Analita Instrumental 2
Analita Instrumental 2
Analita Instrumental 2
INTRODUCCIÓN
Técnica electroanalítica: técnica en la que se mide la respuesta
eléctrica de un sistema químico o muestra para obtener una
información química
Pueden proporcionar límites de detección excepcionalmente bajos
Dan información del sistema químico (estequiometria; constantes de
velocidad y de equilibrio de reacciones químicas)
Dan parámetros específicamente electroquímicos (velocidades de
transferencia de carga y masa o el número de electrones).
Algunas técnicas electroquímicas dan información sobre la especie
química en la que se encuentra un determinado elemento.
Da información cuantitativa tanto de sustancias inorgánicas como
orgánicas.
Son menos costosas que otras técnicas
Son técnicas alternativas y complementarias a otras técnicas para
conseguir obtener la máxima información del sistema bajo estudio.
Se puede acoplar fácilmente a sistemas cromatográficos.
Introducción
Reacciones electroquímicas
𝟎 𝟎
𝟏 𝟐
Sistema experimental
Célula electroquímica
Introducción
Potencial de célula
cel c a
𝟎 𝟐 𝟎
𝒂 𝒁𝒏𝟐 ⁄𝒁𝒏𝟎 𝒄 𝑨𝒈 ⁄𝑨𝒈𝟎
𝟎 𝟎 𝟐
𝒄𝒆𝒍 𝑨𝒈 ⁄𝑨𝒈𝟎 𝒁𝒏𝟐 ⁄𝒁𝒏𝟎
𝑬𝒄𝒆𝒍 = 𝟎. 𝟕𝟗𝟗𝟔 + 𝟎. 𝟎𝟓𝟗𝟐 𝒍𝒐𝒈 𝟎. 𝟏𝟎𝟎 − −𝟎. 𝟕𝟔𝟏𝟖 + 𝟎. 𝟎𝟐𝟗𝟔 𝒍𝒐𝒈 𝟎. 𝟎𝟏𝟔𝟕 = 𝟏. 𝟓𝟓𝟓 𝑽
Introducción
No es correcto porque:
K+
+ -
E cel E c E a E ul
Eul = - 6,4 m V
Clasificación de las técnicas electroanalíticas
Técnicas de la totalidad:
miden propiedades de toda la disolución (como la
conductividad)
Técnicas de interfase,
la señal depende de los fenómenos que se producen en
la interfase entre un electrodo y la disolución en contacto
con él.
Clasificación de las técnicas electroanalíticas
Culombimetría a
Potencial Potencial intensidad controlada
variable constante
Culombimetría a
Voltamperometría Amperometría potencial controlado
Clasificación de las técnicas electroanalíticas
Voltamperometría
Disolución Disolución
Voltamperometría de
agitada estática
redisolución
Voltamperometría
cíclica
Medida de la intensidad y el potencial
𝑷𝑺
𝒔𝒖𝒑 EPS potencial aplicado por la fuente
𝒂𝒃 de alimentación
Rab resistencia entre los puntos a y b.
𝒄𝒆𝒍
Ecel diferencia de potencial entre los
𝒊𝒏𝒇
𝒄 electrodos de la célula
Rcb resistencia entre los puntos c y b.
𝒄
𝒄𝒆𝒍 𝑷𝑺
Diagrama esquemático de un potenciómetro. 𝒂𝒃
C = contraelectrodo; T = Electrodo de trabajo; AC =
alambre deslizante de resistencia; G = Interruptor
de tecleo; i = galvanómetro.
Medida de la intensidad y el potencial
𝑷𝑺
Electrodos de referencia
Electrodos de referencia
• Electrodo normal de hidrógeno (NHE)
• Electrodo de calomelanos (SCE)
• Electrodo de Ag/AgCl.
2 H+ + 2 e- H2
2
a
Eeq E 0 0,0296 log H
PH 2
Electrodos: clasificación y tipos
• Electrodo de Calomelanos
𝟎
𝒆𝒒 𝟏 𝟐
E10 = 0,268 V
Electrodos: clasificación y tipos
• Electrodo de Ag/AgCl
𝟎
𝒆𝒒 𝟏
E10 = 0,222 V
Electrodos: clasificación y tipos
• Básicamente inerte
Platino • Se recubre con una capa de óxido en medio oxidante y de una película de
hidrógeno en medio reductor
• Atacable. Tóxico
• No puede emplearse a potenciales mayores de 0,4 V en medidas de
Mercurio oxidación
• Presenta un sobrepotencial sobre la reducción del agua que permite
trabajar hasta potenciales de -2,0 V en reducción
TÉCNICAS POTENCIOMÉTRICAS
INTRODUCCIÓN
Electrodos metálicos
.
= +
= . + . = . + .
$!
= · = !. " × !
= . + . − . = . − .
Introducción
' )*
Hg2+ + Y4- HgY2- ( =
' * )+
' )
= ." + . ' = . ! + . &
),
= − . & ),
Introducción
= − . & ),
)*
Ca2+ + Y4- CaY2- - =
* )+
)
= + . & = ′− . &
(
Introducción
,
= !. , + .
/
Electrodos selectivos de iones
ELECTRODOS DE MEMBRANA
Electrodos selectivos de iones (ISE)
0
Referencia interna 12
0 =
3-
.
Disolución externa
0
0 = +
Membrana 3
Electrodos selectivos de iones
. 0
0 = +
3
Electrodos selectivos de iones
Propiedades
Mínima solubilidad o disociación.
Conductividad eléctrica.
Reactividad selectiva con el analito.
Coeficientes de selectividad
12 3 ⁄37
= ′ + + 45 ,7 7
3 -
9
.
= ′ +
3
0.0592 3 ⁄3 7
= ′ + 45 ,7 7
3
9
Ejemplo 1. Los potenciales medidos con un electrodo selectivo de calcio en
varias disoluciones son los siguientes:
a) Solución aCa2+ = 0.01 M, Emed = 63.3 mV
b) Solución aZn2+ = 0.01 M, Emed = 113.6 mV
c) Solución aNa+ = 0.01 M, Emed = -70.4 mV
Calcular los coeficientes de selectividad del electrodo para Zn2+ y Na+.
.
= ′ +
3
0.0592 3 ⁄3 7
= ′ + 45 ,7 7
3
9
Electrodos selectivos de iones
5 ,7 3
>37
7
5 ,7 = 3
>37
7
Electrodos selectivos de iones
!
= ! − = .
