Prctica No.

10 Prueba de inhibicin bacteriana

OBJETIVO:
Conocer y aplicar cada una de las tcnicas para que nos permitan poner a prueba la inhibicin
bacteriana a partir de sustancias para probar su poder antibacteriano.
INTRODUCCIN:
Los patrones de resistencia de las bacterias intestinales cambian en respuesta a una mayor exposicin
a los antibiticos o desinfectantes.
La desinfeccin consiste en la destruccin selectiva de los organismos que causan enfermedades. No
todos los organismos se destruyen durante el proceso, punto en el que radica la principal diferencia
entre la desinfeccin y la esterilizacin, proceso que conduce a la destruccin de la totalidad de los
organismos. En el campo de las aguas residuales, las tres categoras de organismos entricos de
origen humano de mayores consecuencias en la produccin de enfermedades son las bacterias, los
virus y los quistes amebianos. Las enfermedades bacterianas tpicas transmitidas por el agua son: el
tifus, el clera, el paratifus y la disentera bacilar, mientras que las enfermedades causadas por los
virus incluyen, entre otras, la poliomielitis y la hepatitis infecciosa.
Es importante que los desinfectantes sean seguros en su aplicacin y manejo, y que su fuerza o
concentracin en las aguas tratadas sea medible y cuantificable. Los mtodos ms empleados para
llevar a cabo la desinfeccin son: (1) agentes qumicos; (2) agentes fsicos; (3) medios mecnicos, y
(4) radiacin.
(1) Agentes qumicos:
Los agentes qumicos utilizados para la desinfeccin incluyen:

El cloro y sus compuestos

El bromo
El yodo
El ozono
El fenol y los compuestos fenlicos
Los alcoholes
Los metales pesados y compuestos afines
Los colorantes
Los jabones
Los compuestos amoniacales cuaternarios
El agua oxigenada
cidos y lcalis diversos.

Los desinfectantes ms corrientes son los productos qumicos oxidantes, de los cuales el cloro es el
ms universalmente empleado, aunque tambin se ha utilizado, para la desinfeccin del agua residual,
el bromo y el yodo. El ozono es un desinfectante muy eficaz cuyo uso va en aumento, a pesar de que
no deja una concentracin residual que permita valorar su presencia despus del tratamiento. El agua
muy cida o muy alcalina tambin se ha empleado para la destruccin de bacterias patgenas, ya que
el agua con pH inferior a 3 o superior a 11 es relativamente txica para la mayora de las bacterias.

(2) Agentes fsico:

Los desinfectantes fsicos que se pueden emplear son: la luz y el calor. El agua caliente a la
temperatura de ebullicin, por ejemplo, destruye las principales bacterias causantes de enfermedades
y no formadoras de esporas. El calor se suele emplear con frecuencia en las industrias lcticas y de
bebidas, pero su aplicacin al agua residual no es factible debido al alto coste que supondra. Sin
embargo, la pasteurizacin del fango es una prctica habitual en toda Europa. La luz solar tambin es
un buen desinfectante, especialmente la radiacin ultravioleta. En la esterilizacin de pequeas
cantidades de agua, el empleo de lmparas especiales ha resultado exitoso. La eficacia de este
proceso depende de la penetracin de los rayos en el agua. La geometra de contacto entre la fuente
emisora de luz ultravioleta y el agua es de gran importancia debido a que la materia en suspensin, las
molculas orgnicas disueltas y la propia agua, adems de los microorganismos, absorbern la
radiacin. Por lo tanto, la aplicacin de la radiacin ultravioleta como mecanismo de desinfeccin no
resulta sencilla en sistemas acuosos, especialmente por la presencia de materia particulada.
(3) Mecanismos de accin de los desinfectantes:
La accin de los desinfectantes se ha pretendido explicar por cuatro mecanismos:

Dao a la pared celular

Alteracin de la permeabilidad de las clulas
Alteracin de la naturaleza coloidal del protoplasma
Inhibicin de la actividad enzimtica

