Manual de Bioquímica Metabólica 2018-1
Manual de Bioquímica Metabólica 2018-1
Manual de Bioquímica Metabólica 2018-1
NDICE
Pgina
Introduccin............................................................................................................... 2
Cronograma................................................................................... 4
Reglamento................................................................................................................ 5
Criterios de evaluacin......................................... 7
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
INTRODUCCIN
La metodologa que se desarrolla en cada prctica es sencilla, sin aparatos sofisticados ni costosos,
adems los reactivos y soluciones que se utilizan en su mayora son fciles de conseguir. Lo anterior
pretende que con experiencias simples el estudiante reconozca el valor de algunos compuestos de
importancia metablica a travs de extraccin de los mismos o la determinacin de sus niveles para
relacionarlos con algn padecimiento o enfermedad, as como, que comprenda la importancia de
las enzimas y sus mecanismos de regulacin; para que sea capaz de integrar el conocimiento
biolgico a la prctica profesional del qumico, sin importar el rea en el que se desarrolle.
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SEMESTRE 2018-1
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SEMESTRE 2018-1
CRONOGRAMA 2018-I
Qumico 1751 Q Karla Paola Hernndez Prez / Q. Yesica Natali lvarez Pacheco
SEMANA FECHAS
ACTIVIDAD
1 07-11-08-17 -------
10 09-13-10-17
Seminario 4: Metabolismo no energtico. Parte 1
11 16-20-10-17 Prctica 6 y 7
13 30-10-03-11-17 Inhbil
14 06-10-11-17 Prctica 8 y 9
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SEMESTRE 2018-1
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SEMESTRE 2018-1
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SEMESTRE 2018-1
CRITERIOS DE EVALUACIN
La evaluacin del curso consiste en el 70% de teora y 30% de laboratorio.
La evaluacin del laboratorio se har con base en:
CONCEPTO PORCENTAJE
Promedio de prcticas 80
Examen 20
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SEMESTRE 2018-1
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SEMESTRE 2018-1
PAGINA DE INTERNET
Carroll, L. & Gilroy, P. J. (2002). Transgender issues in counselor preparation. Counselor
Education & Supervision, 41, 233-242. Recuperado de
Alberts,B., Dennis B., Lewis J.; Raff M.; Roberts K.; Watson J. (1994). Biologa Molecular
de la Clula. (3 Edicin). Barcelona, Espaa: Editorial Omega. Paginas Consultadas: 450-
454.
EXAMEN FINAL. Al trmino de las actividades programadas para el semestre los alumnos
realizan un examen en el que se incluyen preguntas de todas las prcticas.
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SEMESTRE 2018-1
Las heridas pequeas de las que no sale mucha sangre se desinfectan lavndolas con agua
oxigenada, alcohol o tintura de yodo, despus se tapan colocando la gasa, el algodn y,
finalmente, se recubre con una venda.
En cualquier caso las indicaciones anteriores son para primeros auxilios, despus de lo cual
es muy importante canalizar al herido a que reciba atencin mdica.
Las quemaduras leves (de primer grado) producidas por fuego u objetos calientes y a
quemaduras producidas por agentes qumicos. Las quemaduras de segundo grado
(formacin de ampollas) y las de tercer grado (destruccin de la capa superficial de la piel)
requieren la atencin inmediata del mdico.
Las quemaduras leves producidas por objetos calientes o fuego se tratan con disolucin
acuosa o alcohlica muy diluida de cido pcrico, con dermatol o con vaselina y se vendan
despus. Para tratar quemaduras con sulfamidas se deben tomar precauciones, debido a
que hay personas que presentan alta sensibilidad a estos medicamentos.
Las quemaduras con reactivos qumicos requieren retirar rpidamente las ropas
contaminadas y lavar repetidamente la zona afectada con grandes cantidades de agua. Si
la quemadura se produjo por un cido, posterior al lavado con agua conviene realizar otro
con solucin de bicarbonato de sodio, para asegurar la neutralizacin; si la quemadura se
produjo por lcalis la neutralizacin se efecta con disolucin de cido brico.
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SEMESTRE 2018-1
Los sntomas de asfixia se manifiestan por el tono azulado que adquieren los labios y los
lbulos de las orejas; la prdida del conocimiento y la interrupcin de la respiracin. Debe
situarse a la vctima al aire libre y practicarse la respiracin artificial.
Generalmente lo mejor es intentar que la vctima vomite bebiendo agua tibia o con una
solucin de sulfato de cobre al 0.2%. Tambin se puede provocar por estimulacin de la
garganta con un dedo.
INTOXICACIONES MS FRECUENTES
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SEMESTRE 2018-1
cido cianhdrico. Los vapores de HCN Usar mascarilla para su manejo. Beber
Cianuro de son mortales. Tambin disolucin de permanganato de potasio o sulfato
potasio se produce ferroso .al 0.2%. Aplicar respiracin artificial de
envenenamiento a ser posible con oxgeno. Tomar caf
travs dela piel. concentrado como vomitivo. Llamar enseguida
al mdico.
cido fluorhdrico Corrosivo y venenoso Lavar la piel con amonaco al 3%. Para los ojos
seguir tratamiento para cidos. Inhalar
amonaco diluido
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SEMESTRE 2018-1
Algunos factores que deben tenerse en cuenta para solucionar el problema son:
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SEMESTRE 2018-1
RECOMENDACIONES
El Individuo
Las acciones Institucionales
La coordinacin interinstitucional.
DESECHO BIOLGICO
DESECHO QUMICO
Son todos los residuos derivados del manejo de productos qumicos, que por ser corrosivos,
reactivos, txicos, explosivos, inflamables y radioactivos, generan efectos nocivos para las
personas y el Medio Ambiente.
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10 abatelenguas
5 lancetas
Papel aluminio
1 esptula de cromo-nquel
1 paquete de algodn de 50g
Cerillos o encendedor
10 Bolsas de plstico para basura
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SEMESTRE 2018-1
PRACTICA 1
CUANTIFICACIN DE DNA
OBJETIVO
CUESTIONARIO PREVIO
GENERALIDADES
Hay diferentes tcnicas que permiten obtener cidos nucleicos con alto grado de pureza.
Las ms utilizadas suelen incluir una etapa de ultracentrifugacin en gradientes de CsCl o
una cromatografa de intercambio inico. Sin embargo, muchas aplicaciones de laboratorio
no necesitan un grado de pureza tal que justifique incluir estas tcnicas en los protocolos
de purificacin. Por ello se lleva acabo procedimientos como la desintegracin del tejido,
solubilizacin y homogenizacin de los componentes celulares, precipitacin de los cidos
nucleicos y disolucin en un buffer adecuado.