= + G (E + 0
12 3 ⁄37
= ′ + + 45 ,7 7
3 -
9
Electrodos selectivos de iones
Membrana cristalina
Se construyen a partir de un compuesto iónico o una mezcla
homogénea de compuestos iónicos.
monocristal o policristal.
Electrodo de fluoruro
(a) con electrodo de referencia interno; (b) con contacto interno ohmico;
(c) combinado con contacto interno ohmico
Electrodos selectivos de iones
15-corona-5
Electrodos selectivos de iones
.
= +
Electrodos selectivos de iones
Sensor de CO2
Electrodos selectivos de iones
Biosensores potenciométricos
Electrodos selectivos de iones
MEDIDAS CUANTITATIVAS
potenciometría directa
valoraciones potenciométricas
Potenciometria directa
0,0592
Ecel = k + log a i A 25ºC como ai = [iz] γi
zi
Ecel = k +
0,0592
logγ i +
0,0592
[]
log i z
zi zi
Calibrado
pH potential (mV)
2.0 +300
3.0 +240
4.0 +168
5.0 +81
6.0 +35
8.0 –92
9.0 –168
10.0 –235
11.0 –279
400
100
E, mV
-100
-200
-300
0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 12,0
pH
Ejemplo 5. La concentración de NO3- en una muestra de agua se
determinó mediante un método de adición estándar simple usando un
electrodo selectivo de iones de nitrato. Para la determinación, 25.00
mL de muestra se introducen en la célula, midiéndose un potencial de
0.102 V. A continuación, se añade a la célula 1.00 mL de un patrón de
nitrato de 200.0 mg/L obteniéndose un potencial de 0.089 V. Calcular
los mg NO3–/L en la muestra de agua.
Medidas cuantitativas
• Propiedades analíticas
Factores de error
- Contribución de iones interferentes al potencial
- Variación de la fuerza iónica entre patrones y muestras: TISAB
- Variaciones del potencial de unión líquida/ de simetría.
- Alteraciones de la superficie de la membrana/electrodo
-Interacción del analito con interferentes presentes en la muestra
∆[A ] ∆E cel
% error relativo = × 100
[A] RT zF
c) Precisión: limitada por la variación de la temperatura y la sensibilidad-
ruido- del potenciómetro.
La precisión instrumental puede ser de ± 0,1 mV en aparatos
buenos: 0,4-0,8 % en concentración.
Medidas cuantitativas
250
y = -59,312x - 126,54
200
R2 = 1
E, mV vs Ag/AgCl
150
100
50
-50
-8 -6 -4 -2 0
log F
Medidas cuantitativas
Calibrado
B. Valoraciones potenciométricas
Valoraciones ácido-base: electrodo de vidrio
Valoraciones redox: electrodos metálicos (Pt, Au)
Valoraciones formación de complejos: electrodos selectivos de iones
Curva derivada
0,9
0,8
0,15
E, mV
0,7
0,1
∆E/∆V
0,6
0,05
0,5
0 0,4
0 0,5 1 1,5 2 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00
Volumen Ag, mL Volumen Ag, mL
Medidas cuantitativas
Voltamperograma: representación
gráfica de la intensidad de
corriente en función del potencial
aplicado al electrodo de trabajo
Voltamperograma cíclico
de benzofenona y tri-p-
tolilamina
Introducción
c) Barrido triangular
Voltamperometría cíclica
Introducción
Medida experimental
Materiales de electrodo
Microelectrodo Microelectrodos
sólido de mercurio
Gota
colgante Gotas Gota
(HMDE) (DME) estática
(SMDE)
Material electrodo: metal inerte (platino u oro); grafito pirolítico o carbono vítreo;
semiconductores (Sn u In2O3) o bien un metal o carbono vítreo recubierto por una película de
mercurio
Introducción
i: intensidad de corriente
n: número de electrones intercambiados.
F: número de culombios involucrados en la oxidación/reducción de un
equivalente químico (96487 culombios/equivalente)
A: superficie del electrodo.
Ji: flujo de sustancia electroactiva.
Procesos no faradaicos
Procesos en los que no hay transferencia de carga pero se producen
fenómenos (adsorción de sustancias o cambios en la estructura de la
interfase solución-electrodo ) que provocan paso de corriente
Introducción
EA > EB
Etapas:
+i Red Ox
+i
Ec
Ea E E
-i
-i Red Ox
Etapas del proceso electródico
Ox + ne- Red
+i Red Ox +i
E1 Red Ox
Eeq
i1
i2 E1 E
Eeq
E Red Ox
-i -i
Red Ox
Eeq = E 0 +
RT
ln
[Ox ] = E 0 + 0,05916 log [Ox ] ( 25º C )
nF [Re d ] n [Re d ]
Etapas del proceso electródico
Sustancia electroactiva:
sustancia que se pueden oxidar o reducir sobre un electrodo en el intervalo
de electroactividad del sistema disolvente/electrodo
Etapas del proceso electródico
Ecuación de Nernst-Planck
∂C i ( x ) Z i F ∂φ ( x )
J i ( x ) = − Di − Di C i + C iV ( x )
∂x RT ∂x
Ji(x) : flujo de la especie i (mol s-1 cm-2) a una distancia x de la superficie del
electrodo.
Di : coeficiente de difusión (cm2/s)
∂C i ( x ) : es el gradiente de concentración a la distancia x.
∂x
∂φ ( x )
: gradiente de potencial que genera la migración
∂x
V(x): velocidad (cm/s) con la que un elemento de volumen de la disolución se
mueve a lo largo del eje X
Zi y Ci son la carga y concentración de la especie i, respectivamente
Etapas del proceso electródico
∂C i ( x )
J i ( x ) = − Di + C iV ( x )
∂x
a) Ausencia de convección
δ: capa de difusión
= −
Etapas del proceso electródico
∂C
i = nFAJ i = nFAD
Electrodo plano ∂x x =0
∂C C∗
=
∂x x =0 πDt
∗ D1 / 2
i = nFAC = kt −1 / 2
π 1/ 2t1/ 2
Ecuación de Cotrell
Electrodo esférico
∂C ∗ 1 1
= C +
πDt r
∂x x =0
(r es el radio del electrodo)
i = nFADC
1 ∗
1
+ nFADC ∗
ilim =
πDt r r
Etapas del proceso electródico
b) Presencia de convección
∂C ∆C ∆C C∗ − C
Ji = D =D =D =D
∂x ∆x δ δ
C∗
J max = D
δ
D
id = nFAJ max = nFA C∗
δ
Medida de la curva intensidad-potencial
D
Intensidad límite de difusión id = nFA C*
δ
Etapas del proceso electródico
b) Disolución estática
Suponemos una solución de una sustancia electroactiva, a concentración 10-3 M y
en presencia de un electrolito soporte 0,1 M, sin agitar. Se emplea un electrodo de
pequeña superficie comparada con el volumen de la solución
3 1 1
Intensidad de corriente de pico i p = kAn 2 D 2 v 2C *
Medida de la curva intensidad-potencial
• Información cualitativa:
potencial al cual se desarrolla la onda o
pico voltamperométricos.
voltamperometría hidrodinámica/polarografía:
potencial de semionda, E1/2, potencial al cual
la intensidad es la mitad de la corriente límite
de difusión.
voltamperometría estática: potencial de pico,
Ep.
