Artículo original Biotecnología Vegetal Vol. 15, No.

2: 85 - 95, abril - junio, 2015

ISSN 2074-8647, RNPS: 2154 (Versión electrónica)
Instituto de Biotecnología de las Plantas. UCLV. MES.

Establecimiento y multiplicación in vitro de brotes de Aloe vera L.

Naivy Pérez-Alonso*, Alina Capote, Anabel Pérez, Leticia Gómez1, Elio Jiménez**.*Autora para
correspondencia

Instituto de Biotecnología de las Plantas. Universidad Central Marta Abreu de Las Villas. Carretera a Camajuaní
km 5.5. Santa Clara. Villa Clara. Cuba. CP 54 830 e-mail: [email protected]

**Dirección actual: Tropical Research and Education Center. Institute of Food and Agricultural Sciences.
University of Florida. 18905 SW 280th Street. Homestead. USA. FL 33031

RESUMEN
La alta demanda en las industrias de cosméticos y medicinal de Aloe vera L. ha provocado que el cultivo
tradicional sea insuficiente para satisfacer el mercado actual. En Cuba, es utilizada como constituyente de
numerosos productos farmacéuticos y cosméticos. Actualmente, una gran parte de la materia prima de Aloe
es importada debido a la inexistencia de poblaciones suficientemente grandes para suplir la demanda. La
propagación in vitro es una de las alternativas para incrementar la disponibilidad de biomasa de esta especie.
Es por esto, que se estudió el efecto de la época del año en que fue tomado el material inicial para su
introducción y el proceso de desinfección en el establecimiento de brotes in vitro. Además, se estudió el
empleo de reguladores de crecimiento en la fase de multiplicación. Los resultados mostraron que se logró el
establecimiento in vitro de ápices con un 93% de explantes libres de contaminantes microbianos tomando el
material vegetal en la época de seca y desinfectándolo con NaClO al 2.0% durante 15 min. En la fase de
multiplicación se obtuvieron los mejores resultados en los medios de cultivo que contenían la combinación de
2.0 mg l-1 de 6-BAP y 0.5 mg l-1 de AIB, con un corte transversal a los brotes. En estas condiciones, se
obtuvo un coeficiente de multiplicación estable durante nueve subcultivos con un valor máximo de 5.1.

Palabras clave: citoquininas, desinfección, época del año, manejo de explantes

In vitro establishment and multiplication of Aloe vera L. shoots

ABSTRACT
The high demand of Aloe vera L. in the pharmaceutical and cosmetic industries has caused that the traditional
crop is insufficient to satisfy the current market. In Cuba, this plant is used as a constituent of many
pharmaceutical and cosmetic products. At present, a large part of Aloe raw material is imported due to the
lack of sufficiently large populations to meet all the demand. In vitro propagation is one of the alternatives to
increase the availability of biomass of this specie. For this reason, this research was carried out in order to
study the effect of the time of collecting plant material and conditions disinfection to establishment in vitro
shoots. Besides, the use of growth regulators in multiplication phase was studied. The results showed that in
vitro establishment of apices with 93% microbial contamination-free explants was achieved taking plant material
in the dry season and disinfecting with 2.0% sodium hypochlorite for 15 min. In the multiplication phase were
obtained best results in culture medium containing the combination of 2.0 mg l -1 of 6-BAP and 0.5 mg l-1 of
AIB, making a transversal cut to shoot. In these conditions, the multiplication coefficients obtained was
stable during nine subcultures with maximum valour of 5.1.

Key words: cytokinins, disinfection, season, management explants

INTRODUCCION elucidados y que son caracterizados cada año

aproximadamente 4 000 - 5 000 compuestos
L as pl a nt a s so n f ue n te s d e p r o du c to s nuevos.
m e taból ico s d e im po rtanc ia com er cia l,
empleados en las industrias farmacéutica, Aloe vera L. (sábila) pertenece a la familia
alimenticia, de cosméticos y como fuentes Xanthorrhoeaceae, originaria del norte de África
d e n um e r osa s sust a nc ias de int e ré s e introducida en las Antillas y América tropical
agroquímico (Lubbe y Verpoorte, 2011). Zárate donde crece en form a natural y se cultiva
et al. (2013) informaron que se estima que com ercialm ente (Grace, 2011). Los
más de 200 000 productos naturales han sido compuestos extraídos de las hojas de A. vera
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poseen propiedades excepcionales que los conllevar este tipo de propagación en la

