Siembra e identificación de microorganismos mesófilos

en ambientes y superficies
Planting and identification of mesophilian microorganisms in environments and surfaces
Yury Daniela Giraldo Pajoy
Facultad de tecnología, Química industrial, Universidad Tecnológica de Pereira-Colombia
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Resumen

En el presente informe se aplicó nuevas técnicas de siembra para la determinación de microorganismos mesófilos
del aire, disponiendo de una caja de Petri con Agar Plate Count, la cual se expuso alm por determinado tiempo.
Adicional, se realizó también la determinación de microorganismos mesófilos de tejidos vivos o mucosas,
utilizando para este caso un hisopo estéril humedecido con agua peptona para poder ser frotado en algún lugar de
interés del cuerpo, que para este caso fue la oreja y posteriormente realizar la respectiva siembra e incubación.
Finalmente, se demostró la presencia de microorganismos mesófilos de superficies, usando nuevamente un hisopo
estéril y humedecido con peptona, para posteriormente realizar el frote en superficie inerte de interés, que para
este caso fueron las llaves.
Una vez realizado las 3 respectivas siembras, pasó a incubación a temperatura ambiente por 48h para favorecer el
crecimiento microbiano y poder luego hacer la identificación por microscopio de cada cultivo, haciendo antes sus
respectivos procesos de tinción.

Palabras clave: microorganismos mesófilos, caja dePetri con Agar Plate Count, agua peptona.

INTRODUCCIÓN

En este grupo se incluyen todos los microorganismos, capaces de desarrollar en presencia de oxígeno a una
temperatura comprendida entre 20°C y 45°C con una óptima entre 30ºC y 40ºC. El recuento de microorganismos
aerobios mesófilos, en condiciones establecidas, estima la microflora total sin especificar tipos de
microorganismos. Refleja la calidad sanitaria de los productos analizados, indicando además de las condiciones
higiénicas de la materia prima, la forma como fueron manipulados durante su elaboración. Un recuento bajo de
aerobios mesófilos no implica o no asegura la ausencia de patógenos o sus toxinas, de la misma manera un
recuento elevado no significa presencia de flora patógena. Ahora bien, salvo en alimentos obtenidos por
fermentación, no son recomendables recuentos elevados. Un recuento elevado puede significar: - Excesiva
contaminación de la materia prima. - Deficiente manipulación durante el proceso de elaboración. - La posibilidad
de que existan patógenos, pues estos son mesófilos. - La inmediata alteración del producto. En el uso o la
interpretación del recuento de microorganismo aerobios mesofilos hay ciertos factores que deben ser tenidos en
cuenta: Este recuento es sólo de microorganismos vivos. - La utilidad del indicador depende de la historia del
producto y el momento de la toma de muestra. En alimentos perecederos manipulados correctamente pueden
desarrollar recuentos elevados y perder calidad si son almacenados por un período de tiempo prolongado. En este
caso, el recuento no se encontraría elevado por la condición de higiene del producto, sino por la vida útil del
mismo. - Los procedimientos que sufre el alimento en su elaboración, por ejemplo un proceso térmico, pueden
enmascarar productos con altos recuentos o condiciones deficientes de higiene. Además, el almacenamiento
prolongado en congelación o con pH bajo puede producir una disminución del recuento. - El recuento de mesófilos
nos indica las condiciones higiénico sanitarias de algunos alimentos pero no tiene significado sanitario - en otros
productos que han sido madurados con bacterias (por ejemplo quesos) o alimentos que dentro de su formulación
tienen conservadores.[1]

I. MATERIALES Y METODOS

Para llevar a cabo la técnica de siembra, tinción e identificación de mesófilos se utilizó lo siguiente:

• Cajas de Petri
• Hisopo
• Mechero bunsen
• Asa metálica
• Microscopio
• Porta objetos
• Cubre objetos

• Agua peptona
• Agua destilada
• Cristal violeta
• Lugol
• Acetona
• Safranina
• Azul de metileno

Una vez identificado cado uno de estos materiales y reactivos, se procede inicialmente a:

Microorganismos mesófilos del aire

Para iniciar este punto, se dispuso de una caja de Petri con Agar Plate Count sobre el exterior, la cual se procedió a
remover la tapa de la caja y dejarla expuesta por un periodo de 15 min. Transcurrido el tiempo se tapó, se invirtió
y paso a incubación por 48h.