El dao o destruccin de la pared celular da lugar a la lisis celular y a la muerte de la clula. Algunos
agentes, como la penicilina, inhiben la sntesis de la pared celular de las bacterias. Los agentes tales
como los compuestos fenlicos y los detergentes alteran la permeabilidad de la membrana
citoplasmtica. Estas sustancias destruyen la permeabilidad selectiva de la membrana y permiten que
se escapen algunos nutrientes vitales, como el nitrgeno y el fsforo.
(4) Radiacin
El calor, la radiacin, y los agentes fuertemente cidos o alcalinos alteran la naturaleza coloidal del
protoplasma. El calor coagula la protena celular y los cidos o bases desnaturalizan las protenas,
produciendo un efecto letal.
Factores que influyen en la accin de los desinfectantes:
Al aplicar los medios o agentes de desinfeccin descritos, se deben tener en cuenta los siguientes
factores:

Tiempo de contacto

Tipo y concentracin del agente qumico

Intensidad y naturaleza del agente fsico
Temperatura
Nmero de organismos
Tipo de organismos

Naturaleza del medio liquido

Desinfeccin del agua

Las aguas utilizadas en los procesos productivos retornan contaminadas a los cursos de agua; en la
mayora de los casos se deteriora su calidad para usos posteriores, inclusive la irrigacin.
Dependiendo del grado de contaminacin, el agua residual puede ser nociva para la vida, causando
por ejemplo, la mortandad de peces. Tambin puede producirse una liberacin de compuestos
voltiles, que provocan mal olor y sabor acentuado, y que podran traer problemas en una nueva
operacin de purificacin y tratamiento del agua.
Segn el Banco Nacional de Desarrollo Econmico y Social Brasileo, el 65% de las internaciones
hospitalarias de nios menores de 10 aos estn asociadas a la falta de saneamiento bsico. En los
pases en desarrollo, se estima que el 80% de las enfermedades y ms de un tercio de las muertes
estn asociadas a la utilizacin y consumo de aguas contaminadas. La hepatitis infecciosa, el clera,
la disentera y la fiebre tifoidea son ejemplos de enfermedades de transmisin hdrica, que representan
un serio problema de salud pblica.
Las enfermedades infecciosas son transmitidas primariamente por la contaminacin de las fuentes de
agua con deposiciones de animales, las cuales pueden ser agentes muy activos para el transporte de
enfermedades. El uso de tales aguas para beber o
cocinar, el contacto con la misma durante baos, o la
inhalacin de pequeas gotitas (aerosoles) pueden
resultar en infecciones.
La desinfeccin de aguas de abastecimiento se define
como el proceso integrante de una estacin de
tratamiento de agua que tiene como objetivo la
inactivacin de microorganismos presentes en el medio,
minimizando la probabilidad de transmisin hdrica de
enfermedades, y el manejo del agua tratada.
Tipos de microorganismos
Se reconoce que el agua es uno de los principales
vehculos transportadores de microorganismos causante
de enfermedades provenientes del aparato digestivo del hombre y de otros animales. Las coliformes
fecales son un grupo grande de microorganismos, habitantes usuales de los intestinos de los animales
superiores. Estos microorganismos son de fcil identificacin comparados con los microorganismos
patgenos, que normalmente se encuentran en mucho menor nmero y cuya identificacin es
laboriosa. La presencia de coliformes en una muestra no siempre indica que el agua est contaminada
con microorganismos patgenos, sino que, en trminos estadsticos, su concentracin puede y debe
servir como parmetro para alertar sobre la existencia de contaminacin fecal y de microorganismos
patgenos.
Los microorganismos patgenos estn relacionados con enfermedades especficas de transmisin
hdrica. La fiebre tifoidea, las fiebres paratifoideas, la disentera bacteriana y el clera son causadas
por bacterias, la amibiosis o disentera amebiana por protozoarios, la esquistosomosis por gusanos
(helmintos) y larvas, en tanto que ciertos virus originan la hepatitis infecciosa y la poliomielitis.

