Tdoc 3ia 2016 PMB

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTÍN
INSTITUTO DE INVESTIGACIÓN E INGENIERÍA AMBIENTAL
FUNCIONALIZACIÓN Y APLICACIONES ANALÍTICAS DE NANOMATERIALES

BASE CARBONO
Trabajo de Tesis para optar por el título de Doctor en Ciencia y Tecnología

Mención Química
Por: Lic. María Belén Parodi
Directora de Tesis: Dra. Patricia Nora Smichowski
Co-directora de Tesis: Lic. Griselda Inés Polla
Lugar de Trabajo: Departamento de Química Analítica, Gerencia Química y

Departamento de Física de la Materia Condensada, Gerencia de Investigación y
Aplicaciones, Centro Atómico Constituyentes, CNEA, Laboratorio de Tratamiento
de Superficies, Grupo Biomateriales, Centro de Investigación y Desarrollo en
Mecánica, INTI
- 2016 -
Funcionalización y Aplicaciones Analíticas de Nanomateriales Base Carbono
Resumen
Los nanomateriales y en particular los nanotubos de carbono (CNTs) han

sido y continúan siendo ampliamente estudiados debido a sus propiedades
inusuales y a su potencial aplicación en numerosas áreas del conocimiento.

Desde el punto de vista sintético es posible pensar en hacerles diversas
modificaciones para cada aplicaci Desde la

perspectiva de la Química Analítica una interesante y valiosa alternativa surge al
modificar su estructura con la incorporación de aminoácidos, que le otorgan
una alta afinidad por especies metálicas. Por este motivo estos novedosos
materiales fueron evaluados como posibles candidatos para ser utilizados como
sorbentes, aportando selectividad y especificidad a las determinaciones.
El objetivo de este trabajo de Tesis doctoral fue la búsqueda e

implementación de un sistema de pretratamiento de muestras mediante la
separación en fase sólida utilizando CNTs, oxidados y funcionalizados, como

sustratos específicos. El sistema implementado y optimizado se utilizó para la
retención y preconcentración de Cu(II), Hg(II) y Bi(III) que luego se eluyeron y

determinaron cuantitativamente utilizando un acoplamiento en línea
alcanzándose límites de detección del orden de los ng ml-1. Estos resultados son
un valioso aporte para la Química Analítica ya que demuestran que con la
utilización de estos materiales es posible determinar diferentes tipos de metales

a nivel de trazas y ultratrazas en aguas naturales, cabe destacar que estos
niveles solo podrían ser alcanzados por técnicas analíticas de elevado costo de
adquisición y operación.
En este trabajo, se emplearon como sustrato, nanotubos de carbono de
pared múltiple oxidados y funcionalizados con aminoácidos. Se utilizó al Cu(II)

como ión modelo para implementar un sistema de separación en fase sólida en
Funcionalización y Aplicaciones Analíticas de Nanomateriales Base Carbono
línea. Se estudió cuidadosamente la geometría de la microcolumna donde se

confinaron los nanotubos, los distintos acoplamientos y mezclas de relleno para
optimizar la respuesta del sistema. Como parte de la implementación se estudió

la influencia de los distintos parámetros analíticos como pH de carga, caudal de
carga y elución, masa de sorbente, capacidad de retención dinámica y efecto de

iones concomitantes. Luego, el sistema desarrollado se aplicó a la optimización
de la retención y preconcentración de Hg(II) y Bi(III), con aplicación a su
determinación en aguas naturales. Se evaluaron distintos volúmenes de carga

para conseguir los límites de detección adecuados y se realizó un exhaustivo
estudio de medios de carga para controlar las interferencias. Se lograron
retenciones cuantitativas y límites de detección compatibles con la presencia de
los analitos estudiados en aguas naturales. Cabe remarcar que los nanotubos de
carbono mantuvieron su estructura después de ser usados en más de 690 ciclos
de preconcentración/elución.
La caracterización de los materiales obtenidos se realizó por SEM, TEM,

EDS, TGA, XRD y FTIR.
El sistema implementado permitió la utilización de una mínima cantidad
de sustrato debido a la especificidad que la funcionalización le confiere a los

nanotubos. El empleo de una mezcla de nanotubos de carbono con una cera de
polietileno de bajo peso molecular fue un hallazgo que permitió resolver de una
manera sencilla e innovadora los problemas de compactación que presentan las
microcolumnas rellenas con nanocompuestos y de esta forma el sistema se

pudo reutilizar repetidamente sin sobrepresión y sin cambiar la microcolumna.
Functionalized and Analytical Applications of Carbon-based nanomaterials
Abstract
Nanomaterials and especially carbon nanotubes (CNTs) have been, and

continue being extensively studied due to their unusual properties, and their
potential application in many areas of knowledge. From the point of view of their
synthesis, it is possible to think on doing several modifications to prepare a new
material for different applications and in this way to have a tailored material. From
the Analytical Chemistry perspective an interesting and valuable alternative arises
from the modification of the CNTs surface with the incorporation of aminoacids,
which confer them high affinity for metal species. For this reason, these novel
materials are evaluated as possible candidates to be used as sorbents, providing
selectivity and specificity to the determinations.
The objective of this Doctoral thesis was the search and implementation a
sample pretreatement system based on solid phase extraction using oxidized and
functionalized CNTs as specific substrates. The implemented and optimized system
was used for the retention and preconcentration of Cu(II), Hg(II) and Bi(III) that then
were then eluted and determined quantitatively using an on-line system, reaching
detection limits in the range of ng ml-1. These results are a valuable contribution to
Analytical Chemistry since they demonstrate that with the use of these materials it
is possible to determine different metals at trace and ultratrace levels in natural
waters. It should be noted that these levels could only be reached by analytical
techniques of high cost of acquisition and operation.
In this work, multiwalled carbon nanotubes oxidized and functionalized with

aminoacids were used as sorbents. The Cu(II) was used as a model ion to
implement an on line solid phase extraction system. The geometry of the
microcolumn where the carbon nanotubes were packed, the different couplings
Functionalized and Analytical Applications of Carbon-based nanomaterials
and fill mixtures were carefully studied to optimized the system response. As part
of implementation, the influence of different analytical parameters such as sample
pH, loading flow rate, elution flow rate, sorbent mass, dynamic retention capacity
and concomitant ion effect were studied. Then, the developed system was applied
to optimize the retention and preconcentration of Hg(II) and Bi(III), with the
application to their determination in natural waters. Different load volumes were
evaluated to achieve the appropriate detection limits and an exhaustive study of
the sample media was carried out to control the interference. Quantitative
retention and detection limits compatible with the presence of studied analytes
studied in natural waters were accomplished. It should be noted that nanotubes
conserved their structure after being used in more than 690
preconcentration/elution cycles.
The characterization of obtained materials was carried out by SEM, TEM,

EDS, TGA, XRD and FTIR.
The implemented system allowed the used of a minimun amount of

substrate due to the specificity that the functionalization conferred to nanotubes.
The use of a mixture of carbon nanotubes with a low molecular weight
polyethylene wax was a finding that allowed to solve in a simple an innovative way
the compaction problems presented by microcolumns filled with nanocomposites
and in this way the system could be reused repeatedly without overpressure and
without changing microcolumn.
Agradecimientos
A las Instituciones Públicas y sus autoridades que me permitieron desarrollar

este trabajo de Tesis con el cual alcancé un gran sueño personal: la Universidad
de San Martín, la Comisión Nacional de Energía Atómica y el Instituto Nacional
de Tecnología Industrial. En particular el 3iA (UNSAM), el Departamento de
Química Analítica de la Gerencia Química (CNEA), el Departamento de Física de
la Materia Condensada de la Gerencia de Investigación y Aplicaciones (CNEA) y
el Centro de Investigación y Desarrollo en Mecánica (INTI).
A las personas que me acompañaron durante estos años:
A mis Directoras, Patricia y Griselda, que me acompañan desde el 2003 cuando

hice mi Tesis de grado. Gracias por acompañarme durante tantos años, guiarme,
soportarme y comprender todas mis idas y vueltas. Hacer la Tesis part time fue
un desafío enorme que requirió mucho esfuerzo pero la decisión valió la pena!!
Su presencia ha sido y continuará siendo lo que hace la gran diferencia.
A Jorge y Leo, mis Jefes en INTI-Mecánica que se jugaron apoyando una Tesis
un poco distinta. Gracias por pensar que valía la pena y hacer el esfuerzo por
entender la Química Analítica y a los nanotubos.
A Laura Davidowski por su buena predisposición para firmar los Informes.
A los grupos de trabajo tanto de INTI como de CNEA que me brindaron su

apoyo para poder realizar este trabajo. En CNEA: Agustín Londonio, tantas horas
midiendo que hasta tenemos un tema propio!, Gonzalo Zbihlei (gracias por las
horas mirando al TEM y sacar fotos tan lindas!), Eleonora Freire, Facundo Giles,
María Rosa Eppis, Alicia Petragalli y Daniel Vega por los XRD. Mariel Reinoso y
Betty Halac gracias por la paciencia haciendo Raman de los nanotubos. Mariano
Bruno por enseñarme a hacer el BET.
En INTI: Lafo (unas columnitas hermosas, y gracias por controlar los nanotubos
el finde cuando quedaban limpiándose), Dany Egidi (conexiones extrañas para
experimentos locos!), Leito Lebedev (gracias por el cierre de las bolsas de diálisis
y el poster de NT11). Mimí Caldiroli (tus trámites me permitieron ir a todos los
lugares que fueron necesarios). Sole Pereda, Mechi Pianetti, Carlos Serpi, Gisela
Maxia, Gustavo Gimenez (INTI) y Claudia Marchi (CMA-FCEyN-UBA) que me
ayudaron a ver los nanotubos al SEM. CAVA (por la edición de gráficos). Gabi
Ybarra por hacer los FTIR aunque fuera difícil. Todos me ayudaron proponiendo
ideas para hacer mi vida más fácil. Unos genios!!
Al grupo de Química Analítica de San Luis, Luis Dante Martinez, Raúl Gil y
Marianela Savio, por haberme recibido y compartido conmigo su trabajo para
que pudiera desarrollar un sistema similar en CNEA.
A todos los chicos de Biomateriales que me han bancado con su tiempo y

trabajo para que pudiera hacer esta Tesis!! Gracias, Leo Pazos, Noe Carrizo,
Mauro Pisano, Cristian Pereiro, Mariana Bahnyckyj y Ezequiel Perez.
A las personas que me acompañan siempre:
A mis amigos, afectos y familiares que me acompañan en esta y en todas las

aventuras en las que me embarco. Gracias por acompañarme y apoyarme
siempre. A mis padres por su crianza en libertad que me permite poder elegir.
Chicas, (Gabi, Evange, Ale, Machu, Lau) su presencia, con un llamado, una salida
o un mate es lo que hace la diferencia. Gracias por estar siempre!!
Chicos, son lo más porque tienen una paciencia, infinita!! Gracias, Agus
Londonio, Dani Egidi, Leo Pazos, Gustavo Lafo, Leito Lebedev, Claudio Berterreix,
Jorge Scheneebeli, Pablito Torres.
A todos los que siempre recuerdan que estoy metida en este lío de ser doctora
y preguntan: Reyes, Coco, Toti, Gustavo Florio, Juan Szombach, Diego Russo,
Gisela Cañal, Gustavo Elvira, DMK, Pichi, Quique.
A Luis Galófaro y Alicia Labarta por su apoyo, su interés y estar.
A mi familia, que no deja de preguntar cuando termino de estudiar!!! Espero

que nunca!! Gracias por sentirse orgullosos. Abuela Olga, soy doctora, aunque
creo que no era este tipo de doctora el que querías, estoy segura que donde
estés estarás orgullosa. A mi tíos Graciela y Mario, tía gracias por preguntar y
compartirme palabras de aliento. Mis primos, todos!! Y todos los niños de la
familia que son una alegría. Mi padrino, Guille, que aunque lejos, sé que puedo
contar con vos.
A mis sobrinos y ahijada que siempre están presentes, Ariana, Iara, Matilda,
Victorio, Lucas y Juanita.
A mis sobrinas que son las que me sacan una sonrisa cuando todo sale mal, por
quienes me levanto temprano un domingo o comparto un chocolate. Son
cuatro soles: Valen, Lola, Emi, Luli y el año que viene Eluney. Las amo con toda
mi alma. A mis hermanos, Paula y Martín, que son generosos y me permiten
estar con ellas y compartir sus vidas.
A mi bisabuela, Luisa, hermosa persona. Lo que me dijiste la última vez que nos
pueda decir eso a los 96 años.

