UNIVERSIDAD DE ORIENTE

NÚCLEO DE MONAGAS
ESCUELA DE CIENCIAS DEL AGRO Y DEL AMBIENTE
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA AGRONÓMICA
SUB COMISIÓN DE TRABAJOS DE GRADO

PROYECTO DE TRABAJO DE GRADO

MODALIDAD DE TRABAJO DE GRADO: Investigación

DEPARTAMENTO: INGENERÌAGRONÒMICA

TÍTULO DEL PROYECTO: Desarrollo de vitroplantas de cala blanca

(spathiphyllumsp.) utilizando diferentes dosis
de Bencil Adenina (BA) y Ácido
Naftalenacético (ANA).

RESPONSABLE: Evelyn Patricia Carvajal Jiménez

C.I. 16.142.826
CORREO: [email protected]
TELÉFONOS DE CONTACTO: 0424-9642016

TUTOR: MSc, Víctor Alejandro Otahola Gómez.

CO- TUT.OR: Ing. Eneida C. Otahola Bello

COLABORADOR:

FUENTE DE FINANCIAMIENTO: Universidad de Oriente y propio

FECHA DEL PROYECTO:

INTRODUCCIÓN
 La producción de flores y plantas ornamentales en Venezuela se ha visto limitada,
fundamentalmente por la falta de atención y exigencia que este tipos de plantas requieren,
tal es el caso de la cala blanca y muchas otras especies de plantas que son utilizadas como
flores de cortes, como plantas de macetas y como ornamentales de invernadero, entre otras
razones por no disponer de tecnologías eficientes para la propagación acelerada de
especies y variedades de interés, además no se cuenta con la semilla de calidad adecuada y
diversidad de géneros. Sin embargo, en los últimos años se ha incrementado la demanda
de plantas ornamentales, razón por la cual se ha recurrido a nuevas técnicas de cultivos
que permitan la multiplicación masivade dichas especies; una reducción en el ciclo de
crecimiento y la obtención de plantas con mejor calidad fitosanitaria.Así como también los
costos elevados de los sustratos, la preocupación creciente por el deterioro de los
ecosistemas y la sobreexplotación de los recursos naturales propician la búsqueda
constante de sustrato alternativos que cumplan con las funciones de sostén y de nutrición y
que sean materiales disponibles, económicos y no dañen el ambiente. (Estrada et al.,
2016).

El cultivo comercial de Spathiphyllum se lleva a cabo en varias zonas del mundo.

Varios cultivares populares están disponibles y se reproducen en Florida, USA, como en los
invernaderos de Europa. Sin embargo, a medida que el mercado se vuelve más sofisticado,
los cultivadores utilizan cultivares mejorados y seleccionados para áreas específicas y año
con año las listas de variedades preferidas de Spathiphyllum cambian debido a la pérdida o
ganancia de interés por parte de los productores y del público en general (Padilla, 2012).

Según Cordero (2001), la implementación de la técnica de cultivo de tejidos,

consiste en aislar una porción de la planta (explante) y proporcionar artificialmente las
condiciones físicas y químicas apropiadas para que las células expresen su potencial
intrínseco o inducido, técnica que ha logrado dar una respuesta oportuna a las empresas
interesadas en obtener grandes volúmenes de material de buena calidad con el fin de
cumplir las exigencias del mercado nacional e internacional.

Lo que se pretende con el presente proyecto es utilizar las ventajas que ofrece el
cultivo in vitro, para evaluar el efecto de diferentes dosis de BA y ANA sobre el
crecimiento y multiplicación de calas blancas (Spathiphylum sp), ya que por su rápida
reproducción y multiplicación de cultivos en poco espacio y poco tiempo se podrá adquirir
plantas sanas y la posibilidad de obtener material de siembra para viveros y lo que se
requiera en campo. Es así como la siembra en medio de cultivo de tejidos permite mantener
estas especies de plantas en constante multiplicación utilizando técnicas como medio de
cultivo.
 OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

Evaluar el efecto de diferentes dosis de Bencil Adenina (BA) y Ácido

Naftalenacético (ANA) sobre el crecimiento y multiplicación de vitroplantas de Calas
Blancas (Spathiphyllumsp.).

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Determinar el efecto de diferentes dosis de BA y ANA sobre la sobrevivencia de

vitroplantas de calas blancas.

 Evaluar el efecto de diferentes dosis de BA y ANA sobre la regeneración in vitro de

calas blancas.