hacen indispensables en la elaboración de diseminación de enfermedades fúngicas y
múltiples productos terapéuticos nutricionales bacterianas. Por todo lo expuesto se acentúa
y de belleza. Tiene enorme demanda en las el déficit de estas plantas en el mercado
industrias farmacéuticas y cosméticas (Das et nacional e internacional y el cultivo de tejidos,
al., 2010). Es por esto que el mercado de sus por las ventajas que ofrece, se ha convertido
productos ha m ostrado un m arcado y en una de las alternativas tecnológicas
sostenido ascenso (Amoo et al., 2012). Al necesarias.
respecto, Lubbe y Verpoorte (2011) la
mencionan como un ejemplo de planta con Var ias esp e cie s d e Alo e h a n sid o
ingredientes comúnmente utilizados en la micropropagadas (Aggarwal y Barna, 2004;
industria de cosméticos. A lb a n y e t a l., 20 0 6; D a s e t a l., 2 01 0 ;
Jayakrishna et al., 2011). Sin embargo, en
Es com prensible entonces el interés de ninguno de los protocolos descritos refieren el
grandes industrias en l a producción de estudio de la época de selección del material
c om p u est os na t u ra l es d e im p o rt a n cia como un factor que podría incrementar la
com ercial, cuya calidad y costos no se eficiencia en el establecimiento. Otros aspectos
a f e c ten po r c o n dic io n e s c l im át ic as, como el manejo de los explantes han sido poco
san it ar ias o p o lí tic a s d e l a r e gió n d e estudiados y con mayor f recuencia se
producción. Es en este contexto, donde los mencionan en la literatura científica cambios
a va n ce s d e l a bio te c no l og í a ve ge t al , en la composición del medio de cultivo,
especialmente el cultivo de células y tejidos, especialmente los reguladores del crecimiento.
c on st it u ye n u n a a l te r n at iva pa r a l a Teniendo en cuenta lo anterior, este trabajo se
producción de cultivos de gran interés (Yesil- p ro p uso co m o o bj e t ivo e sta b l ec e r y
Celiktas y Vardar-Sukan, 2013). multiplicar in vitro plantas de A. vera a partir
de plantas cultivadas en campo.
La liberación temprana de polen con respecto
a la receptividad del estigma (protandría) en MATERIALES Y METODOS
com binación con la autoincom patibilidad
r ed u ce l a s o p or t u nid ad e s p ar a l a Material vegetal
autopolinización en las flores hermafroditas
(Imery-Buiza y Cequea-Ruiz, 2008). Este Como material vegetal inicial se emplearon
aspecto dificulta la propagación sexual de hijuelos sanos de plantas adultas de A. vera
esta especie, por lo cual se realiza de forma (Figura 1) con una altura entre 20 y 30 cm,
vegetativa a través de hijuelos. Sin embargo, medidos desde la base del tallo hasta el
la tasa de propagación convencional por esta extremo distal de la hoja m ás larga. El
vía es demasiado lenta y baja. Esto conlleva material vegetal fue colectado directamente
a una insatisfacción en la demanda necesaria del cultivo en condiciones de campo en la
para la producción comercial (Arvind et al., G ra n j a S ub u rb a na F in c a S an d ino d e l
2010), además de los riesgos que puede municipio de Remedios, Villa Clara, Cuba.

Figura 1. Material vegetal de Aloe vera L. para el establecimiento in vitro. a: Aspecto de las plantas en condiciones
de campo b: Hijuelo tomado de una planta adulta. c: Aspecto del explante previo al lavado y corte final (corte de la
parte fibrosa del tallo, las raíces y las hojas externas). d: Explante listo para la desinfección.
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Procedimientos generales limpios. Luego se eliminó la parte fibrosa de la