Índice de Contenido
Motivación del Trabajo de Tesis Doctoral 1
Referencias 4
Capítulo 1 Pretratamiento de Muestras: Separación en fase sólida 5

1. Introducción 7
2. Principios Básicos 10
3. Dispositivos 15
4. Ventajas de la Separación en Fase Sólida 16

5. Materiales usados como sorbentes 17
6. Metodología 19
7. Cuantificación en sistemas SPE 27
8. Microseparación en fase sólida 28

9. Conclusiones 29
Referencias 29
Capítulo 2 Nanotubos de Carbono como Material Sorbente 35

1. Introducción 38
2. Elección del tipo de CNTs para su uso en SPE 41

3. Métodos de síntesis de MWCNTs 45
4. Modificación de la superficie de los MWCNTs 47

4.1. Modificaciones covalentes Oxidación 49
4.2. Funcionalización con aminoácidos 51

5. Técnicas de caracterización 54
Referencias 56
Capítulo 3 Obtención y Caracterización de Nanotubos
de Carbono modificados 65
1. Introducción 68
2. Técnicas de caracterización 68
3. Materiales y reactivos utilizados 71
4. Caracterización de los MWCNTs comerciales 72

5. Metodología utilizada para la oxidación de los MWCNTs 79
6. Caracterización de los MWCNT-COOH 82

7. Metodología de funcionalización con aminoácidos 88
8. Caracterización de los MWCNTs funcionalizados con aminoácidos 89

9. Observaciones generales 94
Referencias 96
Capítulo 4 Desarrollo del Sistema de Preconcentración: el Cu(II)

como analito modelo 99
1. Introducción 101
2. Técnicas para la determinación de Cu 103
3. Analito modelo 105

4. Materiales, reactivos e instrumentos utilizados 106
5. Metodología utilizada 107

5.1. Experimentos preliminares, materiales y métodos 107
5.2. Condiciones operativas 109

5.3. Preparación de la columna 109
5.4. Procedimiento general 110

5.5. Optimización de variables 111
5.5.1. Efecto del pH 111

5.5.2. Efecto del caudal de carga 112
5.5.3. Efecto de la concentración y caudal del eluyente 113

5.5.4. Volumen de elución 113
5.6. Capacidad y re-utilización de la microcolumna 113
6. Desempeño Analítico 114
7. Efecto de iones concomitantes 116
8. Análisis de aguas naturales 116

9. Conclusiones 117
Referencias 118
Capítulo 5 Retención, preconcentración y determinación

de Hg(II) en aguas naturales 121
2. Técnicas para la determinación de Hg 128

4.1. Materiales y métodos 131

4.2. Condiciones de operación 132
4.3. Preparación de la microcolumna 132

4.5. Características y tratamiento de las muestras a analizar 135

4.6.1. Características de la microcolumna y material de relleno 136

4.6.2. Efecto del pH 139
4.6.3. Efecto de la concentración del eluyente 141

4.6.4. Efecto del caudal de carga y elución 141

4.6.6. Capacidad de retención de la microcolumna 143
4.7. Capacidad de re-utilización de la microcolumna 144

6. Desempeño analítico 146

8. Conclusiones 150
Referencias 150
Capítulo 6 MWCNT-pro para un analito poco estudiado como el Bismuto 156

2. Elección del Bi 161

3. Técnicas para la determinación de Bi 162

5.1. Materiales y métodos 165

5.2. Condiciones de operación 166
5.3. Preparación de la microcolumna 166

5.5. Características y tratamiento de las muestras a analizar 168

5.6.1. Estrategia de optimización 169

5.6.1.1. Caudal de carga y elución 169
5.6.1.2. Diseño Factorial 171

5.6.3. Capacidad de retención de la columna 171

5.6.4. Efecto del pH de carga y concentración del eluyente 173

7. Desempeño analítico 179

9. Conclusiones 183
Referencias 184
Conclusiones y Perspectivas 187

Producción Científica 192
Motivación
del Trabajo de Tesis Doctoral
Se presentan a continuación los desafíos que motivaron la realización de este

trabajo de Tesis doctoral. Se describe brevemente la problemática abordada y
su aporte significativo en el campo de la química analítica para la determinación

de metales y metaloides en solución, a nivel de trazas y ultratrazas.
Motivación del Trabajo de Tesis Doctoral
El agua tiene un papel esencial en los procesos geoquímicos y

bioquímicos siendo el principal vehículo de transporte entre distintos
compartimentos como sistemas de agua, aire y suelos. Para caracterizar los

distintos sistemas acuosos es necesario determinar los elementos que
naturalmente se encuentran presentes y muy especialmente los potenciales

contaminantes. Entre los contaminantes posibles, los metales y metaloides en
solución en muy baja concentración son una parte esencial [Krawczyk, M. y col.
2015]. Estos metales, aún a muy bajos niveles (ng ml-1 o menor), tienen un gran
impacto en la calidad del ambiente y la salud de seres humanos, animales y

biota [Duffus, J. H. 2002]. Otro interés reside en su utilización como marcadores
químicos de procesos de contaminación presentes o futuros. Desde hace
tiempo y de forma sostenida existe en la sociedad un interés indiscutido en
temas ecológicos enfocados en la contaminación del ambiente y en su impacto

en la salud pública [Tchounwou, P. B. y col. 2012]. Los niveles de contaminantes
varían y dependen fuertemente de las condiciones locales, estacionales y

particularmente de la actividad antropogénica que se desarrolle en la zona.
Poder determinar metales y metaloides a niveles tan bajos supone un

desafío para la mayoría de las técnicas analíticas actuales, muchas de ellas de
elevado costo de adquisición y mantenimiento [Krawczyk, M. y col. 2015,
Kabata-Pendia, A. 2001]. Esto es especialmente importante en laboratorios de
análisis químicos de servicios y de investigación donde no siempre se
encuentran disponibles equipos de última generación para realizar estas

determinaciones. Asimismo, la complejidad de las matrices actuales y la
diversidad de contaminantes que presentan las muestras naturales debido a la

diversificación de las actividades antropogénicas hacen que sea imprescindible
contar con desarrollos y soluciones eficientes e innovadoras para abordar esta

problemática.
2
Las principales motivaciones de este trabajo de Tesis doctoral han sido:

i) desarrollar métodos de pretratamiento como paso previo a la
cuantificación de especies químicas en solución,

ii) desarrollar un material sorbente con gran capacidad de retención de
especies metálicas en forma selectiva,

ii) desarrollar métodos selectivos y de alta sensibilidad que permitan
alcanzar los niveles a los que se encuentran los metales y metaloides tóxicos o
potencialmente tóxicos en aguas naturales.
Al definirse la implementación de un sistema de pretratamiento surgen

desafíos en cuanto a la elección de un sustrato con características adecuadas
para la problemática abordada y la forma de realizar su acoplamiento a una
técnica de determinación cuantitativa tradicional. Conceptos como

Nanomateriales deben ser tenidos en cuenta a la hora de la
elección del sustrato y la metodología general.
Para alcanzar el objetivo propuesto, se estudiaron nanotubos de carbono

comerciales, oxidados y funcionalizados con aminoácidos como sustratos
innovadores para abordar la retención selectiva de especies cargadas que se
encuentren en bajas concentraciones en distintas categorías de aguas naturales
no contaminadas.
Con el material sorbente elegido, modificado y caracterizado se
desarrollaron sistemas de determinación cuantitativa en línea aplicados a la

retención y preconcentración de analitos de interés ecotóxico a nivel de trazas y
ultratrazas.
3
Referencias
Duffus, J. H. (2002). Heavy metals-a meaningless term?. Pure Appl Chem., 74,
793 807.
Kabata- Pendia, A. (Eds). (2001). Trace Elements in Soils and Plants. Boca Raton,
FL: CRC Press.
Krawczyk, M. y Stanisz, E. (2015). Silver nanoparticles as a solid sorbent in

ultrasound-assisted dispersive micro solid-phase extraction for the atomic
absorption spectrometric determination of mercury in water samples. J. Anal.

At. Spectrom., 30, 2353-2358.
Tchounwou, P. B., Yedjou, C. G., K Patlolla, A. K. y Sutton, D. J. (2012). Heavy
Metals Toxicity and the Environment. En Luch, A. (Eds). Molecular, Clinical and
Environmental Toxicology. 133-164, Springer Basel.
4
Capítulo 1
Pretratamiento de Muestras:
Separación en fase sólida
En este capítulo se presenta el método de Separación en Fase Sólida como
Pretratamiento de Muestras, para retener y preconcentrar analitos de forma de

alcanzar mejores límites de detección. Este tipo de pretratamiento permite
utilizar equipamiento analítico de menor sofistifación aún para muestras

complejas (ej. alto contenido salino en agua de mar).
Capítulo 1 Pretratamiento de Muestras: Separación en Fase Sólida
Abreviaturas
CE Capillary electrophoresis (Electroforesis capilar)
CNTs Carbon nanotubes (Nanotubos de carbono)

ET AAS Electrothermal atomic absorption spectroscopy
(Espectrometría de absorción atómica con atomización

electrotérmica)
FA AAS Flame atomic absorption spectrometry (Espectrometría de

absorción atómica con llama)
GC Gas chromatography (Cromatografía gaseosa)

GF AAS Graphite furnace atomic absorption spectroscopy
(Espectrometría de absorción atómica con horno de grafito)

HPLC High pressure liquid chromatography (Cromatografía
Líquida de Alta Resolución)

ICP MS Inductively coupled plasma mass spectrometry
(Espectrometría de Masas con fuente de Plasma Acoplado

Inductivamente)
ICP OES Inductively coupled plasma atomic optical spectrometry

(Espectrometría de Emisión Óptica con fuente de Plasma
Acoplado Inductivamente)
LLE Liquid liquid extraction (Extracción líquido-líquido)
MWCNTs Multi-walled carbon nanotubes (Nanotubos de carbono de

pared múltiple)
REEs Rare earth elements (Tierras raras)

SPE Solid phase extraction (Separación en fase sólida)
SPME Solid phase microextraction (Microseparación en fase

sólida)
6
1. Introducción
Como un proceso contínuo, los sectores industriales y académicos se
encuentran en la búsqueda de mejorar el desempeño, confiabilidad y velocidad

del proceso de análisis químico, tanto para los métodos tradicionales de
determinación de contaminantes en muestras ambientales (aire, aguas

naturales, suelos y sedimentos) como para la detección y cuantificación de
drogas o metabolitos en muestras biológicas. El objetivo sigue siendo el mismo:

análisis más rápidos y a menores precios, mejorando la sensibilidad y
selectividad. Esto se ha expandido a áreas no tan habituales, incorporando

analitos que en otros momentos no se tenían en cuenta o se consideraban no
relevantes, debido a nuevos hallazgos que los ponen en el centro de atención
por sus efectos sobre la salud humana o en el ambiente [Augusto, F. y col.
2010].
Dependiendo del analito a determinar se selecciona el método y la
técnica instrumental de cuantificación más adecuada. En este sentido, un eficaz

pretratamiento de la muestra permite la determinación de numerosos analitos
inclusive a niveles extremadamente bajos. La incorporación de una etapa de

pretratamiento de muestra es vital para el eficiente desempeño de muchas
técnicas analíticas [Fonseca, M. C. y col. 2016]. Generalmente, cada técnica
analítica está asociada con un determinado proceso de pretratamiento que en
muchos casos está relacionado con la forma de introducir la muestra en el

sistema o cómo se pueden alcanzar menores límites de detección o cómo
eliminar/reducir interferencias. Por ejemplo, para métodos que utilizan la

cromatografía gaseosa (GC), la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) o
la electroforesis capilar (CE) los métodos tradicionales de preparación de

muestras incluyen extracciones basadas en la sorción selectiva del analito o de
los interferentes sobre sustratos, seguido del análisis directo o de la desorción

de las especies retenidas. Ejemplos de estas técnicas son la extracción Soxhlet
7
(para sedimentos o matrices sólidas), la extracción líquido-líquido (LLE) (para

agua o muestras acuosas) o tubos de carbono adsorbente (para compuestos
orgánicos volátiles en aire) [Augusto, F. y col. 2010]. Sin embargo, deben ser
tenidos en cuenta aspectos tales como reducir la cantidad de volúmen de

solventes utilizados (grandes volúmenes son necesarios para el LLE tradicional o
el Soxhlet). Esto hizo que la separación en fase sólida (SPE) haya ganado
popularidad como técnica para la preparación de muestras [Türker, A. R. 2007].
El pretratamiento de muestras busca la transferencia del analito de

interés desde la matriz de la muestra a un nuevo medio. Las características
fisicoquímicas de este medio deben ser compatibles con la técnica instrumental

que se va a utilizar y la estabilidad del analito a medir. Este trabajo de Tesis
doctoral esta enfocado en la implementación de un sistema de pretratamiento

de muestras de agua basado en la SPE utilizando nanotubos de carbono como
sustrato. En este sentido, se han propuesto a los nanotubos modificaciones que

les confieren carga, y los hacen apropiados para el desarrollo de metodologías
más específicas enfocadas en la preconcentración de especies metálicas en

solución.
Un relevamiento de las técnicas que habitualmente se utilizan para

cuantificar especies metálicas en solución muestra que las espectroscopías de
absorción atómica han sido extensamente utilizadas, ya que son técnicas

selectivas y sensibles [de Godoi Pereira, M. y col. 2003]. Sin embargo, es
necesario conocer las limitaciones de cada sistema analito/muestra/técnica de

cuantificación, como por ejemplo, la escasa sensibilidad para algunos analitos
y/o matrices de la espectroscopia de absorción atómica con llama (FA AAS)

[Naghmush, A. M. y col. 1995; Matusiewicz, H. y col. 1991, de Godoi Pereira, M. y
col. 2003] o la problemática del alto contenido de sales en la muestra para las
espectroscopías de masa con plasma acoplado inductivamente (ICP MS) y de
emisión con plasma acoplado inductivamente (ICP OES) [Beauchemin, D. 1991].
8
Es por ello que los procesos de pretratamiento se vuelven tan importantes

[Türker, A. R. 2007].
La SPE consiste en la retención de especies en un sustrato sólido para su
posterior desorción utilizando eluyentes inorgánicos u orgánicos. Se encuentra

reportado que estos métodos acoplados con técnicas espectroscópicas
atómicas presentan ventajas como: simplicidad, alta frecuencia de análisis y

altos factores de preconcentración [Pyrzyñska, K. y col. 1999]. De esta forma
surge el interés de desarrollar y caracterizar nuevos materiales para ser

utilizados como sorbentes que sean fáciles de producir y económicos, que
presenten alta capacidad de adsorción y gran versatilidad en las condiciones de

adsorción, que sean reutilizables o en su defecto que puedan ser sometidos a
tratamientos de reciclado para realizar la degradación del contaminante en fase

sólida, que presenten mayor selectividad (inclusive especificidad hacia un
analito en particular), que permitan la utilización de medios de extracción

y con mayor estabilidad
térmica, química y/o mecánica. Con esto último se aumenta la vida útil del
dispositivo utilizado como sorbente [Krawczyk, M. y col. 2016].
La necesidad de utilizar un sistema de SPE es especialmente relevante

para muestras de aguas naturales donde las especies se encuentran a niveles
del orden de los ng ml-1 [Tseng, W-C. y col. 2015]. Asimismo, la alta
concentración de otras especies que usualmente acompañan a los analitos de
interés hace necesario la utilización de los métodos de pretratamiento. La

implementación del sistema SPE en línea tiene como ventajas adicionales, la
Zagatto, E. A. G., y col. 1993], mejoras en la precisión y exactitud, minimización
de la producción de residuos tóxicos y consumo de reactivos y muestra.

