ENZIMAS

MSc . Cristina López

 Propiedades Generales
• Proteínas biológicas específicas que catalizan rx bioquímicas sin alterar el punto de equilibrio de la
reacción o sin ser consumidas o alteradas.
• Catalizan reacciones fisiológicas específicas.
• Concentraciones en plasma o suero son útiles en diagnóstico de enfermedades.
• Cada enzima contiene un sitio activo y un sitio alostérico.
• Isoenzima: una misma enzima existente en diferentes formas, diferenciándose entre sí por:
• Movilidad electroforética, solubilidad o resistencia a desactivación
• Isoforma: enzima sujeta a modificaciones postraslacionales
• Cofactor: molécula no proteínica necesaria para actividad enzimática.
• Inorgánicos (metálicos o no metálicos): Activadores
• Orgánico (NAD).
• Cofactor unido fuertemente a enzima es llamado grupo prostético.
• Porción de enzima (apoenzima) + coenzima: holoenzima
• Enzimas secretadas inactivas (digestivas): proenzima o zimógeno. Se activan por la hidrolisis de
residuos específicos de aminoácidos.
 Clasificación y Nomenclatura
• Nombre sistemático: define sustrato, rx catalizada y coenzima participante.
Extensos.
• Nombre recomendado: más práctico.
• Identificación por código numérico EC con 4 dígitos separados por puntos
decimales.
• Primer dígito: según clase
• Oxidorreductasa: reacción oxidación-reducción.
• Transferasas: transferencia de grupo distinto a H.
• Hidrolasas: hidrólisis de varios enlaces.
• Liasas: eliminación de grupos sin hidrólisis.
• Isomerasas: interconvensión de isómeros geométricos, ópticos y posicionales.
• Ligasas: unión de dos moléculas de sustrato, con rotura de enlace de ATP.
• Segundo y tercer dígito: subclase de la enzima.
• Cuarto dígito: número serial específico para cada una en una subclase.
• Abreviaturas estándar
 Reacciones
Cinética de enzimas fisiológicas que
disminuyen el
nivel de energía
Rx química sucede si la energía libre o cinética de activación que
disponible es mayor para reactantes que para los los reactantes
productos. deben alcanzar
Energía de activación: la requerida para elevar para que ocurra la
todas las moléculas en 1 mol de un compuesto a reacción.
cierta temperatura.
El grado al que avanza la rx depende del número
de moléculas de sustrato que pasan la barrera de
energía.

Especificidad absoluta: la enzima se combina con

sólo un sustrato y cataliza una sola creación.
Especificidad de grupo: se combinan con los
sustratos que contienen un grupo particular
Especificidad de enlace: específicas a enlaces
químicos. Estado de transición
de complejo ES posee
Especificidad estereoisomérica: combinación con menor energía de
sólo un isómero ótico de cierto compuesto. activación que el
estado de transición
de S solo.
 Factores que afectan las reacciones
Concentración *Unión fácil de sustrato con enzima libre a una concentración de sustrato baja.
de sustrato *Primer orden: velocidad de rx directamente proporcional a concentración de sustrato.
*Orden cero: velocidad depende sólo de la concentración de enzima.
*Constante Michaelis-Menten (Km): indica cantidad de sustrato necesaria para rx en particular
*Paso limitante de la velocidad: formación de producto y enzima por producto ES.
Concentración *Mientras más alta sea la concentración de enzima, la reacción procederá con más rapidez, pues existe más
de enzima enzima para su unión con el sustrato
pH *Intervalo de reacciones enzimáticas fisiológicas: 7.0-8.0
*Cambios de pH pueden desnaturalizar una enzima, cambiando estructuras o cargas en los residuos de
aminoácidos en el sitio activo.
Temperatura *Incremento de 10 grados, la velocidad de rx aumenta casi el doble, hasta la desnaturalización de proteína
(40°-50°)
*Temperatura óptima: cercana a la del medio fisiológico de la enzima
*Congelación y descongelación repetidas: desnaturalizan a la proteína
Cofactores *Esencial o únicamente incrementa la velocidad de reacción.
*Segundos sustratos para reacciones enzimáticas.
Inhibidores *Competitivos: unión al sitio activo. Reversible según concentración
*No competitivo: unión en lugar distinto al sitio activo. Reversible
*No competitivo: unión complejo ES
Gráfica de Lineweaver-Burk. Gráfica recíproca doble de la constante de
Michaelis-Menten, que produce una recta.
Medición y cálculo de la actividad enzimática
• Potenciómetro
• Otras enzimas o reactivos como NAD o NADH para ensayo
enzima-acoplada.
• Las unidades empleadas para expresar las concentraciones de enzima son
unidades de actividad.
• La unidad de actividad enzimática reconocida por el SI es: katal (mol/s).
• La concentración de la enzima se expresa como katals por litro (kat/L). 1.0
UI= 17 nkat
• Inmunoensayo: cuantifica la concentración de enzima por masa.
ENZIMAS DE IMPORTANCIA
CLÍNICA
 Cinasa de creatina
Participa en el almacenaje de fosfato de creatinina de alta energía. Relacionada con la
regeneración de ATP en sistemas contráctiles o de transporte.
Fuente de *En grandes cantidades: músculo esquelético, cardiaco y tejido cerebral.
tejido *En menor cantidad: vejiga, placenta, tubo digestivo, tiroides, útero, riñón, pulmones, próstata, bazo, hígado y páncreas.

