18poe - Proteinuria

DETERMINACIÓN DE Nº 0000
PROTEINURIA
(colorimétrico)
ORURO Pag. 1-3
1.-Objetivo/Propósito Una cantidad de proteínas plasmáticas de pequeño peso
molecular son filtradas normalmente en forma libre a través del
glomérulo renal y luego son, en parte, reabsorbidas por los
túbulos renales. Hay condiciones fisiológicas o benignas donde
se puede observar un aumento en la excreción urinaria de
proteínas como en el ejercicio violento, fiebre, hipotermia,
embarazo. La medición de las proteínas urinarias es importante
en la detección de patología renal. La proteinuria en la
enfermedad renal puede resultar de una disfunción glomerular o
tubular. En el primer caso se da por un aumento en el pasaje a
través de los capilares del glomérulo y caracterizada por la
pérdida de proteínas plasmáticas de igual o mayor tamaño. En
el segundo caso se da por una disminución en la capacidad de
reabsorción de proteínas por los túbulos. Entre las patologías en
las que se produce un aumento en la excreción de proteínas
urinarias se encuentran: síndrome nefrítico, síndrome nefrótico,
hipogammaglobulinemia monoclonal, nefropatía diabética,
infecciones del tracto urinario
2.- Alcance/ Campo La aplicación de las técnicas de análisis en orina 24 horas, sirve
de aplicación para estandarizar los procedimientos a nivel del laboratorio y
que este sea de utilidad al personal de laboratorio.
3. Responsable Profesional Bioquímico y Biotecnólogo
4. Definición Las técnicas de determinación de proteínas totales en orina de
24 horas por método colorimétrico por la interacción de estas
proteínas con un agente de precipitación en solución diluida.
5.- Desarrollo del Fundamento. - Las proteínas presentes en la muestra
procedimiento reaccionan en medio ácido con el complejo Rojo de Pirogalol-
Molibdato originando un nuevo complejo coloreado que se
cuantifica espectrofotométricamente a 600 nm.
Procedimiento. –
PROCEDIMIENTO Llevar a temperatura ambiente los

reactivos y las muestras antes de iniciar el ensayo. 1.-Pipetear
en cada tubo los volúmenes en ml
Reactivo Estándar Muestra (U)
blanco (RB) (STD)
Reactivo de 1ml 1ml 1ml
trabajo
Estándar - 20 l -
Muestra - - 20 l
2.- Incubar los tubos a 37ºC por 10 minutos

3.- Leer tanto el estándar como la muestra con blanco de
reactivo a 600 nm antes de 3 horas.
Muestra.- orina.24 horas
REACTIVOS PROVISTOS A. Reactivo

A: solución estabilizada de Rojo de Pirogalol 0,1 mmol/l,
molibdato de sodio 0,1 mmol/l en buffer succinato 50 mmol/l.
S. Standard: solución de albúmina 100 mg/dl (1,0 g/l).
REACTIVOS NO PROVISTOS - Agua destilada. - Solución

fisiológica.
Estabilidad y almacenamiento del reactivo. Reactivos Provistos:

son estables en refrigerador (2-10oC) hasta la fecha de
vencimiento indicada en la caja. El Reactivo A debe protegerse
de la luz.
Material.- Espectrofotómetro o fotocolorímetro
Micropipeta automática de 20 l.
Pipetas de 1 ml.
Tubos de hemólisis o cubetas lavadas con agua
destilada
Reloj o Timer
Equipo.- STAT FAX 1935 plus
Instrucciones Detalladas.-
Poner el tubo de ensayo en la centrífuga de modo balanceado
por espacio de 5 minutos a 3.000r.p.m.. En orina de 24 hrs.
Precauciones de seguridad o bioseguridad. - Para la

obtención de muestras el personal involucrado en los diferentes
procesos para los exámenes de orina debe aplicar las medidas
de bioseguridad establecidas en los Manuales de Bioseguridad
de cada servicio.
Ver lo referente a medidas de protección en caso de accidentes
por inoculación.
Cálculo de resultados.- suero o plasma
1) Proteínas en orina de 24 horas

mg de proteínas /24 horas = D x V x 1000
S
siendo: V = volumen de la diuresis expresado en litros /24 horas

1000 = mg/l del Standard
Intervalo de referencia:
VALORES DE REFERENCIA Orina de 24 horas: 30-140
mg/24 horas (hasta 160 mg/24 horas en embarazadas)
Validación de resultados.-
Pueden emplearse todos los muestra control con valores
determinados por este método.
Linealidad. - Linealidad: la reacción es lineal hasta 150 mg/dl

de proteínas. Para valores superiores, diluir la muestra 1:2 ó 1:4
con solución fisiológica y repetir la determinación. Corregir los
cálculos multiplicando por el factor de dilución empleado. Si se
desea aumentar la sensibilidad analítica en muestras normales o
levemente aumentadas, pueden emplearse 50 ul de muestra. En
este caso, es preferible diluir el Standard 1:2 (1+1) con agua
destilada, y usar este standard de 50 mg/dl en la prueba, de tal
manera de ajustar la calibración a los valores normales bajos.
Verificar el resultado.- Se recomienda que cada laboratorio
establezca sus propios rangos referenciales ya existen
diferencias entre instrumentos, laboratorios y población total.
Interferencias. -
Los conservantes para orina tales como ácido clorhídrico, ácido
benzoico o timol pueden ser causas de resultados falsamente
disminuidos; - algunas drogas o medicamentos pueden interferir
en la reacción. Referirse a la bibliografía de Young para los
efectos de las drogas en el presente método.
Calibración de instrumental y mantenimiento. - Ver Manual

de Control de Calidad.
6.- Formularios y 1. Libro de registro
Registro 2. Copia del resultado
7.- Referencias
8.- Anexos
9.- Lista de Personal Bioquímico y Biotecnólogo
distribución
Redactado por: Revisado por: Aprobado por:
Fecha de redacción: Fecha de revisión: Fecha de aprobación:
Fecha de vigencia Fecha de actualización:

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DETERMINACIÓN DE Nº 0000

PROCEDIMIENTO Llevar a temperatura ambiente los

2.- Incubar los tubos a 37ºC por 10 minutos

Muestra.- orina.24 horas

REACTIVOS PROVISTOS A. Reactivo

REACTIVOS NO PROVISTOS - Agua destilada. - Solución

Estabilidad y almacenamiento del reactivo. Reactivos Provistos:

Equipo.- STAT FAX 1935 plus

Precauciones de seguridad o bioseguridad. - Para la

Cálculo de resultados.- suero o plasma

1) Proteínas en orina de 24 horas

siendo: V = volumen de la diuresis expresado en litros /24 horas

Linealidad. - Linealidad: la reacción es lineal hasta 150 mg/dl

Calibración de instrumental y mantenimiento. - Ver Manual

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