• Información cuantitativa:
intensidad de corriente, proporcional a la
concentración de sustancia electroactiva.
voltamperometría hidrodinámica/polarografía:
intensidad (corriente) límite de difusión, Id.
voltamperometría estática: intensidad
(corriente) de pico, Ip.
.
= −
−
E, V i id-i log(i/id-i)
0,84 11,6 52,2 -0,653
0,85 17,4 46,9 -0,431
0,86 26,3 38,2 -0,162
0,87 37,6 27,1 0,142
0,88 50 14,9 0,526
0,89
0,86
0,85
0,84
0,83
-0,8 -0,6 -0,4 -0,2 0,0 0,2 0,4 0,6
log(i/id-i)
Medida de la curva intensidad-potencial
itot = ia + ir.
Itot: intensidad de corriente registrada. ia: corriente faradaica producida por la
oxidación o reducción del analito; ir, corriente fondo o residual.
ir = ii + ic
disolución estática
Ep
disolución agitada
Técnicas voltamperométricas de análisis
Voltamperometría cíclica
Técnicas voltamperométricas de análisis
Voltamperometría cíclica
benzofenona
Tri-p-tolylamine
Técnicas voltamperométricas de análisis
fosfato 0,1 M, pH 7
E acu = -0,625 V
DE -60 mV L.D. = 0,07 µg L-1
v.b. 30 mV/s
Tacu 240 s
Técnicas voltamperométricas de análisis
Amperometría.
MEDIDAS CUANTITATIVAS
Métodos de calibrado
Generalmente se utiliza patrón externo.
En matrices complejas puede usarse adición estándar para calibrar en
condiciones de matriz
Permite el análisis multielemental, por lo que puede emplearse el método de
patrón interno para mejorar la precisión
Medidas cuantitativas
Propiedades analíticas
a) Intervalo lineal: medio, 2-3 órdenes de magnitud, en medidas
voltamperométricas, y corto 1-2 órdenes de magnitud, en medidas de
redisolución (puede ampliarse cambiando tiempo de acumulación)
As (III), µM ip, µA
1.00 0.298
3.00 0.947
6.00 1.83
9.00 2.72
¿Cuál será la concentración de As (III) en una muestra de agua si la
intensidad máxima de pico es, en las mismas condiciones, 1.37 µA?
3
y = 0,3013x + 0,0176
2,5 R² = 0,9996
ip, µA 1,5
0,5
0
0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00
As(III), µM
2.-. La concentración de cobre en una muestra de agua marina se realiza
mediante voltamperometría de redisolución anódica usando un método
de adición patrón. Al analizar una muestra de 50.0 mL, la intensidad de
pico máxima fue de 0.886 µA. Se hace una adición patrón de 5.00 µL de
Cu2+ 10.0 µg/mL, con lo que la intensidad de pico máxima pasa a 2.52 µA.
Calcular la concentración de cobre en la muestra.
3.- En la determinación de Pb2+ por polarografía de onda cuadrada se
utiliza el Cd2+ como patrón interno. La onda de reducción del Cd2+ se
obtiene a un potencial de -0.60 V, mientras que la onda de reducción del
Pb2+ se obtiene a un potencial de -0.40 V.
Una disolución (conocida) que contiene Cd2+ en concentración 3.23×10-5
mol/L y Pb2+ en concentración 4.18×10-5 mol/L presenta unas
intensidades de corriente de 1.64 µA y 1.58 µA a un potencial de -0.60 V y
-0.40 V respectivamente.
Se prepara una disolución (desconocida) mezclando 25.00 mL de la una
muestra problema que sólo contiene Pb2+ con 10.0 mL de Cd2+ de
concentración 3.23×10-4 mol/L, diluyendo a 50.00 mL. Las intensidades
de corriente obtenidas para esta disolución desconocida son 2.00 µA a -
0.60 V y 3.00 µA a -0.40 V.
Determinar la concentración de Pb2+ en la muestra problema.
Constantes de equilibrio
.
O+n e- R = ⁄ + ⁄ = ⁄
"
O + pL OLp = .
= ⁄ +
.
⁄ "
= ⁄ −
∆ ⁄ = ⁄ "
− ⁄ "
. .
∆ ⁄ =− −
4.- Un voltamperograma para la reducción de dos electrones de M tiene
un potencial de semionda de -0.226 V vs. ECS. En presencia de un
exceso de ligando L, se registran los siguientes potenciales de
semionda:
Cromatografía
método utilizado inicialmente para la separación de los componentes de una
mezcla en el cual dichos componentes se distribuyen entre dos fases, una de
las cuales es estacionaria, mientras que la otra se mueve. La fase
estacionaria puede ser un sólido, un líquido sobre un soporte sólido o un gel.
La fase estacionaria puede estar contenida en una columna, extendida en
forma de capa o dispuesta en forma de película. La fase móvil puede ser un
gas, un líquido o un fluido supercrítico
1. Fuente de fase móvil (su naturaleza depende fundamentalmente del fluido que se utilice).
2. Sistema de regulación y medida del caudal o la presión de la fase móvil.
3. Sistema de introducción (inyección) de la muestra.
4. Columna.
5. Recipiente termostatizado para controlar la temperatura de la columna
6. Sistema de detección (transforma propiedad física f. m. en señal eléctrica)
7. Sistema de amplificación y tratamiento de la señal eléctrica generada por el detector
Clasificación de las técnicas cromatográficas
Cromatografía de adsorción
Cromatografía de reparto
Cromatografía de intercambio iónico
Cromatografía de exclusión molecular
Cromatografía de afinidad
Clasificación de las técnicas cromatográficas
Mecanismos de separación
a) adsorción
b) reparto
c) intercambio iónico
d) exclusión molecular
e) afinidad
Clasificación de las técnicas cromatográficas
Cromatografía en columna
Cromatografía de elución
Cromatografía de análisis frontal
Cromatografía por desplazamiento
Clasificación de las técnicas cromatográficas
Proceso cromatográfico:
ocurre como resultado de repetidos equilibrios de distribución de los
componentes de la muestra entre las dos fases no miscibles entre sí.