Importancia . *Indicador sensible de IMA y distrofia muscular, como Duchenne.

Diagnóstica *Sus fracciones son indicadores más específicos que las concentraciones totales.
*Formas moleculares: CK-BB (cerebral), CK: MB (híbrido) y CK-MM (muscular).
*Suero normal: 94-100% de CK—MM
*Formas atípicas: CK macro: presente en un 0.8-1.6% en suero; CK mitocondrial: no está presente en suero.
Método de *Electroforesis: método de referencia
ensayo *Métodos de masa: sensibles y preferidos para CKMB
*Cromatografía de intercambio iónico; sensible y precisa pero no es satisfactoria.
*Inmunoensayos: reactividad cruzada mínima.
Fuente de *Hemólisis puede causar concentraciones falsas de CK
error *Suero debe almacenarse en la oscuridad a 4°C por 7 días para evitar inactivación de CK.
*Pacientes encamados por largo periodo: CK reducida.
*Personas físicamente bien entrenadas: concentraciones bastantes altas.
Intervalo de
referencia
 Deshidrogenasa de lactato
Cataliza la interconvensión de ácidos láctico y pirúvico. Trasfiere hidrógeno que utiliza NAD+
Fuente de tejido *De manera extensa en el cuerpo
*Cantidades altas: corazón, hígado, músculo esquelético, riñón y eritrocitos.
*Cantidades menores: pulmones, músculo liso y cerebro.
Importancia *Concentraciones altas en diversos trastornos por su actividad extendida en varios tejidos
Diagnóstica *Concentraciones más altas: anemia perniciosa y trastornos hemolíticos
*Valores de LD: bastantes inespecíficos
*Importancia clínica: 5 fracciones que comprende cada una de cuatro subunidades de la enzima
*En suero de individuos saludables, la fracción de la isoenzima principal es LD-2, seguida de LD-1, LD-3,
LD-4 y LD-5

Método de *A través de reacción inversa o directa de: lactato + NAD+🡨-->piruvato + NADH + H+

ensayo *Reacción inversa: tres veces más rápida.
Fuente de error *Cualquier grado de hemolisis, descartar ya que eritrocitos tienen 100 a 150 veces más concentración de
LD que suero.
*LD inestable en suero.
*Analizar de inmediato o almacenar a 25°C y analizar dentro de 48 horas.
Intervalo de LD, 100 a 225 U/L (37°C)
referencia
 Aminotransferasa de aspartato (AST)
Transaminasa que interviene en transferencia de grupo amino entre aspartato y alfa-cetoácidos.

Fuente de tejido *De manera extensa en el tejido humano.

*Concentraciones más altas: tejido cardiaco, hígado y músculo esquelético.
*Cantidades pequeñas: riñón, páncreas y eritrocitos.

Importancia Diagnóstica *Para evaluación de trastornos hepatocelulares y participación del músculo esquelético.
*Concentraciones altas se encuentran en embolismo pulmonar.
*Existe como dos fracciones de isoenzima localizadas en citoplasma y mitocondria de
célula. Citoplasmática predominante en el suero.
Método de ensayo *Principio de Karmen
*pH óptimo: 7.3-7.8

Fuente de error *Evitar hemólisis por incremento de concentración de AST sérica.

