Tesis Chinche
Tesis Chinche
Tesis Chinche
Responsable:
MAURICIO RENDÓN VALDÉS
Estudiante de Tesis - UNISARC
Director:
ANTHONY C. BELLOTTI
Ph.D Entomología
Líder del proyecto de yuca, manejo integrado de plagas y enfermedades
Centro Internacional de Agricultura Tropical CIAT.
En Santa Rosa de Cabal, a los ocho (8) días del mes de noviembre del 2001, se reunió en
esta sede el jurado calificador del Trabajo de Grado, designado por el comité asesor de
agronomía integrado por los MSc:
MARIA CRISTINA GALLEGO
ADRIANA SAENZ APONTE.
__________________________ __________________________
jurado Codirector
_______________________
Director
A mi abuelita Aura Sofía y mi tía Beatriz Elena por confiar en mi brindarme su apoyo
amor y colaboración en lo laboral.
A mis amigos: Los de la brigada CIAT, Gonzalo, Hugo, Carlos los cuales recuerdo y
llevo en mi corazón con afecto.
Mauricio
AGRADECIMIENTOS:
INTRODUCCIÓN 9
1. OBJETIVO 11
1.1. OBJETIVO GENERAL 11
1.2. OBJETIVO DEL PROYECTO 11
1.3. OBJETIVOS ESPECÍFICOS 11
2. HIPÓTESIS DE TRABAJO 12
3. JUSTIFICACIÓN 13
4. REVISIÓN DE LITERATURA 14
4.1. Generalidades del cultivo 14
4.2. Generalidades del insecto Cyrtomenus bergi Froeschner 16
4.2.1. Clasificación taxonómica de Cyrtomenus bergi 16
4.2.2. Distribución geográfica de C. bergi 16
4.2.3 Descripción del daño causado por C. bergi en Manihot esculenta 17
4.2.4. Biología de C. bergi 17
4.2.5. Preferencia del suelo y Humedad de C. bergi 18
4.2.6. Control de C. bergi 18
4.3. Generalidades de los hongos entomopatógenos 19
4.3.1. Clasificación taxonómica de las clases Hyphomycetes 19
4.3.2. Desarrollo de enfermedades producidas por Hyphomycetes 20
4.3.3. Generalidades de los hongos Metarhizium anisopliae (Metschnihoff) 21
4.3.4. Generalidades del hongo Beauveria bassiana 21
4.3.5. Generalidades del hongo Paecilomices liliacinus 21
4.3.6. Características de los hongos 22
4.3.7. Desarrollo de bioensayos con entomopatógenos para control de
Insectos 23
4.3.8. Obtención de un bando de aislamientos 23
4.3.9. Prueba de patogenicidad del estado biológico más susceptible del
Insecto 24
5. METODOLOGÍA 25
5.1. Obtención de Insectos 25
5.2. Procedencia de Aislamientos 26
5.3. Viabilidad del Inoculo Utilizado 27
5.4. Determinación del estado biológico de C. bergi más susceptible
a los hongos entomopatógenos Hyphomycetes 31
5.5. Metodología para determinar la aplicación de los hongos
entomopatógenos Hyphomycetes 34
5.6. Patogenicidad de Beauveria sp, Metarhizium sp, Paeciolomices sp
Sobre C. bergi 36
5.7. Diseño y análisis estadístico para prueba de patogenicidad y
de los hongos entomopatógenos comparado con el testigo 40
5.7.1. Distribución de los tratamientos y repeticiones 41
5.7.1.1 Mapa 1. Distribución de los tratamientos y repeticiones de quinto
Instar y adultos en el primer grupo de cepas evaluadas 41
5.7.1.2 Mapa 2. Distribución de los tratamientos y repeticiones de quinto
Instar y adultos en el segundo grupo de cepas evaluadas 42
5.7.2. Variables a medir 42
6. RESULTADOS Y DISCISIÓN 44
6.1. Métodos de Aspersión 44
6.2. Patogenicidad y Virulencia de las cepas 46
6.2.1. Grupo 1. 46
6.2.1.1 Cepa CIAT 227 46
6.2.1.2 Cepa CIAT 231 46
6.2.1.3 Cepa CIAT 233 47
6.2.1.4 Cepa CIAT 234 47
6.2.1.5 Cepa CIAT 241 47
6.2.1.6 Cepa CIAT 242 48
6.2.1.6 Cepa CIAT 250 48
6.2.1.7 Cepa CIAT 258 48
6.2.1.8 Cepa CIAT 259 49
6.2.1.9 Testigo 49
6.2.2. Grupo 2. 52
6.2.2.1 Cepa CIAT 230 52
6.2.2.2 Cepa CIAT 237 52
6.2.2.3 Cepa CIAT 261 53
6.2.2.4Cepa CIAT 224 53
6.2.2.5 Cepa CIAT 245 53
6.2.2.6 Cepa CIAT 239 54
6.2.2.7 Cepa CIAT 228 54
6.2.2.8 Cepa CIAT 238 54
6.2.2.9 Cepa CIAT 240 55
6.2.2.10Testigo 55
6.3. Selección de cinco cepas de hongos entomopatógenos 61
7. CONCLUSIONES 65
8. IMPLICACIONES 67
9. RESUMEN 68
10. BIBLIOGRAFÍA 69
INDICE DE TABLAS
En yuca el daño es causado por ninfas como adultos al introducir el estilete a través de la
epidermis de la corteza de la raíz permitiendo la entrada de microorganismos presentes en
el suelo, reduciendo el valor comercial del cultivo, al afectar la calidad del producto
comercial y disminuir el contenido de almidón (García & Bellotti, 1982).
Por sus hábitos subterráneos y su ciclo de vida tan largo, mas de 500 días en yuca, puede
pasar desapercibido durante todo el ciclo del cultivo, causando perdidas hasta de un 100%
de la raíz para el mercado en fresco de la producción total (Vargas et al 1986).
9
únicos que se conocen hasta el momento a nivel de laboratorio como potencial para el
desarrollo de un programa de manejo integrado de C. bergi (Caicedo & Bellotti, 1994;
Berberen & Bellotti, 1996; Sánchez & Bellotti, 1996).
10
1. OBJETIVOS
Evaluar practicas biológicas que contribuyan a la disminución del daño ocasionado por el
chinche subterráneo de la yuca Cyrtomenus bergi Froeschner.