base del tallo, las raíces y las hojas externas
Todos los experimentos se realizaron en de cada brote con ayuda de un bisturí. Se
condiciones asépticas. Las operaciones de realizó un corte transversal del follaje, para
transferencia y manipulación del material reducir la altura del explante a 3.0 cm
vegetal fueron realizadas en una cabina de flujo aproximadamente.
laminar horizontal. Los medios de cultivos
fueron esterilizados en autoclave vertical a Los explantes obtenidos se emplearon para
120ºC y 1.2 kg cm -2 de presión. evaluar el efecto de tres concentraciones de
NaClO (1.0; 2.0 y 3.0%; i.a) en la desinfección.
En todos los experimentos se utilizó medio de Se colocaron en frascos de cultivo de 250 ml
cultivo semisólido y se emplearon frascos de de capacidad que contenían la solución
cultivo de vidrio con capacidad de 250 ml con desinfectante y permanecieron durante 15 min
30 ml de medio de cultivo o tubos de ensayo en agitación en agitador orbital (Retomed) a
(100x125 mm) que contenían 15 ml de medio 100 rpm (Figura 2a). Posteriorm ente se
de cultivo. realizaron tres enjuagues consecutivos con
agua desionizada estéril en cabina de flujo
El medio de cultivo basal estuvo compuesto laminar. Luego se procedió a eliminar la
por las sales inorgánicas propuestas por superficie necrosada del explante debido a la
Murashige y Skoog (1962) (MS). Como agente desinfección (Figura 2b). Con auxilio de pinza
gelificante se utilizó agar BioCen a razón de y bisturí se redujo el explante a 1.0 cm de altura
7.0 g l -1. El pH de los medios de cultivo ajustado y 0.5 cm de diámetro (Figura 2c) y se colocaron
a 5.7 previo a la esterilización por autoclave con en tubos de ensayo que contenían el medio de
KOH 0.5N y HCl 0.5N. cultivo compuesto por sales MS, 20 mg l-1 de
sulfato de adenina, 2.5 g l-1 de carbón activado,
Establecimiento in vitro 7.0 g l-1 de agar y 30 g l -1 de sacarosa (Das et al.,
2010). El experimento fue repetido tres veces.
Con el objetivo de definir la época del año
propicia para la selección del explante inicial Los tubos de ensayo con los explantes fueron
de A. vera para su establecimiento in vitro y el colocados en cámara de crecimiento a 27±2 ºC
efecto del hipoclorito de sodio (NaClO) en la con un fotoperíodo de 16 h con lámparas
desinfección del material vegetal se realizaron f l u o re sce n t es de l u z b l an c a , c on un a
los experim entos que se describen intensidad de flujo de fotones fotosintéticos
seguidam ente. Se tom aron los hijuelos de 30-40 µmol m-2 s-1.
provenientes del cultivo en condiciones de
campo en la época de seca (diciembre-abril) A las cuatro semanas de cultivo se cuantificó
y en la época de lluvia (mayo-noviembre). Se el núm ero de explantes libres de
utilizaron 60 explantes por cada época del año. contaminantes microbianos visibles (hongos,
levaduras y bacterias) y el número de explantes
La época de seca (diciem bre-abril) se necrosados.
caracterizó por una temperatura entre 27ºC y
16.50ºC, humedad relativa al 76.2%, mientras Multiplicación in vitro
que las precipitaciones alcanzaron un valor de
21.38 m m según los valores promedios Manejo del explante
brindados por la Estación Provincial de
Meteorología de Villa Clara. En la época de lluvia El objetivo de este experimento fue determinar
(mayo-noviembre) los valores de temperatura el efecto del seccionado del explante (corte
oscilaron entre 30ºC y 22.9ºC; la humedad transversal y transversal-longitudinal parcial),
relativa se comportó al 80.71 % para y las sobre el coeficiente de multiplicación. El corte
precipitaciones fueron de 199.87 mm. transversal se realizó a una altura promedio
de 1.0 cm desde la base del brote (Figura
Los hijuelos fueron separados individualmente 3a) y el corte longitudinal-parcial se realizó
y se les eliminaron los restos de suelo. En el desde la zona apical hasta la zona basal
laboratorio, se lavaron con abundante agua abarcando las tres cuartas partes de la altura
corriente y jabón líquido comercial hasta quedar del explante (Figura 3b).
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Figura 2. Procedimiento de desinfección realizado a los explantes de Aloe vera L. a: Desinfección

con NaClO en agitador orbital. b: Explante después de la desinfección y lavado con agua
desionizada (3.0 cm de altura). c: Explante con 1.0 cm de altura y 0.5 cm de diámetro.

