Pre-Lab #5

PRELABORATORIO DE PRACTICA DE IDENTIFICACION DE COCOS GRAM
POSITIVOS
1. Investigar el fundamento de cada uno de los medios de cultivo descritos en

la práctica.
AGAR SANGRE: la infusión de musculo de corazón y la peptona, otorgan al medio
un valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de
microorganismos, aun de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico y agar es el agente solidificaste.
El agregado de 5-10% sangre bovina destinada estéril promueve el desarrollo de
bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales y la adecuada observación de
las reacciones de hemólisis.
AGAR BAIRD-PARKER: Medio altamente nutritivo, en el cual la peptona de caseína

y el extracto de carne constituyen la fuente de carbono y nitrógeno, el extracto de
levadura aporta vitaminas de estafilococos. El agar es el agente solidificaste. Permite el
crecimiento selectivo de estafilococos ya que el telurito de potasio y el cloruro de litio
inhiben el desarrollo de la flora acompañante presente en la muestra. La yema de huevo
permite demostrar la actividad lecitinásica de los microorganismos.
Los estafilococos coagulasa positiva reducen e telurito a teluro y originan colonias de
color grisáceo-negro, y tienen actividad lecitinásica, por eso actúan sobre la yema de
huevo produciendo un halo claro alrededor de la colonia.
AGAR SALADO MANITOL: El agar manitol es selectivo gracias a la alta

concentración de sal que posee. La salinidad actúa como sustancia inhibitoria y evita el
crecimiento de bacterias Gram negativas.
También es diferencial debido a la presencia del carbohidrato manitol y al indicador de
pH rojo de fenol. A partir de este, las bacterias capaces de fermentar el manitol
producen ácidos, acidificando el medio, tornándose las colonias y el medio de color
amarillo.
Por otra parte, las colonias que no fermentan el manitol crecen en el medio tomando los
nutrientes que les proporciona los extractos y peptonas de carne y la tripteína. De allí
las bacterias extraen el carbono, el nitrógeno, las vitaminas y los minerales necesarios
para su crecimiento. Las colonias en este caso pueden ser rosadas débil o fuertes, y el
medio se queda del mismo color o cambia a fucsia.
AGAR MUELLER HINTON: Es un medio de cultivo que tiene como uso principal,
hacer los ensayos de sensibilidad y susceptibilidad de los microorganismos frente a los
antibióticos. Se usa para la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Sin embargo,
también se usa para aislar y mantener especies de Neisseria y Moraxella.
Es un medio de cultivo no selectivo y no diferencial, lo cual significa que prácticamente
todos los microorganismos que se cultivan ahí, crecerán exitosamente debido a su
superficie.
2 Investigar el fundamento de cada una de las pruebas de identificación descritas

en la guía.
PRUEBA DE GLUCOSA OF(OXIDACIÓN-FERMENTACIÓN): El metabolismo

deglúcido puede seguir la vía oxidativa o fermentativa. En vía oxidativa el aceptor final de
electrones debe ser el oxígeno y por consiguiente el proceso es aerobio y produce poca
acidez, mientras que en vía fermentativa el aceptor final de electrones es un compuesto
orgánico y el proceso es anaerobio, originando mucha acidez en poco tiempo.
La fermentación u oxidación del glúcido se puede ver en dos tubos con medio de cultivo
glucosado, uno abierto (aerobio) y otro cerrado con parafina (anaerobio). Utilizamos para
esta prueba el medio semisólido de Hugh-Leifson al que se le añade glucosa para observar
si el metabolismo de este azúcar es llevado a cabo por vía oxidativa o fermentativa.
RESISTENCIA A LA NOVOBIOCINA: Varias especies del Género Staphylococcus

son resistentes a la novobiocina (disco de 5 µg). Un halo de inhibición de
crecimiento menor o igual a 16mm corresponde a S.saprophyticus. Un halo de
inhibición mayor de 16mm corresponde a otros estafilococos coagulasa negativos.
PRUEBA DE COAGULASA EN AGLUTINACIÓN: La enzima coagulasa debe su

nombre a la acción que produce. Esta tiene la capacidad de transformar el fibrinógeno en
fibrina, creando un coágulo evidente cuando se halla en el plasma, es decir, esta enzima
simula la actividad de la trombina de la cascada de la coagulación. La diferencia con la
cascada de la coagulación normal radica en que esta reacción no necesita la presencia de
calcio y no es afectada por la heparina.
PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD A LA BACITRACINA: la bacitracina es un

antibiótico que inhibe la síntesis de pared celular bacteriana, y a la concentración que se
encuentra en los discos. Inhibe el crecimiento de los estreptococos beta hemolíticos del
grupo A de Lancefield pero no inhibe el desarrollo de otros estreptococos beta hemolíticos.
Los micrococos y los estomatococcus también son inhibidos por la bacitracina, mientras
que los estafilococos coagulasa negativa son resistentes. Un resultado sensible a la
bacitracina es presuntivo de la presencia de estreptococo grupo A, y se puede incrementar
además el valor diagnóstico y facilitar la identificación de la cepa bacteriana en cuestión
mediante la utilización de los discos de PYRA-A-Enterococos.
PRUEBA DE RESISTENCIA AL TRIMETOPRIM-SULFAMETOXAZOL (SXT):

