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Artculo de revisin

Vol. 18, Nm. 2 Mayo-Agosto 2009 pp 52-59

Microarreglos: Tecnologa con aplicaciones en el campo de la salud humana

M en C Edgar Alejandro Medina-Torres,* Dr. Francisco Espinosa-Rosales*

RESUMEN La tecnologa de microarreglos es una herramienta poderosa en el campo de la investigacin biomdica, debido a que permite analizar diferentes tipos de muestras biolgicas (tejidos, protenas y material gentico) y miles de molculas de manera simultnea por ensayo, a diferencia de lo que ocurre con otras tcnicas de biologa molecular (RT-PCR, PCR, Western blot, Northern blot, Southern blot) en las cuales slo se pueden analizar un nmero limitado de molculas por ensayo. La versatilidad de esta tcnica permite utilizarla en estudios de dosis-respuesta, para establecer perfiles de expresin diferencial de genes en condiciones experimentales distintas (enfermedades, tratamientos, etc.), en el anlisis de polimorfismos, presencia de metilaciones, mutaciones puntuales, identificacin de blancos teraputicos, etc. Este tipo de ensayos proporcionan informacin muy valiosa en diferentes campos de la investigacin biomdica, pero el desconocimiento de las aplicaciones y los elevados costos de las pruebas hacen que algunos investigadores no utilicen esta tecnologa. El desarrollo de nuevas plataformas, la aplicacin de nuevas tecnologas de deteccin y la implementacin y mejora de las ya existentes, ofrecen un panorama muy alentador en el desarrollo de una tcnica que puede ofrecer mayor sensibilidad en estudios a nivel de genoma. Palabras clave: Pruebas diagnstico, biologa molecular, microarreglos.

ABSTRACT Microarrays technology is a powerful research tool, them allow us to design trials with many kinds of biological samples (proteins, nucleic acids and tissues), in each trial thousand of molecules can be evaluated simultaneously, in another hand with techniques like PCR, RT-PCR, western blot, northern blot, southern blot, only a few number of molecules can be evaluated by assay. Microarrays technique, allow us to study genetic expression profiles in different experimental conditions (illness, drug treatment, etc.), in order to found polimorfisms, DNA methylations, punctual mutations and to identify pharmaceutic targets. This kind of test provides us valuable information, but ignorance about its research applications and the expensive material required to execute microarrays technology in the laboratory, are facts that limit their use in the research laboratory. Development of new microarray platforms, and improvement of new detectors systems, promise that microarrays will be trials more sensitive and with many news applications in the genomic field.

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Key words: Diagnostic tests, molecular biology, microarrays.

* Unidad de Investigacin en Inmunodeficiencias Primarias, INP.

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INTRODUCCIN
A partir del establecimiento y desarrollo de la biologa molecular se han logrado grandes avances en diversos campos del conocimiento como la medicina, gentica, bioqumica y biologa, y de la misma manera ha contribuido a consolidar y establecer nuevas disciplinas cientficas como la inmunologa, la protemica y la genmica entre otras. Con la aparicin de nuevas tecnologas y el desarrollo de tcnicas como la electroforesis en la dcada de los 30s, el Southern Blot (1975) (Southern E, 1975), northern blot (1977), las tcnicas de secuenciacin de Sanger (1975) y de Gilbert (1977) y en 1986 la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) de Kary Mullis, as como las tcnicas de transformacin bacteriana sentaron las bases para poder realizar estudios a nivel de expresin de genes. Con los conocimientos alcanzados con las tcnicas anteriormente mencionadas y el perfeccionamiento y adaptacin de las mismas se sentaron las bases tcnicas y tecnolgicas para poder establecer uno de los proyectos ms ambiciosos y relevantes del siglo pasado, el Proyecto Genoma (1990-2003). Los resultados obtenidos, permitieron sentar las bases para desarrollar una tcnica con mayor poder de anlisis y que en combinacin con los avances en protemica se obtiene una herramienta de investigacin y diagnstico muy poderosa como son los arreglos de cidos nucleicos y protenas. Los arreglos o macroarreglos requeran para su construccin la adsorcin o fijacin en un soporte slido de pequeos fragmentos conocidos de secuencias de DNA o RNA o bien protenas o fragmentos de las mismas, sin embargo por las limitaciones tecnolgicas las plataformas slo podan contener unas cuantas decenas de secuencias, pero a pesar de eso esta tecnologa represent un gran avance en el estudio de expresin de genes. Como resultado del Proyecto Genoma se construyeron bibliotecas genticas de diferentes organismos (incluyendo el genoma humano) las cuales se implementaron en el diseo de arreglos que contaban con un mayor nmero de genes a evaluar. Si bien los arreglos son herramientas que se han empleado desde hace algunos aos, la innovacin de esta nueva generacin de arreglos radica en la miniaturizacin y el aumento en la densidad de secuencias que podemos encontrar por unidad de rea del soporte slido, lo que trajo como consecuencia que se puedan evaluar de manera simultanea varios miles de genes; por estos motivos es que los microarreglos tienen un gran potencial de aplicacin en los ms diversos rubros de la investigacin y diagnstico clnico.