Figura 3. Seccionado del explante de Aloe vera L. a: corte transversal

de la planta. b: corte transversal longitudinal-parcial.

Se colocaron cuatro explantes por frasco de Efecto de la combinación de auxina-citoquinina

cultivo de 250 ml de capacidad y se utilizaron en la multiplicación in vitro
10 réplicas por tratamiento. Se utilizó el medio
de cultivo empleado en el establecimiento in El objetivo de este experimento fue determinar
vitro. Los explantes fueron colocados en e l e fe c to d e l a c om b in a ció n d e 6 -
cámara de crecimiento de luz solar a 27± 2°C bencilaminopurina (6-BAP) y ácido indol
y un fotoperíodo de 13/11h de luz/oscuridad con butírico (AIB) sobre la multiplicación in vitro de
un rango de intensidad luminosa aproximada brotes de A. vera. Basado en el análisis de la
entre 23.2 y 44.5 µmol m -2 s-1 medido con un literatura científica se incl uyeron dos
luxómetro EXTECH Light meter 401 025. concentraciones de 6-BAP (2.0 y 8.0 mg l-1)
combinadas con 0.5 de mg l-1 de AIB. Se utilizó
A los 45 días de cultivo se midió la altura de los un tratam iento control sin regulador del
brotes (cm) desde la base hasta la zona distal crecimiento para un total de seis tratamientos.
de la hoja más larga, se cuantificó el número Se emplearon 40 explantes por tratamiento.
de brotes totales por explante y se calculó el
coeficiente de multiplicación por la fórmula: Las condiciones de crecimiento de los explantes
CM= No. brotes totales/ No. brotes iniciales. fueron las descritas en el acápite anterior. A los
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45 días de cultivo se midió la altura de los brotes Se obtuvieron porcentajes de contaminación

(cm) desde la base del explante hasta la zona microbiana que oscilaron desde 6.66% hasta
distal de la hoja más larga, el número de brotes 100% dependiendo de la época del año y de la
para calcular el coeficiente de multiplicación como concentración del desinfectante. Los mejores
se describió más arriba y se cuantificó el número resultados se obtuvieron cuando los hijuelos
de raíces formadas por explante. fueron seleccionados en la época de seca. En
estas condiciones se encontraron porcentajes
Cuando se seleccionó el medio de cultivo de de contaminación microbiana de 6.66 hasta
multiplicación donde se alcanzaron los mejores 33.3%, mientras que en la época de lluvia los
resultados para las variables descritas valores oscilaron entre 65 y 100%. El menor
anteriormente, se realizaron nueve subcultivos valor obtenido fue inferior al referido por
del material vegetal, cada 45 días y se calculó Albany et al. (2006) quienes inform aron
el coeficiente de multiplicación. 14.2% de contaminación microbiana al utilizar
2.0% de NaClO cuando propagaron in vitro
Análisis estadísticos plantas de A. vera. Es notable destacar el
uso de bicloruro de mercurio (HgCl 2) en los
Para analizar los datos se empleó las pruebas procesos de desinfección (Das et al., 2010;
de Kruskal Wallis/ Mann Whitney previa Jayakrishna et al., 2011). Sin embargo, a
comprobación de los supuestos de normalidad pesar de la baja contaminación referida por
y heterogeneidad de varianzas, mediante el los autores, el HgCl 2 es un producto muy
paquete estadístico SPSS versión 18.0 sobre tóxico, tanto para el explante como para la
Windows. salud humana y no se elimina con facilidad,
por lo que no se justifica su uso (Marulanda
RESULTADOS Y DISCUSION et al., 2005).

Establecimiento in vitro Los resultados confirman la importancia de

la fase preparativa de la propagación in vitro,
La época del año y la concentración de NaClO la cual es descrita como una muy importante
influyeron en el establecimiento in vitro de los e indispensable para el desarrollo de un
explantes de A. vera. El tratamiento, que incluía esquema de propagación eficiente y repetible
la época de seca y 2.0% de NaClO fue el que (George, 2008). Esta fase tiene una marcada
presentó el mayor valor de explantes libres de influencia sobre la calidad posterior de las
contaminación microbiana visible (Tabla 1), con plantas resultantes del proceso tanto desde
diferencias significativas con respecto al resto el punto de vista sanitario, fisiológico como
de los tratamientos. genético.

