Biotecnología Industrial 2022
Biotecnología Industrial 2022
Biotecnología Industrial 2022
Biotecnología Industrial
https://www.differencebetween.com/difference-between-bioreactor-and-vs-fermentor/
Biotransformación Bioproceso
Sustrato Células Productos de las células
Metabolitos Primarios
✓ Síntesis: fase exponencial de crecimiento (trofofase)
✓ Esenciales
Metabolitos Secundarios
✓ Síntesis: fin de la fase exponencial – etapas tempranas de la fase
estacionaria (idiofase)
✓ No esenciales para el crecimiento y la reproducción
✓ No se producen siempre
(conservación cepa) 4
Crecimiento Batch
5
Metabolitos Primarios y Secundarios
Estacionaria
Concentración de Metabolitos
Log Número de Células
Metabolito
Primario
Metabolito
Lag Secundario
Tiempo (Horas)
Esenciales para el crecimiento
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Esenciales para sobrevivir
Características de Microorganismos de Uso Industrial
✓ Crecimiento rápido
✓ Producción en corto tiempo
✓ Alto rendimiento
✓ Crecimiento en medios económicos
✓ No patógeno
✓ Tamaño grande
✓ Genéticamente estable
✓ Susceptible a manipulación genética
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Medios de cultivo a escala industrial
Suelen ser complejos
Bajo costo
Residuos o efluentes carbonosos de otras industrias
Disponibles en el mercado local
Biorrefinerías Integradas
Precipitación
Aislamiento y purificación Filtración
del producto
Centrifugación
Extracción líquido-líquido
Físico Cromatografía
Tratamiento Ultrafiltración
Paso 7 Químico
de efluentes Secado
Biológico 9
Rao, D.G. (2010). Introduction of Biochemical Engineering Cristalización
Biorreactor o Fermentador
10
Biorreactor o Fermentador
11
Reactores: Clasificación
12
Biorreactor o Fermentador
✓Sistema de Esterilización
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Reactores: Forma
Tanque Tubular
Motor Alimentación
Camisa
refrigerante
Deflector
Agitador
Producto
14
Reactores: Aireación
Aeróbicos Anaeróbicos
Motor Alimentación
Camisa
refrigerante
Deflector
Agitador
Producto
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Transferencia de O2
Coeficiente de transferencia
Concentración de de O2 [h-1]
biomasa [g DW L-1]
X qO2 = KLa (C*-CL) [O2] actual en el
Tasa específica de captación medio [mg L-1]
de O2 [mol (g DW h)-1] [O2] de saturación
[mg L-1]
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Transferencia de O2
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A tener en cuenta…
-Demanda de O2
-Requerimientos de transferencia de calor
-Sensibilidad al esfuerzo cortante (cizallamiento)
-Sensibilidad a variaciones locales dentro del reactor
-Requerimientos específicos para ingredientes farmacéuticos
altamente potentes
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Tipos de Biorreactores: Tanque Agitado
20
Tipos de Biorreactores: Tanque Agitado
Agitador centrado
Un deflector
19 s de mezclado
Agitador centrado
Sin deflector
80 s de mezclado
Agitador descentrado
Sin deflector
45 s de mezclado
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Tipos de Biorreactores: Columna de Burbujas
✓Estructura sencilla
✓Agitación por inyección de aire
✓Adecuado rendimiento de transferencia
de materia y calor
✓Bajo estrés hidrodinámico
✓Bajo costo
✓No apto para medios viscosos
Aplicaciones
✓Producción de levaduras de
panificación, cerveza, vinagre, etc.