 Evaluar el efecto de diferentes dosis de BA y ANA sobre el crecimiento de brotes de

calas blancas en condiciones in vitro.

MARCO TEÓRICO
Antecedentes de la investigación

García et al. (2015) en su trabajo “Efecto de 6-BAP en la multiplicación in

vitro de Spathiphyllum wallisii Regel”, que tuvo como objetivo determinar el efecto del
regulador de crecimiento sobre el incremento del número de brotes in vitro, Utilizaron
ápices meristemáticosde plantas madres, pasando previamente por un proceso de
desinfección, desarrollaron un experimento con diferentes concentraciones de 6-BAP (2,0,
4,0, 6,0 mg l-1). El medio de cultivo estaba compuesto por las sales y vitaminas MS, 0,05
mg l-1 de ácido indolacético (AIA) y 30 g l -1 de sacarosa. Emplearon recipientes de cultivo
de 500 ml de capacidad con 70 ml de medio de cultivo y 20 explantes en cada uno. Los
recipientes fueron colocados en la cámara de crecimiento de luz solar a 27± 2°C y un
fotoperíodo de 13/11h de luz/oscuridad con un rango de intensidad luminosa aproximada
entre 23,2 y 44,5 µmol m-2 s-1 durante 21 días, cuantificando el número de brotes por
explante, momento en el cual el material vegetal fue subcultivado por separación de los
brotes individualmente. Estos fueron colocados en el mismo medio de cultivo del cual
procedían. Realizaron tres subcultivos en las mismas condiciones. Se demostró la
influencia que ejerce el regulador del crecimiento en el número de brotes obtenidos en cada
subcultivo y a medida que aumenta el número de subcultivos. En el tercer subcultivo se
obtuvieron 7,2 brotes por explante tan solo a los 21 días de cultivo.

Das et al. (2000) emplearon en un medio de cultivo concentraciones de 6-BAP

inferiores (1mg l-1) y obtuvieron siete brotes por explante pero en el transcurso de 45
días.La disminución del tiempo y la obtención de alto coeficiente de multiplicación es un
factor muy importante a la hora de programar un proceso de producción para la
propagación in vitro en esta especie.En cada subcultivo a los 21 días de cultivo la mayoría
de los brotes obtenidos alcanzaron 2,0 cm de longitud.Los resultados mostraron que el
mayor número de brotes por explante se logró cuando se utilizaron 4 mg l -1 de 6-BAP en el
medio de cultivo en los tres subcultivos de multiplicación que realizaron.

Hernández et al. (2009) en su trabajo titulado: Empleo del Pectimorf en la

Micropropagación de Spathiphyllum sp, el cual tuvo como objetivo estandarizar una
metodología sostenible para lograr altas tasas de multiplicación de plantas de
Spathiphyllum sp, en el cual se empleó como explante el rizoma aéreo pasando por un
proceso de desinfección. Luego para el establecimiento in vitro, cortaron rodajas del rizoma
de 2 a 3 mm de espesor. Posteriormente lo colocaron en el medio de cultivo
Sales y vitaminas de MS + BAP (1mg.L -1) + sacarosa (30g.L-1) + Gelrite (2g.L-1); el pH
ajustado a 5,8.En este caso desarrollaron un experimento para sustituir el BAP por
diferentes concentraciones de Pectimorf, resultando los tratamientos de la forma
siguiente:Control (1mg.L-1) de BAP, 5 mg.L-1 de Pectimorf + 0,5 mg.L -1 de BAP, 10 mg.L-
1
de Pectimorf + 0,5 mg.L-1 de BAP y 10 mg.L-1 de Pectimorf.
Las evaluaciones se realizaron a los 7, 15 y 30 días posteriores a la siembra en 10 plantas
por tratamiento en las variables altura de las plantas (cm) y número de hojas.
A los 30 días evaluaron el número de brotes y desarrollo del sistema radical, evidenciando
que no encontraron diferencias significativas entre los tratamientos en cuanto a la altura de
las plantas y el número de hojas en ninguna de las evaluaciones realizadas. El tratamiento
donde se redujoel BAP a la mitad de la concentración del medio control (0,5 mg.L -1) y la
adición de 10 mg.L-1 de Pectimorf produjo la mayor cantidad de brotes en las plantas. Los
resultados validan el empleo del Pectimorf para la propagación in vitro de esta especie
ornamental de alta demanda nacional.