MICROARREGLOS
Los microarreglos son en la actualidad una poderosa herramienta de anlisis de expresin de genes debido al mayor nmero de secuencias que se pueden analizar por prueba y tienen grandes ventajas sobre otras tcnicas como la PCR convencional, la RTPCR y la PCR en tiempo real, en las cuales slo se pueden analizar un nmero muy limitado de genes de manera simultnea, debido a que en la mayora de los casos que se requiere montar un ensayo por cada gen a analizar. En trminos generales, un microarreglo se encuentra integrado por dos partes, el material biolgico o sinttico denominado como prueba y el soporte slido en el cual se inmovilizan o adsorbe el material biolgico; este material puede ser de distintas naturalezas; entre los materiales ms usados encontramos plstico, vidrio, gel, silicn, membranas porosas y oro (Napoli C, et al; 2003). Los microarreglos pueden clasificarse en dos grandes grupos: los biomicroarreglos (biochips) y los microarreglos qumicos; los primeros estn constituidos por material biolgico (cidos nucleicos, enzimas, anticuerpos, clulas, tejidos, etc.); mientras que los segundos consisten en la inmovilizacin de molculas de origen sinttico en el soporte. Los biochips pueden obtenerse de diferentes maneras, las ms comunes consisten en la adsorcin o unin qumica del material obtenido de bibliotecas de genes o de material aislado y tratado previamente como en el caso de las clulas, tejidos y protenas; por otra parte tambin pueden realizarse sntesis in situ de las secuencias de nucletidos o aminocidos que quieren colocarse en el soporte (Xu Q y Lam K, 2003). En la investigacin clnica los microarreglos de DNA son los ms usados debido a que las aplicaciones son diversas y bien pueden ajustarse para explorar el perfil de expresin de genes en un organismo en diferentes circunstancias biolgicas y teraputicas. Dadas las caractersticas de manufacturacin de los microarreglos que usan protenas y DNA, podemos definirlos de manera operativa como: una impresin ordenada de material biolgico en una superficie slida cuya aplicacin radica en la evaluacin simultnea de cientos de molculas en una muestra obtenida a partir de los ms diversos sistemas biolgicos.

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Microarreglos de DNA
Es importante el tener presente que el trabajo con microarreglos de DNA inicia incluso antes de tener la muestra problema, la seleccin de las secuencias, as como el tipo de microarreglo a emplear, son importantes para que se obtenga el mximo de infor-

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macin posible de acuerdo al tipo de problema que deseamos abordar. El trabajo con microarreglos podemos dividirlo en cuatro etapas (Figura 1): 1. Seleccin del tipo de microarreglo y de las secuencias que se colocarn en el soporte. 2. Obtencin de la muestra biolgica. 2.1 Purificacin del DNA o RNA. 3. Amplificacin del material gentico (PCR). 3.1 Marcaje de la muestra problema. 4. Hibridacin del microarreglo. 4.1 Captura de resultados. 4.2 Anlisis de resultados. Como ya se ha mencionado, los microarreglos se componen bsicamente de dos partes; el material biolgico (DNA, protenas, tejidos, etc.) y el soporte slido. Sin embargo al momento de disear, fabricar y/o seleccionar el tipo de microarreglo a emplear, se deben realizar diversas consideraciones (Cuadro I).