✓Tratamiento de aguas residuales. 22
Tipos de Biorreactores: Air-Lift
✓Estructura sencilla
✓Agitación por inyección de aire
✓Separación física de las corrientes ascendentes y
descendentes
✓Adecuada transferencia de materia y calor
✓Bajo estrés hidrodinámico
✓Células libres o inmovilizadas
✓Fluidos más viscosos que columna de burbujas
Aplicaciones
✓Cultivo de células animales, vegetales, microalgas
✓Producción de proteínas unicelulares, tratamiento de aguas residuales. 23
Tipos de Biorreactores: Air-Lift
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Tipos de Biorreactores: Fotobiorreactores
↓ volúmenes oscuros
25
Tipos de Biorreactores: Fotobiorreactores
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García Prieto (2018)
Tipos de Biorreactores: Fotobiorreactores
27
García Prieto (2018)
Modelado de Fotobiorreactores
𝑑𝑋
= 𝜇𝑚𝑎𝑥 𝑓 𝑁 𝑓 𝐼 𝑋
𝑑𝑡
𝐶𝑂2 𝑁𝑂3
𝑓 𝑁 = min ,
𝐾𝑆𝐶𝑂2 + 𝐶𝑂2 𝐾𝑆𝑁𝑂3 + 𝑁𝑂3
𝑰𝒐𝒑𝒕
𝐼𝑜 𝐼𝑜
𝑓 𝐼 = exp 1 −
𝐼𝑜𝑝𝑡 𝐼𝑜𝑝𝑡
𝒇 𝑰
𝐼 1 − 𝑒𝑥𝑝 −𝐾𝑒 𝑑 𝑋
𝐼𝑜 =
𝐾𝑒 𝑑 𝑋
𝑰 [Ly día-1]
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Tipos de Biorreactores: Lecho Fijo
Productos
y material no
reaccionado para
separación
-Inmovilización química o física
Aplicaciones
Difusor
producción industrial de productos
químicos, farmaceúticos, alimentos,
Medio de cultivo tratamiento de residuos
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Tipos de Biorreactores: Lecho Fluidizado
Productos
Plato
difusor
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Tipos de Biorreactores: Lecho Fluidizado
Biomasa algal
Biorreactor de Lecho empaquetada en
Fluidizado poliuretano
https://ars.els-cdn.com/content/image/1-s2.0-S0196890419301311-ga1_lrg.jpg
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Biorreactores: Modos de Operación
V = cte
(F1=F2=0)
✓ Sustancias tóxicas
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Modo de Operación: Batch o Discontinuo
Desventajas
✓Dificultad para controlar µ
V ≠ cte.
(F1> 0 F2=0)
✓Objetivo: controlar µ
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Modo de Operación: Continuo o Quimiostato
V = cte.
(F1 = F2)
✓Continuo
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Modo de Operación: Continuo o Quimiostato
Aplicaciones
✓Sistemas de tratamiento biológico de aguas residuales
aminoácidos)
✓ Estudio de los parámetros de crecimiento y las
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Modo de Operación: Continuo o Quimiostato
Desventajas
✓Inestabilidad genética de la cepa, pérdida de
plásmidos
✓ Contaminación
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Modo de Operación: Continuo o Quimiostato
Balance Global
𝑑 𝑉𝜌2
𝑭𝟏 𝐹1 𝜌1 − 𝐹2 𝜌2 =
𝑑𝑡
𝜌1 = 𝜌2
𝑭𝟐 𝑑 𝑉𝜌2
=0
𝑑𝑡
𝐹1 = 𝐹2 = 𝐹
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Modo de Operación: Continuo o Quimiostato
Balance de Biomasa
𝑑 𝑋𝑉 𝑑𝑉 𝑑𝑋
𝐹𝑋𝑜 − 𝐹𝑋 + µ𝑋𝑉 − 𝑘𝑑 𝑋𝑉 = =X +V
𝑑𝑡 𝑑𝑡 𝑑𝑡
𝑑𝑉 𝑑𝑋
𝑋𝑜 = 0 =0 =0 𝑘𝑑 ≪ µ
𝑑𝑡 𝑑𝑡
−𝐹𝑋 + µ𝑋𝑉 = 0
𝐹𝑋 = µ𝑋𝑉
𝐹
𝐹 = µ𝑉 ⇒ =𝐷=µ
𝑉
Tasa de Dilución (h-1) 41
Modo de Operación: Continuo o Quimiostato
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Modo de Operación: Continuo o Quimiostato
Estado Estacionario
Concentración biomasa
Zona Zona Zona
1 2 3
D (h-1)
Ventana de Operación
DC
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Biorreactores: Modos de Operación
46
Fermentación en Estado Sólido
Pleurotus ostratus 48
(Gírgolas)
Escalado de Bioprocesos
Escala laboratorio
3 a 10 L Escala industrial
0.25 - 0.5 L
Escala piloto