Tabla 1. Efecto de la época del año y del NaClO en la desinfección de Aloe vera L.
a las cuatro semanas de cultivo.

No. explantes libres de No. explantes necrosados

Tratamiento
contaminación microbiana
(Época del año-%
Rango Rango
NaClO) Medias Medias
promedio promedio
Seca-1.0% 40 291.83 b 0 240.00 a
Seca-2.0% 56 353.17 a 0 240.00 a
Seca-3.0% 48 322.50 b 10 201.67 b
Lluvia-1.0% 0 138.50 e 0 240.00 a
Lluvia-2.0% 21 219.00 c 0 240.00 a
Lluvia-3.0% 19 165.81 d 9 227.06 b
Letras desiguales en las columnas indican diferencias significativas según la prueba
de Kruskal Wallis/ Mann Whitney para p<0.05. No. de explantes desinfectados
corresponde a la sumatoria de los explantes utilizados en las tres repeticiones
realizadas n=60
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La contaminación microbiana constituye uno de Para la variable núm ero de explantes

los problem as principales en esta fase. necrosados se observó que el NaClO a una
Incuestionablemente, la m ayor fuente de concentración de 3.0% afectó el material vegetal
contaminación primaria en los cultivos in vitro con los mayores valores de explantes dañados
provienen de la planta donadora (George, 2008). en ambas épocas del año. Estos resultados
Según muestra la literatura científica consultada corroboran los presentados por Albany et al.
los procedimientos más frecuentes se relacionan (2006), en A. vera, quienes encontraron que a
con la aplicación de desinfectantes o mezclas medida que aumentó la concentración de
de fungicidas y bactericidas en el material de NaClO el ennegrecimiento de los explantes fue
plantación (estacas, secciones nodales) (Albany mayor. Los autores concluyeron que tiempos
et al., 2006; Das et al., 2010; Jayakrishna et al., prolongados de exposición de los explantes a
2011). Sin embargo, en ninguno de los estudios las sustancias desinfectantes y en
revisados se hace referencia a la importancia de concentraciones elevadas, aunque controlaron
la selección de la época del año y la influencia de forma efectiva la contaminación microbiana,
de las temperaturas y las precipitaciones en afectaron el porcentaje de brotación de dichos
los altos índices de contaminación. Según explantes y ocasionaron su muerte debido al
demuestran los resultados alcanzados este es efecto fitotóxico de los tratamientos de
un factor vital para la disminución de los desinfección.
porcentajes de contaminación en la fase de
establecimiento en A. vera. A las cuatro semanas de cultivo los explantes
tenían de una a dos hojas formadas y en algunos
La superficie de los tejidos de las plantas se observaron nuevos brotes. Estos presentaron
constituye un hábitat para los un color verde bosque (#228B22) (según el código
microorganismos. Estos pueden alojarse en hexadecimal de colores (http: //
estomas, lenticelas o cualquier otra abertura www.cwp.linet.edu/cwis/ cwp.html) (Figura 4).
natural, lo cual dificul ta en extremo su
eliminación. El número de bacterias y hongos Es evidente que el procedimiento de desinfección
en los tejidos aéreos pueden ser reducidos por propuesto en esta investigación donde se utilizan
el mantenimiento de los mismos en condiciones dos estrategias (época del año para la colecta
de baja humedad. En época de seca, donde del material vegetal y el NaClO) contribuye a la
predominan bajos porcentajes de humedad relativa, disminución de los porcentajes de contaminación
temperaturas bajas y escasas precipitaciones, el microbiana. Además, las medidas relacionadas
crecimiento de los microorganismos asociados a con la limpieza del material vegetal previo a la
los tejidos (fundamentalmente bacterias y desinfección, aspecto que favoreció la reducción
hongos) es inferior cuando se compara con el de contaminantes microbianos. Esto minimiza el
crecimiento en condiciones de altas tiempo necesario para el establecimiento in vitro,
temperaturas, elevado porcentaje de humedad pues no es necesario el cultivo de plantas madre
relativa y abundantes precipitaciones (época de en casas de cultivo lo que incrementa el tiempo
lluvia) (Alvarado-Capó, 1998). en el esquema de propagación.