Eleccin del blanco de hibridacin (tamao de las secuencias)

Hablando especficamente de los microarreglos de DNA, se debe tener como principal criterio de seleccin el tipo de prueba que se va realizar. Se debe recordar que en este tipo de pruebas se fundamentan en la capacidad que tiene una cadena de DNA de acoplarse a su cadena complementaria de DNA (hibridacin) y como finalmente este proceso implica la interaccin molecular mediante el establecimiento de puentes de hidrgeno entre los nucletidos de ambas cadenas, la especificidad de unin de las cadenas, as tambin como la intensidad de la misma depende en gran medida de la longitud que tengan dichas cadenas. Entre ms grandes sean las diferencias entre las secuencias a evaluar se tienen menos probabilidades de que se presente una hibridacin entre dos cadenas que no sean complementarias (hibridacin inespecfica). La hibridacin inespecfica depende

Seleccin de secuencias de inters (bases de datos, bibliotecas genmicas, etc.)

Seleccin de plataforma (tipo de microarreglo)

Obtencin de la muestra (tejido, muestra de sangres, etc.)

Purificacin de DNA o RNA

Obtencin de cDNA (RT-PCR)

Marcaje de la muestra problema

Hibridacin del microarreglo

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Lavado del microarreglo y captura de datos (deteccin de la seal)

Interpretacin de resultados Anlisis de expresin o variacin gnica (bases de datos, software)

Figura 1. Esquema general de trabajo con microarreglos de DNA.

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Cuadro I. Elementos a considerar al momento de disear, fabricar y/o seleccionar un microarreglo (Tomada y modificada de Microarrays y Biochips de ADN, Informe de Vigilancia Tecnolgica. GENOMA ESPAA/CIBT-FGUAM 2002.

Consideracin Eleccin del blanco de hibridacin Marcaje de la muestra problema Eleccin de soporte Inmovilizacin de la sonda Fabricacin Captura de resultados Anlisis

Procedimiento cDNA, oligos, etc. Enzimtico, fluorescencia, radiactividad, quimioluminiscencia, etc. Membranas, vidrio, plstico, etc. Activa, pasiva, etc. Adsorcin por contacto, sntesis in situ, etc. Digitalizacin, revelado, etc. Programas y bases de datos.

fundamentalmente de dos parmetros, la secuencia y la longitud de la cadena. De manera que la seleccin del tamao y la secuencia de nucletidos de la sonda de hibridacin o prueba, est sujeta al objetivo del estudio que se tiene; es as que las secuencias ms cortas (oligos) se recomiendan cuando se buscan microRNA (Liu C, et al, 2008), polimorfismos o mutaciones puntuales, ya que los oligos permiten que la hibridacin entre la prueba y el problema (muestra biolgica aislada del sistema que se estudia) ocurra de tal manera que se reduzca la hibridacin inespecfica. Las secuencias de mayor tamao (varios cientos de pares de bases) se emplearn con mayor frecuencia en estudios de expresin de genes, cuando se trate de establecer el nmero de copias (Bignell G, et al, 2006) o qu genes son los que se expresan de manera diferencial en dos o ms condiciones especficas (tratamientos farmacolgicos, infecciones, fases de una enfermedad, cinticas, etc.).