11
2. HIPOTESIS DE TRABAJO.
12
3. JUSTIFICACIÓN
13
4. REVISION DE LITERATURA
14
A demás es uno de los cultivos que reviste mayor importancia, en especial para los países
tropicales en vía de desarrollo, debido a su alto contenido de carbohidratos y los bajos
costos de producción. Tradicionalmente se ha cultivado a nivel de pequeños agricultores
como un producto de subsistencia. En la actualidad se ha despertado un gran interés de su
producción a mayor escala, para la alimentación humana, animal y su uso industrial del
almidón (García & Bellotti, 1982).
Las ninfas y adultos de C. bergi se alimentan de las raíces de la yuca por medio de su fuerte
y delgado estilete, el cual introduce por la cáscara y alcanza la zona del parénquima. Los
patógenos del suelo a través del daño de alimentación del insecto inducen la aparición de
puntos de color marrón o negro en la región parenquimatosa, por la cual la yuca no es
aceptada comercialmente. Este hábito alimenticio resulta en la transmisión de varios
hongos patógenos y su posterior desarrollo, causa comúnmente lo que se conoce como
"viruela". Estos patógenos incluyen especies de los géneros Aspergillus sp.; Diplodia sp.;
Fusarium sp.; Genicularia sp.; Phytophthora sp. y Pythium sp. Estos microorganismos
degradan el tejido de las raíces infectadas causado pudriciones inicialmente localizadas, las
cuales pueden invadir la raíz totalmente a través del sistema vascular. Las raíces dañadas
son rechazadas comercialmente, no siendo aceptadas para el mercado fresco, y
frecuentemente son rechazadas para el procesamiento (Castaño, et al 1985).
Cuando las raíces son atacadas por el chinche, la planta no muestra ninguna sintomatología
y el daño sólo es detectado en el momento de la cosecha. Si el comprador en el lote
encuentra entre un 20 o 30% de raíces atacadas, lo rechaza de inmediato. El daño potencial
de este insecto es por tanto extremadamente serio para el mercado fresco. Estos altos
niveles de daño del 85% de las raíces de CMC 40 (bajo contenido de HCN) y el 65% de las
de M Mex 59 (mayor contenido de HCN), se traduce en un pérdida completa del cultivo e
indica que cualquier medida de control debe llevarse a edades tempranas del cultivo,
probablemente al momento de la siembra (Castaño, et al 1985)
15
4.2. GENERALIDADES DEL INSECTO Cyrtomenus bergi Froeschner.
La chinche subterránea, Cyrtomenus bergi Froeschner. Según (Borror & White, 1970)
citado por (García & Bellotti, 1982) se encuentra comprendida dentro el orden Hemíptero,
suborden Geocorizae; para (Borror y White, 1970) citado por (García, 1982) pertenece a la
súperfamilia Scutelleriodae, Familia Cydnidae y (Froeschner, 1960) la considera dentro de
la subfamilia Cydninae.
Las especies de este subgénero ocupan el centro y oriente sur de los Estados Unidos, hasta
centro América y en América del sur, hasta el centro de Argentina (Froeschner, 1960)
16
Este insecto está presente en algunas zonas del país, causando severas pérdidas.
Potencialmente puede diseminarse a otras zonas y causar serios estragos en plantas
hospedantes adicionales que incluyen maní, pastos, maíz, y sorgo (Castaño et al 1985).
La biología fue estudiada por (García & Bellotti,1982). La duración promedio del ciclo de
vida en yuca es: huevos 13,6 días, ninfas (cinco instares) 111,2 días, cuando se alimenta de
yuca dulce variedad CMC-40 a una temperatura de 23oC y una humedad relativa (HR) de
65+5% para un total de 124,6 días. La longevidad adulto es de 293,4 días. Cuando en cultivo
hospedante fue maíz, el duración promedio del periodo ninfal fue de 91.5 días y de 119.3
días cuando se alimentaba con cebolla larga, a una temperatura de 25oC con la misma HR.
Al iniciar cada instar, seis en total (incluido el adulto), el insecto es de color crema hialino
y en poco tiempo en forma gradual se va quitinizando hasta tomar la consistencia y
coloración característica. Las patas son cortas, con muchas espinas fuertes que le permiten
movilizarse dentro del suelo. La oviposición ocurre dentro del suelo y en forma individual;
17
según observaciones en el campo los huevos son colocados alrededor de las raíces de las
plantas (García et el, 1982).
Según Lozano et al. (1981) la presencia del insecto se puede detectar por su olor repúgnate
porque el suelo se ve removido y que severos ataques se han presentado en plantaciones de
yuca donde anteriormente se había sembrado caña o pastos.
Arias & Bellotii (1985) de acuerdo con los resultados de aspectos ecológicos y de manejo
de insectos, sugieren que algunas medidas de control deben tomarse muy temprano en el
periodo vegetativo para reducir el daño ocasionado en la planta; y debe persistir durante el
ciclo del cultivo de acuerdo con un monitoreo permanente.
La duración del ciclo de vida resultante es por lo tanto de más de un año, tiempo durante el
cual C. bergi puede sobrevivir únicamente en las raíces de yuca. Esto significa que esta
18
plaga puede mantener o incrementar sus poblaciones en los campos de yuca, sin
alimentarse de otro huésped alterno (Castaño et al 1985).
El control biológico de insectos tiene en cuenta muchas clases de organismos que causan la
muerte a plagas de importancia económica. En distintas regiones del territorio Colombiano
se han registrado agentes de control biológico como parasitoides, predadores, nematodos,
bacterias, protozoarios y hongos entomopatógenos. El grupo de los tres últimos, constituye
los elementos del denominado control microbial, ya que estos son precisamente
microorganismos ( Bustillo, 1984; Londoño, 1992).
Los hongos entomopatógenos según (Burge, 1988) están ubicados dentro de las clases
Deuteromycetes y Entomophthoraceae. Algunos géneros pueden ser altamente específicos
en su rango de hospederos, la característica morfológica de los Hyphomycetes descripción
hecha por (Valeila, 1979) sugiere que en esta clase las conídias no se forman ni en
acervulos ni en picnidios, sino que se originan en conidióforos libres o directamente en las
19
hifas somáticas. Muchas de estas especies tienen un estado perfecto o sexual en la
subdivisión Ascomycotina.