Figura 4. Aspecto de los brotes de Aloe vera L. en el medio de cultivo de

establecimiento in vitro a las cuatro semanas de cultivo.
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Letras desiguales en cada gráfico indican diferencias significativas para cada

variable según prueba de Mann Whitney para p<0.05

Figura 5. Influencia del manejo del explante en la multiplicación in vitro de brotes

de Aloe vera L. a los 45 días de cultivo. 1- Corte transversal. 2- Corte transversal-
longitudinal parcial.

Multiplicación in vitro corte y difirió significativamente con el corte

transversal-longitudinal parcial (Figura 5).
Manejo del explante
En ambos tratamientos los brotes obtenidos
El manejo del explante utilizado influyó en el presentaron una coloración verde bosque
crecimiento y desarrollo de los brotes. Se (#228B22) y el tejido era turgente sin síntomas
encontraron diferencias significativas para las de hiperhidricidad (Figura 6).
variables número y altura de los brotes, cuando
se compararon los dos cortes realizados a los Cuando se determ inó el coeficiente de
explantes durante la fase de multiplicación. m ultiplicación se encontraron valores
promedios de 1.45 en el tratamiento donde se
Los mayores valores para la altura de los brotes le realizó el corte transversal a los explantes,
se encontraron cuando se realizó el corte m ientras que con el corte transversal-
transversal en los explantes. Asimismo, el longitudinal parcial los explantes alcanzaron un
número de brotes fue mayor con este tipo de coeficiente de 1.1.
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Figura 6. Brotes de Aloe vera L. obtenidos con diferente manejo de los

explantes a los 45 días de cultivo. a-Corte transversal, b-Corte transversal-
longitudinal parcial.

Uno de los factores que infl uye n en l a Por los resultados obtenidos se seleccionó el
multiplicación in vitro de los brotes es el corte transversal como el mejor manejo ya que
manejo que se realiza al explante en el favoreció el incremento del coeficiente de
m om ento de lo s subc ultivos. En var ias multiplicación.
especies de plantas se realizan cortes totales
o parciales de los explantes, así como se Efecto de la combinación de auxina-citoquinina
dec apitan con la f inal idad de in hibir la en la multiplicación in vitro
dominancia de la yema apical y propiciar el
desarrollo de las pequeñas yemas axilares La s d if e r e n te s c o nc en t ra c io n es de l o s
(George, 2008). reguladores del crecim iento estudiados
influyeron en el desarrol lo de los brotes
En el cultivo de Aloe vera, Albany et al. (2006) (Tabla 2).
evaluaron el efecto del seccionamiento del
explante en interacción con el estado físico Con la concentración de 2.0 mg l -1 de 6-BAP
del medio de cultivo (semi-sólido y líquido en y 0.5 mg l -1 de AIB la altura de las plantas fue
agitación) y determinaron que solo el medio mayor a 5.0 cm como promedio y el número
de cultivo líquido favoreció la altura de las de brotes que se desarrollaron por explante
pla ntas obtenida s in vi tr o sin aparen te f u e su p e rio r a c u at r o c o n d if e r e n c ia s
incremento en el número de brotes y que la sig n if ica t iva m e n t e c on l o s d e m á s
interacción entre estos dos factores no tratamientos.
resultó ser significativa. En contraposición,
en el presente trabajo el manejo del explante Los brotes obtenidos presentaron una
utilizado influyó en el crecimiento y desarrollo coloración verde bosque (#228B22) en sus
de los brotes. Se encontraron diferencias hojas. Estas eran vigorosas y turgentes, sin
significativas para las variables número y síntomas de hiperhidricidad (Figura 7).
altura de los brotes y se obtuvo el mejor
resultado con el corte transversal. Estos Estos resultados fueron sim ilares a l os
resultados pudieron deberse a que en el corte referidos por Jayakrishna et al. (2011) en Aloe
transversal - longitudinal parcial se indujo un barbadensis Miller, quienes emplearon en los
d ec l ive en l a ac t ivid ad de l te j id o medios de cultivo 2.0 mg l -1 de 6-BAP. Esta
meristemático como consecuencia del daño es en general la citoquinina más efectiva en
al explante debido a los cortes, que pudo la inducción de yemas axilares. Sin embargo,
afectar la regeneración celular, el crecimiento u n b al a nc e ap r op iad o e n tr e au xin a s y
y desarrollo de la planta. c it oq uin in as e n e l m e dio d e cu l tivo e s
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necesario para la multiplicación de plantas a combinación de ambos tipos de reguladores