Por su parte, Liendo y Mogollón (2009), en su trabajo sobre multiplicación clonal in

vitro del anturio (Anthurium andraeanum Lind. cv. Nicoya), el cual tuvo como objetivo la
multiplicación clonal, a partir de brotes iniciados in vitro, lo iniciaron en tres fases:
multiplicación de brotes, enraizamiento de brotes y aclimatación de las vitroplantas. En la
fase de multiplicación y enraizamiento seleccionaron brotes uniformes desde un plantel
madre de vitroplantas, las cuales caracterizaron considerando la altura y número de hojas,
aplicando un protocolo de desinfección. El medio de cultivo estuvo conformado por las
sales de Murashige y Skoog al 100% y sacarosa a 30 mg.L-1en las dos fases de cultivos.

En la multiplicación fueron probadas las combinaciones de benciladenina (BA) a 1

y 2 mg.L-1en combinación con el ácido naftalenacètico (ANA) a 0; 0,01 y 0,1 mg.L -1. En el
enraizamiento el ANA loprobaron en dosis de 0; 0,1; 0,25 y 0,5 mg.L -1, excluyendo la BA.
En ambas fases el estado físico del medio de cultivo fue semisólido (agar a 7 mg.L -1). Los
cultivos fueron colocados a 25± 2°C, luminosidad de 67,7 y 135,1 µmol m-2 s-1 para la fase
de multiplicación y enraizamiento, respectivamente, y fotoperiodo de 16 horas diarias de
luz. En la fase de multiplicación evaluaron longitud de brotes y numero de brotes por
explante, al inicio y final del ensayo; en la fase de enraizamiento, el número y longitud
máxima de raíces. Teniendo en cuenta que la fase de aclimatación de las vitroplantas la
realizaron con las plantas obtenidas de la fase de enraizamiento, colocadas en dos
ambientes (cámara húmeda y nebulización) en un sustrato comercial. Determinando en esta
fase el porcentaje de sobrevivencia.

En cuanto a los resultados obtenidos, la mayor tasa de multiplicación la obtuvieron

a los dos meses de cultivo con BA 1 mg.L-1 libre de auxinas, es decir, sin ANA. Para la
longitud del brote, el mayor valor correspondió a la combinación BA 1 mg.L -1 y ANA 0,01
mg.L-1 con 0,91 cm, el cual supero a la combinación BA 2 mg.L -1 y ANA0,1 mg.L-1 que
alcanzo el menor promedio con 0,61cm. En el enraizamiento de los brotes, ocurrió
rizogénesis en todos los tratamientos, por lo que la adición de auxinas al medio de cultivo
no fue indispensable para que dicho proceso ocurriera. La suplencia de ANA en bajas
concentraciones (0,1 mg.L-1), indujo un incremento en el número de raíces por brotes (5,49)
y una máxima longitud de raíces (2,59 cm), en un corto periodo de tiempo de 30 días. Es
así como a medida que incrementaron la dosis de ANA, observaron que las raíces formadas
fueron más gruesas y carnosas.

En la fase de aclimatación de las vitroplantas, llevada a cabo bajo dos condiciones

ambientales: cámara húmeda y nebulización, observaron luego de 15 días ex vitro que la
sobrevivencia fue superior a 70% en ambas condiciones, presentando mejor apariencia las
aclimatas en la cámara húmeda.

Generalidades del cultivo

Botánica de Spathiphyllum

Spathiphyllum pertenece a la familia Araceae, tiene alrededor de 41 especies

originarias desde Panamá, Colombia, Ecuador, Venezuela, el Archipiélago Malayo, Costa
Rica y las Filipinas, donde crecen en las áreas más bajas de la selva tropical húmeda (Chen
et al., 2003).
 El spathiphyllum es una planta perenne de tallos cortos, peciolos alargados
envueltos en la base de las hojas. Las hojas son lanceoladas, lisas, de color verde oscuro
con peciolos largos y nervaciones prominentes en el envés. Presenta una espata blanca o
verde sostenida por un peciolo, que encierra a un espádice de color blanco. El pedúnculo de
la inflorescencia es de igual o mayor longitud que el del peciolo. Tiene flores masculinas
en la parte media y ápice y femeninas en la base del espádice, al madurar da lugar a una
baya con varias semillas; cada flor se encuentra envuelta en un perigonio de tépalos; la flor
masculina tiene seis estambres, la flor femenina presenta un ovario trilocular, cada lóculo
con uno a siete óvulos. Una característica propia del género es que el espádice siempre es
más corto que la espata. (Nicolson, 1968).