Marcaje de la muestra problema

El marcaje de la muestra puede hacerse directamente o indirectamente, en el primer caso, se incorporan durante la sntesis de cDNA (amplificacin del material gentico por PCR) bases qumicamente modificadas que llevan incorporadas molculas que pueden ser detectadas por fluorescencia, radiactividad (Volpe E, et al, 2006) o fluorometra (Cuadro II). Las principales ventajas de emplear el marcaje directo, radica principalmente en que no se necesitan reactivos adicionales para lograr la deteccin en el microarreglo, sin embargo las desventajas ms grandes que se han observado al utilizar este tipo de tcnicas son varias, entre las que destacan el bajo rendimiento en la obtencin de los productos de amplificacin. Los fluorocromos al ser molculas de gran tamao que se encuentran unidas qumicamente a los nucletidos dificultan el proceso de incorporacin enzimtica de los mismos a la cadena que se elonga

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durante el ciclo de amplificacin de la PCR, interrumpiendo la sntesis de algunas copias de la cadena original de DNA, lo que tiene como consecuencia que se obtenga un menor nmero de copias que cuando se usan nucletidos sin fluorocromo. Otras desventajas del uso de tcnicas de tincin directas son el uso de material radiactivo y la baja resolucin que se obtienen al momento de capturar los resultados de la hibridacin (cuando se usan istopos radiactivos), la presencia de fluorescencia inespecfica con el uso de algunos soportes (como en el caso del plstico), etc. En los mtodos indirectos, de manera general se incorporan los marcadores despus de que se ha amplificado por PCR el material gentico. Se pueden incorporar molculas que por s solas no pueden ser detectadas y que requieren de un segundo paso en el cual se incorpora la molcula que permitir la deteccin por alguno de los mtodos previamente mencionados o bien usar nucletidos qumicamente modificados durante la PCR, a los cuales se les pueden unir los marcadores mediante una reaccin qumica (Cuadro II). Entre los mtodos indirectos ms usados destacan el sistema de indicadores como la biotina (la cual se incorpora a la sonda de hibridacin) y posteriormente es revelada con la adicin de avidina o estreptavidina conjugadas a fluorocromos (Fu, Li M; 2006) o bien el uso de una molcula susceptible de ser reconocida por un anticuerpo monoclonal que a su vez est unido a una enzima que puede catalizar una reaccin en la que se produzca un producto luminiscente (ejemplo: sistema digoxigenina (DIG)/ anti-DIG). Con el uso de los sistemas de marcaje indirecto se gana sensibilidad al momento de realizar la deteccin, adems se cuenta con una amplia disponibilidad comercial de los sistemas de marcaje. Las principales desventajas de estos sistemas se reflejan en lo econmico, pues se requiere de equipos de deteccin de mayor costo y de manera importante,

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sobre todo se requiere de una mayor manipulacin de la muestra para poder realizar el ensayo. De acuerdo al tipo de marcaje que se haga de las muestras problema, se obtendr un tipo especfico de lectura; las comunes se describen en el cuadro II.

gidos en la disolucin que contiene a la sonda de hibridacin, posteriormente estos capilares hacen contacto con el soporte slido dejando una microgota en la superficie del soporte dejando una impresin del mismo.

Cmo se fabrica un microarreglo?

Bsicamente existen dos formas de fabricar el microarreglo, el primero de ellos consiste en la sntesis in situ de las sondas de hibridacin y como ya se mencion, esto puede hacerse mediante el uso de microelectrodos, los cuales estn colocados en la laminilla a manera de una especie de circuito electrnico. La otra forma requiere del depsito de las sondas que fueron previamente sintetizadas, y son estas ltimas las que tienen una mayor cantidad de mtodos para cumplir con dicho objetivo. Entre los mtodos ms utilizados, encontramos los denominados inyeccin de tinta (por su similitud con el sistema que utilizan las impresoras). Este sistema consiste en un sistema integrado por un capilar (aguja) y una bomba, la cual deposita un pequeo volumen (nanolitros) de la disolucin de la sonda sobre el soporte slido, realizando una microimpresin. En una variante de la misma tcnica se utiliza una pequea cantidad de cermica localizada en las cercanas del capilar dosificador, la cual es fundida mediante la aplicacin de un pulso elctrico deformando el vidrio y casi de forma simultnea se deposita una pequea cantidad de fluido (nanolitros) en el soporte. Es importante recalcar que en estas dos tcnicas, la disolucin que contiene a la sonda est dentro de los capilares que dosifican la muestra y con la ayuda de un sistema de bombas se deposita una cantidad uniforme de material. Una alternativa a los dos sistemas mencionados, implica que los capilares dosificadores sean sumer-

APLICACIONES DE MICROARREGLOS EN LA INVESTIGACIN BIOMDICA.