MARCO TERICO
El termino muerte se define en microbiologa como la perdida irreversible de la capacidad de
reproduccin. Los microorganismos viables tiene la facultad de multiplicarse; en cambio los
muertos no se desarrollan ni se multiplican. Para determinar la muerte se requiere tcnicas de
laboratorio que rebelen el crecimiento cuando se siembra la muestra en medio del cultivo
lquidos o slidos.
CONDICIONES QUE ACCIN EN LA ACCION ANTIMICROBIANA
En la aplicacin de un agente fsico o qumico usando para inhibir o destruir poblaciones
microbianas, es necesario valorar cada situacin por separado para seleccionar el mtodo
que ha demostrado el resultado deseado
MTODOSDE ACCIN DE LOS AGENTES MICROBIANOS
Los muchos procedimientos y sustancias usadas como agentes antimicrobianos manifiestan
su actividad de diferentes modos, por ellos es importante saber cmo se inhiben o matan los
microorganismos. Conocer la manera de actuar de un agente en particular, hace posible
predecir las condiciones bajo las cuales lo ara mejor, as como la clase de microorganismos
contra los cuales ser ms eficaz.
El dao de estas estructuras inicia las alteraciones que llevan a la clula a la muerte. Es
necesario tomar en cuenta que hay muchos sitios vulnerables de la clula y que el dao lo
causa una o ms de una, variedad de agentes.
ALTERACIN DE LA PERMEABILIDAD CLULA
La membrana citoplasmtica preserva la integridad de los constituyentes celulares y tiene a su
cargo el transporte selectivo de nutrientes al interior de la clula. Del dao de esta membrana
resulta de una inhibicin del desarrollo y la muerte celular. La actividad antimicrobiana de los
compuestos fenlicos, detergentes sintticos, jabones y compuestos cuaternarios y amonio se
atribuyen a sus afectos sobre la permeabilidad celular. Estas sustancias anulan la
permeabilidad selectiva de la membrana, permitiendo la salida de los constituyentes celulares.
INHIBICIN DE LA ACCIN ENZIMTICA
Cada uno de los cientos de enzimas que hay en una clula es un banco potencial para un
inhibidor. La disminucin de las reacciones que suministran energa son particularmente
dainas; mucho agentes afectan enzimas que son vas claves, como el sistema glucoltico, el
ciclo de Krebs y el sistema del citocromo. Los agentes oxidantes fuertes, como los halgenos
y el perxido de hidrgeno llegan a daar tanto a los constituyentes celulares que stos ya no
pueden afectar sus funciones metablicas normales.

INHIBICIN DE LA SNTESIS DE CIDOS NUCLEICOS

Existen sustancias qumicas sintticas y otras naturales que son inhibidores as poderosos de
la sntesis de RNA y de DNA. Hay dos categoras de sustancias que inhiben la sntesis del
cido nucleico: a) compuestos que infieren con la formacin de los bloques estructurales de
los cidos nucleicos y b) compuestos que infieren con la polimerizacin de los nucletidos en
cido nucleico. El papel vital del DNA y del RNA en los procesos normales de la ida de la
clula seala que toda interferencia con su formacin y su funcin ha de daar gravemente a
la clula.