Constante o coeficiente de distribución
Cs,e cantidad de soluto en la
Sm Se fase estacionaria
Cs,m la concentración de soluto
en la fase móvil
𝟏
.
𝑲𝑫
Parámetros cromatográficos.
Parámetros cromatográficos.
Cromatograma de un
componente
• Tiempo muerto, tM: tiempo requerido para que una especie no retenida alcance
el detector
• Volumen muerto, VM: volumen de fase móvil que se requiere para eluir una
especie no retenida
• Tiempo de retención, tR: tiempo transcurrido desde la introducción de la muestra
hasta que el componente alcanza el detector.
• Volumen de retención, VR : volumen de fase móvil que se requiere para eluir un
soluto de la columna cromatográfica.
Teoría general de la cromatografía en columna
Parámetros cromatográficos.
• Tiempo de retención corregido, t’R : tiempo que realmente se invierte en
la retención de un soluto por la fase estacionaria
Parámetros cromatográficos.
Parámetros cromatográficos.
• Selectividad, Factor de separación: capacidad de una determinada fase
estacionaria para separar dos componentes A y B
Eficacia de la columna.
Eficacia de la columna.
Teoría de platos
Eficacia de la columna.
Teoría de platos
El número de platos teóricos se define como
Eficacia de la columna.
Picos asimétricos.
Eficacia de la columna.
Eficacia de la columna.
Teoría cinética
La teoría cinética considera que el ensanchado de las bandas o picos
cromatográficos se produce como consecuencia de que los distintos
procesos de transferencia de masas, durante el desplazamiento de un
compuesto a lo largo de la columna, se producen a distintas velocidades
finitas
Eficacia de la columna.
Dispersión en la fase móvil.
Eficacia de la columna.
Difusión longitudinal del soluto a lo largo de la columna
Eficacia de la columna.
Resistencia a la transferencia de masas
Teoría general de la cromatografía en columna
Eficacia de la columna.
Resistencia a la transferencia de masas
Eficacia de la columna.
Curvas HETP. Ecuación de Van Deemter
Eficacia de la columna.
Relación entre la altura equivalente a un plato teórico y la velocidad lineal de la fase móvil
Teoría general de la cromatografía en columna
Resolución.
• medida cuantitativa de la capacidad de una columna cromatográfica
para separar dos analitos
Resolución.
R = ƒ (selectividad, eficacia, factor de retención)
𝒂𝒗 𝑨 𝑩
𝒂𝒗 𝒂𝒗
Variación de R con el factor de selectividad (α) Variación de R con el factor de retención (k)
para valores de N y k fijos para valores de N y α fijos
Teoría general de la cromatografía en columna
Resolución.
Factor de N requeridos
separación, α
1.005 1 150 000
1.01 290 000
1.015 130 000
1.02 74 000
1.05 12 500
1.10 3 400
1.20 1 020
1.50 260
Optimización de las separaciones cromatográficas
Aplicaciones de la cromatografía.
Análisis cualitativo
Análisis cualitativo
Cromatografía en
columna
Cromatografía plana
PAH
Análisis cuantitativo
Altura de pico, h
Área de pico, A
Análisis cuantitativo
Aplicación al análisis cualitativo y cuantitativo
Análisis cuantitativo
Análisis cuantitativo
Métodos de calibración
patrón externo,
patrón interno,
adición estándar (en mucha menor medida)
normalización de áreas
• Eluir todos los componentes de la muestra,
• Medir las áreas de todos los picos eluidos y
• Obtener las correspondientes áreas de pico corregidas (mediante los
correspondientes factores de respuesta del detector)
𝒄𝒐𝒓𝒓𝒆𝒈𝒊𝒅𝒂
𝒄𝒐𝒓𝒓𝒆𝒈𝒊𝒅𝒂𝒔
Instrumentación.
Desgasificación.
Problemas en el detector
calentar hasta ebullición la fase móvil
usar ultrasonidos (baño o sonda)
aplicación de vacío con agitación magnética
purga de gas inerte (helio)
sistemas de membranas semipermeables en flujo
Instrumentación
Filtración.
Se usan filtros de membrana de poro controlado (0.45-0.22 µm)
El material de filtrado seleccionado en base a:
- Compatibilidad química.
- Tasa de materiales extraíbles
- Facilidad de manejo
Instrumentación
Tipos de bombas
Presión constante: neumáticas de desplazamiento directo y amplificadoras
de aire
Flujo constante: de jeringa y alternantes
Presión constante
Sensibles a cambios en la viscosidad de la fase
móvil y a la permeabilidad del sistema
Flujo constante
Bombas alternantes:
• Cámaras de pequeño volumen, provistas de
válvulas antirretorno
• Suministro de caudal de fase móvil continuo
• Cambios rápidos de fase móvil
• Posibilidad trabajar en gradiente
Instrumentación
Tipos de inyectores
• Inyectores de jeringa
• Válvulas de inyección
• Inyectores automáticos
Instrumentación
Inyectores de jeringa:
Ventajas:
• Baratos
• Fáciles de construir
• Muy buenas eficacias
Inconvenientes:
• Bajas reproducibilidades
• Fugas a presiones elevadas
• Sobrepresión por acumulación
de fragmentos septum
• Cambio frecuente del septum
• Adsorción de solutos
• Disolución del septum
Instrumentación
Válvulas de inyección:
Varios diseños:
• Espira externa: volúmenes de 5µL – 100 mL
• Espira interna: volúmenes 100-1000 nL
Instrumentación
Válvulas de inyección:
Características:
• Permite trabajar a altas presiones
• Da inyecciones muy reproducibles.
• Fácil cambio del volumen de muestra, cambiando espira (bucle)
Instrumentación
Inyectores automáticos.
Características:
• Elevada repetibilidad y facilidad de uso
• Adición automática de reactivos.
• Extracción on line
• Control de la temperatura de inyección
Instrumentación
Consideraciones prácticas
Columnas
Es la parte esencial del cromatógrafo de líquidos ya que en ella, a través de
los diferentes mecanismos, tiene lugar la separación o discriminación entre
analitos e interferentes.
Rellenos de la columna
Componentes de la columna
Características tubo:
• Químicamente inerte
• Mecánicamente resistente
• Diámetro interno homogéneo
• Material : acero inox o PEEK
Conexiones:
• Deben evitar cambios bruscos de sección.
• Poderse desmontar fácilmente para cambio de columna
• Tener un volumen muerto nulo.