El crecimiento del hongo en el hemocele, produce la muerte del insecto por las toxinas que
intervienen en este proceso. Las toxinas pueden inactivar el sistema de defensa del
hospedero, lo cual se demostró con un extracto de cultivo de M anisopliae que contenía
depsipéptidos cíclicos (destruxinas), inhibiendo la producción de prophenol oxidasa en los
hemocitos del insecto C bergi, sugiriendo que las destruxinas pueda suprimir las respuestas
inmunológicas del insecto (Gillespie, 1988).
En general los síntomas que presentan los insectos afectados, son producidos por todos lo
Hyphomycetes y comienza a observarse al cabo de 4 a 5 días después del tratamiento.
Inicialmente las larvas pierden inactividad y dejan de alimentarse, generalmente presentan
machas oscuras localizadas indistintamente en el cuerpo del insecto enfermo, los cuales
corresponden a sitios de penetración de las esporas de los hongos, como resultado de la
reacción del tegumento a la infección criptogámica. Antes de morir los insectos demuestran
movimientos no coordinados y parálisis, la muerte sobreviene cuando el pH de la hemofilia
tiende bruscamente a neutralizarse. El insecto queda inmóvil, aparentemente en posición de
reposo y endurecido por la abundante masa de micelio que hay en su interior. (Pardo &
Puerta, 1995).
20
4..3.3. Generalidades del hongo Metarhizium anisopliae (Metschnihoff)
Una de las características de este género son las diferentes tonalidades de color verde que
presentan sus conidias. En el género Metarhizium se presenta dos especies M. anisopliae y
M. flavoriidae (Tulloch, M. 1976)
López et al, (1983), Comenta sobre P. liliacinus que durante su ciclo de desarrollo,
inicialmente pierde el apetito, se mostraba muy móviles. Luego entre el tercer par de
seudopatas y el extremo posterior, la larva tomaba un color blanco. La parte exterior se
21
tornaba paulatinamente de color café claro. En algunos casos constituyeron un capullo con
los extremos abiertos, luego perdían totalmente el movimiento y se momificaban tomando
una coloración crema.
22
La especificidad de os hongos entomopatógenos es definida por Leyva & Ibarra, (1992),
como la “expresión de la adaptación reciproca y de afinidad entre un organismo patógeno y
su especie hospedera”. El conocimiento de la especificidad de un hongo entomopatógeno es
un aspecto esencial que se debe determinar entre los mecanismos de selección de un hongo
candidato para utilizarse como bioinsecticida. Existen factores, tanto intrínsecos que
determina si tiene influencia sobre la especificidad de un hongo; uno de ello es la
coincidencia espacio temporal, entre el hospedero y el patógeno; otro es la existencia de
patotipos de una especie de hongos que aunque presentan morfología similar, tienen
diferentes rangos de hospederos.
Las cepas iniciales se pueden obtener a partir de insectos moribundos o muertos, los cuales
son llevados a medios de cultivos como PDA (Papa, Dextrosa y Agar) y el SDA
(Sabouraud, Dextrosa y Agar) (Rodríguez, 1984). De todos los patógenos que se
encuentren en un insecto, solo se considera como de ocurrencia natural aquellos que se
23
puedan evaluar como los postulados de Koch, y de esa forma garantizar la procedencia de
aislamientos con respecto a su hospedero nativo (Poprawski and Yule, 1991).
4.3.9. Prueba de patogenicidad del estado biológico más susceptible del insecto.
24
5. METODOLOGIA
25
Figura 1. Colonia de C. bergi. Cuarto de cría del laboratorio de Entomología de Yuca. (Fotografía
Maria Ximena Escobar CIAT).
Tres de los aislamientos de las cepas evaluadas fueron cedidas por Centro Nacional de
Investigaciones de Café CENICAFE de la colección de aislamientos de hongos
entomopatógenos. Diez y nueve (19) de los aislamientos de las cepas evaluadas fueron
recolectadas en el departamento del Cauca en el Municipio de Popayán en el mes de Julio
de 1994 por Caicedo y otros, almacenadas en papel y conservadas a una temperatura de
-20oC y seis (6) de los aislamientos de las cepas evaluadas se recolectaron en el
departamento de Risaralda en el Municipio de Pereira en la vereda la Florida por Rendón y
otros el día 12 de Julio del 2000. De las cepas colectadas se han identificado M. anisopliae,
B. bassiana, P. liliacinus. Las cepas aisladas se multiplicaron en medio nutritivo artificial
compuesto de Saburaud Dextrosa Agar + Extracto de levadura al 0.1% SADY y Papa
Dextrosa Agar enriquecido con extracto de levadura al 0.1% PDAY; Los cuales crecieron
en cámaras incubadora a una temperatura de 25+2 oC para favorecer su crecimiento y
26
esporulación. Una vez esporulados se cosecharon las conidias de cada aislamiento en 50 ml
de Agua con tween al 0.05% esterilizado previamente (Figura2) (Tabla 1).
Figura 2. Cámara incubadora. Medios de cultivo, cepas aisladas (Fotografía Maria Ximena
Escobar CIAT).
Todas las cepas se reactivaron sobre los diferentes estadios de C bergi (Figura 3). Se
tomaron insectos de la colonia 20 de primer instar, 20 de quinto instar y 20 adultos los
cuales fueron desinfectados previamente con hipoclorito de sodio al 0.3% por 2 minutos.
Posteriormente fueron lavados con ADE, y secados con papel toalla. Cada uno de los
instares se colocaron dentro de cajas plásticas sobre toallas de papel humedecidas con
ADE, como sustrato. Para alimentar los insectos se utilizo yuca CMC 40 previamente
desinfectada con hipoclorito al 3%.
27
La aplicación de los tratamientos se hizo de modo líquido. Se tomaron cepas con buenas
esporulaciones y se licuaron en 30ml de agua con tween al 0.05%, se colaron en gasa para
eliminar el medio de cultivo y se aplicaron asperjándolas al insecto y posteriormente se
llevaron a las cajas plásticas con las toallas de papel y la yuca CMC 40. Para cada una de
las cepas evaluadas se hizo el mismo procedimiento. En total se tomaron 560 insectos de
primer instar, 560 para quinto instar y 560 insectos para adultos, para un total de 1680
insectos (Figura 4). De las cepas evaluadas en cada una de las reactivaciones se aislaban los
hongos nuevamente para almacenarlos y posteriormente llevarlos a los ensayos de
patogenicidad.