También al ser sistemas cerrados disminuye la posibilidad de contaminación de
las muestras. La miniaturización es otra de las posibilidades que conlleva la

utilización de estos sistemas.
9
Se encuentran reportados en la bibliografía una importante cantidad de

sistemas de pretatamiento de SPE para el análisis de distintas sustancias y/o
elementos en una variedad de matrices. A modo de ejemplo, se encuentra
reportado la determinación de Pb y Cd en muestras cosméticas utilizando

nanopartículas de TiO2 [Panigati, M. y col. 2002], y W(VI) en muestras de agua y
sedimentos [Li, S. y y col. 2003], también se han utilizado nanopartículas de

poli(4-vinilanilina) para la determinación de Cr(VI) en efluentes líquidos [Wang,
L. y col. 2004].
2. Principios Básicos
En forma general la técnica comprende la transferencia del analito desde
la muestra original a un nuevo medio compatible tanto con el analito como con
la técnica instrumental que se utilizará para su determinación cuantitativa
[Baltussen, E. y col. 2002]. Para que esto ocurra se realiza el pasaje de una
muestra líquida a través de un material sorbente que retiene al analito. Existen,
en menor medida, sistemas que retienen una matriz compleja, liberando así al
analito. El material sorbente puede confinarse dentro de distintos dispositivos,
como: columnas, cartuchos, tubos o discos [Camel, V. 2003]. En este trabajo de

Tesis doctoral se utilizaron microcolumnas fabricadas con un material inerte. Las
columnas, en general, pueden contener desde 50 mg hasta 10 g de material

sorbente, sin embargo menores y mayores cantidades también son posibles. La
utilización de cantidades menores depende de la capacidad del material

sorbente de retener el analito de interés. El sorbente se coloca seco, molido en
distintas granulometrías por el método de empaquetamiento en seco dentro de

la columna
pasar por la columna. Para evitar la migración del material sorbente al sistema
en línea se coloca un disco permeable (fritas, lana de vidrio) en cada uno de los
10
extremos de la columna. Su objetivo es mantener el material sorbente

confinado en la columna, permitiendo el paso del líquido.
La metodología de la SPE consiste en hacer pasar un volumen
determinado de muestra, Vmuestra, por la microcolumna produciéndose la

retención del analito por el material sorbente para luego ser eluído en un
volumen menor (Velución,) por un eluyente apropiado. Durante este proceso es

posible pasar por la microcolumna grandes cantidades de muestra (inclusive
litros) conteniendo muy bajas concentraciones del analito y eluir en un volumen

mucho menor lo que permite alcanzar muy buenos factores de enriquecimiento.
La mayoría de los procedimientos buscan pasar la menor cantidad de muestra

posible para reducir el tiempo de análisis.
Los sistemas SPE pueden implementarse en línea o en batch

(discontínuo). Aquí centraremos la atención en los sistemas en línea ya que los
sistemas en batch no presentan tantas ventajas y solo se utilizan en este trabajo

al principio del desarrollo experimental en el capítulo 4 para evaluar la retención
de los nanotubos de carbono hacia algunas especies metálicas en solución.

Un sistema de SPE convencional puede tener tres o cuatro etapas
sucesivas (Figura 1).
Figura 1. Sistema genérico de SPE.
11
Durante la etapa indicada como lavado/acondicionamiento, la

microcolumna es lavada para extraer posibles restos originados durante el
proceso de síntesis del material sorbente y acondicionada con el medio
apropiado para la retención del analito respectivo. Esta etapa es fundamental

para solvatar el sorbente, conferirle a los grupos funcionales la polaridad
adecuada y remover el aire que hubiera podido quedar retenido en la

microcolumna. La elección del medio de acondicionamiento en esta etapa
depende de la naturaleza del sorbente y de la estabilidad del analito en ese

medio.
La segunda etapa es el pasaje de la muestra a través de la microcolumna.

Este proceso puede realizarse de diferentes formas: gravedad, bombeo,
aspiración con vacío o a través de un sistema en línea automatizado. Este

trabajo aprovecha las ventajas del proceso automatizado en línea. El caudal de
carga de la muestra a través de la microcolumna se debe estudiar para

encontrar el valor apropiado que permita la eficiente retención de los analitos,
evitando excesivos tiempos de análisis. En esta etapa ocurre la concentración de

los analitos en el sorbente. Si bien algunos componentes de la matriz pueden
quedar retenidos en la microcolumna, muchos de ellos pasan a través de la

misma, permitiendo la purificación de la muestra. El diseño de sorbentes
permite maximizar este proceso otorgándole selectividad a los mismos

[Tseng, W-C. y col. 2015].
En una tercera etapa puede lavarse la microcolumna con un solvente que

posea un bajo poder de elución (hacia el analito de interés). Esta etapa puede
realizarse para eliminar componentes de la matriz que hubiesen podido quedar

retenidos en la microcolumna.
La etapa final consiste en la elución del analito de interés con un eluyente

apropiado evitando remover componentes de la matriz que pudieran haber
quedado retenidos en la microcolumna. El volumen del eluyente debe ser

ajustado para obtener una recuperación cuantitativa del analito evitando el
12
efecto de dilución que ocurre cuando los volúmenes son excesivamente

grandes. Sin embargo, en sistemas en línea acoplados al sistema de detección
este volumen se encuentra limitado por los sistemas automatizados de los
equipos utilizados para la medición y son en general relativamente pequeños. El

caudal de elución es otro parámetro a tener en cuenta en el proceso de
optimización para asegurar una eficiente desorción.

Para lograr la separación del analito de la matriz es necesario que ocurra
la retención del mismo en el sorbente. Los mecanismos de retención dependen

de la naturaleza del sorbente. Los analitos que se encuentran en la muestra a
nivel de trazas pueden adsorberse en sustratos sólidos a través de fuerzas de

van der Waals o interacciones hidrofóbicas. Las interacciones hidrofóbicas
ocurren en presencia de sorbentes altamente no-polares (ej. C18-silica) y no nos

referiremos a ellas ya que no participan en la retención de especies cargadas. En
cambio, para lograr la retención de especies cargadas se realizan modificaciones

a los sustratos para conferirles carga ya sea mediante oxidaciones y/o diversas
derivatizaciones [Savio, M. y col 2011; Wadhwa, S. K. y col. 2013]. Estas
uniones químicas. Estas modificaciones le confieren a los sorbentes, grupos

capaces de aportar carga y especificidad hacia distintos analitos cargados.
Varios átomos que forman parte de grupos funcionales son capaces de

interactuar con analitos en baja concentración. Los átomos utilizados con mayor
frecuencia son: el nitrógeno (ej. presente en aminas, grupos azo, amidas,

nitrilos), el oxígeno (ej. presente en grupos carboxilo, hidroxilo, fenilo, éter
carbonilo) y azufre (ej. presente en tioles, tiocarbamatos, tioeteres). Para que

estos grupos puedan introducirse en el sorbente sólido es necesario
modificarlos mediante: i) unión química de los grupos funcionales sobre el

sustrato (funcionalización de sorbentes), ii) unión física de los grupos sobre el
sorbente por impregnación de la matriz sólida con una solución que contenga
13
el ligando con el grupo funcional (lo que suele llamarse: impregnación,

recubrimiento o carga del sorbente).
Para obtener una eficiente retención de especies iónicas metálicas, los
grupos funcionales deben ser accesibles a las especies sin que ocurran
impedimentos estéricos. En la práctica algunos grupos funcionales presentes en
la superficie del sorbente pueden permanecer inactivos durante el proceso de

retención.
Algunas de las funcionalidades que se unen a los sorbentes actúan como

intercambiadores iónicos. Éstos actúan intercambiando con el contra-ión
correspondiente, poseen sitios de intercambio fuertes y débiles. Entendiendo

por sitios de intercambio fuertes aquellos que no se afectan por el pH del
medio y débiles a los que sólo son activos a valores de pH mayores o menores
al pKa. Sitios de intercambio fuertes son los grupos ácidos sulfónicos
(intercambio de cationes) y las aminas cuaternarias (intercambio de aniones)

mientras que los sitios de intercambio débiles son grupos de ácidos carboxílicos
(intercambio de cationes) y aminas primarias, secundarias y terciarias

(intercambio de aniones).
Cuando la retención ocurre en microcolumnas hay que tener en cuenta la

distribución del ión en el sorbente, las constantes de estabilidad de los
complejos en solución, la cinética de intercambio y la presencia de iones

concomitantes. Los sorbentes pueden retener iones hidratados, complejos con
carga y complejos iónicos mediante ligandos lábiles, sin embargo hay que tener
en cuenta que pueden presentar poca selectividad.
Para que la retención ocurra en forma eficiente hay que tener en

consideración una serie de cosas como la capacidad de un compuesto
específico de encontrarse en forma iónica y para ello debe elegirse el solvente

de carga de muestra apropiado. El medio de carga debe contemplar la
estabilidad del analito de interés, sus interacciones con el solvente de carga y el

sorbente, de forma tal de promover la retención del analito. El estudio debe
14
realizarse de manera integral teniendo en cuenta la naturaleza química tanto del

analito como del solvente y sorbente.
Para lograr una eficiente elución se debe realizar una cuidadosa elección
del solvente de elución o eluyente. El solvente apropiado deberá exhibir una

fuerte afinidad por el analito retenido para asegurar la ruptura de su interacción
con el sorbente. La elución puede realizarse mediante el uso de ácidos que

rompan la interacción y liberen al analito. Asimismo, debido a las interacciones
presentes, la dependencia del pH permite el uso de eluyentes con diferentes

valores de pH.
3. Dispositivos
El material sorbente puede alojarse como relleno en distintos sistemas:

columnas, cartuchos, jeringas y discos (Figura 2). El diseño de las columnas y
cartuchos puede variar para adaptarse a distintas características de cada

sistema, por ejemplo, volumen de muestra, sistema de circulación del solvente o
automatización. El material para la fabricación de dispositivos no debe liberar

compuestos al medio por lo que en muchos casos se suele utilizar polipropileno
y polietileno de grado médico para su fabricación.
Figura 2. Dispositivos convencionales en SPE.
15
Asimismo, en la bibliografía reciente se reportan nuevos sistemas como:

los multijeringa en distintas variedades y los sistemas integrados en válvula. El
libro del Dr. Víctor Cerdá (Universidad de las Islas Baleares, España) presenta
una excelente revisión de los más novedosos sistemas integrados en línea

[Cerdá, V. y col. 2014].
En este trabajo de Tesis doctoral se implementó un sistema de SPE en

línea utilizando microcolumnas como dispositivo contenedor. Las
microcolumnas permiten explorar distintos tamaños (diámetros y longitudes) y

de esta forma variar la masa de sorbente contenida en las mismas. También
permiten el pasaje de grandes volúmenes de muestra con lo cual hacen posible

la preconcentración de analitos presentes a muy bajos niveles.
Las microcolumnas están pensadas para su re-utilización por lo cual el

sistema debe permitir una correcta limpieza de la microcolumna previo a un
nuevo ciclo de preconcentración para evitar contaminaciones cruzadas.