Cada tipo de microarreglo ofrece ventajas y desventajas al momento de aplicarlo dentro del trabajo de investigacin. Los microarreglos de DNA en trminos generales son empleados para detectar la expresin diferencial de genes en dos condiciones experimentales: teraputicas o fisiolgicas distintas. Las diferencias en el nivel de expresin de cada gen se determina en funcin del nmero de copias de mensajeros de RNA existentes en las muestras. As podemos encontrar reportes en los cuales se han empleado los microarreglos para cuantificar molculas de RNA (Orntoft y Kruhffer, 2006) y medir el nmero de copias de DNA presentes en un genoma (Snijders et al., 2001) y se ha demostrado que la aplicacin de esta tecnologa a la cuantificacin del nivel de expresin de un gen es equiparable en resultados a los que se pueden alcanzar con tcnicas como la PCR en tiempo real (Khun K., et al; 2004). En microbiologa se han usado para caracterizar cepas de microorganismos y establecer la presencia de factores de virulencia en cepas de inters clnico (Chizhikov V, et al; 2001), como en el caso de estudio sobre la expresin de genes en el parsito de malaria en donde se identificaron una serie de protenas que no haban sido caracterizadas y que aparentemente desempean un papel importante en el proceso de infeccin y resistencia en las diferentes etapas del desarrollo de Plasmodium falciparum y con ayuda de modelos de estudio de interaccin de

Cuadro II. Mtodos de marcaje de la muestra problema.

Mtodo Directo Indirecto Enzimtico Istopos radiactivos Fluorocromo Qumico Enzimtico

Fosfatasa alcalina, peroxidasa 33 P* o 135I Cy3, Cy5, Fluorescena Biotina1 (marcador) Avidina, estreptavidina (revelador) DIG (marcador) Anti-DIG y sustrato (revelador)

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Marcaje

Elemento de deteccin

Lectura Espectrofotometra Auto-radiografa Fluorescencia Fluorescencia Fluorescencia Quimio-luminiscencia

Elemento cromognico (absorcin de radiacin) Radiacin (emisin) Luz ( especfica) Luz ( especfica) Luz ( especfica)

Nota: = longitud de onda

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protenas se puede predecir la funcin y la importancia de 946 nuevas protenas (Zhou Y, et al; 2008) y con la informacin generada de estos estudios se pueden disear esquemas de tratamiento adecuados para tratar las infecciones con los microorganismos identificados. Tambin se han empleado para comparar los niveles de expresin de alelos con polimorfismos (Liljedahl, et al; 2004) y mutaciones (inserciones y deleciones de material gentico), estudios de evolucin, anlisis farmacolgicos (Katzukabe et al., 2005), cinticas para el anlisis transcripcional, etc. (Mantripragada et al., 2004). En la clnica del trasplante han encontrado un gran campo de aplicacin. El xito de un trasplante de tejido radica en el manejo farmacolgico adecuado y el identificar a tiempo las seales de rechazo por parte del organismo receptor. En 2004 el grupo de Daniel R Salomn public el primer reporte completo con el cual hizo un estudio de expresin diferencial de genes entre muestras obESTE DOCUMENTO ES ELABORADO POR MEDIGRAtenidas de diferentes grupos de estudio, entre los PHICse encuentran los donadores de rin como conque trol, el grupo de trasplantados con una supervivencia del rin de ms de un ao y pacientes que presentaron rechazo agudo del tejido; y las muestras consistieron en linfocitos de sangre perifrica y biopsias de todos los pacientes. Los pacientes que presentaron signos clnicos de rechazo agudo del rin trasplantado presentaban sobreexpresin de genes relacionados con quimiotaxis como RANTES y receptores de quimiocinas con motivos C-X-C, receptores de interfern alfa y beta (IFN-alfa e IFN-beta), de interleucina 4 (IL-4), del factor de necrosis tumoral (TNF-alfa), molculas relacionadas con la activacin y maduracin de linfocitos como el receptor de linfocitos T (TCR) y molculas como la granzima A implicada en el proceso de citotoxicidad mediada por linfocitos. Los resultados de este trabajo permitieron disear mejores esquemas de tratamiento con inmunosupresores para los pacientes trasplantados, as como para predecir eventos de rechazo agudo de rin y mejorar el esquema de tratamiento (Flechnera S, et al; 2004). Con ayuda de los microarreglos de DNA se han podido establecer diferencias en el perfil de expresin de genes de los corazones de ratones viejos y ratones jvenes y gracias a ese estudio se sabe que el cambio de perfil de expresin de genes en cardiomiocitos de ratones viejos tienen similitudes con los que se presentan en ciertas patologas del corazn, lo que hace que este rgano vaya perdiendo la capacidad de adaptarse al estrs, lo que finalmente desencadena fallas cardiacas (Bodyak N., et al; 2002).

