la dosis
habituales por va general.
- Cepa intermedia: es aquella que puede ser afectada por un tratamiento local,
mediante un aumento de las dosis por va general, o por una concentracin
fisiolgica particular (orina, bilis, etc.).
- Cepa resistente: es aquella que probablemente no ser afectada con las dosis
habituales, sea cual sea el tipo de tratamiento.
VI.

Resultados:
Se observ la presencia de halos (anillos transparentes) en todas
los antibiticos a excepcin de una debido a que hubo una mala
tcnica (estria muy amplia) de sembrado y por ende no hubo la
bacteria de Escherichia coli.
Se hallo halos en los siguientes antibiticos sobre la bacteria de
Escherichia coli que son Orn, ,Ege,Cph,Aaa,Xsx,Kak,Pip, con la
excepcin de TXC

VII.

VIII.

Discusin de resultados:

La accin de los agentes antimicrobianos debe estudiarse sobre cultivos

"in vitro" del agente en cuestin. Con los datos obtenidos puede
planificarse la posible utilidad teraputica del producto ensayado.

Uno de los datos que ms se maneja a nivel clnico y que ms

trascendencia tiene es el de la sensibilidad; para calcularla se enfrentan
los microorganismos problema a diversas concentraciones de sustancias
antibiticas o quimioterpicas.

No se debe realizar el antibiograma sobre una poblacin mixta de

microorganismos.

Se debe tener en cuenta la esterilizacin de la pinza microbiolgica.

Se debe tener en cuenta de sembrar por estra toda la superficie de la
placa para que se junte con el antibitico.
Conclusiones:

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IX.

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Entre estos datos puede ser interesante conocer los tipos de

microorganismos sobre los que acta un antibacteriano
(espectro antimicrobiano).

Los antibiticos son sustancias que inhiben el crecimiento de los

microorganismos o producen su inactivacin.
Referencias bibliogrficas:

Manual de prcticas de laboratorio. Microbiologa

general. Aquiahuatl Ramos.2012.
Microbiologa. Sergio Gonzlez.2006-2007.
Rojas N, Chaves E, Garca F (2006) Bacteriologa
Diagnstica, Costa Rica, Universidad de Costa Rica,
Facultad de Microbiologa.
Garca R, Crdoba R, (1988) Manual Ilustrado para
Laboratorio de Bacteriologa y Micologa.
Jawetz Ernest. Microbiologa Mdica. Editorial El Manual
Moderno. 17 edicin. 2002. Captulo10, pp: 177-214.
Hososaka Y, Hososaka I. Characterization of oxacillinsusceptible mecA positive Staphylococcus aureus: a
new type of MRSA. J Infect Chemother. 2007;13(2):7986.
Bhattacharya D, Smith D. Differences in clinical and
molecular characteristics of skin and soft tissue MRSA
isolates between two hospitals in Northern California. J
Clin Microbiol. 2007;45(6):1798-803.
Nilsson P. Staphylococcus aureus throat colonization is
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Wagenvoort JHT. Medidas de control de SARM
adoptadas por los Pases Bajos, a raz de la expansin
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Kemps BS. AMEDEO List. 2007. Available from:
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Oteo J. Deteccin de resistencia a oxacilina en un
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de Microbiologa Clnica. 2004;7(1):10.
CLSI. Performance Standards for Antimicrobial
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Cantn R. Lectura interpretativa del antibiograma.
Ejercicio intelectual o necesidad clnica? Enferm Infecc
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X.

2014

Skov R, Lov M. Evaluation of a cefoxitin 30 g disc on

Iso-Sensitest agar for detection of MRSA. J Antimicrob
Chemother. 2003;52:204-7.

Anexos:

Discos antibiticos

inoculacin de E. coli en la placa

1 muestra con los discos antibiticos

2 muestra con los discos antibiticos

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