Asimismo, las microcolumnas pueden utilizarse en sistemas de SPE en línea
acopladas con distintas técnicas analíticas de detección. Para diseñar el sistema

de SPE de forma eficiente debe prestarse especial atención al diseño de la
microcolumna, el material sorbente y a los parámetros propios de la técnica

analítica con la cual se acoplará.
4. Ventajas de la Separación en Fase Sólida
Algunas de las ventajas de esta metodología son: la disminución de los

tiempos de procesamiento, disminución del uso de solventes y por lo tanto una
menor exposición a los mismos, y menores costos de disposición final

[Karadjova, I. y col. 2016; Huck, C. W. 2016]; realizando una adecuada
optimización de parámetros (selección del sorbente, tipo de eluyente, etc.) es

posible mediante la SPE obtener recuperaciones cuantitativas [Das, D. y col.
2012]. Asimismo, utilizando estos sistemas de pretratamiento se puede alcanzar
16
de forma simultánea la preconcentración de analitos y el control de

interferentes. Están reportados factores de enriquecimiento extremadamente
altos con una implementación eficiente del sistema de SPE (~ 1000) [Camel, V.
2003]. La técnica es muy versátil ya que al poder elegir entre una gran cantidad
de sorbentes es posible abarcar un amplio espectro de aplicaciones.
La SPE permite realizar una separación selectiva del analito de interés

evitando la presencia de iones mayoritarios. Esto es fundamental en muchos
casos y en particular en sistemas acoplados con detecciones espectrométricas.

La posibilidad de fabricar el sorbente y conferirle por ejemplo, mayor resistencia
mecánica, mayor resistencia a los interferentes y mayor selectividad es otra

ventaja fundamental del sistema de SPE [Tseng. W-C. y col. 2015].
El método permite la automatización mediante sistemas comerciales o ad

hoc y de esta forma acoplarse en línea con las técnicas de cuantificación [Das, D.
y col. 2012; Zagatto, E. A. G. y col. 1993]. El procesamiento de muestras en línea

evita la manipulación de la muestra entre las etapas de preconcentración y
análisis, esto permite minimizar el riesgo de pérdida y contaminación del analito

[Huck, C. W. 2016] obteniendo alta reproducibilidad.
5. Materiales usados como sorbentes
Los materiales utilizados como sorbentes en sistemas SPE pueden ser

clasificados según diferentes criterios:
Basados en la naturaleza del material: inorgánicos porosos, inorgánicos

porosos con una superficie funcionalizada con compuestos orgánicos,
polímeros orgánicos sintéticos, polímeros orgánicos naturales y otros

materiales.
Basados en el tipo de compuesto a ser procesado: no-polar, polar,

intercambio iónico, afinidad e inmunoafinidad, polímeros impresos, y
otros tipos de sorbentes.
17
Basados en el método de SPE: convencional, microextracción, head space

y otras metodologías.
La clasificación de los sorbentes es arbitraria y compleja debido a que tienen

más de un tipo de funcionalidad en su estructura e interactúan mediante más
de un tipo de interacción con el analito.

Además, desde los ´90 se han reportado trabajos que demuestran que es
posible modificar los sorbentes mediante la inmovilización de compuestos

orgánicos sobre su superficie [Emteborg, H. y col. 1993; Emteborg, H. y col.
1995]. Estas modificaciones se realizan usualmente mediante la incorporación

de grupos funcionales para obtener una mayor selectividad en la separacción.
La selectividad de los sorbentes sólidos modificados hacia ciertos iones

metálicos se atribuye a factores como: 1) el tamaño del compuesto orgánico
utilizado para modificar el sorbente, 2) la actividad de los grupos funcionales

sobre la superficie, y 3) el tipo de interacción de los grupos funcionales. Sin
embargo, la retención selectiva de un único analito presente en muy baja

concentración o de una especie específica del analito es un gran desafío ya que
requiere encontrar un sorbente con la suficiente afinidad para retener

selectivamente a esa especie metálica [Karadojova, I. y col. 2016].
A modo de ejemplo, Shakerian, F. y col. presentan a los polímeros iónicos

impresos (materiales poliméricos avanzados), como sorbentes selectivos en SPE
para la extracción, separación y detección de iones metálicos en distintas

matrices: agua, corrientes de desecho, sedimentos y alimentos. Presentan a la
impresión iónica como un proceso de modificación con el cual mejorar la

selectividad de los polímeros y conferirles sitios específicos de unión [Shakerian,
F. y col. 2016]. Otro ejemplo de la utilización de sorbentes modificados

encontramos en el artículo de Pourjavid, M. R. y col. donde utilizaron un agente
quelante (1-fenil-3-(2-tienil metil) tiourea) para modificar una columna de

grafeno oxidado para separar de Mn(II), Fe(III) y Cu(II) que luego se
18
determinaron por FAAS en muestras de hojas de espinaca, miel, cabello, sangre

y agua [Pourjavid, M. R. y col. 2016].
Teniendo en cuenta la gran potencialidad de estos sistemas en este
trabajo de Tesis doctoral se propusieron como sustratos a los nanotubos de

carbono modificados mediante oxidación seguida de un proceso de
derivatización. En el siguiente capítulo se desarrollan las características

fisicoquímicas generales de los nanotubos, sus antecedentes en aplicaciones
como sorbentes y el aumento de sus capacidades al funcionalizarlos.
6. Metodología
Dependiendo de la naturaleza del compuesto a determinar y el sorbente,
los mecanismos de retención incluyen principalmente la adsorción, intercambio

iónico, complejación y afinidad iónica. Sin embargo, los mecanismos de
retención y elución en sistemas de SPE suelen ser mucho más complejos que los
mecanismos analizados en forma individual y numerosos efectos pueden
influenciar el proceso de retención y elución [Moldoveanu, S. y col. 2015].

La eficacia de un sistema de SPE está determinada por una adecuada
implementación y un estricto control de los parámetros involucrados. Para ello,

es necesario estudiar detalladamente todos los parámetros que intervienen en
el proceso. Algunos de éstos son: la naturaleza química de la funcionalización y

de la estructura de los sorbentes, selectividad, poder de separación, rango de
estabilidad de pH, contenido de impurezas, características de los poros, área

superficial, dimensión y geometría de las partículas, distribución de tamaño de
partícula, material con que se fabrica la columna, estabilidad física, química y

biológica de los sorbentes.
Debe elegirse el sorbente más apropiado según el analito a determinar,

la matriz en la cual se encuentra, la técnica de detección a emplear y cualquier
otro aspecto que pudiera condicionar la elección del sorbente. Luego, debe
19
realizarse la optimización de los parámetros que influyen en la retención del

analito. En una primera etapa la optimización debe realizarse con soluciones
preparadas a partir de estándares del analito a preconcentrar, luego deben
utilizarse materiales de referencia certificados o muestras reales con o sin

agregado del analito (enriquecidas) para poder evaluar la capacidad del método
en condiciones reales. Esto es necesario debido a que la presencia de otros

iones puede afectar la retención del analito en el material sorbente.
La naturaleza y propiedades del material sorbente son muy importantes

para la retención eficiente de especies metálicas. Una cuidadosa elección del
sorbente es vital para el exitoso desarrollo de un sistema de SPE. En forma

genérica, los principales requisitos de un sorbente sólido son: 1) la posibilidad
de retener un gran número de analitos en muy baja concentración en un amplio

rango de pH, 2) rápida y cuantitativa sorción/elución, 3) alta capacidad de
retención, 4) accesibilidad de sitios activos, y 5) posibilidad de regeneración. En

este sentido, los sorbentes que retienen en poco tiempo al analito son
preferidos ya que permiten una extracción más rápida y el incremento del

caudal de carga.
En relación al tamaño de partícula hay que tener en cuenta dos factores

en forma simultánea. Si bien tamaños de partícula chicos proporcionan una
mayor área superficial y mejores propiedades de sorción, también pueden

producir un aumento de presión en el sistema. Este aumento de presión puede
tener una influencia negativa en los sistemas de SPE requiriendo de mayores

tiempos de procesamiento y la aplicación de mayor presión (o vacío) para lograr
el pasaje de la muestra a través del sorbente. Este aumento de presión junto

con varios ciclos de retención/elución producen un aumento en la
compactación del sorbente logrando en muchos casos bloquear el sistema de

SPE.
Luego de elegido el sorbente y optimizado el proceso se necesita

conocer la capacidad de retención del mismo. La capacidad de retención se
20
define como la máxima concentración de analito que es capaz de ser retenido

por una determinada cantidad de sorbente.
Dentro de los parámetros que se estudian para la optimización del
proceso encontramos los: a) de acondicionamiento, b) de carga, y c) de elución.

Durante la etapa de lavado/acondicionamiento se pueden eliminar
posibles contaminantes remanentes en el sorbente y aire. Las características del

solvente de acondicionamiento deben estar en concordancia con la naturaleza
del material sorbente para asegurar una buena interacción con los grupos
funcionales presentes. Asimismo, es aconsejable que el solvente de
acondicionamiento sea de naturaleza similar a la muestra. En muchos casos en

esta etapa puede usarse un mismo solvente que cumpla ambos requisitos. En
general para muestras acuosas es aconsejable que el solvente utilizado tenga el

mismo pH y fuerza iónica que la muestra a procesar. Cuando se utiliza la SPE
mediada por procesos de intercambio iónico es posible utilizar soluciones

reguladoras de pH (buffers) para el acondicionamiento del sorbente al pH
deseado.
Dentro de los parámetros de carga encontramos el volumen de corte
(breakthrough), es decir, el volumen máximo de muestra que puede pasar a

través de una determinada masa de material sorbente colocado en la
microcolumna antes que el analito comience a eluirse de la misma y no se

obtengan recuperaciones cuantitativas (Figura 3).
Figura 3. Concentración de analito (C/C0) en el efluente en función del volumen
de muestra que atraviesa la columna de SPE.
21
El volumen de breakthrough depende tanto del tipo de sorbente y analito

estudiado como de la masa de sorbente considerada y la concentración del
analito en la muestra. También depende del tipo de dispositivo donde se
encuentre confinado el material sorbente y del caudal de carga. Como este

volumen está asociado a la pérdida del analito por la columna se busca que sea
grande. Se define el punto VB al volumen de muestra para el cual se empieza a

observar la presencia del analito en el efluente. Generalmente se mide V B al 1%
de la concentración inicial de analito (C/C0=1%) [Hennion, M-C. 1999]. Al

continuar pasando muestra por la columna el valor de concentración del analito
en el eluvato c se incrementa hasta alcanzar su máximo que es equivalente a la

concentración inicial de la muestra C0. El volumen de muestra eluída con un
99% de concentración de la concentración inicial (C/C0=99%) se denomina Vc.

La curva de breakthrough presenta un punto de inflexión cuyo valor
corresponde al volumen de retención Vr.

Conocer el volumen de breakthrough para un sistema particular de SPE,
un analito específico y en condiciones de operación conocidas es muy útil para

asegurar que el analito de interés no se pierde de la columna durante la
preconcentración de las muestras. Si el analito no se retiene apropiadamente en

la columna el porcentaje de recuperación será bajo y posiblemente no
reproducible. La retención de los analitos en la columna de SPE debe realizarse

tal que el volumen de muestra a analizar se encuentre por debajo del volumen
de breakthrough.
La determinación experimental del volumen de breakthrough es compleja
y es por ello que se han desarrollado métodos para estimarlo [Poole, C. F. y col.
2000]. Para esta determinación debe tenerse en cuenta la naturaleza de la
muestra y la posible presencia de ligandos que podrían provocar una

disminución en el volumen de corte. En el desarrollo de esta Tesis doctoral se
utiliza la capacidad de retención dinámica para poder estimar este parámetro.
22
El caudal de carga debe ser optimizado para asegurar una retención

cuantitativa junto con la disminución del tiempo requerido para el
procesamiento de las muestras. Este parámetro tiene un efecto directo sobre el
volumen de breakthrough ya que caudales de carga elevados reducen este

volumen [Poole, C. F. y col. 2000].
El pH de la muestra es un parámetro fundamental para lograr una

eficiente retención de los analitos por el material sorbente y su influencia es
muy dependiente de la naturaleza del sorbente. El valor de pH al cual se

encuentre la solución de carga definirá la forma en la cual se encontrarán los
grupos funcionales presentes en el sorbente y de esta manera es posible

conseguir la retención de especies cargadas [Poole, C. F. y col. 2012]. Este
parámetro debe ser cuidadosamente optimizado y es crucial para asegurar la

retención cuantitativa del analito y en algunos casos la retención selectiva. El
mecanismo de retención de especies iónicas esta gobernado mayormente por

el intercambio iónico en el sorbente. Este intercambio esta basado en la
capacidad del compuesto de encontrarse en forma iónica, retenerse, y ser

eluído luego, por ejemplo, de la modificación del pH del solvente de elución,
modificando de esta forma, su interacción por el sorbente [Moldoveanu, S. y col.

2015]. Por ejemplo, en el caso de los intercambiadores catiónicos, muy bajos
pHs usualmente producen pobres extracciones debido a la competencia entre

los protones y las especies catiónicas. Otro ejemplo, es el rol que tiene el pH en
la retención de especies metálicas sobre la superficie de los nanotubos de

carbono (CNTs) debido a que la carga que adquiere su superficie depende de la
acidez del medio en que se encuentre [Pyrzynska, K. 2010]. Cuando el valor del
pH > pHpzc (pH de carga cero), los cationes metálicos pueden retenerse en la
superficie de los CNTs oxidados, y es por ello que la retención de los iones
metálicos aumenta al aumentar el valor del pH. Como el desempeño de los
CNTs oxidados depende mayormente de la cantidad de especies conteniendo

grupos funcionales oxigenados, diferentes valores de pH están reportados
23
como óptimos, por ejemplo para la retención de tierras raras (REEs), desde 1,5
[Jerez, J. y col. 2014] hasta 4,0 [Cho, J. y col. 2012].
La presencia de ligandos en la muestra es otra característica que debe
estudiarse ya que puede afectar la retención del analito al poder formarse

complejos estables, con lo cual el analito estaría menos disponible para su
retención en el sorbente. La presencia de iones concomitantes también puede

causar problemas/interferencias durante la SPE y es motivo de estudio para
cada sistema de extracción. En particular, deben estudiarse los iones que se

encuentran en altos niveles de concentración ya que pueden competir con el
analito en el proceso de retención sobrecargando el sorbente o causando

interferencias durante la etapa de análisis. También debe estudiarse el efecto de
los distintos iones sobre las técnicas utilizadas para la cuantificación.