1. Mecanismos de accin de desinfectantes

Convencionales
Mecanismos de accin del cloro
La capacidad germicida del cloro se basa en que puede penetrar la pared celular, alterar
funciones especficas de las protenas e inhibir procesos metablicos de bacterias y virus.
Algunos grupos de parsitos son resistentes al cloro, como los quistes de protozoarios
Cryptosporidium parvum y Giardia lamblia, para los cuales se han aplicado dosis hasta de 80
mg/L por 120 min para lograr slo 3 unidades de inactivacin. Por lo que respecta a su
capacidad ovicida sobre los huevos de helmintos, los compuestos de cloro no son efectivos
para inactivarlos, ni con 10,000 mg/L de cloro
Mecanismos de accin de la luz UV
El blanco principal de la desinfeccin mediante la luz ultravioleta es el material gentico. Los
microorganismos son destruidos por la radiacin ultravioleta cuando la luz penetra a travs de
la clula y es absorbida por dicho material gentico, lo que provoca una reordenacin de la
informacin gentica, que interfiere con la capacidad reproductora de la clula y por
consiguiente los microorganismos son inactivados ms que destruidos. Si bien el empleo de
radiaciones UV ha sido efectivo para eliminar bacterias y algunas esporas y quistes, no lo
espara los huevos de helmintos.
Mecanismos de accin del ozono
El ozono es un oxidante muy fuerte y germicida de virus, bacterias, protozoarios y huevos de
helmintos (aunque stos ltimos con dosis muy altas). Los mecanismos de desinfeccin
asociados con el uso del ozono incluyen: La oxidacin o destruccin directa de la pared de la
clula con la salida de componentes celulares. El dao a los componentes de los cidos
nuclicos (purinas y pirimidinas). La ruptura de las uniones de carbono-nitrgeno que conduce
a la despolimerizacin.

2. Mecanismos de accin de desinfectantes no convencionales

Los sistemas de filtracin tienen la ventaja de no causar alguna alteracin en el agua ni
producir compuestos secundarios que afectan a los seres vivos pero slo concentran a los
microorganismos, es decir, no los eliminan por lo que en este caso el problema de la
desinfeccin se pasa al agua de lavado de filtros, as como a los lodos producidos. El mtodo
de sedimentacin se usa exclusivamente en agua residual y por gravedad remueve huevos de
helmintos con eficiencias del 30% en sedimentadores primarios y de 95 a 99 % en
sedimentadores ubicados despus de un proceso fisicoqumico o tratamiento primario
avanzado, no separa patgenos de menor tamao como quistes de protozoarios, bacterias y
virus.
El cido peractico es esporicida a bajas temperaturas y adems, su efectividad permanece
inalterable ante la presencia de algn material orgnico. Se ha visto que es efectivo para
eliminar virus, bacterias y algunos protozoarios excepto Cryptosporidium sp, Giardia sp. y
huevos de helmintos.
El perxido de hidrgeno por s solo produce radicales libres H y OH, por lo que oxida y
reduce los grupos funcionales de las enzimas, se ha visto que es efectivo para eliminar virus,
bacterias y algunos protozoarios, es esporicida a bajas temperaturas y adems tiene alta
actividad contra bacterias Gram + y Gram. Los iones plata actan como veneno
protoplasmtico al combinarse con las protenas de las clulas bacterianas.
El cobre puede trastornar la estructura enzimtica y su funcionamiento por enlaces con el
grupo sulfhidrilo de las protenas moleculares. Cationes divalentes como el Cu2+ cuando
quelatan con un fosfato, pueden ocasionar concentraciones que rompen los puentes de
hidrgeno que unen las bases de los filamentos de la doble hlice del DNA. Esto puede alterar
el proceso de replicacin de la clula
3. Cintica de desinfeccin
En todos los casos se debe obtener una dosis para poder hacer una comparacin entre la
dosis, el tiempo de contacto y la reduccin logartmica necesaria de cada desinfectante que
acte sobre determinado microorganismo. Las dosis necesarias para inactivar
microorganismos varan significativamente de un desinfectante a otro, incluso entre
microorganismos al aplicar un mismo desinfectante Ejemplos Modo de accin
A
Virus Bacterias Protozoarios HH