En la mayora de los casos cuando se trabaja con DNA es importante realizar una
cuantificacin de la cantidad con la que se dispone. La cuantificacin del DNA se puede
llevar a cabo por estimacin de la intensidad de una banda en geles de agarosa en el que
el DNA es teido por algn colorante como Bromuro de Etidio o bien mediante tcnicas de
espectrofotometra de luz ultravioleta.
Debido a las caractersticas de los nucletidos se han podido obtener mtodos qumicos de
identificacin, por ejemplo mediante la reaccin colorimtrica del monosacrido con los
reactivos de Bial y Difenilamina. En solucin cida, la cadena lineal de una desoxipentosa
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SEMESTRE 2018-1
MATERIAL Y REACTIVOS
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REACTIVOS
METODOLOGA
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[ ] g/mL
20 25 50 75 100
DNA
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SEMESTRE 2018-1
OBSERVACIONES Y RESULTADOS
[ ] g/mL
Absorbancia
DNA
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SEMESTRE 2018-1
MANEJO DE RESIDUOS
Los residuos producidos en esta prctica sern manejados de acuerdo a las indicaciones
proporcionadas en el apartado correspondiente de este manual: los cidos o bsicos se
neutralizan y se eliminan en las tarjas con suficiente agua; los solventes y mezclas de
reactivos se guardarn en frascos perfectamente etiquetados que permita conocer en todo
momento que tipo de residuos son, quin los gener y en que prctica. Los desechos
slidos se colocan en bolsas y se depositan en los cestos de basura. Si tiene dudas consulte
a su asesor.
BIBLIOGRAFA
1. Karp, G. (2010). Biologa celular y molecular. (6 ed) D.F., Mxico: Mc Graw Hill.
2. Sambrook, J. y Russell, D. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual. (3
ed.) Nueva York, USA: Cold Spring Harbor Laboratories.
3. Flores, G., Domnguez, M. y Gonzlez, N. (2013). Manual de Prcticas de
Gentica Molecular. D.F, Mxico: Facultad de Estudios Superiores Cuautitln,
UNAM.
4. Horton, R. (2008). Principios de Bioqumica. (4 ed.) D.F, Mxico: Pearson
Educacin.
5. Alberts, B., Dennis, B., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. y Watson, J. (2000).
Biologa Molecular de la Clula. (4 ed.) Barcelona, Espaa: Editorial Omega.
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SEMESTRE 2018-1
PRCTICA 2
INTRODUCCIN AL METABOLISMO
OBJETIVOS
1. Comprender que el metabolismo es un proceso integrado por una serie de reacciones para
determinar la funcin vital de las enzimas.
2. Reconocer la importancia de las enzimas dentro del metabolismo global, utilizando como
ejemplo la degradacin del almidn in vitro.
CUESTIONARIO PREVIO
1. Qu es el metabolismo? Explique
2. Explique cada una de las fases del metabolismo.
3. Cul es la importancia de las enzimas dentro del metabolismo global?
4. Qu significa IN VIVO e IN VITRO? D un ejemplo.
5. Cul es la composicin de la saliva?
6. Cules son las funciones de la saliva?
7. Qu es la Dilisis y como se realiza?
8. Qu le ocurre a una muestra de saliva al dializarla?
9. Cul es la estructura del almidn y cules son sus productos de hidrlisis?
10. Explique la reaccin del iodo con el almidn y sus productos de hidrlisis.
CONTENIDO
En esta prctica el alumno realiza la hidrlisis enzimtica del almidn, por medio de la
amilasa salival y para detectar la desaparicin de este polisacrido utiliza la reaccin con
lugol. Lleva a cabo la dilisis de la saliva y compara la actividad de una muestra de saliva
dializada y una no dializada. A travs del mtodo espectrofotomtrico determina
cuantitativamente la actividad de la amilasa salival.
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SEMESTRE 2018-1
GENERALIDADES
METABOLISMO
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SEMESTRE 2018-1
Catabolismo
Degradacin de biomolculas
Proceso global de oxidacin qumica y produccin de cofactores reducidos NADH,
NADPH y FADH2
Liberacin de energa qumica (reacciones exotrmicas) y produccin de ATP a
partir de ADP
Convergencia de vas
Anabolismo
Sntesis de biomolculas
Abarca todo el proceso de reduccin qumica y produccin de cofactores oxidados
NAD+, NADP+, FAD
Requiere de energa qumica (reacciones endotrmicas) y utiliza ATP
Divergencia de vas
DIGESTIN
Los seres vivos requieren de un suministro continuo de energa para subsistir. Esta energa
la obtienen de la oxidacin de los alimentos, que son compuestos qumicos procedentes de
otros animales o de vegetales, tales como; carbohidratos, lpidos y protenas. Estos
compuestos qumicos se caracterizan por ser de elevado peso molecular y de estructura
muy compleja; por lo que la mayor parte de ellos no pueden ser asimilados directamente.
Para que puedan ser absorbidos por el organismo deben ser degradados a sus
componentes ms sencillos, es decir: las protenas a aminocidos, los oligo y polisacridos
a monosacridos y los lpidos a alcoholes y cidos grasos
El conjunto de procesos mecnicos e hidrolticos que sufren los alimentos para ser
asimilados se denomina digestin, sta puede ser intra o extracelular. En la mayor parte
de los organismos inferiores la digestin es intracelular y en los organismos superiores
extracelular y se realiza en el tubo digestivo.
Los cambios qumicos que ocurren durante la digestin se llevan a cabo con la ayuda de
las enzimas, que se encuentran distribuidas en diferentes zonas del aparato digestivo. Los
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SEMESTRE 2018-1
factores que afectan la actividad de las enzimas son entre otros el pH y la temperatura y
para que cada enzima presente su mxima actividad debe encontrarse en condiciones
ptimas, de lo contrario se disminuye considerablemente su actividad. Adems, es
importante recordar que se deben encontrar presentes en el medio de reaccin los
cofactores o coenzimas respectivos.
SALIVA
En los organismos superiores, como el hombre, la digestin se inicia en la boca con la
masticacin de los alimentos que fragmenta las partculas grandes de alimento, que se
mezclan con la saliva y se transforman en una papilla denominada bolo alimenticio. En
ausencia de saliva, las partculas pequeas tienden a dispersarse y hacen difcil la
deglucin por que no forman bolo. La cantidad de masticaciones depende del alimento pero,
por lo general vara entre 20 y 25.