La etapa final del proceso de SPE es el pasaje de un solvente apropiado a
través de la columna para eluir cuantitativamente el analito. La recuperación del

analito depende de las propiedades del solvente (y su interacción con el analito)
y de las interacciones específicas del analito con el sorbente.

El tipo de eluyente utilizado es fundamental para conseguir eficiencia y
selectividad. Una alta afinidad del analito por la superficie del sorbente involucra
una alta retención, lo cual a priori es deseable, sin embargo puede influenciar
negativamente el proceso de elución y provocar una baja recuperación del

analito. Es por ello que se debe seleccionar adecuadamente el solvente de
modo de satisfacer los requerimientos específicos de su aplicación, es decir,

eluir al analito sin eluir la matriz (donde se pueden encontrar retenidos los
interferentes), o eluir la matriz sin afectar el analito retenido. Asimismo para

obtener altos factores de enriquecimiento se busca que la elución completa del
analito se consiga utilizando el menor volumen posible. Los eluyentes pueden

ser orgánicos, inorgánicos o agentes complejantes [Camel, V. 2003]. Es posible
modificar su identidad, concentración, pH y fuerza iónica para realizar

experiencias secuenciales que permitan la elución cuantitativa de un analito
24
específico [Moldoveanu, S. 2015]. En algunos casos la elución puede ser

selectiva y permitir la desorción de un analito frente a otros como en el caso de
Bi(III) en presencia de Pb(II) y Cu(II), donde Yamini, Y. y col. utilizaron HCl 1 mol
l-1 para lavar Pb(II) y HCl 1,5 mol l-1 para lavar Cu(II), ambos retenidos en una
resina de C18-silica modificada con Cyanex 301 y luego se eluyó el analito de
interés, Bi(III), utilizando HNO3 3 mol l-1 [Yamini, Y. y col. 2002]. Otro caso donde
se hace uso de la selectividad del eluyente, es para conseguir la especiación, es
decir, la determinación selectiva de una especie. Por ejemplo, la utilización de

HCOOH para remover selectivamente el Se(IV) de una resina de intercambio
dejando retenido el Se(VI) que luego se eluye con HCl 2 mol l-1[Gomez-Ariza, J.
L. y col. 1999]. También se encuentra reportado un sistema en línea que permite
la especiación de Sb(V) y Sb(III) utilizando un eluyente reductor en una primera

etapa para determinar Sb total y luego la elución selectiva de Sb(III), ambos
retenidos sobre levaduras, para luego determinar la concentración de las

especies por diferencia [Menagário, A. A. y col. 2006]. Tuzen, M. y col.
desarrollaron un sistema de SPE utilizando como sorbente una resina comercial

modificada con Staphylococcus aureus para la retención de metilHg y Hg(II),
realizaron una elución secuencial y observaron que eluyendo con HCl 0,1 mol l-1
conseguían la elución selectiva de metilHg en presencia de Hg(II). Encontraron
también, que la elución cuantitativa del Hg(II) sólo era posible al utilizar
concentraciones de HCl mayores a 2 mol l-1 [Tuzen, M. y col. 2009]. La elución
secuencial sigue siendo relevante encontrándose experiencias más recientes

como, por ejemplo su aplicación a la determinación y cuantificación de drogas
junto con sus metabolitos. En este caso, la sustancia de interés se retiene con
sorbentes hidrofóbicos, luego las sales y compuestos polares se lavan con un
solvente adecuado. Se acondiciona la columna con un eluyente ácido para

protonar las bases presentes aumentando la retención por el mecanismo de
intercambio iónico para luego eluir con un solvente orgánico y de esta forma
separar las fracciones neutras de las ácidas [Poole, C. F. y col. 2012]. Otro
25
ejemplo lo encontramos en la separación de nanopartículas de Au de iones de

Au. Para ello Su, S. y col. propusieron una novedosa estrategía basada en una
separación en fase sólida magnética mediante la utilización de iones de Al(III)
inmobilizados en nanopartículas de Fe3O4@SiO2@ácido iminoacético como

sorbente. Luego de la retención los iones de Au y las nanopartículas de Au
fueron eluídos selectivamente con Na2S2O3 y NH3.H2O, respectivamente [Su, S. y

col. 2014]. Finalmente, y no menos importante, el eluyente seleccionado debe
ser compatible con las técnicas de análisis a utilizar para la cuantificación del
analito.
En muchos casos, por cuestiones de practicidad las etapas de carga de

muestra y elución son operadas de forma similar. Sin embargo, para evitar una
adsorción irreversible, compactación del sorbente y asegurar recuperaciones

cuantitativas se recomienda realizar la elución en contracorriente. Esto significa
hacer pasar el eluyente en sentido opuesto al sentido de carga de la muestra.

Durante la optimización del caudal de elución se debe buscar una
velocidad tal, que minimice el tiempo de esta etapa del proceso y a su vez
permita la recuperación cuantitativa del analito estudiado [Camel, V. 2003]. Por
ejemplo, eluciones cuantitativas de iones de Fe se obtienen con un caudal de 1

a 3,5 ml min-1 cuando se encuentra retenido en discos de C 18-silica [Shamsipur,
M. y col. 2001]. En el caso de sorbentes alojados en cartuchos, están reportados

caudales de elución típicos entre 0,5 y 5 ml min-1 y en el caso de sorbentes
alojados en discos, entre 1 y 20 ml min-1 [Shamsipur, M. y col. 2000]. A modo

general, encontramos que a mayores caudales de elución, mayores volúmenes
de eluyente se necesitarán para lograr la elución completa [Shamsipur, M. y col.

2001; Shamsipur, M. y col. 2000; Shamsipur, M. y col. 2000]. Sin embargo, hay
que encontrar una relación de compromiso entre estos dos factores, ya que
menores volúmenes de elución son necesarios para obtener altos factores de
enriquecimiento. Al igual que para el volumen de breakthrough es posible

determinarlo experimentalmente o por estimaciones teóricas [Poole, C. F. y col.
26
2000]. La etapa de elución comprende la difusión de las especies metálicas

retenidas en la superficie/poros del sorbente y para ello debe contar con tiempo
suficiente. En algunos casos se pueden realizar eluciones en más de una etapa
para mejorar el porcentaje de desorción [Camel, V. 2003]. También puede

disminuirse el volumen de elución incrementando la concentración del eluyente
(un ejemplo clásico es cuando se utilizan ácidos para eluir); sin embargo, como
se mencionó hay que tener en cuenta los posibles inconvenientes que ello
podría tener con las técnicas analíticas de cuantificación acopladas (por

ejemplo, FA AAS) [Camel, V, 2003]. Otra alternativa para disminuir el volumen de
elución es utilizar microdispositivos, como microcolumnas o microdiscos que

permitan reducir el volumen de eluyente [Thurman, E. M. y col. 2000].
7. Cuantificación en sistemas SPE
La preconcentración alcanzada mediante SPE conduce a cambios en la

concentración del analito al comparar su concentración en la muestra original y
en la muestra procesada. Entre los parámetros que caracterizan el cambio en la

cantidad y concentración de analito encontramos la recuperación R (Ecuación
7.1.) y el factor de enriquecimiento F (Ecuación 7.2.) ya mencionados
anteriormente.
Ecuación 7.1.
Donde qp es la cantidad de analito en la muestra procesada y q i es la cantidad

de analito en la muestra inicial.
Ecuación 7.2.
Donde cp es la concentración en la muestra procesada y c i es la concentración
en la muestra inicial.
27
Durante la optimización del sistema de SPE se busca obtener

recuperaciones cercanas al 100%. El parámetro R se puede evaluar aplicando la
metodología optimizada a soluciones de concentración conocida preparadas
por dilución de soluciones estándar. Las concentraciones deben elegirse

cercanas a la concentración en la que se espera encontrar al analito en la
muestra real.
Cuando se utilizan muestras líquidas, la Ecuación 7.2 puede expresarse en
términos de volumen (Ecuación 7.3.) donde, Vmuestra, es el volumen de muestra y

Velución, volumen de eluyente.
Ecuación 7.3.
La recuperación, R, considera el rendimiento tanto de la etapa de

retención del analito en el sorbente como la elución del mismo.
8. Microseparación en fase sólida
Al igual que en otros campos de la ciencia, la miniaturización, recibe gran

interés de la comunidad científica, ya sea para aprovechar los beneficios de
nuevas propiedades que solo se manifiestan en materiales de dimensiones

diminutas o para disminuir la cantidad de reactivos con fines de sustentabilidad.
Los sistemas de SPE no escapan a esta realidad y la utilización de muy poca

cantidad de sorbente para la retención de analitos de interés recibe el nombre
de microseparación en fase sólida (SPME). La técnica requiere columnas de

menor tamaño para alojar menor cantidad de sorbente pero el proceso se lleva
a cabo con gran eficiencia. La SPME tiene la ventaja de ser fácilmente adaptable
a los sistemas en línea convencionales. El fundamento de la técnica es el mismo
que para la SPE convencional ya que consiste en exponer una pequeña cantidad
28
de sorbente a la solución de muestra con el propósito de que el analito se

retenga en el sorbente.
9. Conclusiones
En este capítulo se han resumido las características más importantes del
sistema de pretratamiento de SPE implementado en el desarrollo de esta Tesis

doctoral. En los siguientes capítulos se aborda el uso de los nanotubos de
carbono como material sorbente y sus modificaciones para finalmente presentar

tres desarrollos concretos de la cuantificación de especies metálicas presentes
en muy baja concentración en muestras de aguas de diversos orígenes, que no
podrían haberse cuantificado a esos niveles con gran parte de las técnicas
analíticas disponibles sin aplicar un sistema de preconcentración de la muestra.
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34
Capítulo 2
Nanotubos de Carbono como
Material Sorbente
En este capítulo se desarrollan conceptos relacionados con los nanotubos de
carbono, fundamentalmente: sus características y su utilización en sistemas de

separación en fase sólida. Se hará hincapié en sus aplicaciones y la posibilidad
de funcionalización para ser empleados como sorbente con alta selectividad.

Capítulo 2 Nanotubos de Carbono como Material Sorbente
Abreviaturas
CNTs Carbon nanotubes (Nanotubos de carbono)

CVD Chemical vapor deposition (Deposición química en fase
vapor)
DCC N,N'-dicyclohexylcarbodiimide
(N,N´diciclohexilcarbodiimida)
EDC N-eltil-N´-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida
EDS Energy dispersive spectroscopy (Espectroscopía dispersiva

en energías)
FTIR Fourier transform infrared spectroscopy (Espectroscopía
infrarroja por transformada de Fourier)
GCB Graphitized carbon black (Carbón grafitizado)

LA Ablación laser

pared múltiple)
MWCNT-COCl Cloruro de acilo de MWCNTs

MWCNT-COOH Nanotubos de carbono de pared múltiple oxidados
PAHs Polycyclic aromatic hydrocarbons (Hidrocarburos
aromáticos policíclicos)
PGC Porous graphitic carbon (Carbón poroso grafitizado)
SEM Scanning electron microscopy (Microscopia electrónica de

barrido)
SOCl2 Cloruro de tionilo

SWCNTs Single-walled carbon nanotubes (Nanotubos de carbono de

pared única)
TEM Transmission electron microscopy (Microscopía electrónica

de transmisión)
36
TGA Thermogravimetric analysis (Análisis termogravimétrico)

XPS X-ray photoelectron spectroscopy (Espectroscopia de
fotoelectrones)
XRD X-ray diffraction (Difracción de Rx)
37
1. Introducción
Los nanotubos de carbono (CNTs) fueron reportados por primera vez por
Sumio Iijima en 1991 [Iijima, S. 1991] y desde entonces han despertado el
interés de científicos del área de la química, física y materiales. Los CNTs pueden
clasificarse como nanotubos de carbono de pared única (SWCNTs), formados
por una única capa de grafeno (el grafeno es el nombre que se le dio a la
monocapa de grafito, Novoselov, K. S. 2004, con diámetros de entre 1-2 nm, y
nanotubos de pared múltiple (MWCNTs), formados por varias capas de grafeno

enrolladas una sobre la otra en forma concéntrica con diámetros de entre 5 a 50
nm [Davis, J.J. y col. 2003]. Debido a su estructura, los CNTs han despertado
gran interés en el ambiente cientifico por sus propiedades de transporte, alto
módulo elástico, alta estabilidad térmica y gran área superficial disponible [Cai,
Y. Q. y col. 2003], que les confieren múltiples aplicaciones tales como

microscopías de sonda [Wu, Z. y col. 2015], sensores electroquímicos [Yang, J. y
col. 2015], transistores de efecto de campo [Wang, M. y col. 2014], catálisis