*Actividad estable en suero durante 3-4 días a temperatura refrigerada.

Intervalo de referencia 5 a 30 U/L (37°C).

Reacción del método de Karmen
 Aminotransferasa de alanina (ALT)
Cataliza transferencia de un grupo alanina a alfa-cetoglutarato con la formación de glutamato piruvato.

Fuente de tejido *Distribuida en muchos tejidos.

*Concentraciones altas: hígado

Importancia Diagnóstica *Evaluación de trastornos hepáticos.

*Concentraciones altas en trastornos hepatocelulares
*Tejido cardiaco contiene una pequeña cantidad de actividad de ALT

Método de ensayo Reacción enzimática acoplada con LD como enzima indicadora, que cataliza la reducción de
piruvato a lactato como oxidación simultánea de NADH.
pH óptimo: 7.3-7.8

Fuente de error *Estable durante 3 a 4 días a 4 °C.

*Casi no afecta la hemólisis.

Intervalo de referencia 6 a 37 U/L (37°C)

 Fosfatasa alcalina (ALP)
Libera fosfato inorgánico de un éster de fosfato orgánico con la producción concomitante de un
alcohol. Enzima inespecífica. Requiere Mg+ como activador.
Fuente de *Es superficies celulares en la mayor parte del tejido.
tejido *Concentraciones más altas: intestino, hígado, huesos, bazo, placenta y riñón.

*Evaluación de trastornos hepatobiliares y óseos.

*Trastornos hepatocelulares (hepatitis y cirrosis) muestran sólo incrementos ligeros.
*En varios trastornos óseos, como enfermedad de Paget, osteomalacia, raquitismo, hiperparatiroidismo y sarcoma
Importancia
osteogénico.
Diagnóstica *Disminuyen en la condición heredada de hipofosfatasia.
*Isoenzimas principales encontradas en el suero, son derivadas del hígado, hueso, intestino y placenta.
*Fracciones anormales de isoenzima se son: Regan (tejido maligno) y Nagao (variante de isoenzima de Regan).
*Por su no especificidad relativa, no hay un método de elección.
Método de *Técnica de monitoreo continua: permite calcular la actividad de ALP con base en la absortividad molar de p-nitrofenol.
ensayo *Diferenciación de isoenzimas: desactivación térmica e inhibición química.

*ALP 6 veces más en eritrocitos: hemólisis ligeros incrementos.

Fuente de *Actividad en suero se incrementa de 3 a 10% si se mantiene a 25 o 4°C durante varias horas.
error *Dieta puede producir incrementos en grupos sanguíneos B u O.

Intervalo de 30 a 90 U/L (30°C)

referencia
 Fosfatasa ácida (ACP)
Hidrolasa que cataliza reacciones similares a ALP, diferenciándose en el pH de la reacción, teniendo
un pH óptimo de 5.0

Fuente de tejido *En próstata, hueso, hígado, bazo, riñón, eritrocitos y plaquetas.

Importancia Diagnóstica *Auxiliar en la detección de carcinoma prostático, en particular, el metastásico.

*Ningún método es sensible a otro tipo de carcinoma prostático.
*Concentraciones altas en hiperplasia de la próstata y la cirugía prostática.
*Útil en investigaciones forense, en particular en caso de violaciones..
*Actividad de ACP alta en enfermedad ósea.
Método de ensayo *Mismas técnicas que para ALP con pH ácido.
*Técnicas inmunoquímicas para ACP prostática: RIA, contrainmunoelectroforesis e
inmunoprecipitación.
*Ensayo inmuunoenzimático (tándem E) que incluye incubación con p-NFF.
Fuente de error *Separar suero de eritrocitos para evitar fuga de ACP.
*Evitar hemólisis
*Procedimientos de RIA requieren muestra de suero no acidificada.
*Acidificado, la muestra es estable por 2 días a temperatura ambiente.
Intervalo de referencia ACP prostática: 0 a 35 ng/ml
 γ- Glutamiltransferasa (GGT)
Interviene en la síntesis de péptido y proteína, la regulación de las concentraciones de glutatión tisular y el transporte de
aminoácidos por membranas celulares.