Glndulas salivales
La saliva es un fluido biolgico viscoso producido por las glndulas salivales, que contiene
99.5 % de agua, sales minerales ( Na+, K+, Cl-, HCO3,) y varias enzimas digestivas; la lipasa
lingual una enzima importante para la digestin de la leche, y la -amilasa. Tambin
contiene mucinas, glucoprotena lubricante del alimento y protectora de la mucosa oral; es
la responsable de la viscosidad de la saliva.
Otras protenas presentes son la muramidasa o lisozima que ataca el cido murmico de
algunas bacterias, la lactoferrina, una protena que liga al hierro, el factor de crecimiento
epidrmico que estimula el crecimiento de las clulas de la mucosa gstrica,
inmunoglobulinas (IgA) y sustancias del sistema sanguneo.
La saliva desempea varias funciones importantes: facilita la deglucin, conserva la boca
hmeda, sirve como solvente para las molculas estimulantes de las papilas gustativas,
ayuda al habla al facilitar los movimientos de los labios y de la lengua, adems de que
conserva la boca y los dientes limpios. El agua y las mucinas que contiene ablandan y
lubrican el bolo y las enzimas digestivas que contiene inician el proceso digestivo.
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SEMESTRE 2018-1
La saliva puede servir de vehculo para la excrecin de algunas sustancias, (como el alcohol
y la morfina), de iones inorgnicos (como el K+, Ca2+, HCO3, yodo, tiocianato) y de
inmunoglobulinas.
El pH de la saliva por lo general es de 6.8, pero puede variar a ambos lados de la neutralidad
y debido a su contenido de HCO3- tiene propiedades neutralizantes de los cidos, de
manera que juega un importante papel en la higiene bucal.
-AMILASA
Para los carbohidratos la digestin se inicia en la boca, por la
saliva, la cual contiene a la enzima ptialina, -amilasa o
amilasa salival, que es una enzima que hidroliza enlaces
glucosdicos del almidn y glucgeno, dando como productos
maltosa, maltotriosa, dextrinas lmites y algo de glucosa (in
vitro); en el organismo, debido al corto tiempo que actan
sobre los alimentos su accin, no es de mucha importancia.
Adems es fcilmente inactivada a pH de 4 o ms cidos, por
eso su accin cesa en el medio cido del estmago. En ciertas
personas la saliva presenta una actividad de amilasa muy Amilasa salival humana
dbil o nula.
DILISIS
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SEMESTRE 2018-1
su peso molecular. Las membranas dialticas son aquellas permeables al agua y a solutos
cristaloides, como el celofn, pergamino y el colodin.
Este mtodo permite la separacin de iones y molculas pequeas como la glucosa de
macromolculas como las protenas, con lo cual estas ltimas se pueden purificar.
La dilisis es un proceso muy lento, en algunos casos requiere das e incluso semanas para
su realizacin. Los coloides muy dializados se vuelven inestables al perder demasiados
electrolitos y tienden a precipitar.
La difusin es el fenmeno por el cual las molculas disueltas tienden a distribuirse
uniformemente en el seno del agua. Puede ocurrir tambin a travs de una membrana si
es lo suficientemente permeable.
Cuando se tienen dos disoluciones acuosas de distinta concentracin separadas por una
membrana semipermeable (deja pasar el disolvente pero no el soluto), se produce el
fenmeno de la smosis que sera un tipo de difusin pasiva caracterizada por el paso del
agua (disolvente ) a travs de la membrana semipermeable desde la solucin ms diluida
(hipotnica) a la ms concentrada (hipertnica), este traslado continuar hasta que las dos
soluciones tengan la misma concentracin (isotnicas o isoosmticas). Se entiende por
presin osmtica la presin que sera necesaria para detener el flujo de agua a travs de
la membrana semipermeable.
MEMBRANAS SEMIPERMEABLES
Son aquellas que permiten el paso de molculas en funcin de su peso/tamao molecular,
permitiendo el paso de pequeas molculas pero impidiendo el paso de molculas de gran
tamao. Estas membranas estn dotadas de poros microscpicos y dependiendo de las
dimensiones de los poros, podrn pasar determinadas molculas a travs de ellas. Unas
lo harn libremente, otras a medias y otras no podrn pasar en absoluto. Este transporte
de masa a travs de las membranas semipermeables sigue determinadas reglas:
Transporte difusivo: por diferencia de concentracin. Es un transporte pasivo que no
consume energa. El movimiento de solutos por difusin es el resultado del movimiento al
azar que tienen las molculas dentro de esta solucin. Un soluto en una disolucin, en su
movimiento aleatorio de vez en cuando impacta contra la membrana. Si la molcula de
soluto encuentra un poro de tamao adecuado podr pasar al otro lado de la membrana.
De igual manera en la solucin existente al otro lado de la membrana podr ocurrir lo mismo
y otro soluto podr pasar en direccin contraria.
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SEMESTRE 2018-1
Peso molecular: cuanto mayor sea el peso molecular de un soluto, menor ser su tasa de
transporte a travs de una membrana semipermeable. Los motivos para esto se deben a la
velocidad y al tamao. La velocidad de una molcula en una solucin est inversamente
relacionada con el peso de la molcula. Por ejemplo, la velocidad de una molcula que
pesa 200 daltons ser menor que la de una molcula que solo pesa 100 daltons. Las
molculas pequeas se mueven a una velocidad elevada e impactan con gran frecuencia
con la membrana por lo que su transporte difusivo va a ser alto. Las molculas grandes,
aunque pudieran pasar fcilmente por los poros, van a difundir poco ya que al ir a una
velocidad ms lenta van a colisionar con menos frecuencia contra la membrana. El tamao
de una molcula se relaciona con su peso molecular. La membrana va a impedir parcial o
totalmente el paso a su travs de un soluto que sea de un tamao aproximado o mayor que
el del poro de la membrana.
Permeabilidad de la membrana: tamao de poros, densidad de poros, grosor de la
membrana
Resistencia de la membrana: la resistencia de la membrana al transporte de solutos ser
mayor si la membrana es gruesa, si el nmero de poros es pequeo o si los poros son
estrechos.
MATERIAL Y REACTIVOS
MATERIAL QUE DEBEN PROPORCIONAR LOS ALUMNOS
1 liga o trozo de parafina Hilo camo
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SEMESTRE 2018-1
1 propipeta 5 espectrofotmetro
1 gradilla 1 mechero bunsen
1 placa de porcelana 1 tripie
1 piseta 1 tela de asbesto
1 termmetro
5 bao mara
REACTIVOS
100 mL de almidn al 1% 100 mL de lugol 0.01M / en 2 frascos goteros
60 mL HCl 0.1M 6 L de agua destilada
10 tubos para dilisis de 10 cm de longitud Parafilm
100g Bicarbonato de sodio/ 100mL NaOH
METODOLOGA
I. Recoleccin de la muestra
1. Diluya una fraccin de saliva no dializada. Elija usted la dilucin (Se sugiere iniciar con
una dilucin 1:10).