Tipos de columnas:
Columnas Preparativas (dc >10 mm)
Columnas Semipreparativas (5 mm < dc < 10 mm)
Columnas Analíticas (2 mm < dc < 5 mm)
Microcolumnas
• Columnas de pequeño diámetro o “microbore” (0.5 mm < dc < 2 mm)
• Columnas capilares rellenas (dc < 0.5 mm)
• Columnas capilares abiertas (dc ≈ 3-10 µm)
Instrumentación
Termostatización.
• La temperatura no es una variable clave para la resolución cromatográfica
en HPLC.
• La temperatura afecta a la solubilidad de los solutos en la fase móvil, a la
difusión de los mismos y a la viscosidad de la fase móvil.
• El tiempo de retención cambia: un incremento de 5-6° C puede originar
una reducción del 25-30% en los tiempos de retención.
• Conveniente el control de la temperatura, en especial en la columna
cromatográfica, al objeto de obtener resultados reproducibles
Precolumnas.
• Columnas cortas, de relleno similar a la columna.
• Protege la columna analítica: evita su disolución y acumulación de
material absorbido.
Instrumentación
Detectores
dispositivo que permite medir en todo momento, a la salida de la columna,
una propiedad física del efluente que depende de su composición.
Clasificación.
Detectores que monitorizan una propiedad específica del soluto no
compartida por el disolvente (p. ej. absorbancia o fluorescencia)
Detectores que monitorizan una propiedad global del efluente (p. ej.
índice de refracción, conductividad)
Detectores que funcionan separando el soluto del efluente, permitiendo
la detección por técnicas como la Espectrometría de Masas.
=
Se expresa en = o en función de la señal que se genera
. .
Instrumentación
Célula UV en Z
Instrumentación
Tipos:
• Detector de longitud de onda fija
• Detector de longitud de onda variable
• Detector de matriz de fotodiodos (Diode
array detector)
Instrumentación
Características
Reducción Oxidación
Aminas aromáticas Cetonas
Oximas Fenoles y polifenoles
Mercaptanos Nitrilos y alquenos
Peróxidos Catecolaminas
Carbohidratos Aldehídos
Alcoholes
Sustancias con grupos nitro
Ventajas
- Volumen pequeño de la célula de detección (0.1-1 µL)
- Alta sensibilidad, comparada a la de la detección espectrofotométrica (10
veces superiores).
- Alta selectividad: bajo número de sustancias electroactivas, selección del
potencial de trabajo.
Instrumentación
Limitaciones
- Necesidad de una fase móvil conductora de la electricidad por la
presencia de tampones electrolíticos.
- Sensibilidad a cambios en el caudal, pH, fuerza iónica, temperatura, etc.
No es por tanto recomendable en gradiente.
- Dependencia de la señal del estado de la superficie del electrodo de
trabajo (adsorciones, pasivaciones, deterioro físico)
Detector culombimétrico
Ventajas
• Volumen pequeño de la célula de detección (1 µL)
• Se pueden detectar tanto cationes como aniones inorgánicos u orgánicos
Inconvenientes
• Fases móviles acuosas de electrolitos: alta conductividad, reduce
sensibilidad.
• Sensible a la temperatura: termostatizar.
Instrumentación
Ventajas
• Son universales: detectan casi todas las sustancias
Inconvenientes
• Poco sensible (µg) y no trabaja en gradiente
• Sensible a la temperatura y presión: exige una estabilización perfecta de la
temperatura del detector y de la columna
Instrumentación
ventajas:
Estima masas mejor que cualquier otra técnica.
Es muy sensible.
Proporciona información estructural de los analitos.
Da confirmación cualitativa del compuesto eluido.
Inconveniente
Es destructivo.
Instrumentación
Sistema de
lectura
Instrumentación
Fuente de iones
Fuente de iones de impacto electrónico
Instrumentación
Analizadores de masas
Detector
Detector multiplicador de electrones
Acoplamiento LC-MS
De introducción
Interfases
De introducción e ionización
Instrumentación
Interfaces de introducción
Haz de partículas (particle bean interface, PB)
Instrumentación
Modos de operación
Mecanismos de separación
Cromatografía de adsorción
Cromatografía de reparto
Cromatografía de intercambio iónico
Cromatografía de exclusión molecular
Cromatografía de adsorción
• La fase estacionaria es un sólido adsorbente polar de gran área
superficial.
• Los centros activos polares situados sobre la superficie del sólido
interaccionan con los grupos funcionales polares de los compuestos a
separar.
• Cuanto mayor es la polaridad del compuesto, mayor es su interacción con
la fase estacionaria.
Mecanismos de separación
TEORÍA DE RETENCIÓN
Mecanismo de desplazamiento
competencia, entre soluto y fase móvil, por los puntos activos de la
superficie de la fase estacionaria
FASES ESTACIONARIAS
Sílice (SiO2) y alúmina (Al2O3.x H2O)
Gel de sílice
• Superficie altamente activa de grupos silanoles (Si-O-H).
• Los grupos silanoles pueden desactivarse lentamente por adsorción de agua
superficial. Activación: calefacción a unos 200 °C. Una calefacción a 400 °C:
deshidratación con formación de un enlace siloxano, cromatográficamente inactivo
FASES MÓVILES
• En CLS el disolvente compite con los solutos por los centros activos de la
fase estacionaria
• La elución puede describirse como un desplazamiento del soluto por el
disolvente.
• Cuanto más intensa sea la interacción disolvente-fase estacionaria, más
tiempo pasará el soluto en la fase móvil y, en consecuencia, más
rápidamente será eluido.
• La capacidad eludora de los distintos disolventes es casi independiente
de la naturaleza del soluto.
• La variable a controlar en cromatografía de adsorción, es el disolvente.
serie eleutrópica
agua > metanol > etanol > acetona > acetato de etilo > cloroformo > benceno
> tolueno > tetracloruro de carbono > ciclohexano > hexano
Mecanismos de separación
APLICACIONES
Separación de moléculas que difieren en la naturaleza química o en el
número de grupos activos
Capacidad para diferenciar compuestos isómeros en mezclas
Mecanismos de separación
Mecanismos de separación
Cromatografía de reparto
mecanismo de separación:
• adsorción del soluto en la fase estacionaria.
• interacción del soluto con el grupo funcional de la molécula orgánica
ligada al soporte
mecanismo de separación:
• reparto entre dos fases líquidas
• adsorción del soluto en la fase estacionaria.