[Tourani, S. y col. 2015], medio para el almacenamiento de hidrógeno [Naresh
Muthu, R. y col. 2016.], etc. Como consecuencia de la gran área superficial, la

habilidad para establecer interacciones - y su excelente estabilidad química,
mecánica y térmica, los CNTs son muy atractivos como material sorbente en
sistemas de separación en fase sólida (SPE).
Como se mencionó en el capítulo anterior, en los procesos de SPE se

pueden utilizar numerosos tipos de sorbentes, entre ellos, el carbón activado ha
sido uno de los primeros en utilizarse para esta aplicación. El carbón activado
presenta una gran capacidad de sorción debido principalmente a su alta
porosidad y su amplia disponibilidad de áreas superficiales que se encuentran

en el rango de los 300 a 2500 m2g-1 [Efremenko, I. y col. 2006]. La estructura
general del carbón activado consiste en pequeños cristales de grafito altamente

desordenados, irregulares, con alta rugosidad y con una superficie heterogénea.
38
Las propiedades de sorción del carbón activado se encuentran fuertemente

influenciadas por su área superficial específica, distribución de tamaño de poros
y el contenido de elementos inorgánicos. La estructura superficial es muy

compleja y depende del material de partida utilizado y de su método de
producción, así como también de su pretratamiento. Los pretratamientos más

usuales se basan en ataques ácidos oxidantes que causan la reorganización de
la estructura, sus poros y su superficie y pueden afectar la capacidad de

interacción con los iones metálicos [Boehm, H. P. 2002]. Si bien el carbon
activado ha sido utilizado como sorbente [Cerutti, S. y col. 2005], presenta la

desventaja de la heterogeneidad de su superficie cuyos grupos funcionales
provocan que haya muy baja reproducibilidad del material sintetizado.
Asimismo, dependiendo del origen del carbón, su naturaleza hidrofóbica puede
impedir la difusión de las especies iónicas metálicas hacia el interior del

sorbente, lo que hace más dificultoso su uso en condiciones dinámicas (estudios
en línea) debido a que no se obtienen intercambios a la velocidad compatible

con la metodología en línea [Terada, K. 1991].
En la búsqueda de sorbentes que combinaran las buenas propiedades de

sorción del carbón activado y buscando superar sus limitaciones podemos
nombrar la aparición del carbón grafitizado (GCB) que presenta una estructura
más homogénea y por lo tanto mayor reproducibilidad y del carbón poroso

grafitizado (PGC) que presenta mayor estabilidad que el GCB. El GCB ha sido
muy utilizado en SPE de contaminantes orgánicos polares en muestras de agua

[Forgács, E. y col. 2000] pero su uso para elementos traza es escaso [Ferri, T. y
col. 1989]. Más recientemente se han empezado a utilizar fullerenos, moléculas

cerradas de carbono con arreglo de anillos pentagonales y hexagonales y CNTs
para la retención selectiva de especies metálicas en solución [Castro Grijalba, A.

y col. 2015, Parodi, B. y col. 2015, Peña Crecente, R.M. y col. 2014] con
resultados alentadores. En la Figura 1 se presentan las distintas estructuras de

los materiales base carbono mencionadas.
39
a)
b) c)
d)
e) f)
Figura 1. a) Esquema de una única capa de grafeno y la forma en que se enrolla
para formar CNTs, b) microestructura del carbon activado, c) imagen SEM de un

carbon activado (Air-n-Water Inc.®), d) estrcutura de un GCB, e) esquema de
una estructura 3D de PGC, f) fullereno.
Cuando analizamos algunas de las excelentes propiedades de los CNTs,

que ya se mencionaron, y se encuentran presentadas con profundidad en
exhaustivas recopilaciones [Valcárcel, M. y col. 2007, Ravelo-Pérez, L. M. y col.
2010; Ren, X. y col. 2011;], encontramos que la propiedad más importante desde
el punto de vista de la Química Analítica es que poseen la capacidad de

establecer diferentes tipos de interacciones con analitos orgánicos e inorgánicos
[Herrera-Herrera, A. V. y col. 2012] lo cual les confiere numerosas aplicaciones

[Valcárcel, M. y col. 2005, Agui, L. y col. 2008, Wanekaya, A. K. 2011]. Asimismo,
encontramos que los SWCNTs y los MWCNTs han sido señalados en numerosas
ocasiones como los materiales más investigados del siglo XXI [Ying, L. S. y col.
2011] y como resultado del esfuerzo realizado por la comunidad científica
40
internacional numerosos logros que involucran estos materiales se han

conseguido en diferentes campos, incluida la Química Analítica.
En esta Tesis doctoral se utilizan los CNTs para separar y preconcentrar

iones metálicos presentes en matrices naturales/aguas a muy bajas
concentraciones, por lo tanto el capítulo se desarrollará mencionando los

aspectos más relevantes de los CNTs haciendo foco en esta aplicación.
Como se mencionó, los CNTs son los sorbentes de base carbono más
estudiados recientemente [Pyrzynska, K. 2007]. Esto se debe, si los comparamos
con el carbón activado, a que los CNTs poseen una estructura atómica bien
definida y por lo tanto pueden obtenerse resultados reproducibles al
preconcentrar iones metálicos. Asimismo, los arreglos atómicos hexagonales de
cada una de las capas de grafeno que forman los CNTs son ideales para las
interacciones fuertes con otras moléculas. Además, su gran área superficial los
hace excelentes candidatos para la preconcentración de compuestos orgánicos
e iones de metales de interés [Azevedo Lemos, V. A. y col. 2008, Pyrzynska, K.

2010]. Sin embargo, los CNTs sin modificar son insolubles y muy difíciles de
dispersar en casi cualquier solvente, esto ocurre debido a las fuertes

interacciones de van der Waals que obstaculizan la retención de iones
metálicos. De allí surge la necesidad de modificar su superficie para mejorar la
dispersión, la retención de iones metálicos y conferirles selectividad cuando se

los quiere utilizar en estudios de SPE.
2. Elección del tipo de CNTs para su uso en SPE
En la introducción se presentaron los dos tipos más importantes de CNTs:

SWCNTs y MWCNTs. Se presenta un breve análisis de los mismos para
comprender el motivo de la elección de los MWCNTs para el desarrollo de este

trabajo.
41
Definimos a los SWCNTs como una única capa de grafeno enrollada

formando un tubo cilíndrico sin costura y a los MWCNTs como un arreglo de
estos nanotubos enrollados en forma de anillos concéntricos (Figura 2)

[Baughman, R. H. y col. 2002]. La única capa de grafeno que forma los SWCNTs
posee propiedades distintas a las esperables; por ejemplo, mientras el grafeno

es un semiconductor donde el ancho de banda prohibida es cero, los SWCNTs
pueden presentar comportamiento metálico o de semiconductor. La diferencia

en el comportamiento depende de la dirección en la cual la capa de grafeno se
enrolla para formar el tubo cilíndrico. Las propiedades electrónicas de los

MWCNTs con estructura perfecta son similares a las de los SWCNTs con
estructura perfecta ya que la interacción entre los cilindros que forman los
MWCNTs es muy débil. La presencia de varias capas de grafeno dispuestas en
forma concéntrica una alrededor de la otra en los MWCNTs le confieren una

mayor área específica [Peigney, A. y col. 2001] y una mayor capacidad de
adsorción [Yang, K. y col. 2007] debido a su superficie extremadamente

hidrofóbica y su estructura única de cavidad tubular interna [Cai, Y.Q. y col.
2003]. Uno de los motivos de implementar sistemas de SPE está enfocado en el

desarrollo y optimización de metodologías analíticas que permitan utilizar
instrumentación menos sofisticada, esto redunda en menores costos y la
posibilidad de realizar los análisis en laboratorios que no posean la

instrumentación mencionada. En este sentido cabe destacar que los MWCNTs
son mucho más económicos que los SWCNTs [Liang, X. y col. 2014].
42
a)
b) c)
Figura 2. a) Imagen TEM de un MWCNT conteniendo nueve SWCNTs enrollados
en forma concéntrica, b) imagen TEM de un manojo de SWCNTs de 1,4 nm de

diámetro, c) imagen SEM de MWCNTs crecidos en forma de bosque. Adaptado
de Baughman, R. H. y col. 2002.
En los últimos años los MWCNTs sin modificar han sido utilizados
exitosamente en SPE para la extracción de diferentes compuestos orgánicos no
polares como los hidrocarburos aromáticos policíclicos (PAHs), pesticidas,

agentes químicos con fines bélicos, drogas, compuestos fenólicos, tioles,
materia orgánica disuelta y cobalaminas [Liang, X. y col. 2014].

Los iones metálicos en solución se encuentran en forma hidratada o
formando complejos con aniones sencillos y no se adsorben sobre los MWCNTs

sin modificar. Para que ocurra la retención debería formarse un complejo
hidrofóbico y de esa forma interactuar mediante fuerzas de van del Waals o
interacciones hidrofóbicas con la superficie de los nanotubos. Para formar estos
complejos hidrofóbicos se eligen agentes quelantes teniendo en consideración

la velocidad con la que reaccionan con el metal, la solubilidad en agua y la
estabilidad en el rango de pH. Por lo tanto, la utilización de MWCNTs sin

modificar para la retención de especies metálicas requiere la formación de
complejos hidrofóbicos como tratamiento previo a la carga de la muestra en la

columna. Este procedimiento hace más compleja la técnica separativa y requiere
mayores tiempos de procesamiento.

Como estrategia para lograr mejores condiciones de retención de
especies metálicas, la modificación de MWCNTs se ha vuelto cada vez más
43
popular. Encontramos MWCNTs modificados mediante su oxidación y MWCNTs

funcionalizados con diversos compuestos. Los MWCNTs oxidados se consiguen
realizando oxidaciones fuertes con ácidos inorgánicos que introducen funciones

hidroxilo, carbonilo y carboxilo sobre la superficie de los nanotubos y les
confiere la habilidad de retener especies metálicas cuando el pH de la muestra

se encuentra por encima del punto isoeléctrico adquirido por los MWCNTs
oxidados. Asimismo, los MWCNTs funcionalizados se consiguen mediante la

derivatización de MWCNTs oxidados. De esta forma es posible inmovilizar
moléculas biológicas que le otorguen un alto grado de control y selectividad

[Chen, R. J. y col. 2001].
Es imposible realizar un relevamiento de toda la bibliografía disponible y
analizar exhaustivamente las características de cada uno de los sustratos y
procedimientos involucrados, es por ello que mencionaremos a dos grupos de

trabajo muy activos en la utilización de MWCNTs funcionalizados
covalentemente para la retención de especies metálicas en solución. El grupo de

Soylak, M. y col. ha utilizado MWCNTs modificados con polipirroles para formar
un nanocompuesto que le permitió separar y preconcentrar Pb(II) a nivel de

trazas en muestras de agua [Sahmetlioglu, E. y col. 2014]; también ha utilizado
MWCNTs funcionalizados con 2-((3-sililpropilimino)metil fenol para la retención
de Cu(II), Pb(II), Fe(II), Ni(II) y Zn(II) en muestras alimenticias (puerro, rábano,

ananá y bananas) [Ghaedi, M. y col. 2013]; y MWCNTs funcionalizados con
Pseudomonas aeruginosa para la retención de Co(II), Cd(II), Pb(II), Mn(II), Cr(III) y

Ni(II) en muestras de relevancia ambiental [Tuzen, M. y col. 2008]. Asimismo, el
grupo de Teixeira-Tarley, C. R. y col. ha utilizado MWCNTs funcionalizados con

3-mercaptopropiltrimetoxisilano para preconcentrar Cd(II) en muestras de agua
y cigarrillo [Corazza, M. Z. y col. 2012] y Pb(II) en muestras de agua y

sedimentos [Somera, B. F. y col. 2012]; MWCNTs oxidados se utilizaron para
preconcentrar U(VI) en distintas muestras de agua [do Lago, A. C. y col. 2012],

Sn(II y IV) también en muestras de agua [Costa, H. H. V. y col. 2011], y Co(II) en
44
muestras de agua y orina [Souza, J. M. O. y col. 2009]; sistemas de inyección en

línea acoplados con espectrofotometría molecular UV-visible utilizando
MWCNTs oxidados para la preconcentración de Cu(II) para su monitoreo en

muestras de agua [de Fátima Lima, G. y col. 2010]; también ha utilizado
MWCNTs oxidados para la preconcentración de Pb(II) en aguas (agua corriente,

agua mineral, suero fisiológico y agua de mar sintética) y plantas medicinales
(ajo y Ginkgo Biloba) [Barbosa, A. F. y col. 2007]; un nanocompuesto de alúmina

sobre MWCNTs fue utilizado para preconcentrar Ni(II) en muestras de agua
[Amais, R. S. y col. 2007]; utilizaron espectroscopia de absorción atómica con

llama de termospray para determinar Cd(II) luego de preconcentrarlo con SPE
utilizando MWCNTs oxidados en muestras de agua, de cigarrillo y material
biológico de referencia (hígado bovino y centeno) [Teixeira-Tarley, C. R. y col.
2006].
El grupo de trabajo en el cual se desarrolló esta tesis utilizó MWCNTs
para preconcentrar y especiar V(IV y V) en muestras de agua [Gil, R. A. y col.