2. Coloque en un tubo de ensaye 1 mL de sol. de almidn al 1% en agua.
3. Incube a 37C por 2 min.
4. Aada al tubo 1 mL de saliva diluda e incube a 37 C.
5. Tome, cada 30 seg una muestra de la mezcla de incubacin y colquela sobre una
cavidad de una placa de porcelana a la cual previamente se le ha depositado 2 gotas
de solucin de lugol.
6. Busque la dilucin adecuada para que el tiempo en que la enzima degrade el almidn
sea de entre 3 y 5 min.
7. Una vez obtenida la dilucin adecuada, repita la metodologa con una muestra de saliva
dializada a la misma dilucin (no pipetee el precipitado obtenido en el tubo de dilisis).
8. Compare sus resultados y concluya.
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SEMESTRE 2018-1
. .
100 = 600
.
Nota: Investigue que significa unidades de amilasa para que pueda elaborar de manera
correcta su reporte.
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Observaciones y resultados
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SEMESTRE 2018-1
MANEJO DE RESIDUOS
Los residuos generados en esta prctica sern manejados de acuerdo a las indicaciones
generadas en el apartado correspondiente de este manual: los cidos o bsicos se
neutralizan y se eliminan en las tarjas con suficiente agua; los solventes y mezclas de
reactivos se guardarn, en frascos perfectamente etiquetados que permita conocer en todo
momento que tipo de residuos son, quin los gener y en que prctica. Los desechos
slidos se colocan en bolsas y depositan en los cestos de basura. Si tiene dudas consulte
a su asesor.
BIBLIOGRAFA
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SEMESTRE 2018-1
PRCTICA 3
FERMENTACIN ALCOHLICA
OBJETIVOS
Realizar fermentacin alcohlica con levadura bajo diferentes condiciones, para relacionar
el tipo de metabolismo con la produccin de energa que se realiza en estos organismos.
CUESTIONARIO PREVIO
CONTENIDO
INTRODUCCIN
De todos los organismos que habitan la tierra, solo unas cuantas especies son
estrictamente anaerbicos, es decir, que solamente pueden vivir en ausencia de oxgeno.
La mayora son microorganismos que habitan ambientes que tienen poco oxgeno o
carecen de l, como: el intestino de los animales, el suelo profundo, sedimentos de lagos y
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SEMESTRE 2018-1
ocanos o pantanos. Sin embargo, hay una gran cantidad de organismos que pueden vivir
en ausencia y presencia de oxgeno, entre ellos, se incluyen microorganismos, sino tambin
animales superiores y plantas. Incluso ciertos tejidos de nuestro organismo pueden
funcionar anaerbica o aerbicamente.
Las clulas que pueden vivir bajo ambas condiciones reciben el nombre de clulas
facultativas. Un aspecto muy significativo de ellas es que, cuando el oxgeno est ausente
de su medio ambiente, pueden extraer energa de la glucosa mediante el mismo tipo de
mecanismo de fermentacin anaerbica que utilizan las anaerbicas estrictas. Mientras que
en presencia de oxgeno prefieren oxidar completamente los alimentos hasta la formacin
de CO2, agua y energa, esto es, hacen oxidacin aerobia.
Saccharomyces cerevisae.
FES-CUAUTITLN/QUMICA 39
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SEMESTRE 2018-1
gracias a este proceso se obtienen productos de origen lcteo tales como el yogurt, crema
agria y quesos.
MATERIAL Y REACTIVOS
REACTIVOS
400 mL de solucin de glucosa al 10 % 50 mL de solucin de sacarosa al 2 %
150 mL de solucin de glucosa al 2 % 80 mL de NaF al 0.01M
50 mL de solucin de galactosa al 2 % 100 mL Reactivo de Benedict
50 mL de solucin de fructosa al 2 % 1 galn de agua destilada
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SEMESTRE 2018-1
METODOLOGA
Para esta metodologa es importante revisar la temperatura a la cual deben estar las
soluciones que se van a utilizar.
Prueba de Benedict:
Fermentacin de glucosa.
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SEMESTRE 2018-1
1. Rotule cinco tubos de ensaye como: agua, glucosa, fructosa, sacarosa, galactosa
2. Adicione a cada uno lo siguiente:
Agua: 2 mL de agua destilada
Glucosa: 2 mL de glucosa al 2%
Fructosa: 2 mL de fructosa al 2 %
Sacarosa: 2 mL de sacarosa al 2%
Galactosa: 2 mL de galactosa al 2 %
3. Para cada uno de los tubos por separado y uno por uno:
4. Adicione 2 mL de suspensin de levadura y
Llene completamente una pipeta graduada de 2mL con la solucin del tubo que
corresponda y tape el extremo con un dedo, mientras sella el lado opuesto con un
trocito de parafilm. Utilizando una pipeta pasteur, contine el llenado de la pipeta
graduada hasta que la solucin llegue hasta antes de que se desborde.
Invierta la pipeta y colquela dentro del tubo de ensaye.
5. Inicie la toma del tiempo.
Observe cada 5 minutos, durante media hora y con ayuda de una regla anote el
volumen desplazado del lquido.
Registre sus datos en la tabla 2.
1. Rotule dos tubos de ensaye de 15 x 1.5 cm como: C (sin NaF) y D (con NaF)
2. Adicione a cada uno lo siguiente:
C: 7.5 mL de suspensin de levadura a 37C + 7.5 mL de glucosa al 10% + 7.5 mL
de agua destilada a a 37C.
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
OBSERVACIONES Y RESULTADOS
Glucosa
Levadura
30 min
60 min
90 min
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SEMESTRE 2018-1
120 min
10
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SEMESTRE 2018-1
30
10
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
10
15
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
30
Puede la levadura metabolizar cada uno de los carbohidratos que se utilizaron? por
qu?
MANEJO DE RESIDUOS
Los residuos generados en esta prctica sern manejados de acuerdo a las indicaciones
generadas en el apartado correspondiente de este manual: los cidos o bsicos se
neutralizan y se eliminan en las tarjas con suficiente agua; los solventes y mezclas de
reactivos se guardarn, en frascos perfectamente etiquetados que permita conocer en todo
momento que tipo de residuos son, quin los gener y en que prctica. Los desechos
slidos se colocan en bolsas y depositan en los cestos de basura. Si tiene dudas consulte
a su asesor.