Los insectos atacados por los hongos asperjados se dejaron en cámaras húmedas por 4 días
y se prosiguió a sembrar en medios de cultivos antes mencionados para los ensayos de
patogenicidad. Las cepas que en la reactivación no mostraron ataque al insecto se
catalogaron como cepas no activas (Tabla 2) (Figura 4).
28
Tabla 1. Cepas almacenadas en el laboratorio de l Programa de Manejo Integrado de Plagas
y Enfermedades en yuca (Cepario de Entomología de Yuca) CIAT.
Hospedero Lugar del Muestreo
Nomenclatura Fecha de colección
Género Especie Pais Depto Colector
29
Figura 4. Montaje de reactivaciones para cada una de las 28 cepas evaluadas. (Fotografía
Maria Ximena Escobar CIAT).
30
5.4. Determinación del estado biológico de C. bergi más susceptible a los hongos
entomopatógenos hyphomycetes.
La susceptibilidad de los seis estados biológicos de la chinche fue evaluada con las cepas
de Metarhizium sp, Beauberia sp y Paecilomices sp nativos de C. Bergi (primer pase
por medio artificial) los insectos fueron sometidos a una cuarentena desde el momento de
recolección en campo hasta utilizarlos para los ensayos. Según reportes de Sánchez
(1996) el estadio más susceptible a los hongos entomopatógenos es el quinto instar. Por
ello para los ensayos de patogenicidad y virulencia de este trabajo se seleccionaron los
insectos de quinto instar y además los adultos1. Las inoculaciones se realizaron por
aspersión al insecto y a la superficie del suelo (Figura 6). De cada uno de los estados
biológicos de la chinche se inocularon 20 insectos por cada tratamiento con cinco
repeticiones cada uno. Además del testigo absoluto ADET al 0.05%. Los ensayos se
realizaron en diferentes grupos y fechas. Las evaluaciones se realizaron cada dos días
removiendo el suelo y determinando la mortalidad de los insectos durante veinte días de
evaluación (Anexo 1).
1
Seleccionamos los adultos para determinar si las cepas evaluadas intervienen en la oviposición y evaluar
el ataque de los hongos en este estadio.
31
Tabla 2. Reactivaciones de 28 cepas de hongos Hyphomycetes sobre C. bergi.
32
Figura 6. Aspersión al insecto de C. bergi de igual forma se le hizo la aspersión al suelo
en la caja plástica (Fotografía Maria Ximena Escobar CIAT).
33
5.5. Metodología para determinar la aplicación de los hongos entomopatógenos
hyphomycetes.
34
cada uno de los tratamientos y el testigo con 5 repeticiones. Las evaluaciones se
realizaban cada 2 días por un período de 20 días (Figura 8).
Planteando otra metodología para la aspersión de las cepas de los hongos, la cual
consistió en la aspersión de las cepas en solución líquida tanto a los insectos como al
suelo en el momento del montaje de los ensayos. Esta unidad experimental consto de
cajas plásticas de 30x20x10cm con un peso de 500gr de suelo estéril y semillas de maní
(forrajero o común) o raíces de yuca2, con 5 repeticiones. Las evaluaciones se realizaron
cada 2 días por un periodo de 20 días (Figura 9).
2
El alimento variaba de acuerdo a la disponibilidad del mismo al momento del montaje de los ensayos
35
Figura 9. ensayos preliminares de métodos de aspersión al suelo y al insecto (Fotografía
Maria Ximena Escobar CIAT).
36
con papel filtro y permitir la aireación (Figura 10). El alimento fue yuca Manihot
esculenta o tres semillas de maní Arachis hipogea o A. pintoi1. Se aplicaron 50 ml de la
solución de cada cepa por tratamiento y por instar (Figura 11).
Figura 10. Unidad experimental caja de 30 x 20 x 10cm. (Fotografía Carlos Julio Herrera
CIAT).
1
las semillas de maní se optaron como alimento por ser el hospedero principal del insecto, y reducir su
ciclo de vida de ninfa de primer instar a adulto en 120 días y estimular la oviposición. Según RIIS 1990
37
Figura 11. Soluciones líquidas de las cepas evaluadas en los ensayos de patogenicidad y
virulencia. Al igual para reactivaciones. (Fotografía Maria Ximena Escobar CIAT).
38
Tabla 3. Cuadro de las fecha de Patogenicidad de las 18 cepas de hongos evaluadas para
este trabajo.
39
5.7. Diseño y análisis estadístico para las pruebas de patogenicidad de las cepas
de los hongos entomopatógenos comparadas con el testigo.
J CIAT 230
40
5.7.1. Distribución de los tratamientos y repeticiones
1 C1 20 G1 21 E5 40 B5 41 I4
2 B1 19 A4 22 R5 39 G5 42 G2
3 R1 18 H3 23B4 38 F4 43 R3
4 A1 17 R4 24 C2 37 C4 44 BD4
5 F5 16 F1 25 H2 36 A5 45 E3
6 I2 15 E1 26 I3 35 B2 46 C5
7 D5 14 C3 27 D2 34 H4 47 F3
8 E4 13 I1 28 A3 33 R2 48 A2
9 H1 12 D1 29 F2 32 D3 49 H5
10 G4 11 B3 30 G3 31 I5 50E2
41
5.7.1.2. Mapa 2. Distribución de los tratamientos y repeticiones de quinto
instar y adultos en el segundo grupo de cepas evaluadas.
1 O3 20 N2 21 Ñ3 40 Q4 41 P4
2 L2 19 O5 22 N5 39 P5 42 Q2
3 Ñ4 18 P3 23 J4 38 O1 43 K5
4 R1 17 M2 24 K1 37 Ñ2 44 L5
5 J2 16 J5 25 R5 36 R3 45 N4
6 K2 15 O2 26 O4 35 Q5 46 Ñ5
7 M4 14 Ñ1 27 R2 34 N3 47 M5
8 N1 13 R4 28 P2 33 M1 48 L1
9 P1 12 K3 29 Q1 32 K4 49M3
10 Q3 11 L4 30 L3 31 J1 50 J3
% de M: No muertos x 100
No vivos + No muertos
42
Las evaluaciones de virulencia de los hongos entomopatógenos cada 2 días de evaluación
no se tuvieron en cuenta para análisis estadístico, por no presentar diferencias
significativas, solo se presentó diferencias a los 20 días después de aplicados los
tratamientos, en el momento de las evaluaciones de patogenicidad, tomando esta como
prioritaria para la mortalidad.