Mecanismos de separación
Mecanismo de reparto
• La molécula orgánica ligada al relleno se comporta como un líquido o un
cuasi-líquido
• El soluto experimentará un reparto entre la fase móvil y la estacionaria
atendiendo exclusivamente a la polaridad de las fases en juego.
Mecanismo de adsorción
• Adsorción del soluto sobre las moléculas orgánicas sobre la superficie
del soporte
• Interacciones de tipo inespecífico: solvóforo.
• El soluto es expulsado de la fase móvil contra la fase estacionaria,
formándose el complejo soluto - fase estacionaria.
Limitación: en fases enlazadas con base silícea el pH del eluyente 2 <pH < 8
Mecanismos de separación
APLICACIONES
Como norma, las separaciones cromatográficas se realizan haciendo coincidir
la polaridad del analito con la de la fase estacionaria, para luego emplear
una fase móvil de polaridad muy distinta
I TSA
II TMS
III DTDBA
Supresión iónicaI:
60:40 MeOH:H2O, HAc 0,02 M
Pares iónicos:
50:40 MeOH:H2O,
TEAP 0,002 M pH 4,8 (HClO4)
Mecanismos de separación
Esta consta de una matriz (R) con grupos funcionales cargados (A) y
contraiones de carga opuesta (M), susceptibles de intercambiarse con
especies de la misma carga contenidas en la fase móvil (X)
FASES ESTACIONARIAS
Cambiadores catiónicos
- Fuertes: ácido sulfónico, -SO3-H+. Todo el margen de pH
- Débiles: ácidos carboxílicos – CO2-H+ pH 5-14
Cambiadores aniónicos
- Fuertes : sales de amonio cuaternario, -R3N+Cl-.
- Débiles : aminas ternarias: -R2NH+Cl-
Mecanismos de separación
FASES MOVILES
Mecanismo de la separación
* , *
+
Mn+ + n R-X+ R-M + n X+ ) = * ,* +
• Solubilizar la muestra
• Tener fuerza disolvente que conduzca a tiempos de retención
razonables
• Interaccionar con los solutos de forma que favorezca la selectividad
(uso de modificadores orgánicos)
Mecanismos de separación
CROMATOGRAFÍA IÓNICA
Usa un detector de conductividad
Responde de manera universal a especies cargadas, sensible,
responden de manera predecible a los cambios de concentración
Problema: alta conductividad de las fases móviles enmascara la
señal del analito.
Desionizador en continuo
Mecanismos de separación
VR = VM + K Ve
VR es el volumen de retención, VM el volumen muerto, Ve el volumen de fase
estacionaria y K la constante de distribución
+ − + − .
)= =
'
Mecanismos de separación
Curvas de calibracion
obtenidas representando
el tiempo de retencion
frente al peso molecular
Mecanismos de separación
Mecanismos de separación
Tipos de geles
Sustancia químicamente inerte
mecánicamente estable
tamaño de partícula uniforme
estructura de poros perfectamente reproducible
Geles de dextrano
• Insoluble en agua
• Hidrofílico
Geles de poliacrilamida
• Insoluble en agua
• Hidrofílico
• menos resistentes a los álcalis
• Desnaturalización grupos amida
Mecanismos de separación
Gel de estirenodivinilbenceno
• Hidrofobos
• Uso con disolventes orgánicos
Gel de sílice
Aplicaciones
• Separación de dos grupos de sustancias con pesos moleculares muy diferentes
(desalinización).
• Fraccionamiento de mezclas más o menos complejas de diferentes materiales,
como péptidos, ácidos nucleicos, enzimas, polisacáridos, etc.
• determinación de pesos moleculares
(a) Separación de ácidos grasos. Columna de (b) Análisis de una resina epoxi comercial (n=
poliestireno 7.5 x 600 mm con un límite de número de unidades monoméricas en el
exclusión de 1000. Fase móvil tetrahidrofurano. polímero). Columna de sílice porosa 6.2 x 250
Caudal 1.2 mL/min. Detector: índice de mm. Fase móvil tetrahidrofurano. Caudal 1.3
refracción mL/min
Mecanismos de separación
Cromatografía quiral.
Diferenciación de enantiómeros
Metodologías
Cromatografía quiral.
Columna: Chirobiotic™ T
Glicoproteína enlazada
sobre sílice.
Cromatografía de afinidad.
• Se basa en la interacción específica entre una molécula, o grupo de
moléculas, y un ligando que se fija a la fase estacionaria para
interaccionar con las del soluto.
• Esta interacción específica es la base de la separación.
• Cromatografía de bioafinidad
1. alcohol bencílico,
2. Fenol
3. Dimetoxiacetofenona
4. Benzoína
5. benzoato de etilo
6. Tolueno
7. Dimetoxitolueno
8. o-metoxibifenilo.
columna Hypersil ODS (5 µm), 0.46x25 cm, caudal de 1.0 ml/min a temperatura ambiente
Fase móvil: tampón KH2PO4 25mM+0.1 g/l azida sódica a pH 3.5 con HCl (A) y acetonitrilo (B)
Mecanismos de separación
Programa del
gradiente
Mecanismos de separación
Principios básicos
Comparación CG-CL
• Las interacciones entre las moléculas de los gases son débiles. La fase móvil no
interacciona con las moléculas de analito, siendo su función únicamente el
transporte del analito a través de la columna.
• Los gases difunden entre sí mucho mejor que los líquidos, lo cual influye en la
resolución y en la velocidad de separación. Por otra parte, y como consecuencia de
la mayor difusividad de los gases, el equilibrio de separación se alcanza más
rápidamente.
• Las propiedades superficiales de los líquidos también influyen sobre sus
características cromatográficas. Esto no ocurre en cromatografía de gases.
• La mayor densidad de los líquidos respecto a los gases permite usar la gravedad o
la fuerza centrífuga como fuerza motriz de la fase móvil, mientras que la pequeña
viscosidad de los gases, hace posible el empleo de columnas más largas.
Introducción
Principios básicos
• Debido a la compresibilidad de los gases, es más aconsejable utilizar volúmenes de
retención en lugar de tiempos de retención
= =
Donde F es el flujo promedio de la fase móvil
−
=
= =
Introducción
volumen neto, VN = −
Requisitos que deben cumplir las muestra para su análisis directo por CG:
• Compuestos en estado gaseoso, o bien en estado líquido y sólido con presiones de
vapor de por lo menos 0.3 mm de mercurio a la temperatura máxima de la fase
estacionaria empleada.
• No descomponibles por el calor a la temperatura de la separación.
• No adsorbibles o descomponibles en el soporte sólido de la columna
• Detectables a la salida.