Fuente de tejido *En tejido del riñón, cerebro, próstata, páncreas e hígado.
Importancia Diagnóstica *Aumenta en casi todos los trastornos hepatobiliares, siendo este muy sensible.
*Concentraciones más altas se observan en la obstrucción de la vía biliar.
*Incremento en pacientes con fármacos que inducen enzimas: Warfarina, fenobarbital y
fenitoína.
*Puede indicar alcoholismo, principalmente, crónico.
Método de ensayo γ- glutamilo-p-nitroanilido. El residuo de γ- glutamilo es transferido a glicilglicina,
liberando p-nitroanilina, un producto de absorbancia a 405-420 nm.

Fuente de error *Estable

*Hemólisis no interfiere con sus concentraciones por carencia de eritrocitos.

Intervalo de referencia Varón: 6 a 45 U/L (37°C)

Mujer: 5 a 30 U/L (37°C)
 Amilasa (AMS)
Hidrolasa que cataliza la descomposición del almidón y el glucógeno. Requiere iones calcio y cloruro
para su activación.
Fuente de tejido *Células acinares del páncreas y las glándulas salivales.
*Concentraciones menores: músculo esquelético, intestino delgado y trompas de Falopio.
Importancia *Pancreatitis aguda.
Diagnóstica *Es un hallazgo no específico por incrementar en otros trastornos de tejido.
*Lesiones de las glándulas salivales, como paperas y parotiditis.
*Posible uso diagnóstico de las mediciones de isoenzima S y P de AMS.
Método de ensayo *Método amiloclástico: Interacción AMS y sustrato de almidón con yodo.
*Método sacarogénico: sustrato de almidón y moléculas de carbohidrato de AMS.
*Método Cromogénico: almidón y colorante cromogénico.
*Monitorio continuo.
Fuente de error *En suero y orina: estable
*Poca pérdida de actividad a temperatura ambiente por una semana.
*Valores pueden ser normales en pancreatitis aguda con hiperlipemia por supresión de AMS sérica por
los triglicéridos.
*morfina y otros opiáceos: dan lugar a concentraciones falsamente altas.
Intervalo de Suero: 25 a 130 U/L
referencia Orina: 1 a 25 U/hora
 Lipasa (LPS)
Hidroliza los enlaces de éster de las grasas para producir alcoholes y ácidos grasos.
Fuente de tejido *Sobre todo en páncreas.
*En estómago e intestino delgado.

Importancia Diagnóstica *De manera exclusiva para diagnóstico de pancreatitis aguda.

*Útiles para diferenciar el incremento de AMS sérica como resultado de interacción
pancreática como salival.
*Isoenzima L2 es la más específica y sensible a nivel clínico.
Método de ensayo *Estimación de ácidos grasos liberados
*Métodos turbidimétricos. Las grasas en disolución crean una emulsión turbia.
*Colorimétricos: reacciones acopladas con enzimas como la peroxidasa

Fuente de error *Estable en suero, con pérdida insignificante de actividad a temperatura ambiente durante una
semana o tres semanas a 4°C.
*Evitar hemólisis porque hemoglobina inhibe actividad de LPS sérica.

Intervalo de referencia 0 a 1.0 U/ml

 Deshidrogenasa de glucosa-6-fosfato (G-6-PD)
Oxidorreductasa que cataliza la oxidación de glucosa-6-fosfato a 6-fosfogluconato o lactona correspondiente

Fuente de tejido *Corteza suprarrenal, bazo, timo, nodos linfáticos, glándula mamaria lactante y eritrocitos.
*Poca actividad: en suero normal

Importancia Diagnóstica *Su interés se centra en el eritrocito.

*Su deficiencia da como resultado un suministro inadecuado de NADPH y en la capacidad
para mantener concentraciones reducidas de glutatión.
*Su deficiencia es un rasgo hereditario relacionado con el sexo.
*Altas concentraciones en suero: en infarto de miocardio y anemias megaloblásticas.
Método de ensayo *Se emplea un hemolizado de eritrocitos para valorar la deficiencia de la enzima.
*Se basa en la ecuación:

Intervalo de referencia 10 a 15 U/g Hgb.