Según Chen et al. (2003) los cultivares de Spathiphyllum son populares para plantas
de interior en parte debido a su gran selección de variedades desde alturas de 31
centímetros hasta de 1,2 metros. También son fáciles en su mantenimiento y son plantas
atractivas, con follaje verde obscuro que contrasta con las flores blancas en forma de lirios.
Se cultivan en una gran variedad de macetas que se adaptan a cualquier lugar. La NASA le
ha dado a estas plantas el premio del Estudio de Aire Limpio por su habilidad de remover
formaldehído, benceno y monóxido de carbono de aires de interior. Debido a sus elegantes
blancas espatas, follaje de verde intenso y una habilidad de tolerar bajas exposiciones de
luz, el lirio de la paz se ha convertido en una planta de follaje ornamental muy popular.

Taxonomía de Spathiphyllum

Grayum (2003) describe la taxonomía de Spathiphyllum de la siguiente manera:

Taxonomía
Reino Plantae
División Magnoliophyta
Clase Liliopsida
Orden Alismatales
familia Araceae
Tribu spathiphylleae
Genero Spathiphylum
 Schott in H.W. Schott&
S.L. Endlicher(1832)

Cultivo deSpathiphyllum

Las plantas requieren de sombra para crecer, no tolera el sol directo pues ocasiona
amarillamiento y quemaduras de las hojas. Necesita una atmósfera húmeda; suelos ricos en
materia orgánica, sueltos, porosos, ligeros, con buena retención de humedad, pero con buen
drenaje para evitar encharcamientos que dañen las raíces. Se recomienda aplicar riegos
regulares (Gayosso, 2015).

Propagación

La propagación puede realizarse por división, separación de tejidos, o por

germinación de semillas. Los brotes de las bases se pueden separar de la planta madre y ser
sembradas en macetas con sustratos de siembra. La propagación por medio de tejidos es la
forma de propagación más común. Las plántulas son cultivadas en un medio de cultivo
poroso plástico. Luego son pasadas a contenedores más grandes y por último a una maceta
final ya que esto presenta una ventaja por no ser tan dificultosa su producción para
satisfacer la demanda. Los métodos de propagación por semillas no promueven la
expansión de las especies ya que la producción de semillas es irregular en países con
temperaturas templadas. El método de propagación in vitro es ahora usado en gran escala
para la producción de plantas ornamentales para así suplir la creciente demanda de los
mercados domésticos y para la exportación. Sin embargo, al crecimiento de la demanda
comercial de plantas de spathiphyllum, solo se encuentran pocos protocolos publicados
para la propagación de tejidos (Dewir et al., 2006).

Requerimientos agroecológicos

El cultivo requiere alta intensidad luminosa, aunque se adapta a interiores que

tienen poca luz. No tolera el sol directo, ya que se queman las hojas(Espinoza et al., 2012).
En cuanto a lahumedades importante evitar el exceso pues se pueden tener problemas
de enfermedades graves. Se debe de regar de dos a tres veces a la semana, dependiendo de
la época del año. Se recomienda el uso de sustratos ligeros, esto se consigue usando
mezclas de suelos de tipo orgánico. Puede usarse arcilla, hoja, corteza de pino, etcétera,
pero también un poco de sustratos de tipo inorgánico que sean muy ligeros y conserven
mucha humedad. (Espinoza et al., 2012).

Esta planta se adapta bien a casi todo los climas. Cuando mejor crece la planta es
cuando se mantiene a temperaturas alrededor de 20-22 oC ya que no suele tolerar los fríos ni
las heladas; así que debe tener como límite inferior 15 oC. En cuanto al riego se debe hacer
de forma constante para que el medio de cultivo se mantenga húmedo. Se debe mantener el
medio de cultivo húmedo para que la planta pueda desarrollarse de forma adecuada.
Durante el invierno se reduce la frecuencia de los riegos pero siempre se debe mantener el
medio de cultivo húmedo. Se debe tener en cuenta la sombra en la que se encuentra la
planta, el clima y la localidad donde se está cultivando. Se debe de mantener la humedad
relativa alta, con lo cual se puede realizar riegos al suelo o por aspersiones de agua sobre el
follaje, siempre teniendo los cuidados para no dañar a las plantas. En climas cálidos es muy
probable que se necesite dar un riego todos los días y en algunos días debe de darse, hasta
dos veces por día. Es muy recomendable que junto con este se adicione la fertilización.
(Espinoza et al., 2012).