partir de meristemos, ápices o yemas. Este del crecimiento.
b al a nc e e stá de t e rm ina d o p or l a s
concentraciones endógenas de auxinas y Por otra parte, la proliferación de brotes
citoquininas presentes en el explante, las dism inuyó considerablem ente cuando la
cuales dependen de la especie y del tipo de concentración de 6-BAP se elevó hasta a 8.0
explante. En este trabajo fue imprescindible mg l-1. Resultados similares fueron descritos
la presencia de citoquinina y auxina en los en A. polyphylla cuando se increm entó la
medios de cultivo para producir una mayor concentración de otra citoquinina, en este caso
p ro l if e r a c ión de br o te s. L o s m ej o re s la Zeatina a 3.29 mg l -1 (Ivanova y Van Staden,
resultados se obtuvieron cuando fue añadido 2011).
al medio de cultivo 6-BAP y AIB. Uno de los
posibles efectos de las auxinas en esta fase Es conocido que la presencia de determinadas
es anular el efecto depresivo de las altas concentraciones de 6-BAP en el medio de
concentraciones de citoquininas sobre la cultivo pueden inducir hiperhidricidad en las
e l o n g ac ión de l os br o t es axil a r e s y plantas (Quiala et al., 2012). En el presente
restablecer su crecimiento normal. Similares trabajo con ninguna de las concentraciones de
resultados fueron obtenidos por Das et al. 6-BAP utilizadas se encontraron plantas
(2010) en A. vera en cuanto al empleo de la hiperhídricas.

Tabla 2. Influencia de la combinación de reguladores del crecimiento en la multiplicación in vitro de

brotes de Aloe vera L. a los 45 días de cultivo.

Tratamiento Altura (cm) No. de brotes/explante No. de raíces/explante

6-BAP-AIB Rango Rango Rango
Media Media Media
-1
(mg l ) promedio promedio promedio
0-0 2.87 97.39 d 1.30 62.50 c 1.70 79.59 d
2.0-0 2.46 74.63 de 1.90 108.31 b 2.00 93.01 cd
8.0-0 2.35 67.04 e 2.12 121.50 b 1.60 75.60 d
0-0.5 3.19 121.88 c 1.97 104.06 b 3.78 171.79 b
2.0-0.5 5.19 207.48 a 4.80 207.99 a 4.15 190.09 a
8.0-0.5 3.90 157.57 b 2.20 122.06 b 2.53 114.65 c
Medias con letras desiguales en cada columnas indican diferencias significativas según prueba
de Kruskal Wallis / Mann Whitney para p<0.05