Requisitos
• La vaporización de la muestra debe realizarse en el menor tiempo posible.
• La vaporización debe realizarse sin discriminar los componentes de la mezcla.
• La muestra debe llegar a la columna como una banda lo más fina posible.
Diseño de la cámara
• El volumen de la cámara proporcionado con el tipo de
columna: evita mezclas incompletas o bandas de
muestra excesivamente anchas.
• Necesario evitar la formación de turbulencias en el
paso de la cámara del inyector a la columna.
• Se debe evitar la presencia de volúmenes muertos, no
barridos por el gas portador, para evitar
deformaciones de la banda de muestra.
• El volumen existente entre la cámara del inyector y la
columna debe ser el menor posible, para evitar
ensanchamientos de la banda.
• La temperatura de la cámara debe ser homogénea
para evitar que algún componente sea discriminado.
Inyector on column
Instrumentación
Inyector automático
Columnas y hornos
Necesidad de termostatizar
Isoterma a 45 °C
Isoterma a 145 °C
Gradiente 30-180 °C
Instrumentación
Detectores
Son de tipo diferencial: no dan señal cuando pasa por ellos sólo el gas portador, y
responden ante alguna propiedad que puede variar cuando éste se encuentra
mezclado con alguna sustancia que sale de la columna
Características a cumplir
• Adecuada sensibilidad: las sensibilidades de los detectores actuales se
encuentran en el intervalo de 10-8 a 10-15 g de analito/s.
• Buena estabilidad y reproducibilidad.
• Una respuesta lineal de varios órdenes de magnitud.
• Un intervalo de temperaturas de trabajo: temperatura ambiente hasta, al menos,
400 °C.
• Un tiempo de respuesta corto que lo haga independiente del caudal.
• Alta fiabilidad y manejo sencillo.
• Respuesta semejante para todos los analitos, o por el contrario, una respuesta
selectiva y altamente predecible para una o más clases de analitos.
• No destructivo de la muestra.
• Universales
Tipos
• selectivos
Instrumentación
N2 + e- N2+ + 2 e- Ar + e- Ar+ + 2 e- M + e- M-
Instrumentación
Acoplamiento CG-MS
Es el caso más favorable de acoplamiento
Q MS
Rendimiento Y= × 100
QGC
QGC: cantidad de muestra que eluye de la columna
QMS: cantidad de muestra que alcanza el detector
C MS
Enriquecimiento E=
CGS
Interfases GC-MS
Separador de
membrana
Instrumentación
Cromatografía Gas-Líquido
• columnas empaquetadas o de relleno,
• columnas tubulares abiertas o capilares.
columnas empaquetadas
• Tubos de vidrio o de acero inoxidable, con longitud de 1 a 15 m y diámetro interno
de 2-5 mm,
• Llenos con un soporte sólido de grano fino para conseguir una buena distribución
(0.25-0.15 mm) recubierto de una capa delgada (0.05-1 µm) de un líquido no
volátil que actúa de fase estacionaria.
• Puede contener entre 1000 y 2000 platos teóricos por metro.
Columnas y rellenos
a) Columnas abierta de pared recubierta WCOT (wall coated open tubular): la fase
estacionaria se deposita formando una película líquida sobre la pared del tubo.
b) Columnas abiertas de capa porosa PLOT (porous layer open tubular): la pared
interna del tubo está recubierta por una capa de soporte adsorbente. Si el soporte
está impregnado de una fase estacionaria líquida, las columnas son denominadas
SCOT (support coated open tubular)
Columnas y rellenos
Tipo de columna
FSOT WCOT SCOT Rellena
Longitud, m 10-100 10-100 10-100 1-6
Diámetro interno, mm 0.1-0.53 0.25-0.75 0.5 2-4
Eficacia, platos/m 2000-4000 1000-4000 600-1200 500-1000
Platos totales (20-400) 103 (10-400) 103 (6-120) 103 (1-10) 103
Tamaño de muestra, ng 10-75 10-1000 10-1000 10-106
Presión relativa Baja Baja Baja Alta
Velocidad relativa Rápida Rápida Rápida Lenta
Estabilidad química Sí No No No
FSOT: columnas abiertas de sílice fundida
WCOT: columnas abiertas de pared recubierta
SCOT: columnas abiertas recubiertas con soporte
Columnas y rellenos
Soportes
Función: proporcionar una superficie donde poder depositar la fase estacionaria
líquida en forma de película uniforme
Características a cumplir
• Deben tener una superficie relativamente grande conseguir una película de fase
líquida fina y homogénea, para facilitar el rápido intercambio entre ambas fases.
• Debe ser un material relativamente duro.
• Debe ser estable térmicamente
• Debe ser poroso, para no producir una caída de presión excesiva.
• La superficie ha de ser químicamente inerte y no absorbente de los solutos: no
debe contribuir a la separación cromatográfica.
Materiales
tierra de diatomeas
Esqueletos de miles de especies de plantas unicelulares que habitaban antiguos
mares y lagos
Columnas y rellenos
Micro-bolas de vidrio
Soporte no poroso, de área superficial baja y muy duro. Tiene una figura geométrica muy
definida y tamaño uniforme. Admite cantidades muy pequeñas de fase estacionaria
Teflón
Poca interacción sobre los solutos. Poca capacidad de retención de líquidos sobre su
superficie. Separación de compuestos polares: agua, ácidos orgánicos, fenoles, aminas y
gases ácidos (HF, HCl, SO2 y NOx)
Micro-bolas de polímeros orgánicos
Estireno-divinilbenceno. Forma esférica con tamaño de poro controlado. Puede actuar como
soporte y como fase estacionaria.
Columnas y rellenos
Fases estacionarias
Características a cumplir
• Tener un intervalo de temperaturas de utilización lo más amplio posible (idealmente -60 –
400 ⁰C)
• Tener baja volatilidad a la temperatura de la columna (presión de vapor lo más baja posible).
• Tener estabilidad térmica a la temperatura de la columna.
• Tener inercia química.
• Debe tener baja viscosidad en las condiciones de trabajo.
• Debe mojar bien el soporte, presentando además una adherencia suficiente para no ser
arrastrada por la fase móvil.
Fases estacionarias
Selección de la fase estacionaria
• Polaridad del soluto
• Debe poder disolver la muestra
polisilosanos
polietilenglicol
Cromatografía Gas-Sólido
Se basa en una fase estacionaria sólida en la cual se produce la retención de los
analitos como consecuencia de la adsorción física
Dificultades
Fases estacionarias
Sílice porosa
• Disponible comercialmente en una gran variedad de áreas superficiales (185 a
100 m2/g) y diámetros de poro (15 y 30 nm).