300 - 3 000 L
49
Escalado de Bioprocesos
Tamaño
(Litros) Producto
50
Escalado de Bioprocesos
≠ escalas de tiempo
Cte P/V
“Reglas” Cte KLa
Cte velocidad agitación
Cte tiempo de mezclado combinado con Re
Cte [DO]
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Escalado de Bioprocesos
CFD
Dinámica de Fluidos Computacional
Aireador Aireador
perforado 1 perforado 2 Membrana
Efecto de la velocidad de gas de entrada
Distribución de gas con diferentes aireadores sobre la velocidad del líquido de
circulación
-Proteínas recombinantes
-Artemisinina
-Vitaminas
Productos -Antioxidantes
Valor del producto
farmacéuticos -Sabores
-Antibióticos
Productos -Enzimas
nutracéuticos -Bloques elementales
-Etanol
Productos -Solventes
química fina -Aminoácidos
Químicos a granel
y biocombustibles
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Bioseguridad
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Métodos Físicos
Calor
✓Priones
✓Endósporas bacterianas
+
✓Mycobacteria
✓Hongos
✓Bacterias
Calor Seco
Flameado Estufas e Incineradores
Laboratorio microbiología 160-180 °C
Oxidación 2 hs 170 °C asegura
Materiales resistentes al calor esterilización
Sustancias no miscibles en agua
Polvos
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Métodos Físicos
✓ Temperatura refrigeración (0 a -7°C) ↓ crecimiento
Bajas T° ✓ Psicrótrofos
✓ Bacteriostático
✓ Filtros y membranas
Filtración ✓ Poros ≤ 0.2 µm bacterias; ≤ 0.01 µm virus y algunas proteínas.
✓ Medios de cultivo termolábiles, enzimas, vacunas, entrada de gases reactores
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Métodos Químicos
✓Daño de proteínas y ác. nucleicos
✓Alteración de la permeabilidad de la membrana plasmática
Antisépticos
Alcoholes
Iodo
Colorantes
Órgano-Mercuriales
Métodos
✓Subcultivos refrigerados (-2 a 4 °C)
Liofilizador
✓Liofilización Freezer -80°C
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Esterilización Industrial
Todas las etapas de cultivo libres de contaminación
Fermentador
Medio de cultivo y aditivos
Esterilizados
Gases suministrados
Gases de salida
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Mejoramiento de Índices de Producción
Cepa-Industrial
Cepa-Prueba de Concepto
67
Modificado de Hong & Nielsen (2012), Cell. Mol. Life Sci. 69:2671
Mejoramiento de Cepas para Usos Industriales
Modificar
genéticamente la
cepa
Mutaciones inducidas
Alteran el ADN en forma aleatoria
Mutágenos químicos Mutágenos físicos
ácido nitroso, Radiación ionizante (rayos gamma, X)
N-nitrosoguanidina (NTG) Radiación no ionizante (UV)
Ingeniería Metabólica
Modificación del metabolismo de un organismo por ingeniería
genética introduciendo, eliminando o regulando genes
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Mejoramiento de Cepas para Usos Industriales
sustrato sustrato
producto
producto
WT OGM 70
70
Tecnología del ADN Recombinante
Gen de la
Hormona de
Crecimiento
Célula Humana Recombinación
Extremos
del ADN
complementarios Inserción
del ADN
Bacteria
Cromosoma
bacteriano
Bacteria
Plásmido
recombinante 71
Tecnología del ADN Recombinante
ADN cebador
Nucleótidos
Proteína Proteína
β-galactosidasa/insulina A β-galactosidasa/insulina B
3 Purificación de las
proteínas fusionadas
Producción de Insulina
4 Remoción química Humana Recombinante
de los polipéptidos
de la insulina
O2
O2
CO2
74
Edición genética: CRISPR-Cas
Bacteriófago
(virus)
76
Pontrelli et al. (2015), Metabolic Engineering 50: 16-46