43
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Sánchez et al (1996), Cita que las unidades experimentales más adecuadas para la
evaluaciones de hongos entomopatógenos sobre C. bergi a una temperatura de 23oC fue
el insecto inoculado por contacto directo con una suspensión de conidias confinado
dentro de un vial plástico, revestido por papel filtro húmedo, registrando mortalidades del
86 al 98%, no detectando diferencias significativas entre estados inmaduros de la
chinche, pero si detectando diferencias significativas entre el estado adulto con
mortalidades del 62%.
Estos ensayos realizados por Sánchez (1996) dan pie para el establecimiento de esta
metodología a nivel de suelo en laboratorio para darle condiciones a los hongos
entomopatógenos y posteriormente continuar con trabajos en invernadero y campo.
Para los ensayos preliminares en cajas plásticas de 30x20x10cm con aspersiones a los
insectos, aunque se facilitó la evaluación tampoco se usó pues permitía el escape del
44
insecto ya que el momento los hogos empezaron a mostrar su crecimiento y se evidencio
viabilidad y virulencia.
Analizando las mortalidades de los ensayos anteriores se decide hacer el montaje en las
cajas plásticas de 30x20x10cm con un promedio de 500gr de suelo estéril y tapas con
perforaciones en la mitad antes descritas. Las aspersiones de las cepas se realizaron tanto
al insecto como al suelo, uniendo los ensayos antes mencionados para una mayor
efectividad en los tratamientos y darle mejores condiciones a los hongos
entomopatógenos en su adaptación a la temperatura y humedad relativa, esto nos facilito
las evaluaciones de las mismas, así determinando en que momento comenzó la
mortalidad de los insectos y la virulencia de los hongos. Dándole condiciones más
controladas. Los insectos se encontraron los 20 en cada uno de los tratamientos por las 5
repeticiones en el momento de las evaluaciones.
45
6.2. PATOGENICIDAD Y VIRULENCIA DE LAS CEPAS.
6.2.1. GRUPO 1.
Este grupo de cepas se empezó a evaluar el 6 de marzo del 2001. Contó con 9 cepas de
hongos y un testigo, las evaluaciones se realizaron cada 2 días durante un periodo de 20,
en el cual se analizaron las mortalidades promedios de cada una de las cepas.
La mortalidad de los adultos se observó desde el 4 DDAT con un 5% para el día 6 fue de
6.7% encontrándose tasas de mortalidad altas a partir del 12 DDAT con un 20%, a los 17
DDAT 30% y el mayor pico de mortalidad se observo a los 20 DDAT con un 56% (Tabla
6).
Para el adulto este tratamiento empezó a mostrar la mortalidad al 4 DDAT con 1.7%
llegando el día 17 DDAT con un 20% y su pico máximo a los 20 DDAT con el 40.3%
(Tabla 6).
46
6.2.1.3.CEPA CIAT 233.
Las soluciones de esporas asperjadas a este tratamiento fue de 4.65 x 107 conidias/ml. La
mortalidad de este tratamiento para ninfas de quinto instar empezó el día 2 DDAT con
1% llegando el 17 DDAT con una mortalidad de 41%, y su máximo pico al 20 DDAT
con una mortalidad del 67% (Tabla 5).
La mortalidad del adulto empezó a los 4 DDAT con el 1.7% el día 17 con el 35% y un
pico máximo al 20 DDAT con un 53.3% (Tabla 6).
La mortalidad de los adultos empezó al 4 DDAT con el 1.7%, al 15 DDAT fue de 15% y
su pico mayor fue el 20 DDAT con el 31.7% de mortalidad (Tabla 6).
Los adultos para esta cepa presentaron mortalidades a partir del 4 DDAT, las
mortalidades mayores se presentaron a partir del 12 DDAT con 23.3%, 14 con 28.3%, 17
con 30% y su mayor pico el 20 DDAT con el 58.3% (Tabla 6).
47
6.2.1.6.CEPA CIAT 242.
La solución de esporas aplicadas a esta cepa fue de 4,5 x 107 Conidias/ml. La mortalidad
en este tratamiento empezó para ninfas de quinto instar a los 2 DDAT el 4% llegando el
día 17 al 45% y su mayor pico el 20 DDAT con 55% (Tabla 5).
Los adultos para esta cepa presentaron mortalidades a partir del día 4 con el 11.7%
aumentando al 17 DDAT con 35% y el mayor pico registrado fue al 20 DDAT con una
mortalidad del 50% (Tabal 6).
Los adultos para esta cepa presentaron mortalidades a partir del 4 DDAT con el 6.7%. las
mayores mortalidades se presentaron al 17 DDAT con 30% y el pico máximo a los 20
DDAT 56.7% (Tabla 6).
Los adultos para esta cepa presentaron mortalidades a partir del 4 DDAT con 5%. Para el
17 con el 30% y la mayor mortalidad se presentó a los 20 DDAT con el 55% (Tabla 6).
48
6.2.1.9.CEPA CIAT 259.
La solución de esporas aplicadas a este tratamiento fue de 4.75 x 107 conidias/ml. La
mortalidad para quinto instar se registro desde el día 2 DDAT con el 1%. El día 17 con
31% y su mayor mortalidad registrada a los 20 DDAT con el 51% (Tabla 5).
Los adultos para esta cepa presentaron mortalidades a partir del 4 DDAT con el 5%. Para
el 17 DDAT 45% la mayor mortalidad registrada fue a los 20 DDAT con el 65% (Tabla
6).
6.2.1.10.TESTIGO
El testigo fue asperjado con agua destilada con Tween al 0.05% (ADET). Se registraron
mortalidades dentro del testigo debido a agentes contaminantes presentes en el ambiento
del cuarto donde se realizaron los ensayos bajo las condiciones de 25 oC de temperatura y
la humedad relativa del 60%. Las mortalidades se presentaron a partir del 6 DDAT con
6% para las ninfas de quinto instar, el día 17 con 12% su máxima mortalidad se presento
a los 20 DDAT con el 22% (Tabla 5).
Los adultos presentaron una mortalidad a partir del día 10 con el 3.3%, el 17 con 10% y
su máxima mortalidad al 20 DDAT con 28.3% (Tabla 6).