BIBLIOGRAFA
1. Alberts, B., Dennis B., Lewis J.; Raff M.; Roberts K.; Watson J. (2000). Biologa
Molecular de la Clula. (4 ed.) Barcelona, Espaa: Editoral Omega.
2. Nelson, D.L. y Cox, M.M. (2000). Principios de Bioqumica de Lehninger. (3 ed.)
Barcelona, Espaa: Omega.
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
FES-CUAUTITLN/QUMICA 48
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
PRCTICA 4
OBJETIVOS
1. Inducir la sntesis de glucgeno por medio de una dieta rica en carbohidratos para
extraerlo en hgado de ratn.
2. Conocer las rutas metablicas implicadas en la sntesis y degradacin del glucgeno.
3. Realizar el sacrificio de los animales de experimentacin y su diseccin posterior
para obtener el rgano que se va a trabajar.
CUESTIONARIO PREVIO
CONTENIDO
En esta prctica se manejan como mnimo 3 ratones; de las cuales 2 se someten a dieta
rica en carbohidratos por un periodo mnimo de 15 das, el tercero sirve como control y
recibe una dieta normal.
Se sacrifican los tres animales por dislocacin cervical. De los de dieta rica en
carbohidratos, a uno se le somete durante un mnimo de 15 minutos a estrs y despus se
sacrifica. Se realiza la diseccin, se extrae el hgado y se pesa. Despus se realiza la
tcnica de extraccin de glucgeno y por ltimo se identifica mediante la reaccin con yodo.
El alumno realiza una investigacin completa de las rutas metablicas implicadas en la
sntesis y degradacin del glucgeno.
FES-CUAUTITLN/QUMICA 49
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
GENERALIDADES
FES-CUAUTITLN/QUMICA 50
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
es convertida a su forma inactiva y estos efectos estn mediados por protein-cinasas que
depende del AMPc. Al inhibirse la glucogenolisis se incrementa la glucognesis y si se
inhibe la glucognesis aumenta la glucogenlisis. La concentracin de la fosforilasa a, es
el factor ms importante en el control del metabolismo del glucgeno en el hgado ya que
esta enzima no slo controla el paso limitante de la velocidad en la glucogenlisis, tambin
inhibe la actividad de la protein-fosfatasa 1 y en esta forma controla la sntesis de
glucgeno.
MATERIAL Y REACTIVOS
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
REACTIVOS
METODOLOGA
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
OBSERVACIONES Y RESULTADOS
MANEJO DE RESIDUOS
Los residuos generados en esta prctica sern manejados de acuerdo a las indicaciones
generadas en el apartado correspondiente de este manual: los cidos o bsicos se
neutralizan y se eliminan en las tarjas con suficiente agua; los solventes y mezclas de
reactivos se guardarn, en frascos perfectamente etiquetados que permita conocer en todo
momento que tipo de residuos son, quin los gener y en que prctica. Los desechos
slidos se colocan en bolsas y depositan en los cestos de basura. Si tiene dudas consulte
a su asesor.
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
BIBLIOGRAFA
5. Alberts,B., Dennis B., Lewis J.; Raff M.; Roberts K.; Watson J. (2000). Biologa
Molecular de la Clula. (4 ed.) Barcelona, Espaa: Editorial Omega.
6. Nelson, D.L. y Cox, M.M. (2000). Principios de Bioqumica de Lehninger. (3 ed.)
Barcelona, Espaa: Omega.
7. Hill, R. (1937). Oxygen envolved by isolated chloroplasts. Nature 139: 881.
8. Rendina, G. (1974). Tcnicas de bioqumica Aplicada. Mxico: Interamericana.
9. Stryer, L. (1996). Bioqumica. (4 ed.) Barcelona, Espaa: De Revert.
10. Ynez, A. R. (1996). Manual de Prcticas de Bioqumica. Mxico: IPN.
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
PRCTICA 5
FOTOSNTESIS
AISLAMIENTO DE CLOROPLASTOS Y REACCION DE HILL
OBJETIVO
CUESTIONARIO PREVIO
CONTENIDO
GENERALIDADES
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
compuestos de alto poder reductor o elevado energa qumica de enlace; esos productos
se utilizan posteriormente para la reduccin y transformacin del CO 2 a carbohidratos.
La vida en la tierra depende de la energa que suministra la luz solar, pero las clulas no
pueden emplear o almacenar la energa luminosa directamente, sino que tienen que
convertirla en energa qumica. Los electrones son moneda de uso comn en la
conversin de energa en los sistemas biolgicos: muchas de las reacciones energticas
de la clula se explican en trminos de transferencia de electrones entre molculas. Por
tanto, las clulas necesitan para vivir una fuente de electrones. Hace aproximadamente tres
mil millones de aos, algunas clulas fotosintticas aprendieron a prosperar casi en
cualquier tipo de entorno natural; sacaron electrones de una sustancia simple: el agua.
Estas clulas desarrollaron la facultad de disociar pares de molculas de agua en
electrones, protones y oxgeno molecular. Los protones y electrones resultaron
energticamente muy tiles; el oxgeno era simplemente un producto de desecho. La
fotosntesis produce todo el oxgeno de la atmsfera y se realiza en los cloroplastos.
La fotosntesis, es el proceso que transforma la luz solar en la energa que precisan las
funciones vitales de los organismos. Es sin duda, el proceso bioqumico ms importante de
la Biosfera por varios motivos:
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
Cuando un pigmento absorbe energa, uno de tres cosas puede ocurrir: la energa es
disipada como calor; la energa puede emitirse inmediatamente como una longitud de onda
ms larga (fluorescencia) o la energa puede activar una reaccin qumica, como el caso
de la fotosntesis.
La captacin de energa radiante la realiza el cloroplasto a travs de las antenas y los CCL.