2007], se utilizaron MWCNTs funcionalizados con L-tirosina para la retención de
Co(II) [Pacheco, P. H. y col. 2009], MWCNTs se utilizaron para la

preconcentración de Tl(I y III) [Gil, R. A. y col. 2009, Pacheco, P. H. y col. 2009],
Cd(II) [Parodi, B. y col. 2011], Ni(II) y Pb(II) [Savio, M. y col. 2011], Hg(II) [Parodi,
B. y col. 2014], Mo(VI) [Bazán, C. y col. 2014] y Bi(III) [Parodi, B. y col. 2015].
3. Métodos de síntesis de MWCNTs
Se comentarán las técnicas más utilizadas para la obtención de MWCNTs
haciendo foco en las características de los nanotubos como producto final y en

los procesos de post tratamiento para obtener un producto de calidad
suficiente y reproducible. No pretende ser una descripción exhautiva sino un

breve resumen que ayude a entender la necesidad de los procesos de
purificación y caracterización con el fin de detectar posibles contaminantes que
45
puedan provenir del proceso de síntesis. Este conocimiento es necesario para

evaluar posibles interferencias en el desarrollo del proceso de SPE.
Los MWCNTs pueden prepararse utilizando el método de evaporación de

descarga por arco que se ha utilizado previamente para la obtención de
fullerenos [Ebbesen, T. W. y col. 1992]. En la actualidad es posible obtener

moderadas cantidades de MWCNTs con una relativa precisión en el número de
capas utilizando procesos de descarga por arco [Keidar, M. 2007], ablación laser
(LA) [Kusaba, M. y col. 2006] y la deposición química en fase valor (CVD)
[Flahaut, E. y col. 2005]. Además, la creciente demanda internacional de

MWCNTs estimula la investigación en este campo para la búsqueda de nuevas
tecnologías de síntesis, por ejemplo, el método del catalizador flotante o
distintos tipos de forma de arco [Ying, L. S. y col. 2011].
Las características finales de los MWCNTs dependen fuertemente del

proceso de síntesis utilizado. Por consiguiente, es posible obtener MWCNTs con
los extremos cerrados o MWCNTs con los extremos abiertos, Figura 3;

dimensiones (diámetro y largo), arreglo atómico (forma de unión entre láminas:
zig-zag, armchair o quiral) y el número de paredes concéntricas, que se

requiera, Figura 4.
Figura 3. Esquema de un CNTs con a) extremos cerrados y, b) extremos abiertos.
46
Figura 4. Esquema de los arreglos atómicos posibles y número de paredes en

los CNTs.
Otro desafío de los procesos de síntesis es la cantidad de impurezas

presentes en los MWCNTs, ya que es inevitable encontrar restos de carbono
amorfo, fullerenos, nanopartículas de carbono y partículas metálicas utilizadas
como catalizador. La presencia de estas impurezas pueden afectar las

propiedades de los nanotubos. Para abordar esta problemática es necesario
realizar post tratamientos de purificación [MacKenzie, K. y col. 2009] y utilizar

técnicas de caracterización que nos ayuden a seguir el proceso [Belin, T. y col.
2005]. Existen métodos de purificación químicos, físicos y combinaciones de

ambos que han sido ampliamente utilizados. Afortunadamente, debido a la
demanda creciente, es posible encontrar en el mercado proveedores de
MWCNTs de diferentes dimensiones, tipos y pureza.
4. Modificación de la superficie de los MWCNTs
La necesidad de modificar la superficie de los MWCNTs ya se puso de

manifiesto en este capítulo al revisar la forma de interacción que deben mostrar
los nanotubos para conseguir interactuar con especies metálicas en solución y

al mencionar la necesidad de remover impurezas que pudieran estar presentes
en el material. También existen otros motivos que justifican la modificación de

los MWCNTs, entre ellos podemos mencionar: modificar la baja dispersión que
47
presentan naturalmente los nanotubos hacia la mayoría de los solventes debido

a las fuertes interacciones de van der Waals que existen entre los distintos
manojos de tubos, remover los extremos que pudiesen estar cerrados por
estructuras tipo fullerenos que no permiten el acceso al interior de los tubos y
conferirle selectividad a los MWCNTs.

La estructura carbonada de los nanotubos los hace atractivos a los
distintos procesos de modificación química. Cada reacción química sobre su

estructura se utiliza para conferirles características particulares que pueden ser
empleadas para una función específica. Si bien existen numeros procesos con el
agregado de surfactantes para conseguir, por ejemplo, la dispersión en medios
acuosos [López-Feria, S. y col. 2009.], vamos a hacer foco en los métodos de
funcionalización de las paredes de los MWCNTs [Merkoci A. 2006] y
tratamientos oxidativos en volumen [Valcárcel, M. y col. 2005].

Podemos separar las modificaciones como de carácter covalente y no-
covalente [Meng, L. y col. 2009].

El cambio en la selectividad de los MWCNTs debido a la funcionalización
covalente de su superficie ocurrirá en primer lugar en los extremos de los tubos,

sobre la estructura tipo fullereno, que es más reactiva que las paredes de los
nanotubos [Ravelo-Pérez, L. M. y col. 2010]. Para lograr la incorporación de
grupos hidroxilo, carboxilo o carbonilo en las paredes de los nanotubos deben

utilizarse condiciones severas de oxidación química debido a la alta estabilidad
de la estructura [Wang, Y. y col. 2005]. En la bibliografía encontramos

numerosas modificaciones químicas, como reacciones de halogenación,
hidrogenación, adición de radicales, adición nucleofílica y cicloadiciones [Hirsch,

A. y col. 2005]. Asimismo, las funcionalizaciones no-covalentes de la pared de
los MWCNTs también producen cambios en la selectividad. Este tipo de

funcionalización incluye interacciones iónicas (ej., dipolo-dipolo), acoplamiento
de electrones - , uniones por puentes de hidrógeno, fuerzas electrostáticas,

fuerzas de van der Waals, uniones dativas e interacciones hidrofóbicas.
48
Esta breve introducción nos permite vislumbrar la gran cantidad de

posibilidades que existen en función de las necesidades y la imaginación. Se
profundizará en las modificaciones covalentes (oxidación y funcionalización con

aminoácidos) que son las que se utilizaron para modificar los sustratos
utilizados en el desarrollo de esta Tesis doctoral.
4.1. Modificaciones covalentes - Oxidación
Las modificaciones covalentes generalmente se inician con una primera

etapa de oxidación. Los procesos de oxidación se han vuelto populares por su
simpleza y versatilidad, siendo posible utilizar ácidos, ozono o plasma. La

utilización de condiciones severas de tratamiento, ácidos inorgánicos fuertes
(HNO3, H2SO4) y temperatura, provoca la remoción de las estructuras tipo

fullereno que se encuentran en los extremos de los nanotubos, además generan
defectos en las paredes de los CNTs que sirven de anclaje a los grupos COOH,
-OH y C=O [Wepasnick, K. A. y col. 2010] (Figura 5), generan una superficie
más hidrofílica [Xiaojing, L. y col. 2014], e inclusive llegan a cortar los nanotubos
disminuyendo su largo. Asimismo, el tratamiento con ácidos es el más utilizado
para remover carbono amorfo y partículas de óxidos metálicos provenientes del

proceso de síntesis de los MWCNTs [Pyrzynska, K. 2010]. La incorporación de
estos grupos aporta átomos con pares de electrones libres capaces de formar
complejos con los iones metálicos a retener [Sitko, R. y col. 2012] y la presencia
de grupos con oxígeno facilita la exfoliación de los manojos de CNTs y por lo
tanto aumenta su dispersión en medios polares. Los grupos introducidos son la

base para posteriores derivatizaciones que le conferirán a los nanotubos
selectividades particulares.
49
H2SO4
HNO3
Figura 5. Proceso de oxidación de CNTs.
Los grupos funcionales formados sobre la superficie de los MWCNTs
2002]
carga de los MWCNTs sea cero. Cuando el valor de pH de la solución en
contacto con la superficie del nanotubo se encuentre por encima del punto
isoeléctrico la superficie adquirirá una carga negativa y sus interacciones

electrostáticas se estabilizarán al sorber especies catiónicas. La presencia de
sitios activos sobre la superficie, el interior de los nanotubos y el espacio inter-

nanotubo contribuyen a la capacidad de retención de especies metálicas de los
MWCNTs. Por el contrario, cuando el valor del pH disminuye por debajo del
punto isoeléctrico los protones compiten con las especies catiónicas por los
mismos sitios y la capacidad de sorción de los nanotubos hacia las especies
catiónicas disminuye. En este sentido, debido a que las especies metálicas son
pobremente retenidas a pHs ácidos, soluciones conteniendo HCl o HNO3 son
utilizadas para eluir ya que el protón desplazará a la especie retenida. El efecto

del pH es fundamental y debe ser cuidadosamente estudiado en los sistemas de
SPE para la retención de especies metálicas [Ravelo-Pérez, L. M. y col. 2010].

Como se mencionó, la funcionalización covalente requiere de
condiciones severas de oxidación debido a la estabilidad de la estructura de los

MWCNTs lo que puede provocar alteraciones en su superficie, modificando sus
propiedades y pudiendo afectar la capacidad de sorción de los MWCNTs

[Herrera-Herrera, A. V. y col. 2012]. El estudio de Wang, S. reporta que la
50
funcionalización covalente no debería superar el 10% de la superficie del

nanotubo, siendo este un porcentaje de compromiso entre los beneficios
aportados por la funcionalización y el deterioro de la estructura [Wang, S. 2009].

Sin embargo, estos aspectos deben verificarse utilizando técnicas que nos
permitan cuantificar el grado de funcionalización y por otro lado observar

microscópicamente el efecto sobre la estructura del nanotubo.
Los tratamientos de oxidación producen una mejora significativa en la

dispersión de los MWCNTs debido a la disminución de la atracción de las
fuerzas de van der Waals y la repulsión que se establece entre los grupos
funcionales. Como consecuencia adicional, la dispersión facilita la utilización de
varias técnicas de caracterización.
4.2. Funcionalización con aminoácidos
Es posible derivatizar los grupos formados durante el proceso de

oxidación de forma de inmovilizar biomoléculas sobre los MWCNTs y así lograr
un sustrato con mayor selectividad [Azevedo Lemos, V. y col. 2008] (Figura 6). La
mayoría de las derivatizaciones se realizan a partir de la formación de amidas y
ésteres. Estos grupos presentan alta reactividad pudiendo reaccionar con una
gran cantidad de moléculas.
Los aminoácidos y péptidos han demostrado ser de gran interés como
nuevos sustratos en la preconcentración y/o especiación de especies metálicas

en solución debido a la afinidad que poseen para ligar metales. Han sido
utilizados en diferentes campos de la nanotecnología [Schiffrin, A. y col. 2007],

estudios de la interacción metal-aminoácido [Stair, J. L. y col. 2007] y separación
y preconcentración de metales [White, B. R. y col. 2007].

Los aminoácidos poseen diferentes grupos funcionales con diferente
afinidad para unir metales, su selectividad, fuerte capacidad de unión e

inocuidad ambiental son algunas de las propiedades que los hacen
biomoléculas ideales para ser utilizadas en la preconcentración de metales traza
51
[Wildgoose, G. G. y col. 2005]. Asimismo, al inmovilizar estas moléculas se les

confiere una orientación específica con la cual deben lograr la formación del
complejo con el metal a retener.

Ante la presencia de aminoácidos tenemos que tener en cuenta tanto la
retención de las especies metálicas por la formación del complejo como las
interacciones no-covalentes que pueden presentar con el metal. Los
aminoácidos actúan como ligandos bidentados haciendo uso de su grupo

carboxílico y del átomo de nitrógeno del grupo amino.
La forma más general de preparar MWCNTs funcionalizados con

aminoácidos consta de dos etapas:
1) la obtención del cloruro de acilo (MWCNT-COCl) que se forma
mediante la reacción de los MWCNTs oxidados (MWCNT-COOH) con
cloruro de tionilo (SOCl2)

2) la formación del producto final reemplazando el cloro para formar una
amida
Figura 6. Esquema de ruta síntetica para funcionalizar MWCNTs con

aminoácidos.
Esta ruta síntetica es la más común, sin embargo también se han
reportado amidaciones directas utilizando la activación por diimida con

compuestos de entrecruzamiento, donde los MWCNT-COOH son activados con
52
hipoclorato de N-eltil-N´-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) o