METODOLOGA:
Medios de cultivo y reactivos
Agar Mueller Hinton. Preparacin del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las indicaciones del
fabricante.
Esterilizar en autoclave y dejar enfriar en bao de agua hasta que alcance los 45C - 50C y
verter en placas Petri.
Preparacin del estndar (0,5 Mc. Farland) para el inculo:
Para estandarizar la densidad del inculo se usa una suspensin de sulfato de bario (0,5 de la
escala de Mac Farland) como estndar.
Preparacin del estndar de turbidez:
-Agregar 0,5 ml de una solucin de BaCl 2 0,048 M a 99,5 ml de una solucin de H2SO4 0,18 M
en constante movimiento para mantener la suspensin.
- Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca, similares a los que se usarn para
preparar el inculo.
- Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura ambiente y
anotar la fecha de preparacin.
- Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estndar de preferencia, en un agitador
mecnico.
- Verificar mensualmente la densidad de los estndares de sulfato de bario, y reemplazarlo
cuando sea necesario.
Preparacin del inculo:
Puede realizarse de dos formas:
A. Mtodo de desarrollo previo
a. Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas, del mismo tipo morfolgico, de un cultivo
en placa.
b. Tocar la superficie de cada colonia con un asa de siembra y transferirlo a un tubo que
contiene de 4 a 5 ml de caldo apropiado.
c. Incubar el caldo a una temperatura entre 35C a 37C, hasta que alcance o exceda la
turbidez del estndar 0,5 de la escala de Mc. Farland.
d. Ajustar la turbidez del inculo con solucin salina o caldo apropiado hasta el tubo 0.5 de la
escala de Mc. Farland, por comparacin visual con el estndar. Para realizar este paso
correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra un fondo blanco con lneas
negras como contraste.
e. La suspensin preparada contendr aproximadamente 1 a 2 x 10 8 UFC/mL para E. coli
ATCC 25922.
B. Mtodo directo de inoculacin a partir de colonias aisladas
a. De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h, seleccionar colonias
aisladas y preparar una suspensim directa en solucin salina caldo.
b. La suspensin debe ser inmediatamente ajustada a la escala 0,5 de Mc. Farland.

.
Inoculacin de las Placas
a. Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inculo, sumergir un hisopo
estril en la suspensin, rotar el hisopo varias veces presionando firmemente sobre la pared
interior del tubo por encima del nivel del lquido para remover el exceso de inculo.
b. Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton, estriando con el hisopo en tres
direcciones para asegurar una distribucin uniforme del inculo. Antes de colocar los discos
dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5 minutos para que cualquier exceso
de humedad superficial sea absorbido.

Aplicacin de los discos

a. Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la ayuda de
una pinza estril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre cada disco para
asegurar un contacto completo con la superficie del agar.
b.Distribuir los discos uniformemente, de modo que estn a una distancia mnima de 50 mm
uno del otro (el dimetro de los discos segn las normas de la Organizacin Mundial de la
Salud (OMS) debe ser de 6 mm). No deben colocarse ms de 12 discos en una placa de 150
mm, ni ms de 6 en una placa de 100 mm de dimetro interno, para evitar la superposicin de
las zonas de inhibicin. Un disco no debe ser removido una vez que tom contacto con la
superficie del agar debido a que algunos antibiticos se difunden rpidamente.
Incubacin
a. Incubar lar placas en posicin invertida a 35C dentro de los 15 minutos posteriores a la
aplicacin de los discos.
b. Despus del tiempo recomendado de incubacin examinar cada placa y medir los
dimetros de los halos de inhibicin alrededor de cada disco.
Lectura de las placas e interpretacin de los resultados
a. Medir los dimetros de las zonas de inhibicin completa (incluyendo el dimetro del disco),
usando una regla o calibrador. Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa petri
con una luz reflejada localizada a unos cuantos centmetros sobre un fondo negro.
b. El punto final debe tomarse como el rea que no muestra un crecimiento obvio, visible, que
puede ser detectado mediante observacin visual, no incluyendo velo de crecimiento o
colonias muy pequeas que puedan ser detectadas solo con mucha dificultad en el borde de
la zona.
c. Los dimetros de inhibicin son interpretados basndose en lo siguiente:
la sensibilidad de la cepa bacteriana ser reportada como sensible (S), intermedio (I), o
resistente (R).