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En oncologa los microarreglos se han usado para identificar y diagnosticar algunos tipos de cncer que son difciles de establecer de manera clnica y que muchas veces slo se establecen por patologa, tal es el caso de varios tipos de linfoma de linfocitos B grandes y difusos (Alizadeh, et al; 2000), lo que ha permitido que se establezcan nuevos subtipos de este linfoma, lo cual ha impactado en la supervivencia de los pacientes diagnosticados. En otros tipos de cncer, el perfil de expresin de genes ha permitido disear mejores esquemas de tratamiento y de la misma forma ha permitido hacer predicciones de la respuesta al tratamiento con quimioterapia. En 2002 vant Veer demostr que el anlisis de expresin de genes del tejido afectado por el cncer de mama permite predecir qu pacientes desarrollarn metstasis con ms precisin que con los criterios clnicos convencionales (vant Veer, et al; 2002). Tambin el anlisis de expresin de genes permite hacer pronsticos de supervivencia de pacientes afectados con algunos tipos de cncer como se demostr en el trabajo de Tomas Fillies, el cual demuestra que la sobreexpresin del factor de transcripcin inducido por hipoxia alfa (HIFI-alfa) es un marcador que permite establecer un buen pronstico en pacientes afectados por cncer de boca (Fillies T, et al; 2005). El valor predictivo del anlisis del perfil de expresin de genes en cncer ha tomado tanta importancia que se han publicado diversos trabajos en los que se propusieron reglas para clasificar diferentes tipos de cncer en base al perfil de expresin de genes (Tan A, et al; 2005); recientemente se public un nuevo criterio para clasificar desde el punto de vista molecular el cncer de mama que permite realizar pronsticos de evolucin de la enfermedad (Pusztai L, et al; 2008). Cabe sealar que el poder de prediccin sobre el pronstico de evolucin de la enfermedad que se ha alcanzado con el estudio molecular del cncer ha aumentado con el uso simultneo de los microarreglos de tejidos y microarreglos de protenas (Abramovitz M y Leyland-Jones B; 2006). Las aplicaciones en el estudio clnico y farmacolgico de los microarreglos en cncer es quiz el campo ms ampliamente desarrollado y cabe mencionar que tambin se ha empleado para estudiar otros tipo de cncer como el colorrectal (Graudens E, et al; 2006), cncer de mama (Nagasaki y Miki, 2006), cncer de esfago (Hu N, et al; 2006). En linfoma de zona marginal se han identificado factores de transcripcin como c-fos, c-jun- junD, entre otros (Troen G, et al; 2004). Los microarreglos tambin se han empleado en el estudio de otro tipo de padecimientos, contribu-