En el proceso dos fotoreacciones operan en serie para elevar electrones desde el agua, un
donador con alto potencial redox, al aceptor final NADP +, de bajo potencial redox, una y
otra reaccin se desarrollan en los fotosistemas I y II. La captacin fotnica por ambos
fotosistemas, viene facilitada y canalizada va los correspondientes CCL, e induce un
estado exitado en los centros P-700 y P-680; que ceden inmediatamente un electrn a los
aceptores primarios respectivos: un componente para el fotosistema I, y una feofitina para
el fotosistema II. A consecuencia de ello aparecen los radicales catinicos P-700+ y P-680+
, que, por su elevado potencial redox, son inmediatamente reducidos por los donadores
primarios de ambos fotosistemas, ese electrn es recogido por una sustancia aceptora de
electrones que se reduce: la Plastoquinona (PQ) y desde sta va pasando a lo largo de una
cadena transportadora de electrones, entre los que estn varios citocromos (cyt b/f) y as
llega hasta la plastocianina (PC), que se los ceder a molculas de clorofila del FSI. A su
vez, la plastocianina se ver reducida por el flujo electrnico procedente del fotosistema II,
mientras que un complejo enzimtico dependiente de manganeso, tras acumular cuatro
cargas positivas a consecuencia de cuatro fotoactos sucesivos en P-700, recupera su
situacin basal mediante los cuatro electrones que proceden de la escisin o ruptura de
dos molculas de agua, con desprendimiento simultneo de oxgeno el proceso se llama
fotlisis del H2O. De este modo se puede mantener un flujo continuo de electrones desde
el agua hacia el fotosistema II y de ste al fotosistema I. Finalmente, el flujo de electrones
procedentes del fotosistema I suministra los equivalentes de reduccin necesarios para la
sntesis del potencial reductor generado en la fotosntesis; el NADP+ por de dos electrones
y un in hidrogeno.
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
En el descenso por esta cadena, con oxidacin y reduccin en cada paso, el electrn va
liberando la energa que tena en exceso; energa que se utiliza para bombear protones de
hidrgeno desde el estroma hasta el interior de los tilacoides, generando un gradiente
electroqumico de protones. Estos protones vuelven al estroma a travs de la ATP-asa y se
originan molculas de ATP.
La sntesis de ATP en el cloroplasto se explica mediante la hiptesis quimiosmtica de
Mitchell, de forma muy semejante a como ocurre en la mitocondria. El transporte de
electrones en la cadena transportadora de la membrana tilacoidal produce el bombeo de
protones desde el estroma hacia el espacio tilacoidal a nivel del complejo citocromo b6-f,
lo que genera un gradiente electroqumico. El flujo de protones a favor del gradiente desde
el espacio tilacoidal hasta el estroma, a travs del canal de protones de la ATP sintasa,
activa la sntesis de ATP a partir de ADP y fosfato. Los electrones se emplean para reducir
el NADP+ a NADPH. El ATP y el NADPH* producidos de esta forma pueden utilizarse en
la fase oscura.
Los dos fotosistemas pueden actuar conjuntamente proceso conocido como esquema en
Z, para producir la fotofosforilacin (obtencin de ATP) o hacerlo solamente el fotosistema
I; se diferencia entonces entre fosforilacin no cclica o acclica cuando actan los dos, y
fotofosforilacin cclica, cuando acta el fotosistema I nicamente. En la fotofosforilacin
acclica se obtiene ATP y se reduce el NADP+ a NADPH, mientras que en la
fotofosforilacin cclica nicamente se obtiene ATP y no se libera oxgeno.
FES-CUAUTITLN/QUMICA 58
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
Mientras la luz llega a los fotosistemas, se mantiene un flujo de electrones desde el agua al
fotosistema II, de ste al fotosistema I, hasta llegar el NADP+ que los recoge; sta pequea
corriente elctrica es la que mantiene el ciclo de la vida.
Fase obscura:
En esta fase, se va a utilizar la energa qumica obtenida en la fase luminosa, en reducir
CO2, Nitratos y Sulfatos y asimilar los elementos C, H, y S, con el fin de sintetizar
carbohidratos, aminocidos y otras sustancias.
Descripcin de eventos de la fase obscura.
Las plantas obtiene el CO2 del aire a travs de los estomas de sus hojas. El proceso de
reduccin del carbono es cclico y se conoce como Ciclo de Calvin, en honor de su
descubridor M. Calvin.
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
(a) (b)
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SEMESTRE 2018-1
MATERIAL Y REACTIVOS
REACTIVOS
METODOLOGA
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
Las tcnicas de aislamiento de cloroplastos no son muy sencillas; sin embargo, pueden
utilizarse tcnicas aproximadas, que permiten mantener algo de la actividad de los
cloroplastos. Para poder preservar la actividad debe asegurarse de trabajar siempre a
temperaturas fras, incluyendo las soluciones y la cristalera.
1. Mantener los extractos y los reactivos en hielo.
2. Pese 3 g de hojas de espinacas frescas y lavadas; crtelas (descartando las venas
grandes)
3. Macerar las hojas en un mortero con 15 ml de una mezcla (2:1) de una solucin
buffer de fosfatos 0.02 M pH 8.0 y una solucin de NaCl 0.35 M.
4. Centrifugue el filtrado por 2 minutos a 1500 rpm.
5. Centrifugue el sobrenadante a velocidad mxima durante 10 minutos.
6. Resuspender la pastilla en 7 ml de solucin de NaCl 0.35 M.
7. Durante todas las manipulaciones, asegrese de que el envase que contenga los
cloroplastos est sumergido en hielo.
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
OBSERVACIONES Y RESULTADOS
Tubo Observaciones
Absorbancia
No.
MANEJO DE RESIDUOS
Los residuos generados en esta prctica sern manejados de acuerdo a las indicaciones
generadas en el apartado correspondiente de este manual: los cidos o bsicos se
neutralizan y se eliminan en las tarjas con suficiente agua; los solventes y mezclas de
reactivos se guardarn, en frascos perfectamente etiquetados que permita conocer en todo
momento que tipo de residuos son, quin los gener y en que prctica. Los desechos
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MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
slidos se colocan en bolsas y depositan en los cestos de basura. Si tiene dudas consulte
a su asesor.
BIBLIOGRAFA
1. Alberts, B., Dennis B., Lewis J.; Raff M.; Roberts K.; Watson J. (2000). Biologa
Molecular de la Clula. (4 ed.) Barcelona, Espaa: Editorial Omega.
2. Nelson, D.L. y Cox, M.M. (2000). Principios de Bioqumica de Lehninger. (3 ed.)
Barcelona, Espaa: Omega.
3. Barn, M., Chueca, A. y Lopez, J. (1986). Inhibicin de la fotosntesis por herbicidas.
Investigacin y Ciencia, 175: 10-17.
4. Coleman, G., Coleman, M.I. (1990). How plants make oxygen. Scientific American, 262
(2): 50-8.