Principio del mtodo:

Elaborar una suspensin bacteriana con base en el estndar 0.5 de Mac Farland, sembrar
masivamente en un medio de prueba y colocar los discos impregnados con las soluciones
inhibidoras que se desea poner a prueba su capacidad inhibidora del crecimiento microbiano.
Hacer una interpretacin de los resultados en funcin a los siguientes parmetros: Sensible
(halo de inhibicin de aproximadamente 24mm),
Intermedio (halo de inhibicin de
aproximadamente 15mm) y Resistente (no hay halo de inhibicin).

Materiales, equipos y reactivos

Materiales para la preparacin de las
soluciones y medio de cultivo:
1 parrila
1 esptula
2 matraces erlenmeyer de 250 ml
2 matraces aforados de 100 ml
1 matrz de 200 ml
1 matraz aforado de 50 ml
1 varilla de vidrio
1 probeta de 100 ml
1 balanza granataria
4 tubos de 13 x 100 mm
1 gradilla
1pipeta de 1 ml
1 pipeta de 5 ml
1 perilla
2 vasos de precipitados de 200 ml
2 hisopos estriles
Pepel filtro para la elaboracin de los
sensidiscos
1 pinza para colocar los sensidiscos
1 mechero
1 parrilla
1 vrtex

Estndares de metales pesados a 1000 ppm (Plomo, Ars

Mercurio y Cromo)
Solucin con pH 3
Solucin con pH 4
Medios de cultivo:
Agar Mueller Hinton
Agar Mac Conkey
Caldo Tripticasa de
Soya

Reactivos:
Alcohol
Cloruro de Bario ( BaCl2)
cido sulfrico (H2SO4)
Cloruro de sodio (NaCl). Preparar como solucin salina isotnica.
Soluciones inhibidoras:
Permanganato de Potasio al 2%, KMnO4
Fenol al 5%
Solucin de hipoclorito de sodio al 13%, NaClO.
Lugol

Material por equipo:

Cerillos
1 regla
Papel manila
1 Frasco grande para muestrear
5 frascos pequeos
Masking tape
Franela
Cajas Petri
Material Individual
Cubrebocas
Guantes
Bata blanca y planchada, con todos los
botones
Asa bacteriolgica

Procedimiento
1. Preparar el nefelmetro 0.5 de Mac Farland
2. Preparar los medios de cultivo Mueller Hinton
3. Preparar la solucin salina fisiolgica estril (NaCl: 8.5 g en un litro de agua
destilada), colocar 6 ml en tubos de ensayo y esterilizar.
4. Preparar el inculo.
5. Sembrar masivamente con hisopos estriles en el medio de Mueller Hinton
6. Colocar los sensidiscos (previamente esterilizados) impregnados con las
soluciones a probar, usar un sensidisco por cada solucin a probrar, y colocar en
la placa.
7. Incubar por 24 h a 35C
8. Realizar la lectura utilizando una regla para medir halos de inhibicin.
Observaciones:
Para llevar a cabo
cada una de
nuestras pruebas se
hizo uso de los
siguientes
productos:
a) Fabuloso.
Desinfectante
.
b) Clara-sol .
c) Jabn
antibacterial .
d) Pinol.
Cada uno de ellos
con diferentes
caractersticas
fsicas y qumicas,
pero con un mismo

Resultados

Placa No. 1

Placa No.2

Placa No.3

Sustancias
a)Fabuloso
b)Clarasol
c)Jabn
antibacterial
d)Pinol

Placa No. 1

Placa No. 2

Placa No. 3

Solucin
desinfectante

Tamao del
dimetro

Inhibicin

Fabuloso

0.7 mm

Resistente

Cloralex

3.7 cm

Sensible

Jabn lquido para

manos

2 cm

Medianamente
sensible

Pino

0.5 cm

Resistencia

Anlisis de resultados

Conclusiones:
Las condiciones de salud de poblacin estn determinadas por el control de poblaciones
de microorganismos. la purificacin del agua y preservacin de alimentos son algunos
mtodos. Todo ello permite prevenir la trasmisin de infecciones y enfermedades. Por lo
cual es de suma importancia la eliminacin o inhibicin de microorganismos por medio de
agentes fsicos o qumicos. Los procedimientos son muy especficos sin embargo son de
suma importancia para el control de infinidad de enfermedades. Adems que el uso
adecuado de estos es un factor que influye al igual en el cuidado propio y de la sociedad
en general.