Cultivo de tejidos in vitro

El cultivo de tejidos in vitro es un conjunto de procedimientos biotecnológicos que

permite la producción de plantas en condiciones asépticas sobre medios nutritivos
artificiales apropiados y en un ambiente controlado. “In vitro” proviene del latín y significa
“en vidrio”, lo cual se refiere a que esta técnica se lleva a cabo principalmente en
recipientes de este material, tales como frascos o tubos de ensayo (Tombion, 2023).

El mismo autor indica que esta metodología se puede emplear tanto en el área de la
investigación como en la producción comercial. Entre sus aplicaciones de mayor
importancia se destacan la propagación vegetativa o micropropagación, la obtención de
plantas libres de enfermedades sistémicas, la conservación e intercambio de germoplasma,
el mejoramiento genético, el rescate de embriones, la producción de metabolitos
secundarios, la germinación de semillas y el cultivo de granos de polen, óvulos y
protoplastos.

El cultivo de tejidos, como técnica, consiste esencialmente en aislar una porción de

la planta (explante) y proporcionarle artificialmente las condiciones físicas y químicas
apropiadas para que las células expresen su potencial intrínseco o inducido. Es necesario,
además adoptar procedimientos de asepsia para mantener los cultivos libres de
contaminación microbiana (Roca y Mroginski, 1991).

El fundamento del cultivo de tejidos vegetales se basa en la teoría de la

totipotencialidadcelular, la cual indica que se puede obtener una planta entera a partir de
cualquier célula viva bajo condiciones controladas de cultivo. Para ello es indispensable
lograr la desdiferenciación de la célula inicial (es decir, la transformación y pérdida de las
características de especialización de una célula para dar lugar a células de tipo
meristemático) y, posteriormente, la rediferenciaciónde esta célula de partida (proceso por
el cual la célula cambia su morfología a una de mayor especialización). En resumen, una
célula de una hoja, una raíz, un tallo o una flor puede desdiferenciarse para luego
rediferenciar yemas y, finalmente, originar una planta completa en un espacio reducido y
bajo condiciones ambientales controladas (Tombion, 2023).

La porción de material vegetal con la que se inicia el cultivo in vitro se llama

explantoo explante y es, un fragmento de una planta madre del cual se obtiene una
descendencia uniforme con plantas genéticamente idénticas (clones). Estas porciones
vegetativas pueden ser:tejidos organizados, órganos o parte de ellos (fragmentos de raíces,
de hojas, de tallos, embriones, semillas, anteras, óvulos, meristemas, yemas);tejidos
indiferenciados, como callos, protoplastos y suspensiones celulares.El empleo de cada uno
de estos dependerá de los objetivos de la investigación o de la producción que se desee
realizar.

Ventajas y limitaciones de las técnicas de cultivo de tejidos

 Las principales ventajas de la utilización de las técnicas de cultivo de tejidos son:
Control del medio extracelular, se puede controlar en un cultivo distintos factores como:
pH, temperatura, humedad, presión osmótica, tensiones de O 2 y de CO2, concentración de
nutrientes, etc. Homogeneidad de la muestra, las células de un cultivo son bastante
homogéneas en comparación con la variabilidad existente entre plantas de experimentación.
Disminución del gasto, si se experimenta con fármacos, al utilizarse cultivos de células se
utilizan concentraciones muy bajas de dichos productos. Recientemente la utilización de
sistemas robotizados que utilizan pequeños volúmenes, permite la realización de
determinados trabajos que necesitan un gran número de determinaciones repetitivas en
diferentes tiempos o con diferentes concentraciones de productos (García, 2002).

El mismo autor indica que también existen limitaciones como por ejemplo 1)
excesiva sensibilidad, el crecimiento de las células es relativamente lento y es dependiente
en muchos casos de factores no del todo conocidos. Además, existen contaminantes como
hongos, levaduras, bacterias, micoplasmas y virus que suelen tener un crecimiento más
rápido y pueden llegar a matar las células en cultivo. 2) Límite de producción,
generalmente el límite de producción de un laboratorio normal es menor a 10g de células.
3) Inestabilidad, muchas líneas celulares continúas son inestables por ser aneuploides.

Medios de cultivo

El medio de cultivo es definido como el sustrato capaz de aportar las sustancias

esenciales requeridas para el crecimiento y el desarrollo del vegetal cultivado en
condiciones in vitro. El control de su elaboración, conservación y uso asegura exactitud,
confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos (Tombion, 2023).