Figura 7. Plantas de Aloe vera L. después de 45 días de cultivo en los medios de cultivo de
multiplicación. 1- sin reguladores del crecimiento, 2- .2.0 mg l-1 de 6-BAP y 0.0 mg l-1 de AIB,
3- 8.0 mg l-1 de 6-BAP y 0.0 mg l-1 de AIB, 4- 0.0 mg l-1 de 6-BAP y 0.5 mg l-1 de AIB, 5- 2.0
mg l-1 de 6-BAP y 0.5 mg l-1 de AIB, 6- 8.0 mg l-1 de 6-BAP y 0.5 mg l-1 de AIB.
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Ivanova y Van Staden (2011) en A. polyphylla relación favorable con el alargamiento de la raíz
encontraron diferencias en el porcentaje de (George, 2008).
plantas con estas características en dependencia
del agente gelificante utilizado. Cuando se empleó Por el contrario, en investigaciones realizadas por
el agar en el medio de cultivo los porcentajes de Albany et al. (2006) en A. vera se necesitó
plantas hiperhídricas fueron de 17.2%, mientras subcultivar brotes en un medio de cultivo sin
que cuando utilizaron Gelrite® los porcentajes se reguladores del crecimiento para lograr la
incrementaron a 64.7%. En esta investigación se inducción de las raíces a los 21 días de cultivo.
utilizó agar como gelificante en los medios de Por su parte, Das et al. (2010) lograron el
cultivo lo que pudiera ser el motivo de la no enraizamiento de plantas de A. vera cuando
aparición de plantas con hiperhidricidad, utilizaron en el medio de cultivo de enraizamiento
fenóm eno negativo en los procesos de AIB y ANA con solamente 80% y 77% de brotes
propagación. enraizados respectivamente, valores inferiores a
los obtenidos en la presente investigación donde
Con todas las concentraciones de reguladores se alcanzó 100%. Además, es importante señalar
del crecimiento ensayadas las plantas que no fue necesaria una fase de enraizamiento,
desarrollaron el sistema radical. Es de destacar lo que trae como ventaja una reducción del ciclo
que las plantas obtenidas en el medio de cultivo de cultivo al lograr el enraizamiento a la vez que
de multiplicación que contenía 2.0 mg l-1 de 6- se multiplican los brotes.
BAP y 0.5 mg l-1 de AIB presentaron el mayor
número de raíces cuando se compararon con los Cuando se incrementó la concentración de 6-BAP
demás tratamientos. en el medio de cultivo de 2.0 mg l-1 a 8.0 mg l-1 el
número de raíces disminuyó, lo cual pudiera estar
Esto pudo deberse a que el medio de cultivo relacionado con el desbalance entre auxina/
contenía carbón activado y este compuesto tiene citoquinina que se produjo. Las raíces formadas
como efecto absorber diferentes sustancias in vitro pueden favorecer el crecimiento inicial ex
excretadas por la planta, las cuales inhiben la vitro, aunque la tasa de crecimiento óptima no
formación de raíces según su grado de toxicidad. ocurrirá hasta que las nuevas hojas y raíces se
En esta respuesta también pudo influir la desarrollen en el ambiente ex vitro. La
concentración endógena de reguladores del funcionalidad de las raíces quedó demostrada en
crecimiento, fundamentalmente AIA pues cuando este trabajo con la supervivencia de las plantas
el potencial osmótico del medio de cultivo se hace durante la aclimatización.
más negativo, se limita a la absorción de los
componentes del medio de cultivo. Esto trae Cuando se calculó el coeficiente de multiplicación
consigo una disminución en la disponibilidad de de los explantes en los nueve subcultivos
glucosa en los brotes y la presencia de auxina estudiados se observó que este se mantuvo
conjugada con incremento de la auxina activa en estable, como valor máximo 5.1 (Figura 8).

Figura 8. Coeficiente de multiplicación de Aloe vera L. obtenido en el medio de cultivo de

multiplicación que contenía 2.0 mg l-1 de 6-BAP y 0.5 mg l-1 de AIB en diferentes subcultivos.
Biotecnología Vegetal Vol. 14, No. 2, 2014 95

En la literatura científica se refiere que la tasa Im ery-Buiza, J, Cequea-Ruiz H (2008)

de multiplicación de Aloe vera superior a dos Autoincompatibilidad y Protandría en poblaciones
yemas nuevas comienza a observarse a partir naturalizadas de Aloe vera de la península de Araya.
del cuarto subcultivo y solo desciende a partir Polibotánica 26: 113-125
del séptimo cuando el potencial genético
Ivanova M, Van Staden J (2011) Inûuence of gelling
disminuye por envejecimiento del tejido (Matos, agent and cytokinins on the control of hyperhydricity
2007). No fue así en el presente trabajo, donde in Aloe polyphylla. Plant Cell Tiss Organ Cult 104:
la evaluación del coeficiente de multiplicación 13-21
realizada a los brotes durante nueve
subcultivos se mantuvo estable. Esta variable Jayakrishna C, Karthik C, Barathi S, Kamalanathan
es una de las más importantes en los procesos D, ArulSelvi P (2011) In vitro propagation of Aloe
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