Este primer grupo de cepas evaluadas se analizaron los métodos se los mortalidades de
las medias a los 10 DDAT y 20 DDAT. Estadísticamente no hubo ninguna diferencia
significativas para los tratamientos después de 10 DDAT para la variable evaluada
mortalidad en ninfas de quinto instar y mortalidad en adultos, siendo estadísticamente
iguales según Tukey al 5% (Anexo 3 y 4).
49
sus repeticiones, teniendo cepas efectivas para el tratamiento de C. bergi con estos
hongos entomopatógenos (Gráfica 1) (Anexo 5).
50
Tabla 5. Porcentaje de mortalidad de las cepas para las ninfas de quinto instar del primer grupo comparado con el testigo.
GRUPO 1. NINFAS
DDAT
CEPAS CONIDIAS/ML
2 4 6 8 10 12 14 17 20
7
CIAT 227 5.45x10 0 0 0 0 1 2 2 28 66
7
CIAT 231 6.65x10 1 1 2 3 3 3 3 20 53
CIAT 233 4.65x107 1 4 5 5 5 6 6 41 67
7
CIAT 234 6.50x10 0 0 0 0 0 0 3 10 58
CIAT 241 5.45x107 0 0 2 4 7 8 9 19 30
7
CIAT 242 4.50x10 4 11 11 11 14 16 16 45 55
CIAT 250 6.75x107 2 5 6 9 11 11 11 35 52
CIAT 258 6.75x107 2 4 5 5 5 6 8 40 58
7
CIAT 259 4.75x10 1 2 5 6 6 7 7 31 51
TESTIGO Tween 0.05% 0 0 6 6 8 8 8 12 22
Tabla 6. Porcentaje de mortalidad de las cepas para adultos del primer grupo comparados con el testigo.
GRUPO 1. ADULTOS
DDAT
CEPAS CONIDIAS/ML
2 4 6 8 10 12 14 17 20
7
CIAT 227 5.45x10 0 5 6.7 15 16.7 20 21.7 30 56
7
CIAT 231 6.65x10 0 1.7 3.3 5 5 8.3 15 20 48.3
CIAT 233 4.65x107 0 1.7 3.3 3.3 5 11.7 11.7 35 53.3
CIAT 234 6.50x107 0 1.7 5 8.3 10 11.7 13.3 15 31.7
CIAT 241 5.45x107 0 3.3 3.3 8.3 15 23.3 28.3 30 58.3
7
CIAT 242 4.50x10 0 11.7 11.7 13.3 16.6 21.6 30 35 50
CIAT 250 6.75x107 0 6.7 15 16.7 18.3 20 21.7 30 56.7
7
CIAT 258 6.75x10 0 5 5 8.3 13.3 20 21.7 30 55
7
CIAT 259 4.75x10 0 5 5 11.7 15 18.3 18.3 45 65
TESTIGO Tween 0.05% 0 0 0 0 3.3 5 8.3 10 28.3
51
6.2.2. GRUPO 2.
Este grupo de cepas se empezó a evaluar el 1 de mayo del 2001 contó con 9 cepas y un
testigo, realizando evaluaciones cada 2 días durante 20 días, registrando la mortalidad de
las medias de cada una de las cepas.
La mortalidad de los adultos se empezó a observar a los 2 DDAT con el 14%, llegando el
día 16 con 35% y la mayor mortalidad de los adultos se registró a los 20 DDAT con el
50% (Tabla 8).
52
6.2.2.3.CEPA CIAT 261.
La solución de esporas asperjadas para este tratamiento fue de 1.45 x 107 conidias/ml. La
mortalidad de este tratamiento aplicado a las ninfas de quinto instar se observo desde el 2
DDAT con el 19% de mortalidad, aumentando cada día siguiente, hasta llegar el 16
DDAT a 67%, el mayor mortalidad de las ninfas de quinto instar se registró a los 20
DDAT con un 83% (Tabla 7).
La mortalidad de los adultos se observó a los 2 DDAT con el 9% aumentando en los días
siguientes, hasta llegar el día 16 con 33% y la mayor mortalidad se registró a los 20
DDAT con el 49% (Tabla 8).
La solución de esporas asperjadas para este tratamiento fue de 2.68 x 108 conidias/ml. La
mortalidad de las ninfas de quinto instar de este tratamiento se observo a los 8 DDAT con
un 84%, aumentando para cada una de las evaluaciones donde el día 10 DDAT con 94%,
11 con 95%, 12 con 96%, 14 con el 98%, 15 con el 99%, a los 18 y 20 DDAT la
mortalidad era del 100% (Tabla 7).
La mortalidad de los adultos para este tratamiento de observo a los 8 DDAT con el 14%
aumentando hasta llegar el día 18 con el 24% y para el 20 DDAT la mortalidad fue del
47% (Tabla 8).
La solución de esporas aplicadas para este tratamiento fue de 1.08 x 108 conidias/ml. La
mortalidad de las ninfas de quinto instar de este tratamiento se observo a los 8 DDAT con
el 94% de mortalidad aumentando los días 9 con el 99% y el día 11 con el 100% la
mortalidad de este tratamiento se registró antes de evaluar los tratamientos a los 20
DDAT la mortalidad era de un 100% (Tabla 6).
53
La mortalidad de los adultos para este tratamiento se observó desde el 8 DDAT con el
14% aumentando hasta llegar el día 15 con 26% y al 20 DDAT la mortalidad fue del 47%
(Tabla 7).
Los adultos de este tratamiento registraron una mortalidad a los 4 DDAT con el 7%
aumentando para cada fecha de evaluación. El día 15 con el 20% y para el 20 DDAT la
mortalidad fue del 33% (Tabla 8).
La mortalidad para los adultos de registró desde el 3 DDAT con el 3%. Se registraron al
final del ensayo para los 17 DDAT con el 14%, el 18 con el 15% y el 20 DDAT con una
mortalidad del 23% (Tabla 7).
54
La mortalidad para los adultos de este tratamiento se observo desde el 3 DDAT con el 1%
siendo muy bajo el aumento para los días siguientes, la mortalidad mayor se registró el 20
DDAT con el 20% (Tabla 8).
Los adultos para este tratamiento mostraron una mortalidad a partir del 3 DDAT del 2%.
La mayor mortalidad se observo el 20 DDAT con el 21% al final de las evaluaciones
(Tabla 6).
6.2.2.10. TESTIGO.
Los adultos registraron mortalidades observadas después del 9 día con el 2% aumento
para el día 16 con 6%. La evaluación al 20 DDAT mostró una mortalidad del 17% para
este tratamiento (Tabla 8).