Perea (2009) señala que el desarrollo de las diferentes vías del cultivo de tejidos se
basa en la capacidad de las células vegetales para regenerar una planta completa idéntica a
la original. Esto permite obtener numerosos cambios fisiológicos, genéticos y morfológicos
con el empleo de reguladores de crecimiento, como auxinas, citoquininas, giberelinas y
poliaminas, los cuales originan una serie de reacciones en las células vegetales que alteran
procesos metabólicos y posibilitan obtener resultados de interés en el área de la
biotecnología vegetal. De acuerdo a la misma autora los sistemas in vitro agrupan
básicamente cinco etapas que consisten en: 1) selección de la especie, 2) establecimiento
del medio de cultivo, 3) desarrollo del tejido, 4) enraizamiento y 5) acondicionamiento,
aclimatación. Cada una de estas etapas son importantes dependiendo del objetivo que el
investigador se proponga realizar.

Reguladores de crecimiento

A partir de la biotecnología se han podido fabricar de manera sintética reguladores

de crecimiento que pueden imitar el rol de las fitoreguladores de manera natural. Existen
distintos tipos de reguladores capaces de promover o inhibir el crecimiento vegetal.
Asimismo, los reguladores se han podido clasificar en diez tipos diferentes, de acuerdo a la
actividad o capacidad estimulante que cada uno pueda poseer en el crecimiento vegetal, en
un órgano o procedimiento único como la fotosíntesis, maduración de frutos entre otros
Además pueden ser clasificados según su estructura molecular, actividad a nivel vegetal,
efectos inhibitorios o estimulantes, entre otras clasificaciones (Alcantara et al., 2019).

El mismo autor indica que las auxinas son un tipo de fitoregulador especializado en
diferentes procesos a nivel vegetal. Los principales puntos de acción se encuentran a nivel
celular, donde tienen la capacidad de dirigir e intervenir en los procesos de división,
elongación y diferenciación celular. Esta suele encontrarse muy bien distribuida en la
mayoría de las células y tejidos vegetales, por lo que puede interferir en procesos de
diferenciación unicelular, pluricelular o incluso tener acción en los diferentes tejidos
vegetales. Dadas las funciones que posee esta hormona es considerada como un tipo de
morfógeno capaz de inducir la diferenciación celular de órganos como raíces, tallos y hojas,
y así mismo, dar origen a ellos. Por su parte, Perea (2009) indica que las auxinas más
usadas son el ácido indol-3-butírico y el ácido naftalenacético que sirven para el
enraizamiento. Deben ser utilizadas en concentraciones muy bajas con el fin de no causar
efectos inhibitorios ni atrofias en células y tejidos.
Citoquinas

Las citoquinas tienen la capacidad de estimular e inducir una alta proliferación y

división celular, suelen inducir la iniciación y elongación de las raíces al igual que pueden
activar la senescencia de las hojas, permitiendo estimular el desarrollo fotomorfogénico
vegetal y jugar un rol importante en el aumento y generación de la producción de brotes a
nivel vegetal. Se sabe que estas fitohormonas suelen producirse de manera abundante en la
punta de la raíz y suelen transportarse principalmente por el xilema vegetal hacia las partes
aéreas de la planta. (Alcantara et al., 2019).Las principales citoquinas son: 6
bencilaminopurina (BAP), thidiazuron (TDZ), (N 6- furfuriladenina) kinetina, N 6 (2-
isopentil) adenina (2-iP) (Perea, 2009).

Su efecto en el sistema vegetal casi siempre suele acompañarse de la presencia de

auxinas debido a su alta complementariedad en la estimulación del crecimiento y desarrollo
vegetal, puede inducir la proliferación de células no diferenciadas (meristemos o callos
vegetales), mientras que una mayor concentración de auxinas podría generar un incremento
en la producción de raíces, una concentración mayor de citoquinas puede inducir una mayor
producción de brotes vegetales, lo cual puede sugerir que una concentración ideal de ambas
fitohormonas en un medio de cultivo estable o en un sustrato adecuado podrían mejorar y
acelerar el crecimiento vegetal (Alcantara et al., 2019).

