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    Cuantificacion de Proteinas PDF

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    Este documento resume los resultados de un taller sobre cuantificación de proteínas mediante dos métodos. El método de Biuret mostró una relación lineal entre la concentración estándar y la absorbancia, con un R2 cercano a 1. El método 2 también tuvo una relación lineal y un factor promedio de 247,1. Este método mostró menor variabilidad entre muestras y por lo tanto mayor reproducibilidad. Finalmente, se estimó la concentración de proteínas en hojas maceradas en 11,6% y la cantidad de proteínas en 400

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    Este documento resume los resultados de un taller sobre cuantificación de proteínas mediante dos métodos. El método de Biuret mostró una relación lineal entre la concentración estándar y la absorbancia, con un R2 cercano a 1. El método 2 también tuvo una relación lineal y un factor promedio de 247,1. Este método mostró menor variabilidad entre muestras y por lo tanto mayor reproducibilidad. Finalmente, se estimó la concentración de proteínas en hojas maceradas en 11,6% y la cantidad de proteínas en 400

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    TALLER CUANTIFICACION DE PROTEINAS

    Paula Natali Jimenez Martinez 20181180058


    Venus Valentina Mora Piernagorda ​20181180056
    Wilson Rincon Cruz ​20172180084
    ___________________________________________________________________________

    PUNTO A
    Indicar la ecuación de la recta y R 2 para el método de Biuret

    Método de Biuret
    ACTOR DE CADA
    ESTÁNDAR mg/dL ABSORBANCIA ESTÁNDAR
    [] Abs [ ]/Abs
    20 0,12 166,7
    40 0,22 181,8
    80 0,4 200
    160 0,9 177,8
    320 1,9 168,4
    Factor Promedio 178,9
    Discusión
    En cuanto al método de Biuret, es un método efectivo para la cuantificación de proteínas,
    evidenciando una relación entre una concreción estándar y la absorbancia, se puede determinar el
    valor de la concentración de una muestra deseada. El valor de R Deberá estar próximo a 1 para la
    veracidad de los datos.

    PUNTO B
    Determinar el factor promedio y R 2 del método de detección de proteínas 2 y discuta los resultados.

    MÉTODO DE DETECCIÓN DE PROTEÍNAS 2


    ABSORBANCIA FACTOR DE CADA ESTÁNDAR [ ] /
    ESTÁNDAR [ ] mg/mL (Abs) Abs
    960 2,1 457,1428571
    480 1,4 342,8571429
    240 0,9 266,6666667
    120 0,7 171,4285714
    80 0,32 250
    40 0,18 222,2222222
    20 0,12 166,6666667
    10 0,1 100
    FACTOR PROMEDIO 247,1230159

    PUNTO C
    Incluir una gráfica Absorbancia Vs. Concentración e indicar la ecuación de la recta para el método
    de detección de proteínas 2

    Discusión de resultados
    Segun el valor de R obtenido, este nos indica que el modelo obtenido, explica toda la variabilidad de
    los datos de respuesta en torno a su media, que en nuestro caso seria la linea de tendencia qe se puede
    ver de color gris en la grafica,asi mismo, esta representacion, relaciona una señal instrumental en
    función de la concentración de un analito y define un intervalo de trabajo en elcual, los resultados a
    informar tienen una precisión y exactitud conocida que ha sido documentada en la validación de cada
    método, en este caso, si bien, el resulato obtenido supera el 90% de confianza en la prueba este no se
    califica como un valor alto, ya que no se encuentra entre el 98-99%.

    PUNTO D
    Con las muestras del primer punto, estimar la concentración de proteínas para la Muestra No. 2 por
    el método de detección de proteínas 2 y discutir si este ofrece los resultados más parecidos a
    BIURET.

    -Calcular promedio (​M​), desviación Estándar (D


    ​ S​) y coeficiente de Variabilidad * (​CV=
    (DS/M)*100 %)​ de cada Muestra

    -El CV es una medida de dispersión de los datos expresada en porcentaje.

    ​ V)​ idealmente en pruebas de Bioquímica deben


    -Si los valores de Coeficiente de Variabilidad (C
    ser menores a 5 %, ¿Qué determinación muestra la mejor reproducibilidad (CV más bajo)?,
    ¿Cuáles determinaciones pueden ser aceptadas bajo este criterio?, ¿Cuáles rechazadas?

    Concentración Concentración
    Muestra-1 Muestra-2
    muestra 1 muestra 2
    0,62 0,8 110,9180 143,12
    0,65 0,81 116,2850 144,909
    0,615 0,835 110,0235 149,3815
    0,6 0,825 107,3400 147,5925
    0,65 0,845 116,2850 151,1705
    0,645 0,86 115,3905 153,854
    0,62 0,862 110,9180 154,2118
    0,66 0,85 118,0740 152,065
    0,63 0,835 112,7070 149,3815
    0,645 0,816 115,3905 145,9824

    Tabla 1. Concentración y absorbancia muestra 1 y 2.

    MM1 0,6335
    MM2 0,8338
    DS1 0,01930025907
    DS2 0,02101745306

    Tabla 2. Promedio y desviación estándar muestra 1 y 2 de la tabla 1.


    CV1 3,046607587
    CV2 2,520682785

    Tabla 3. Coeficientes de variabilidad muestra 1 y 2 de la tabla 1.

    Gráfica 1. Curva de calibración muestra 1

    Gráfica 2. Curva de calibración muestra 2.

    DISCUSIÓN DE RESULTADOS

    -​Según los datos presentados anteriormente en la tabla y obtenidos de la fórmula: CV=


    (DS/M)*100 % el coeficiente de variabilidad más óptimo para la reproducibilidad corresponde a la
    muestra 2.

    -​Loscoeficientes de variabilidad que describen valores inferiores al 5% son aceptados bajo


    los estudios estadísticos presentados, así mismo los valores descrito que superen el 5% no serán
    aceptados bajo el mismo criterio.
    PUNTO E
    Se lleva a cabo un experimento en plantas y se desea determinar la concentración de proteínas en un
    macerado a partir de hojas (Peso de las hojas en preparación: 50 gramos). Se toma un gramo del
    macerado y se disuelve en 100 ml de agua destilada. Se trabaja una curva de calibración para
    proteínas que ofrece los siguientes resultados

    Si al trabajar la muestra por triplicado ofrece las siguientes absorbancias: 0,174 - 0,182 – 0,178.

    → Calcular la concentración promedio de la proteína dado por el método.

    Concentración el Estándar (mg/dL) Absorbancia del Estándar


    200 0,466
    100 0,272
    50 0,13
    promedio 116,6666667

    → ¿Qué porcentaje de las hojas maceradas es proteína?

    1g 100mL 1g 1000mg 1000mg


    100mL * 1dL = 1dL * 1g = 1dL

    1000 mg/dL= 100%

    116 mg/dL= x%
    116mg *100%
    1000 = 11, 6%

    → Determinar cuánta proteína puede encontrarse en 400 kilogramos de hoja recolectada.

    1.000.000mg
    400kg * 1kg = 400.000.000 mg

    1000mg de hoja macerada = 116mg de proteína

    400.000.000mg= x mg de proteína
    400.000.000mg *116mg
    1000mg = 46.400.000mg

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