Microorganismos mesófilos de tejidos vivos omucosas

Para este caso, se procedió a operar cerca al mechero, tomando un hisopo estéril humedecido con agua peptona al
0.1%, después, se froto sobre cualquier parte de la superficie del cuerpo o mucosa, siendo en ese caso el las orejas.
Seguidamente, se tomó una caja de agar Plate Count para hacer la inoculación, realizando una estría en sentido
vertical en el centro del agar, y posteriormente, realizando estrías en forma de zig-zag sobre toda la superficie del
medio de cultivo como se aprecia en la figura Nº1. Finalmente se tapó, se invirtió y fue llevada a incubación a
temperatura ambiente por 48h

Fig. 1- Técnica de siembra en superficie con hisopo

Para llevar a cabo la determinación de microorganismos mesófilos de superficie, se tomó un hisopo estéril
humedecido con agua peptona, frotándolo sobre la superficie del llavero en este caso. Seguidamente, se procedió
a inocular de lamisma manera descrita en el punto anterior.

Tinción de Gram

Una vez transcurrido las horas de incubación, se observó el desarrollo microbiano en cada una de las cajas de
Petri con Agar Plate Count, y se realizó tinción a las colonias de interés procediendo de la siguiente manera:
Para iniciar la tinción, se preparó previamente en portaobjetos las colonias de interés, poniendo primero una gota
de agua destilada, luego se tomó una pequeña porción de la colonia y se distribuyó por el portaobjetos formando a
la vista un agua lechosa. Se procedió a calentar para sellarla o secarla totalmente y ahí si proceder a la técnica de
tinción, la cual consistió en adicionar una cantidad de un reactivo, dejar actuar por un tiempo establecido y jugar
con agua. Estos reactivos fueron los siguientesy en ese orden:

Cristal violeta – 1minLugol- 1min

II. RESULTADOS

Una vez transcurrido las 48h de incubación, seanaliza los resultados obtenidos como cultivos.

Fig.2 – Agar Plate Count inoculado con microorganismosmesófilos del exterior

A través de la Figura 2, se logra apreciar varias colonias de diferentes tipos.

Para este caso, se aprecian múltiples colonias circulares blancas

Fig.4 – Agar Plate Count inoculado con microorganismos mesófilos de la superficie de las llaves

A través de la figura 4, se logra visualizar alrededor de 8 tipos de cultivos, uno blanco pequeño otro grande, uno
color gris, uno amarillo en el centro.
 Fig.5 – Muestra del ambiente posible presencia de un bacillus flamentosa con esporas

III. DISCUSIONES

Según los resultados obtenidos se pudo observar la presencia de muchas bacterias no solo en el medio ambiente,
sino en los utensilios que manipulamos a diario y en nuestro cuerpo y de allí la importancia de conservar la buena
higiene, no exactamente son bacterias peligrosas, pero pueden ocasionar daños al estar e contacto con otros
microrganismos
Como pudimos observar en nuestros resultados se comprobó que Las poblaciones microbianas son demasiado
diversas y se agrupan o clasifican dependiendo de diferentes factores, uno de ellos es la temperatura de
crecimiento. Debido a esto l a mayoría de los microorganismos son mesófilos, y se encuentran en casi todos los
productos, esto debido a que su temperatura de desarrollo (30 ºC) es la temperatura óptima para muchas de las
formas de vida libre; la temperatura a la que aproximadamente estábamos en el laboratorio que era 25 °C además
se encuentran ampliamente difundidas en el medio ambiente.

Estos datos sugieren que las llaves presentan alta contaminación bacteriana debido a la proximidad a partes
sensibles del cuerpo como: cara, orejas, labios y manos de sus dueños; el tipo de profesión de cada persona genera
diferentes contaminaciones además el hecho de que los docentes y estudiantes no practican la higiene correcta y
con frecuencia a sus llaves que son de uso diario como un teléfono móvil esto se presta para la distribución masiva
de dichas bacterias.

IV. BIBLIOGRAFIA
(1) María del Rosario Pascual Anderson, 1992. Editorial Díaz de Santos, S.A., MADRID, España. Microbiología
Alimentaria: Metodología Analítica para Alimentos y Bebidas.
Pelczar, M.; Reid, R. 1966. Microbiología. Trad. L. Hontañón. 2 ed. Madrid, España, Ediciones Castilla.