METODOLOGÍA

El experimento se realizará en el Laboratorio de Biotecnología del Núcleo de

Monagas de la Universidad de Oriente, ubicado en el Campus Juanico, sede de los estudios
de Postgrado del Núcleo, ubicado en la Urbanización Juanico de la ciudad de Maturín,
estado Monagas,

Para cumplir con los objetivos de evaluar el efecto de diferentes dosis de BA y

ANA sobre la sobrevivencia, regeneración y crecimiento de brotes de calas blancas en
condiciones in vitro se utilizará la siguiente metodología:

Material vegetal

Se utilizarán vitroplantas que se encuentran en condiciones in vitro en el

Laboratorio de Biotecnología, obtenidas de trabajos anteriores, por lo cual no será necesario
realizar ningún tratamiento de desinfección de los explantes. Se extraerán explantes o
brotes de las vitroplantas a las cuales se les cortará las raíces y hojas grandes de manera que
solo los tallos con las hojas nuevas en formación, (Figura 1) este procedimiento se realizará
en la cámara de flujo laminar.

Figura 1. Plantas de cala Blanca (Spathiphyllumsp) presentes en el laboratorio de

Biotecnología UDO Monagas y que serán utilizadas como fuente de los explantes

A fin de evaluar el efecto de las dosis de BA y ANA se establecerá un experimento

donde se utilizarán tres dosis de BA (0, 1,0 y 2,0 mg/L) y tres dosis de ANA (0, 0,5 y 1,0
mg/L), tal y como se muestra en el Cuadro 1. En total serán nueve tratamientos con tres
repeticiones y cinco frascos por unidad experimental para un total de 135 frascos. Los
frascos a utilizar serán de una capacidad de 125 ml y con tapas plásticas resistentes al calor
generado en el autoclave. El experimento se establecerá bajo un diseño completamente
aleatorizado en arreglo factorial (3 x 3).

Cuadro 1. Tratamientos propuestos para evaluar el efecto de tres dosis de Ba y tres

dosis de ANA sobre el crecimiento de vitroplantas de spathiphyllum

Tratamientos Dosis de BA Dosis de ANA

(mg/L) (mg/L)
T1 0,00 0,10
T2 0,00 0,50
T3 0,00 1,00
T4 1,00 0,10
T5 1,00 0,50
T6 1,00 1,00
T7 2,00 0,10
T8 2,00 0,50
T9 2,00 1,00

La inoculación se realizará utilizando medio con macrosales, microsales y vitaminas

MS, suplementando con 30 g/l de sacarosa, 0,1 g de myoinotisol y solidificando con 6 g de
agar por litro ajustando el pH a 5,8 y vertidos en frascos de compota (125 ml) de diámetro
4,5 cm de diámetro y una altura de 7 cm. que contendrán 20 ml de medio de cultivo MS
con las respectiva combinación de los reguladores de crecimiento.

La siembra se realizará manteniendo las normas de asepsia y bioseguridad

establecidos en el Laboratorio de Biotecnología. Se retiraran las vitroplantas que serán
utilizadas como fuentes de explantes y serán colocadas cuidadosamente sobre las cerámicas
previamente esterilizadas, para proceder inmediatamente a limpiar los explantes, separando,
eliminando las raíces y eliminando las hojas, dejando un explante de aproximadamente 1 a
1,5 cm de alto, el cual se colocará en los frascos con el medio de cultivo.
 Una vez realizada la siembra en los 135 frascos se colocarán los mismos en la
cámara de crecimiento con fotoperiodo de 12 horas luz y 12 horas de oscuridad a 23ºC ±
2ºC, durante 60 días, tiempo durante el cual se tomara las respectivas evaluaciones.

Variables a evaluar:
 Sobrevivencia de los explantes. Se realizarán evaluaciones discriminando entre explantes
vivos y explantes muertos en cada uno de los tratamientos, iniciando a los 7 días después de
la siembra, en evaluaciones semanales hasta los los 60 días que durará el experimento.
 Altura de los brotes. Para ello se utilizarán reglas graduadas y con ayuda de marcadores se
marcará en el frasco la altura del brote cada 15 días, para un total de cuatro evaluaciones.
 Numero de brotes, estos se contarán en los mismos días en que se evalué la altura de los
brotes.

Todas las variables serán medidas a todas las plántulas de cada tratamiento. Los
resultados se analizaran por medio de un análisis de varianza (ANAVA) y las posibles
diferencias entre los tratamientos se obtendrán con la prueba de mínima diferencia
significativa (MDS) al 5%, utilizando para el análisis una hoja de cálculo elaborada en el
Laboratorio de Biotecnología.