55
Los adultos tuvieron diferencias significativas entre el; tratamiento CIAT 261 (20) y el
Testigo (5%) para los 10 DDAT . El coeficiente de variación fue de 64.23% (Anexo 8).
Para los 20 DDAT la mortalidad en quinto instar presentó diferencias significativas para
las cepas CIAT 245 (100%), CIAT 224 (100%), CIAT 230 (89%), CIAT 261 (74.17%),
CIAT 240 (74%) con respecto al testigo (29.3), el coeficiente de variación fue del 24.1%,
ratificando que los tratamientos fueron estadísticamente diferentes y las cepas son
efectivas para el control de C. bergi en condiciones de laboratorio con este sistema de
aspersión (Gráfica1) (Anexo 9).
Para los 20 DDAT las mortalidades en adultos para la cepa CIAT 230 (53%) en
comparación con el testigo 22.3%), con el coeficiente de variación del 39.3% (Gráfica 2)
(Anexo 10).
56
Tabla 7. Porcentaje de mortalidad de las cepas para las ninfas de quinto instar del segundo grupo comparado con el testigo.
GRUPO 2. NINFAS
DDAT
CEPAS CONIDIAS/ML
2 4 6 8 10 12 14 17 20
7
CIAT 230 4.75x10 15 42 50 56 66 74 79 81 89
7
CIAT 237 6.70x10 8 8 9 9 9 30 45 49 58
CIAT 261 1.45x107 19 23 23 24 24 37 47 67 74
CIAT 224 2.68x108 20 40 60 84 94 96 99 100 100
CIAT 245 1.80x108 25 50 63 94 99 100 100 100 100
8
CIAT 239 2.2x10 20 21 24 30 35 36 38 40 56
CIAT 228 2.65x108 18 21 26 28 28 34 40 45 55
7
CIAT 238 6.75x10 5 7 12 14 15 21 30 36 50
8
CIAT 240 1.75x10 5 9 9 9 12 21 31 37 74
TESTIGO Tween 0.05% 1 2 6 6 8 8 12 19 29
Tablas 8. Porcentaje de mortalidad de las cepas para adultos del segundo grupo comparado con el testigo
GRUPO 2. NINFAS
DDAT
CEPAS CONIDIAS/ML
2 4 6 8 10 12 14 17 20
7
CIAT 230 4.75x10 7 10 10 13 19 25 30 35 53
7
CIAT 237 6.70x10 4 14 169 19 21 29 34 35 50
CIAT 261 1.45x107 9 13 17 20 22 26 32 33 49
8
CIAT 224 2.68x10 14 17 17 18 19 19 22 24 47
CIAT 245 1.80x108 14 16 19 20 21 23 26 26 47
8
CIAT 239 2.2x10 7 8 11 13 13 13 49 20 33
8
CIAT 228 2.65x10 3 4 6 8 8 10 14 15 23
CIAT 238 6.75x107 1 2 3 5 5 8 12 13 20
8
CIAT 240 1.75x10 2 3 4 5 5 8 11 12 21
TESTIGO Tween 0.05% 0 0 0 2 2 5 6 6 17
58
100 100
100 89
80 74 74
% MORTALIDAD
65 65
58 58 56 55
60 52 51
40 30 29 28
22
20
0
4
IA 5
IA 0
IA 1
IA 0
IA 8
IA 4
IA 8
IA 9
IA 0
IA 9
Te 41
Te 37
2
1
22
24
23
26
24
22
23
23
25
23
24
25
25
o
2
2
ig
ig
T
T
st
st
IA
IA
IA
IA
IA
C
C
CEPAS
Gráfico 1. Porcentaje de mortalidad de ninfas de quinto instar de C. bergi para los dos grupo de evaluación, comparados con los
testigos de los grupos.
59
100
% MORTALIDAD
80
65
58 57 56 55
60 53 53 50 50 49 48 47 47
40 33 32 28
23 22 21 20
20
0
9
Te 34
Te 28
8
2
1
25
24
25
22
25
23
23
24
23
26
23
22
24
23
24
23
o
o
2
2
ig
ig
T
T
st
st
IA
IA
IA
IA
IA
IA
IA
IA
IA
IA
IA
IA
IA
IA
IA
IA
IA
IA
C
C
CEPAS
Gráfico 2. Porcentaje de mortalidad de adultos C. bergi para los dos grupo de evaluación, comparados con los testigos de los grupos.
60
6.3. SELECCIONAR 5 CEPAS DE HONGOS HYPHOMYCETES.
100
90
% DE MORTALIDAD
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Testigo CIAT 240 CIAT 261 CIAT 230 CIAT 224 CIAT 245
CEPAS
10ddat 20ddat
Comparando los dos grupos de cepas vemos la mayor efectividad de los tratamientos en las
cepas CIAT 245, CIAT 224, CIAT 230, CIAT 261 Y CIAT 240, comparadas con el testigo.
Estadísticamente las cepas antes mencionadas fueron las mejores en el control de C bergi
en condiciones de laboratorio para el estado de quinto instar, por la longevidad del insecto y
la amplia gama de hospederos. El ciclo biológico de C. bergi puede ser de 550 por este
motivo el coeficiente de variación para los ensayos se puede permitir hasta un máximo de
30%, de esta cantidad para abajo los tratamientos muestran una efectividad , hacia arriba
los tratamientos no funcionan o deben ser nuevamente evaluados.
El coeficiente de variación para estas cepas es del 24.09% y la F tabulada es > que la F
evaluada para las repeticiones de los tratamientos Pr > F 0.8009 > 0.41. Según prueba de
comparación Tukey los tratamientos más efectivos por el porcentaje de mortalidad son los
61
de la variable quinto instar para el grupo dos presentando una mayor mortalidad en las
cepas CIAT 245 y CIAT 224 con un 100%, seguidas por CIAT 230, 261 y 240 con
mortalidades de 89, 74.17 y 74 respectivamente, comparadas con el testigo que tuvo una
mortalidad del 29.25%. (Anexo 9)
100
% DE MORTALIDAD
80
60
40
20
0
TESTIGO CIAT 258 CIAT 227 CIAT 250 CIAT 241 CIAT 259
CEPAS
10 DDAT 20 DDAT
Comparando los dos grupos de cepas vemos la mayor efectividad de los tratamientos en las
cepas CIAT 259 perteneciente a Fusarium sp, CIAT 241 perteneciente a Aspergillus
neosartorya, CIAT 250 perteneciente a Fusarium sp, CIAT 227 perteneciente a
Aspergillus flavus y CIAT 258 perteneciente a Metarhizium anisopliae, comparadas con el
testigo.