Las zonas con trimetoprima-sulfamethoxazole (y también sulfonamidas, y trimetoprima
solo) podrían ser difíciles de leer porque este agente podría no inhibir el crecimiento de las
bacterias hasta que las bacterias hayan pasado por varias generaciones de crecimiento. Se
podría observar un ligero crecimiento opaco dentro de la zona. Mida la zona en el punto en
que haya una reducción del 80% en el crecimiento.
PRUEBA DE CAMP: Los estreptococos grupo B secretan el factor CAMP, una proteína
termoestable y difusible, que interactúa con la ß-hemolisina secretada por una cepa S.
aureus. S. Aureus produce esfingomielinasa C (se une a la membrana de los eritrocitos) que
al unirse a el factor de CAMP provoca un sinergismo de la hemólisis.
PRUEBA DE BILIS-ESCULINA: medio de cultivo nutritivo por la presencia de extracto

de carme y peptona de carne que aportan nutrientes para el desarrollo microbiano. Los
estreptococos del grupo D crecen rápidamente en el agar bilis esculina e hidrolizan la
esculina, que en presencia de iones hierro forman un compuesto de color verde oliva hasta
negro. La bilis de buey inhibe el desarrollo de la flora acompañante.
PRUEBA DE TOLERANCIA A NaCl 6.5%: Se basa en la capacidad de la bacteria de
desarrollarse en presencia de cantidades variadas de cloruro de sodio (NaCl). Es una
propiedad que ha sido utilizada para caracterizar varios géneros y especies bacterianas,
incluyendo los Streptococcus del grupo viridans. En este caso se utiliza la concentración de
Cloruro de Sodio al 6,5%.
PRUEBA DE LA OPTOQUINA: S. pneumoniae y Streptococcus grupo viridans son

cocos Gram positivo que presentan colonias alfa hemolíticas cuando crecen en medios
sólidos suplementados con 5-10% de sangre de carnero.
Se puede diferenciar mediante la realización de pruebas bioquímicas como ser la prueba de
sensibilidad a la optoquina y la prueba de solubilidad en bilis.
La optoquina inhibe el desarrollo de Streptococcus pneumoniae mientras que otro
estreptococo no son inhibidos o presentan una zona pequeña de inhibición alrededor del
disco.
2. Elaborar un esquema de identificación para las especies clínicamente más

importantes de los géneros Staphylococcus, Streptococcus y Enterococcus.
En el esquema se debe incluir coloración de Gram, prueba de catalasa, tipo
de hemolisis y todas las pruebas utilizadas en el laboratorio.
4. Investigar cuales estreptococos y estafilococos son considerados flora normal y
en qué lugares del cuerpo se encuentran.
ESTAFILOCOCOS.
Staphylococcus aureus (nasofaringe y zonas húmedas como pliegues inguinales y
axilas)
Staphylococcus capitis (glándulas sebáceas como la frente)
Staphylococcus haemolyticus y Staphylococcus homínis (zonas dotadas de
glándulas apocrinas como las axilas)
Staphylococcus epidermis (superficie corporal donde sobrevive gracias a sus
lipasas)
ESTREPTOCOCOS.
Streptococcus del grupo B - Enterococos (flora normal de los intestinos)
Streptococcus viridans y pygone (orofaringe)
Streptococcus aerobios y anaerobios (aparato genitourinario)
Streptococcus mutans y Streptococcus sanguis (placa dentaria).
Streptococcus mitis (dientes como a las mucosas)
S. salivarius (mucosa lingual.)
5. Investigar las patologías más importantes producidas por estreptococos y

estafilococos. Indica las especies involucradas en cada caso.
Staphylococcus aureus: carbucos, folliculitis, forúnculos, intoxicación alimentaria,

síndrome del shock tóxico, artiritis séptica, bacteriemia, epidemia, endocarditis,
osteomielitis, neumonía.
Staphylococcus haemolyticus y Staphylococcus homínis: bacteriemia, epidemia,
heridas, infecciones óseas y articulares e infecciones del tracto urinario.
Staphylococcus epidermis: bacteriemia, epidemia, heridas quirúrgicas, infecciones
del tracto urinario y de los catéteres, anastomosis, prótesis y dispositivos de diálisis
peritoneal.
Streptococcus del grupo B: enfermedad neonatal (neumonía, meningitis y

septicemia, bacteriemia con meningitis)
Streptococcus viridans y pygone: faringitis, escarlatina, pioderma, erisipela,

celulitis, fascitis necrosante.
Streptococcus agalactiae: conjuntivitis, otitis, pericarditis, osteomielitis
Streptococcus pneumoniae: neumonía, sinusitis, broquitis, otitis, bacteriemia,
meningitis.

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1. Investigar el fundamento de cada uno de los medios de cultivo descritos en

AGAR BAIRD-PARKER: Medio altamente nutritivo, en el cual la peptona de caseína

AGAR SALADO MANITOL: El agar manitol es selectivo gracias a la alta

2 Investigar el fundamento de cada una de las pruebas de identificación descritas

PRUEBA DE GLUCOSA OF(OXIDACIÓN-FERMENTACIÓN): El metabolismo

RESISTENCIA A LA NOVOBIOCINA: Varias especies del Género Staphylococcus

PRUEBA DE COAGULASA EN AGLUTINACIÓN: La enzima coagulasa debe su

PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD A LA BACITRACINA: la bacitracina es un

PRUEBA DE RESISTENCIA AL TRIMETOPRIM-SULFAMETOXAZOL (SXT):

PRUEBA DE BILIS-ESCULINA: medio de cultivo nutritivo por la presencia de extracto

PRUEBA DE LA OPTOQUINA: S. pneumoniae y Streptococcus grupo viridans son

2. Elaborar un esquema de identificación para las especies clínicamente más

5. Investigar las patologías más importantes producidas por estreptococos y

Staphylococcus aureus: carbucos, folliculitis, forúnculos, intoxicación alimentaria,

Streptococcus del grupo B: enfermedad neonatal (neumonía, meningitis y

Streptococcus viridans y pygone: faringitis, escarlatina, pioderma, erisipela,

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