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
2023 2024
Actividades Jul. Agost. Sept. Oct. Nov. Dic. Ene. Febr. Marzo Abr. Mayo Junio
Elaboración del
proyecto
Entrega del
Proyecto
Establecimient
o del
experimento
Evaluación de
variables
Análisis de
resultados
Redacción de
Trabajo Grado
Presentación y
Discusión TG

PRESUPUESTO
 SUB- SUB-
PRECIO TOTAL TOTAL
RENGLÓN CANT. UNIDAD DESCRIPCIÓN UNIT. (BS) (BS.) ($)
 MATERIALES
Cloro 1 Litro Cloro comercial 3,50 3,50 0,78
Desinfectante* 1 Litro Desinfectante 3,00 3,00 0,67
Lavaplatos 1 Litro Lavaplatos Líquido 3,80 3,80 0,84
Rollo de toallin 1 Rollo Papel Absorbente 1,50 1,50 0,33
Alcohol 1 Litro Alcohol absoluto 7,00 7,00 1,56
Agua Oxigenada 0,5 Litro Agua Oxigenada 3,50 1,75 0,39
Envoplast 1 Rollo Envoplast 4,50 4,50 1,00
Cinta Plástica 1 Rollo Cinta transparente 5,00 5,00 1,11
Lápices Creyón 3 Lápiz Lápiz de grafito 2,00 6,00 1,33
Libreta de
2 Libreta Carpeta plástica 1,50 3,00 0,67
Anotaciones
Azúcar refinada 1 kg Azúcar 3,80 3,80 0,84
 Usado para desinfección de pisos 199,85 44,41
TRANSPORTE
Pasajes a Juanico 20 Viajes 4.00 80,00 17,78
Subtotal B 80,00 17,78
Subtotal C (A +B) 279,85 62,19
SUB- SUB-
MEDIOS DE PRECIO
CANT. UNIDAD DESCRIPCIÓN TOTAL TOTAL
CULTIVO UNIT. ($/g)
($.) (Bs)
Macronutrientes
NH4NO3 1,65 gramo Nitrato de Amonio 8,34 13,76 61,92
KNO3 1,9 gramo Nitrato de Potasio 9,42 17,90 80,54
CaCl.2H2O 0,44 gramo Cloruro de Calcio 3,13 1,38 6,20
MgSO4.7H2O 0,37 gramo Sulfato de Mg. 14,98 5,54 24,94
KH2PO4 0,17 gramo Fosfato de Potasio 13,10 2,23 10,02
Micronutrientes
MnSO4.H2O 0,0223 gramo Sulfato de Mn. 13,20 0,29 1,32
ZnSO4.H2O 0,0086 gramo Sulfato de Zinc 9,18 0,08 0,36
H3BO3 0,0062 gramo Ácido Bórico 9,59 0,06 0,27
KI 0,0008 gramo Ioduro de potasio 9,18 0,01 0,03
Na2MoO4.2H2O 0,0003 gramo Molibdato de Sodio 6,90 0,00 0,01
Continuación
CuSO4.5H2O 3E-05 gramo Sulfato de Cobre 14,51 0,00 0,00
CoCl2.6H2O 3E-05 gramo Cloruro de Cobalto 7,86 0,00 0,00

Fuente de hierro
FeSO4.7H2O 0,0279 gramo Sulfato de Hierro 18,74 0,52 2,35
Na2EDTA.2H2O 0,0373 gramo EDTA 27,16 1,01 4,55
Vitaminas
Inositol 0,1 gramo Mio-inositosl 5,28 0,53 2,38
Nicotínico 0,0005 Gramo Acido Nicotínico 40,00 0,02 0,09
HCl-Piridoxina 0,0005 Gramo Piridoxina 33,60 0,02 0,08
Glicina 0,002 Gramo Glicina 59,40 0,12 0,53
HCl-Tiamina 0,0001 gramo Tiamina 202,80 0,02 0,09
Gelificante
Agar gel 4,5 Gramo Agar 2,50 11,25 50,63
Reguladores de Crec. 0,00
Bencil amino
BAP 2,00 gramo 3,50 7,00 31,50
purina
ANA 0,5 gramo Ac. Indol Butírico 4,50 2,25 10,13
Sub total medio de cultivo (C) 63,99 287,94
Subtotal general (A + B + C) 123,44 555,49
Imprevistos (15%) 18,52 83,32
TOTAL 141,96 638,81

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