• Se aplican fundamentalmente para la determinación de hidrocarburos saturados
y no saturados de bajo peso molecular
Alúmina
• Sustancia de polaridad elevada que interactúa fuertemente con moléculas polares,
tales como el agua.
• Área superficial típica es del orden de 250 m2/g
• Superficie puede modificarse por adición de sales inorgánicas
Tamices moleculares
• Suelen ser zeolitas preparadas artificialmente con sodio, potasio y alumino-
silicatos.
• Presentan una cavidad que retiene moléculas pequeñas que son parcialmente
retenidas.
• Uso: separar mezclas conteniendo O2, N2, CO2, H2, CH4, etc.
Columnas y rellenos
Fases estacionarias
Polímeros microporosos
• co-polimerización de divinilbenceno con estireno u otros monómeros.
• Proceso de separación mixto: adsorción y reparto, si bien predomina adsorción,
especialmente a bajas temperaturas.
• Uso: separación de especies gaseosas polares, tales como óxidos de nitrógeno,
sulfuro de hidrógeno, dióxido de carbono, metanol y otras
Columnas y rellenos
Polímero poroso
Tamiz molecular
Análisis cualitativo y cuantitativo
"
! − !
= + "
! "# − ! "
Análisis cuantitativo
Ejemplos
• Análisis de alimentos
Determinación de especies volátiles responsables de olor o sabor (espacio de
cabeza).
Determinación de lípidos, ácidos grasos, proteínas e hidratos de carbono
(mediante derivatización)
• Análisis de drogas
• Industria
Caracterización de alquitranes, pinturas, películas , fibras sintéticas e incluso
material biológico
• Seguimiento y control de contaminantes en el medio ambiente
Análisis de derivados clorados, organofosforados, carbamatos, dibenzo-p-dioxinas
policloradas, hidrocarburos aromáticos
Análisis cualitativo y cuantitativo
Derivatización
• Para que un compuesto que no se puede analizar mediante un método particular
resulte idóneo para el análisis.
• Para mejorar la eficacia analítica del compuesto.
• Para mejorar la detectabilidad del compuesto.
Derivatización
Reacciones
ánodo cátodo
Tiempo de migración
Introducción
= + +
Movilidad electroforética
Cuando un ion de carga q (culombios) se coloca en un campo eléctrico E
(V/m) la fuerza sobre el ion es q·E (N).
En disolución: fuerza de fricción de retardo es f·uef
donde uef es la velocidad (electroforética) del ion.
· = · = =
= (Ecuación de Stokes)
Introducción
Movilidad electroosmótica
Al aplicar un campo eléctrico, como el disolvente (agua) es neutro por lo que
permanecería estacionario. Sin embargo, lo que observamos bajo condiciones
normales es que la disolución se mueve hacia el cátodo.
Este fenómeno se denomina flujo electroosmótico.
Introducción
Diferencia del perfil de flujo por caída de presión o por flujo electroosmótico
I2·R (J·s)
I : corriente en amperios y R : resistencia de la disolución (en ohmios)
Introducción
Movilidad.
La movilidad aparente (u observada), , de un ion es la suma de la movilidad
electroforética del ion más la movilidad electroosmótica de la disolución
= +
Introducción
movilidad aparente
⁄
= =
⁄
Ld es la longitud de la columna capilar desde el inyector al detector,
Lt es la longitud total de la columna capilar de un extremo al otro,
V el voltaje aplicado entre los dos extremos y
t el tiempo necesario para que un soluto migre desde el extremo de inyección al detector
(tiempo de migración)
movilidad electroosmótica
⁄
= =
⁄
movilidad neta
= +
! > = ! <
Introducción
Eficacia.
%& &
$= = $=
%&
• longitud del capilar es la distancia del punto de inyección al detector, Ld
&
$= Sólo difusión longitudinal %& = 2(
%&
= =
$=
2(
Introducción
Selectividad. ,+
)=
,&
Donde µef,1 y µef,2 son las movilidades electroforéticas de los dos solutos, elegidos de
manera que α ≥ 1.
Resolución.
La resolución de los picos adyacentes en un electroferograma es la diferencia entre
tiempos de migración (Δt) dividido por la anchura media de los picos (wm)
$ ,
,= (. − 0) .= =
,
3. 055( , − , )
2=
(( 6 + )
INSTRUMENTACIÓN
Instrumentación
Tubo capilar.
Inyección hidrodinámica
se sumerge el capilar en la disolución de la muestra y se le aplica presión al
vial o vacío desde el extremo del capilar
∆9
! 7 =
0:;
Donde ΔP es la diferencia de presión entre los extremos del capilar (Pa); d el
diámetro interno del capilar (m), t es el tiempo de inyección (s), η la
viscosidad de la muestra (Kg m-1 s-1) y L la longitud total del capilar (m).
Instrumentación
<
=>
=
=?
Instrumentación
Apilamiento (stracking)
• Se inyecta la muestra en un electrolito que es 1/10 de la concentración del
electrolito fondo
• Muestra: máximo 1/500 concentración electrolito fondo
Instrumentación
Detectores.
Espectrofotometría UV.
El agua es transparente: > 185 nm.
El electrolito fondo debe ser suficientemente: electrolitos de ion borato.
Paso óptico anchura del capilar (25-75 µm)
Instrumentación
Amperometría.
Instrumentación
Espectrometría de masas
Límite de detección
Detector Selectividad On column
Moles inyectados molaridad
Espectrofotometría UV- Selectivo Si
10-13-10-16 10-5 – 10-7
Vis
Fluorescencia Selectivo 10-15-10-17 10-7 – 10-9 Si
Fluorescencia láser Selectivo 10-18-10-20 10-13 – 10-16 Si
Universal (total ion)
Espectrometría de masas 10-16-10-17 10-8 – 10-10 No
Selectivo (ion simple)
Amperometría selectivo 10-18-10-19 10-7 – 10-10 No
conductividad universal 10-15-10-16 10-7 – 10-9 No
Métodos en electroforesis capilar
Si recubrimos las paredes del capilar con un reactivo no iónico, eliminamos el flujo
electroosmótico.
• En esta forma de CZE los cationes migran del ánodo al cátodo, los aniones van
hacia el reservorio fuente y los compuestos neutros no se mueven
Electrocromatograma capilar de
hidrocarburos
Métodos en electroforesis capilar
• Dependiendo del valor del pH del medio, la molécula tendrá carga neta positiva,
negativa o cero (punto isoeléctrico, pI)
Métodos en electroforesis capilar