5. Hill, R. (1937). Oxygen envolved by isolated chloroplasts. Nature 139: 881.
6. Stryer, L. (1996). Bioqumica. (4 ed.) Barcelona, Espaa: De Revert.
7. Youvan, D. Y Marrs, B. (1988). Mecanismo molecular de la fotosntesis. Investigacin y
Ciencia, 179: 34-41
FES-CUAUTITLN/QUMICA 64
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
PRCTICA 6
CUANTIFICACION DE COLESTEROL EN SUERO SANGUNEO
OBJETIVO
CUESTIONARIO PREVIO
CONTENIDO
Los alumnos investigan y practican la forma correcta de obtener una muestra sangunea y
el tratamiento a seguir para obtener el suero sin provocar hemlisis. Realizan una tcnica
espectrofotomtrica y realizan una curva patrn para conocer el nivel de colesterol de su
muestra problema. Investigan tambin los niveles normales de colesterol y la importancia
metablica y fisiolgica de este esterol.
GENERALIDADES
FES-CUAUTITLN/QUMICA 65
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
los lquidos que constituyen los tejidos; slo alrededor del 30 % del colesterol circulante en
sangre se presenta en forma libre el resto se encuentra en forma de steres del colesterol.
En relacin a sus propiedades fsicas, es un lpido poco soluble en agua (a 25C el lmite
de su solubilidad es 0.2 mg/100 ml). La alta solubilidad del colesterol en sangre se debe
a la presencia de lipoprotenas plasmticas que tienen la capacidad de fijar y solubilizar
grandes cantidades de colesterol por asociacin de lpidos y protenas. Sus propiedades
como alcohol dependen del grupo OH; la cadena lateral de hidrocarburo unida al tomo de
carbono 17 le da las caractersticas de lpido, como son solubilidad en ter, cloroformo, etc.
El colesterol tiene una gran importancia desde el punto de vista bioqumico, ya que es el
precursor de otros esteroides entre los que se encuentran cidos biliares, hormonas
corticosuprarrenales, hormonas sexuales, vitamina D, glucsidos cardiacos y algunos
alcaloides. Adems es un componente muy importante de las membranas celulares, su
presencia modifica la fluidez de la membrana ya que le confiere rigidez debido a su
estructura policclica. Esta ampliamente distribuido en todas las clulas del organismo, pero
en particular en el sistema nervioso.
Es sintetizado en numerosos tejidos a partir de acetil CoA y finalmente eliminado del cuerpo
en la bilis, como colesterol o como sales biliares. s un producto tpico del metabolismo
animal, por lo cual existe en los alimentos de este origen, como la yema de huevo, carne,
hgado y cerebro.
Los niveles de colesterol en sangre estn relacionados con la edad, el sexo, el peso, la
dieta y el ejercicio Es muy importante mantener al colesterol dentro de ciertos lmites porque
un exceso de esta sustancia puede provocar problemas cardiovasculares.
El colesterol es atacado por reactivos muy cidos, estos reactivos eliminan del colesterol
una molcula de agua, para despus oxidar al intermediario y formar el 3,5 colestadieno,
este a su vez es atacado para formar el bis-3,5 colestadieno y con la adicin de cido
sulfrico se obtiene el cido bis-colestadienilmonosulfnico (color verde) o cido bis-
colestadienildisulfnico (color rojo).
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SEMESTRE 2018-1
MATERIAL Y REACTIVOS
REACTIVOS
METODOLOGIA
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SEMESTRE 2018-1
I. TOMA DE MUESTRA.
Investigacin por parte del alumno
1. Prepare la siguiente serie de tubos (en material perfectamente limpio y seco) para la
curva estndar. Al mismo tiempo se deben preparar el o los tubos problema (P).
2. Siga cuidadosamente el orden de adicin de los reactivos.
NMERO DE TUBO
REACTIVO 1 2 3 4 5 6 7 8 P
Colesterol estndar 100 mg - 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.8 1.0 -
/100 ml de cido actico (mll)
Suero sanguneo (ml) - - - - - - - - 0.2
cido actico (ml) 2.0 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.2 1.0 1.8
Acido p-toluen sulfnico al 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
12% (ml)
SUMERGIR LOS TUBOS EN AGUA FRIA SIN AGITAR
Anhdrido actico (ml) 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4,0 4.0 4.0 4.0
cido Sulfrico (ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
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SEMESTRE 2018-1
OBSERVACIONES Y RESULTADOS
Tubo Absorbancia
Concentracin Unid. de Conc
No
CLCULOS
MANEJO DE RESIDUOS
Los residuos generados en esta prctica sern manejados de acuerdo a las indicaciones
generadas en el apartado correspondiente de este manual: los cidos o bsicos se
neutralizan y se eliminan en las tarjas con suficiente agua; los solventes y mezclas de
reactivos se guardarn, en frascos perfectamente etiquetados que permita conocer en todo
momento que tipo de residuos son, quin los gener y en que prctica. Los desechos
slidos se colocan en bolsas y depositan en los cestos de basura. Si tiene dudas consulte
a su asesor.
FES-CUAUTITLN/QUMICA 69
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
BIBLIOGRAFA
1. Huang, T.C.C.P., Chem V., Wefrer and A. Raftery. (1961). A stable reagent for the
Liebermann-Buchard reaction application to rapie serum cholesterol determination.
Analytical chem, 33: 1405.
2. Murray, K. R., Granner, K.D., Mayes, A.P., Rodwell, W.V. (2001). Bioqumica de
Harper. (15 ed.) Mxico: Manual Moderno.
3. Stryer, L. (1996). Bioqumica. (4 ed.) Barcelona, Espaa: De Revert.
FES-CUAUTITLN/QUMICA 70
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
PRCTICA 7
CUANTIFICACION DE CREATININA EN SUERO SANGUNEO
OBJETIVO
CUESTIONARIO PREVIO
INTRODUCCIN
Jaff describi un mtodo en 1886 para la determinacin de creatinina el cual envolva una
protena libre filtrada y una reaccin con cido pcrico en una solucin alcalina. Aunque
FES-CUAUTITLN/QUMICA 71
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
desde entonces se han descrito varios mtodos, el mtodo clsico de reaccin de Jaff
sigue siendo el ms utilizado.
MATERIAL Y REACTIVOS
REACTIVOS
60mL cido pcrico (en frasco mbar) 30mL solucin de creatinina estndar
17.5 mmol/L 200 mg/L
20mL Hidrxido de sodio 0.29 mol/L
METODOLOGA
I. TOMA DE MUESTRA
Investigacin por parte del alumno
FES-CUAUTITLN/QUMICA 72
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
TUBO B E MP
Suero
- - 1.2 mL
desproteinizado
Creatinina estndar - 1.2 mL -
cido pcrico 1.2 mL - -
Hidrxido de sodio 0.2 mL 0.2 mL 0.2 mL
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SEMESTRE 2018-1
OBSERVACIONES Y RESULTADOS
Problema 1
Problema 2
( ) = 2 ( )
MANEJO DE RESIDUOS
Los residuos generados en esta prctica sern manejados de acuerdo a las indicaciones
generadas en el apartado correspondiente de este manual: los cidos o bsicos se
neutralizan y se eliminan en las tarjas con suficiente agua; los solventes y mezclas de
reactivos se guardarn, en frascos perfectamente etiquetados que permita conocer en todo
momento que tipo de residuos son, quin los gener y en que prctica. Los desechos
slidos se colocan en bolsas y depositan en los cestos de basura. Si tiene dudas consulte
a su asesor.