Estadísticamente las cepas antes mencionadas fueron las mejores en el control de C bergi
en condiciones de laboratorio para el estado de adulto. Por la longevidad del insecto y la
amplia gama de hospederos, el ciclo biológico de C. bergi puede ser de hasta 550 días por
este motivo el máximo coeficiente de variación para los ensayos permitido es de un 30%,
en un porcentaje menor los tratamientos muestran una mejor efectividad , a un porcentaje
mayor los tratamientos no funcionan o deben ser nuevamente evaluados.
62
El coeficiente de variación para estas cepas es del 19.8%. Según prueba de comparación
Tukey los tratamientos más efectivos por el porcentaje de mortalidad son los de la variable
mortalidad en adultos para el grupo uno presentando una mayor mortalidad en las cepas
CIAT 259 (65%), CIAT 241 (58.33%), CIAT 250 (56.67%), CIAT 227 (56.67%) y CIAT
258(55%), comparadas con el testigo que tuvo una mortalidad del 28.33%. (Anexo 6)
Comparando esta metodología con otros trabajos realizados en insectos del suelo como
Aneolamia varia Fabricius (Homoptera: Cercopide) donde se aplicaron suspensiones
sobre las ninfas utilizando un aspersor DeVilvisR adaptado a un compresor con una presión
de 12 PSI las aspersiones se dirigieron al suelo circúndate en la raíz de la planta a una
concentración de 3.3x105 conidias/ml. Las mortalidades oscilaron entre 18.2, 46.4 y 47.6%
para las cepas V1, CIAT 1822 y CIAT 1760 respectivamente comparado con un testigo con
una mortalidad del 20.9% (Arango, 1994). Sin embargo la patogenicidad de las tres cepas
entes mencionadas de M. anisopliae sobre ninfas de A. Varia no presentaron diferencias
significativas en la patogenicidad de las mismas con respecto al insecto. Diferente a los
resultados obtenidos con C. bergi pues la patogenicidad y virulencia fue efectiva para las
cepas encontrando mortalidad en cada una de ellas.
63
virulentos causaron una mortalidad 20 días después para estados inmaduros. Para los
adultos las mortalidades oscilaron entre 46.40 y 53.53% (Badilla, 1991).
64
7. CONCLUSIONES.
65
4. En los ensayos realizados de patogenicidad y virulencia, se determino que las ninfas
de quinto instar de C. bergi son muy susceptibles, presentando mortalidad hasta del
99% a los 13 DDA, corroborando lo citado por Sánchez, 1996.
66
8. IMPLICACIONES.
67
9. RESUMEN.
68
10. BIBLIOGRAFÍA
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38. RODRÍGUEZ, D.A. 1984. Hongos Entomopatógenos registrados en Colombia Revista
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40. TULLOCK, M. 1976. The genus Materhizium Transaction of British Mycological
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tecnology. 5, 185-192.
71
ANEXO 1
REPETIOCIONES
TRATAMIENTO CEPA DÍA 1 2 3 4 5
1
2
3
4
5
6
7
8
9
REPETIOCIONES
TRATAMIENTO CEPA DÍA 1 2 3 4 5
1
2
3
4
5
6
7
8
9
73
ANEXO 2.
VOL. AGUA
Peso Muestra
Formulación:
74
ANEXO 3.
75
ANEXO 4.
76
ANEXO 5.
77
ANEXO 6.
78
ANEXO 7
DEPENDIENTE VARIABLE DE MORTALIDAD NINFAS 10 DDA LOS TRATAMIENTOS
SOURCE DF ANOVA SS MEAN SQUARE F Value Pr > F
Model 16 57089.06 3568.07 13.88 0.0001
error 63 16198.13 257.11
correcte total 79 73287.19
R-Square CV Root MSE NINFAS Mean
0.78 46.73 16.03 34.31
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
CEPA 12 26547.19 4712.27 18.33 0.0001
REP 4 451.86 135.47 0.53 0.7163
B 56 5CIAT 230
B
B 54 5CIAT 054
B
B C 32 5CIAT 007C
B C
B C 28 5CIAT 055
B C
B C 27 5CIAT 239
B C
B C 24 5CIAT 261
C
C 20 5CIAT 237
C
C 20 5CIAT 240
C
C 17 5Testigo
C
C 17 5CIAT 238
C
C 10 5CIAT 228
79
ANEXO 8.
DEPENDIENTE VARIABLE DE MORTALIDAD ADULTOS 10 DDA LOS TRATAMIENTOS
SOURCE DF ANOVA SS MEAN SQUARE F Value Pr > F
Model 16 2584.38 161.52 3.82 0.0001
error 63 2664.38 42.29
correcte total 79 5248.76
R-Square CV Root MSE ADULTOS Mean
0.49 64.23 6.5 10.13
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
CEPA 12 2538.75 211.56 5 0.0001
REP 4 45.63 11.41 0.27 0.8964
80
ANEXO 9.
DEPENDIENTE VARIABLE DE MORTALIDAD NINFAS 20 DDA LOS TRATAMIENTOS
SOURCE DF ANOVA SS MEAN SQUARE F Value Pr > F
Model 16 52861.51 3303.84 14.36 0.0001
error 64 14727.38 230.12
correcte total 80 67588.89
R-Square CV Root MSE NINFAS Mean
0.78 24.09 15.17 62.96
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
CEPA 12 52484.31 4373.69 19.01 0.0001
REP 4 377.21 94.3 0.41 0.8009
81
ANEXO 10.
DEPENDIENTE VARIABLE DE MORTALIDAD ADULTOS 20 DDA LOS TRATAMIENTOS
SOURCE DF ANOVA SS MEAN SQUARE F Value Pr > F
Model 16 12343.78 771.49 4.7 0.0001
error 64 10511.78 164.25
correcte total 80 22855.56
R-Square CV Root MSE ADULTOS Mean
0.54 39.32 12.82 32.59
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
CEPA 12 11370.97 947.58 5.77 0.0001
REP 4 972.81 243.2 1.48 0.2185
82