Cuestionario:
1. Qu es un halo de inhibicin?

Zona alrededor de un disco de antibitico en un antibiograma en el que no se produce

crecimiento bacteriano en una placa de agar inoculada con el grmen. Es una medida de
la potencia del antibitico frente al grmen
2. Cules son las caractersticas del medio Mueller Hinton?
Baja concentracin de inhibidores, condicin crtica para evaluar sulfonamidas,
trimetoprim y tetraciclina. El crecimiento satisfactorio de patgenos no exigentes. Existir
ya gran experiencia en estudios de susceptibilidad
3. Cul es la funcin de la solucin salina fisiolgica?
El CLORURO DE SODIO es la sal principal usada para producir iones de sodio.

4. Qu significa CMI (concentracin mnima inhibitoria)

Corresponde a la concentracin ms dbil de un antibitico capaz de inhibir el crecimiento
visible de una cepa bacteriana al cabo de 18 24 horas de incubacin.
Bibliografa
1. Microbiologa. Michael J. Pelczar, Jr. Roger D. Reid. Edit. McGraw-Hill
2. Biologa celular. Estructura, bioqumica y funcin. Sheeler. Editorial Limusa.
3. Biologa de los microorganismos. Thomas D. Brock, Madigan, Martinko, Parker.
Edit.
Prentice- Hall

ANEXOS
GLOSARIO:
Definiciones y abreviaturas:
Para los propsitos de la presente prctica, y a manera de repaso de conceptos
se aplican las siguientes definiciones:
Antibitico: Agente biolgico o qumico que inhibe el crecimiento de los
microorganismos.
Bioseguridad: Conjunto de medidas preventivas para proteger la salud y la
seguridad humana y del ambiente, frente a diferentes riesgos producidos por
agentes biolgicos, fsicos, qumicos o mecnico.
Cepa: Cultivo puro formado por bacterias descendientes de un solo
aislamiento.
Colonia: Crecimiento visible bacteriano, generalmente en medios slidos,
originada por la multiplicacin de una sola bacteria preexistente.
Concentracin inhibitoria mnima (CIM): Corresponde a la concentracin ms
dbil de un antibitico capaz de inhibir el crecimiento visible de una cepa
bacteriana al cabo de 18 24 horas de incubacin.
Crioconservacin: Congelamiento y almacenamiento de clulas vivas a muy
bajas temperaturas
Disco de sensibilidad: Discos impregnados con algn antimicrobiano usados
para determinar la susceptibilidad antimicrobiana por disco difusin.

Escala de Mc. Farland: Estndar de turbidez de sulfato de bario. La escala

usada para el inculo de las pruebas de susceptibilidad por el mtodo de disco
difusin es 0.5.
Esterilizacin: Proceso validado que permite la eliminacin de toda forma de
vida microbiana incluyendo endosporas bacterianas. Puede conseguirse por
medio de mtodos qumicos, fsicos o gaseosos.
Incubacin: Mantenimiento de cultivos bacterianos en condiciones favorables
para su desarrollo y multiplicacin.
Inculo: Alcuota de un cultivo bacteriano transferida a un medio de cultivo.
Medio de cultivo: Medio artificial de sustancias nutritivas, que puede ser
slido, semislido o lquido, necesarias para el crecimiento y multiplicacin
bacteriana in vitro.
Microaeroflico: Organismo que crece y se reproduce mejor en la presencia
de una tensin de 5% de oxgeno, 10% de anhdrido carbnico y 85% de
nitrgeno.
Registro: Documento que provee evidencias objetivas de las actividades
efectuadas o de los resultados obtenidos.