BIBLIOGRAFA
1. Ganong, F. (2002). Fisiologa Mdica. (18a ed.) D.F., Mxico: Manual Moderno.
2. Viniegra, P. (1994). Manual de Qumica Clnica. Estado de Mxico, Mxico:
Instituto Mexicano del Seguro Social.
3. Karp, G. (2010). Biologa celular y molecular. (6 ed.) Mxico: Mc Graw Hill.
4. Murray, K., Granner, K., Mayes, A. y Rodwell, W. (2001). Bioqumica de Harper.
(15 ed.) D.F., Mxico: Manual Moderno.
FES-CUAUTITLN/QUMICA 74
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
PRCTICA 8
CUANTIFICACIN DE CALCIO EN SUERO SANGUNEO
OBJETIVO
CUESTIONARIO PREVIO
INTRODUCCIN
La mayor parte del calcio corporal se localiza en el hueso (98-99%), el 1-2% en los tejidos
blandos y el 0.1% en el lquido extracelular.
El calcio plasmtico representa el 0.03% del calcio total del organismo y puede dividirse en
3 fracciones:
a) 40 45% unido a protenas de la sangre, principalmente albmina, que representa
el 80% de la protena fijadora de Ca.
b) 45% forma ionizada libre: fisiolgicamente activa y regulada homeostticamente
por vitamina D.
c) 10 - 15% forma difusible no ionizada, unida a aniones orgnicos e inorgnicos como
sulfato, lactato, citrato y fosfato.
FES-CUAUTITLN/QUMICA 75
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
Las hormonas directamente responsables de la regulacin del metabolismo del calcio son
la PTH (hormona paratiroidea), la calcitonina y la vitamina D, los glucocorticoides, la STH,
las hormonas tiroideas y las hormonas sexuales pueden modificar la calcemia y el
metabolismo seo.
El calcio total del organismo, resulta del balance entre la ingesta y la excrecin, tanto
intestinal como urinaria. En el equilibrio el balance es igual a cero. Esta situacin se da en
los sujetos sanos en edad adulta. En cambio los nios, adolescentes sanos y mujeres
gestantes se encuentran en balance positivo, mientras que en la vejez ocurre balance
negativo.
El calcio reacciona con el azul de timol en un medio alcalino formando un complejo azul
que absorbe a 610 nm, cuya intensidad de color es directamente proporcional a la cantidad
de calcio existente en la muestra.
MATERIAL Y REACTIVOS
FES-CUAUTITLN/QUMICA 76
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SEMESTRE 2018-1
REACTIVOS
20mL calcio estndar (Carbonato de calcio)
100mL azul de timol 5 x10-4 %
0.2 g/L
METODOLOGA
TUBO B P M
Muestra de suero - 50 L
Calcio estndar - 50 L -
Azul de timol 2 mL 2 mL 2 mL
FES-CUAUTITLN/QUMICA 77
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA METABLICA
SEMESTRE 2018-1
OBSERVACIONES Y RESULTADOS
Problema 1
Problema 2
CLCULOS
10( ) =
MANEJO DE RESIDUOS
Los residuos generados en esta prctica sern manejados de acuerdo a las indicaciones
generadas en el apartado correspondiente de este manual: los cidos o bsicos se
neutralizan y se eliminan en las tarjas con suficiente agua; los solventes y mezclas de
reactivos se guardarn, en frascos perfectamente etiquetados que permita conocer en todo
momento que tipo de residuos son, quin los gener y en que prctica. Los desechos
slidos se colocan en bolsas y depositan en los cestos de basura. Si tiene dudas consulte
a su asesor.
BIBLIOGRAFA
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SEMESTRE 2018-1
PRCTICA 9
OBJETIVOS
CUESTIONARIO PREVIO
INTRODUCCIN
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Prueba de Fouchet
Mtodo de cuantificacin
MATERIAL Y REACTIVOS
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REACTIVOS
METODOLOGA
1. Con ayuda del sistema vacutainer de tapn rojo, tome la muestra de sangre
2. Coloque el tubo vacutainer en un bao mara durante 10 min a 37C y posteriormente
centrifuge a 2500 rpm durante 10 min.
3. Separe el sobrenadante (suero) que es de color amarillo plido
4. Las muestras se cubrirn con papel aluminio debido a que son sensibles a la luz
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BD BT
B1
Bilirrubina Bilirrubina
(blanco 1)
directa total
cido sulfanlico /cido
clorhdrico 1.5 1.5 1.5
(mL)
Nitrito de sodio
-- 2 2
(gotas)
Cafena
-- -- 2
(mL)
Muestra
0.2 0.2 0.2
(mL)
Agua destilada
2 2 --
(mL)
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OBSERVACIONES Y RESULTADOS
Muestra BD
BT
B Bilirrubina
Bilirrubina
(blanco) directa
total
Problema 1
Problema 2
CALCULOS
Para cuantificar la bilirrubina directa (conjugada) o total (no congujada) presente en el suero
se aplicar las frmulas anteriores
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BIBLIOGRAFA
OBJETIVO
CUESTIONARIO PREVIO
INTRODUCCIN
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MATERIAL Y REACTIVOS
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REACTIVOS
40 mL de p-dimetilaminobenzaldehdo
50 mL carbonato de sodio 15%
(R. Erlich)
40 mL HCl 6N 10 mL fenolftalena 0.1%
200 mL acetato de sodio
METODOLOGA
I. TRATAMIENTO DE LA MUESTRA
1. Las muestras estarn guardadas en frascos mbar debido a que son sensibles a la
luz o bien se cubrirn con papel aluminio.
2. En dos tubos para centrfuga verter 10 mL de muestra de orina, etiquetar como
problema 1.
3. En otros dos tubos para centrfuga colocar 10mL de muestra de orina, etiquetar como
problema 2.
4. Centrifugar durante 5 min a 2000 rpm.
5. Recuperar el sobrenadante.
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OBSERVACIONES Y RESULTADOS
CLCULOS
( )=( ) ( )
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