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yendo con el esclarecimiento de mecanismos inherentes a la patologa, tal es el caso de la diabetes mellitus en la cual se ha podido entender cmo se inician y mantienen los procesos con los que el organismo se vuelve resistente a la insulina y con los datos obtenidos del anlisis de microarreglos y de la PCR en tiempo real, se han logrado identificar y relacionar el papel de citocinas (IL-1 beta, IL-12, IL6) y enzimas que modifican a los lpidos de baja densidad con la aparicin de una poblacin morfolgicamente diferenciada y relacionada con la regulacin de procesos inflamatorios, como es el caso de las clulas esponjosas (macrfagos activados), los cuales contribuyen de manera contundente mediante un proceso inmunolgico a que el organismo se vuelva resistente a la accin de la insulina (Sashkin P., et al; 2006). As, los microarreglos constituyen actualmente una herramienta de uso ms amplio en el estudio de enfermedades crnicodegenerativas, algunas con un trasfondo autoinmune como es el caso de la esclerosis mltiple, en donde se comparan los perfiles de expresin entre tejido cerebral con lesiones causadas por procesos inflamatorios agudos y el cerebro afectado por lesiones crnicas sin proceso inflamatorio y se encontr que la expresin de citocinas proinflamatorias es una constante en las lesiones agudas (OPN y el factor estimulante de colonias granulocticas), mientras que genes que codifican para receptores de la regin Fc de IgG predominan en las lesiones crnicas (Chabas D, et al; 2001; Lock C, et al; 2002). Otras enfermedades en las que se han empleado los microarreglos como herramienta de estudio es el caso de la osteoporosis (Lui Y, et al; 2006); en otros modelos experimentales se han identificado nuevos blancos farmacolgicos que pueden usarse en el tratamiento de la atrofia muscular espinal (Lee S, et al; 2008). Cabe sealar que en muchos de estos estudios se combinan el uso de microarreglos de protenas y tejidos en conjunto con los de DNA, lo cual complementa la informacin obtenida de la expresin de genes con las interacciones entre protenas y la produccin de antgenos en tejidos. En trminos generales de los microarreglos de protenas podemos obtener informacin sobre las interacciones protena-protena, datos tan relevantes como los que report Zhu y quienes observaron nuevas protenas capaces de interactuar con calmodulina y fosfolpidos (Zhu H, et al; 2001); en otros casos se han utilizado microarreglos con anticuerpos para analizar la produccin de antgenos en tejido obtenido de biopsias de cncer de cavidad oral (Huang RP, et al; 2001).

PERSPECTIVAS
Si bien el primer reporte de microarreglos apareci en 1995 (Schena M., et al, 1995) y su uso se ha difundido ampliamente en diversos campos del conocimiento, todava es una herramienta de investigacin y diagnstico que se est insertando en el panorama de recursos tcnicos y cientficos de muchas reas de investigacin y no est por dems decir que se encuentra en una etapa temprana de su desarrollo. Queda mucho camino por delante en lo que se refiere al diseo y desarrollo de las diferentes plataformas; la aplicacin de nuevas tecnologas de deteccin y la implementacin y mejora de las ya existentes, ofrecen un panorama muy alentador en el desarrollo de una tcnica que puede ofrecer mayor sensibilidad en lo que se refiere a los estudios a nivel de genoma. Sin embargo, es indispensable que haya un mayor desarrollo en lo referente a las tcnicas de anlisis, en la integracin de grupos multidisciplinarios que permitan abordar de manera ms completa este tipo de estudios. Todava queda mucho por hacer desde el punto de vista tecnolgico, metodolgico y en la generacin de conocimientos para poder hacer un uso pleno de esta tcnica, la cual puede ayudarnos a responder muchas preguntas que no se podan responder con el anlisis particular de un nmero muy limitado de genes de manera simultnea.
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Direccin para correspondencia: Edgar Alejandro Medina-Torres Torre de Investigacin 9 Piso. Instituto Nacional de Pediatra. Insurgentes Sur Nm. 3700-C Colonia Insurgentes Cuicuilco Coyoacn, Mxico, D.F. 04530 Mxico Tel/Fax: +5255 1084 3892 E-mail: [email protected]