N,N´diciclohexilcarbodiimida (DCC).
Durante la funcionalización, la inmovilización de los aminoácidos a través

del grupo amino se produce con mayor extensión (para formar la amida anclada
a los MWCNTs), dejando el grupo carboxilato libre para interactuar con los
metales.
Otro aspecto a considerar lo encontramos en la etapa de elución. Si bien

al disminuir el pH los protones desplazan a las especies catiónicas metálicas
retenidas sobre el sustrato, está demostrado que los ácidos también pueden
provocar un cambio reversible en la estructura terciaria de los aminoácidos
produciendo una rápida y eficiente liberación del metal retenido desde el sitio
de unión [Miller, T. C. y col. 2001].
De esta forma es posible modificar los MWCNTs basándonos en la

creación de uniones amida para inmovilizar aminoácidos, ej. L-cisteina [Liu, Y. y
col. 2008], L-tirosina [Pacheco, P. H. y col. 2009a y 2009b], L-alanina [Parodi, B. y

col. 2011, Savio, M. y col. 2011], L-prolina [Parodi, B. y col. 2015] y hexahistidina
[Liu, Y. y col. 2009]. La funcionalización con aminoácidos busca incrementar la

selectividad de los MWCNT-COOH. Como precedente podemos mencionar: 1)
los MWCNTs funcionalizados con L-cisteina y su aplicación en SPE para la
retención de Cd(II) donde se evidenció que la fuerza iónica de la solución no

afectaba la retención de Cd(II) con su consiguiente ventaja al analizar muestras
provenientes de matrices complejas; y 2) los MWCNTs funcionalizados con

hexahistidina que mostraron un incremento en la cinética de retención de Cu(II)
y Ni(II) inclusive al incrementar en 20.000 y 1.800 veces la concentración de

iones interferentes en sistemas de SPE, respectivamente.
53
5. Técnicas de caracterización
Para evaluar las modificaciones introducidas en la estructura de los

nanotubos y entender los procesos de modificación, es necesario hacer una
caracterización lo mas completa posible utilizando una gran cantidad de

técnicas instrumentales. Es necesario como primer paso, conocer las
características fisicoquímicas de los MWCNTs a los cuales someteremos tanto a

procesos de oxidación como a su posterior funcionalización con aminoácidos.
Entre las técnicas que más se utilizan para esta caracterización encontramos en
la bibliografia, la microscopía electrónica, el análisis termogravimétrico (TGA),
espectroscopía Raman, espectroscopía infrarroja por transformada de Fourier
(FTIR), espectroscopia de fotoelectrones (XPS) y la difracción de Rx (XRD).
Sin embargo, hay que tener en cuenta que la identificación inequívoca de
los grupos presentes en la estructura de los nanotubos presenta un desafío

mayúsculo para las técnicas de caracterización disponibles.
La utilización de la microscopía electrónica tanto de transmisión (TEM)

como de barrido (SEM) permiten observar la morfología de los nanotubos con
una gran magnificación y resolución. Con estas técnicas podemos determinar el

grado de aglomeración y las dimensiones de los nanotubos (longitudes y
diámetros). También es posible analizar el grado de purificación que tienen los
MWCNTs, como materia prima, ya que podremos observar la presencia de
defectos en las paredes de los tubos, nanopartículas de carbono amorfo y

nanoparticulas metálicas provenientes del catalizador utilizado en la síntesis.
Asimismo al analizar los MWCNT-COOH y los funcionalizados podremos evaluar

la presencia de modificaciones estructurales. Podremos observar si los extremos
de los nanotubos lograron abrirse o no y como se manifiestan los defectos

introducidos por el proceso de oxidación en la morfología de los nanotubos
(pliegues de la estructura, acortamiento en el largo). También es posible hacer

uso de la espectroscopía dispersiva en energías (EDS) que acoplada a la
54
microscopía electrónica nos brinda información sobre los elementos presentes

en la muestra. Con esta técnica podremos saber de forma semicuantitativa el
porcentaje de cualquier heteroátomo introducido.

El análisis de los difractogramas obtenidos por XRD permitirá analizar la
estructura cilíndrica de las paredes del nanotubo y compararlas. También puede

compararse el espaciado interplanar de cada una de las muestras y observar si
los procesos de modicación han alterado este parámetro. El estudio por XRD
nos permitirá decir si los procesos de modificación han cambiado o no la
estructura general de los MWCNTs.

La espectroscopía Raman nos brinda información relacionada con
cambios estructurales en los MWCNTs, especialmente los cambios provenientes
de una modificación significativa en sus paredes. Los picos característicos
llamados banda D y banda G sufren pequeñas modificaciones debido a la

aparición de heteroátomos sustitucionales, vacancias y otros defectos que en su
conjunto disminuyen la simetría cristalina de la estructura. Tanto el proceso de

oxidación como el de funcionalización introducen defectos en la estructura por
lo cual esta espectroscopia nos permitirá evaluar la extensión de las

modificaciones en los sustratos sintetizados.
La espectroscopía infrarroja (FTIR) en la región del infrarrojo medio (200 a
4000 cm-1) corresponde a las vibraciones moleculares y el estudio de sus

espectros permite indentificar las vibraciones de los distintos enlaces presentes
entre los atomos que forman la estructura de los nanotubos, con ello
caracterizaremos tanto la estructura primaria como la formación de nuevos
enlaces. La espectroscopia IR nos permite analizar las especies que se

encuentran sobre la superficie de los MWCNTs. Existen varias formas de
espectroscopía infrarroja, la más común es la espectroscopia infrarroja de

transmisión, sin embargo las características de las muestras hacen que
utilicemos la técnica de reflectancia difusa.
55
El análisis por TGA brinda información sobre el porcentaje de impurezas

debido a la presencia de nanopartículas metálicas, carbono amorfo y la cantidad
de estructuras de menor estabilidad presentes los MWCNTs comerciales.

También nos permite conocer el comportamiento frente a la temperatura de los
grupos funcionales y aminoácidos introducidos en la estructura.
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64
Capítulo 3
Obtención y Caracterización de
Nanotubos de Carbono modificados
En este capítulo se describen las metodologías utilizadas para la obtención de
los nanotubos de carbono modificados. Se explica cómo se obtuvieron y que

técnicas se utilizaron para caracterizarlos. Asimismo, se presentan los resultados
de su caracterización.
Capítulo 3 Obtención y Caracterización de Nanotubos de Carbono Modificados
Abreviaturas
BET Brunauer-Emmett-Teller
DDW Double distilled water (Agua destilada y desionizada)
DMF Dimetilformamida
DDA Dodecylamine (Dodecilamina)
EDS Energy dispersive spectroscopy (Espectroscopía dispersiva

en energías)
FEG Field Emission Gun (Cañón de emisión de campo)

FEG SEM Field Emission Gun Scanning Electron Microscope
(Microscopio electrónico de barrido con cañón de emisión
de campo)
FTIR-DRS Fourier Transform Infrared Spectroscopy Diffuse

Reflectance Spectroscopy (Espectrofotometría Infrarroja por
Transformadas de Fourier-Espectroscopia de Reflectancia

Difusa)

MWCNTs Multi-walled carbón nanotubes (Nanotubos de carbono de
pared múltiple)
MWCNT-pro Nanotubos de carbono de pared múltiple funcionalizados

con L-prolina
PDVF Polyvinylidenefluoride (Fluoruro de polivinilideno)

barrido)
SOCl2 Cloruro de tionilo
66
TEM Transmission electron microscopy (Microscopía electrónica

de transmisión)
TPD Temperature-programmed desorption (Desorción a

temperatura programada)
XRD X-ray diffraction (Difracción de Rx)
67
1. Introducción
En este capítulo se presenta el trabajo realizado para la obtención de los

sustratos que se utilizarán luego en los sistemas de separación en fase sólida
(SPE).
Se desarrollan las siguientes temáticas:
breve descripción de las técnicas de caracterización utilizadas,

materiales y reactivos empleados en los distintos procesos,
caracterización de la materia prima (MWCNTs),

metodologías utilizadas para la oxidación de los MWCNTs,
caracterización de los MWCNTs oxidados,

metodología de funcionalización con aminoácidos,
caracterización de los MWCNTs funcionalizados con aminoácidos.
2. Técnicas de caracterización
La morfología de los MWCNTs sin modificar, oxidados y funcionalizados
con aminoácidos se caracterizó empleando microscopía electrónica, de barrido
(SEM) y de transmisión (TEM). Para la observación por SEM se utilizó un

microscopio que emplea como fuente de electrones un cañón de emisión de
campo (FEG) que proporciona haces de electrones muy focalizados, lo que

permite mejorar la resolución espacial, minimizar cargas sobre el espécimen a
observar, causando además menos daño en muestras sensibles. El equipo

empleado fue un Zeiss Supra 40, funcionando a 5 kV. En el caso de la
caracterización por TEM se utilizó un microscopio electrónico de transmisión

Philips CM 200. Las muestras analizadas por TEM se prepararon vía suspensión
húmeda, colocando la muestra en un vial y añadiendo isopropanol. Para lograr

una mejor dispersión se colocó en ultrasonido. Luego con una pipeta Pasteur se
tomó una gota y se depositó sobre una rejilla de cobre previamente cubierta
68
con una película de carbón. Las imágenes se registraron con un voltaje de

aceleración de 200 kV.
Los microscopios utilizados, SEM y TEM, cuentan con un detector de Rx

para poder realizar análisis por espectroscopía dispersiva en energías (EDS).
Ambos microscopios utilizan un haz de electrones que interactúa con los

átomos de la muestra provocando los fenómenos de interacción de la radiación
con la materia. En particular, los electrones secundarios expulsados son los que
se utilizan para formar la imagen de la morfología de la muestra. Esta expulsión
conduce a la ionización de los átomos y para restablecer el equilibrio un

electrón de un orbital más externo va a ocupar el lugar del electrón expulsado.
Este movimiento electrónico deja al átomo original con un excedente de
energía. Una de las formas de recuperar el equilibrio es emitiendo un fotón de
rayos X. Estos fotones poseen una energía que se encuentra directamente

relacionada con el peso atómico del elemento que los emite, con lo cual es
posible asociar cada valor de energía emitida con un elemento de la tabla

periódica, y además, por el número de fotones emitidos de cada energía, la
cantidad relativa de cada elemento. Estos análisis permiten obtener información

química elemental de forma semicuantitativa. Estas técnicas permiten detectar
la presencia de partículas provenientes de los catalizadores del proceso de
síntesis de los MWCNTs y otros elementos derivados de los procesos de
oxidación y de funcionalización con aminoácidos.

El grado de incorporación de grupos funcionales fue calculado por
análisis termogravimétrico y por la formación del zwitterion con la DDA

[Marshall, M. W. y col. 2006]. Los estudios térmicos se realizaron empleando un
equipo de Termogravimetría marca Shimadzu DTG-50. Las muestras se

analizaron en un rango de temperaturas entre 25 a 1000 ºC a una velocidad de
calentamiento de 10 ºC min-1, bajo flujo continuo de aire. La técnica de

formación del zwitterion empleada para conocer la cantidad de grupos
carboxílicos presentes en los nanotubos surge como una alternativa frente a los
69
procedimientos ácido-base que resultan muy complicados por las dificultades

de manipulación de las muestras a escala nanométrica (filtración, titulación
indirecta) [Samorì, C. y col. 2010].

Los espectros Raman se adquirieron en un espectrómetro comercial
LabRAMHR-UV-Vis-NIR (HoribaJobinYvon) de resolución espectral de 2,5 cm-1.

Se utilizó la línea 514 nm de un láser de argón como fuente excitadora y la
potencia del láser sobre la muestra se utilizó con potencia mínima, del orden de
0,05 mW de modo de evitar el calentamiento del punto a observar. El
microscopio acoplado al espectrómetro se utilizó con el objetivo de 50x lo que

permite concentrar el haz en la región de estudio. El análisis por difracción de
rayos X se realizó a temperatura ambiente empleando un difractómetro
PANanlytical, Modelo Empyrean con detector PIXcel 3D, se utilizó un paso de
0,0263 y se obtuvo registro en el rango de 13 65°, zona suficiente

para la tarea de identificación y caracterización de la muestra. Las muestras en
polvo se colocaron en un capilar de vidrio y los diagramas se obtuvieron en el

modo transmisión. Para la identificación de fases presentes se empleó un
programa denominado PC-Identify y la base de datos de la ICDD.

La adsorción física de gases y vapores en sólidos es una técnica utilizada
para el estudio de la textura porosa de sólidos de todo tipo pudiéndose

determinar la superficie específica, el volumen de poros y la distribución de
tamaño de poros. Para la determinación de estos parámetros se suelen utilizar

gases como N2, CO2 e hidrocarburos, a temperatura constante, obteniéndose así
la isoterma de adsorción [Garrido J, y col. 1987]. La caracterización textural de

los MWCNTs comerciales se realizó mediante la adsorción de N2 a -196ºC. Las
isotermas se obtuvieron en un aparato automático de adsorción, Micromeritics

ASAP 2020. Antes del análisis la muestra se desgasificó a 220 ºC con una
velocidad de calentamiento de 10 ºC min-1 durante 480 min. El área específica

se calculó por el método BET [Brunauer, S. y col. 1938].
70
Se empleó espectroscopía infrarroja por transformada de Fourier (FTIR)

para obtener información estructural y de grupos funcionales. Se utilizó un
equipo NICOLET Magna en la modalidad de reflectancia difusa (DRS) que

permite analizar materiales no reflectivos, incluyendo los muy opacos o poco
absorbentes, asimismo permite analizar superficies irregulares y muestras en

polvo. Esta espectroscopía se basa en los fenómenos que tienen lugar cuando
se refleja radiación infrarroja sobre una superficie irregular. La radiación

incidente es reflejada, absorbida, dispersada y transmitida por la superficie de la
muestra. La luz reflejada en forma difusa es colectada por la óptica accesoria y

dirigida hacia el detector del espectrofotómetro para obtener un espectro. Se
utilizó el método de la pastilla de KBr para la medición de las muestras,
utilizando una relación de 1 mg de nanotubos y 199 mg de KBr. Los espectros
se obtuvieron colectando 90 scans con una resolución de 4 cm -1 entre 400 y

4000 cm-1.
3. Materiales y reactivos utilizados
En la Tabla 1 se describen los materiales y reactivos utilizados.
Material/Reactivo Procedencia Características
Agua destilada y Barnstead Obtenida por sistema mixto de

desionizada (DDW) intercambio iónico
DDA Alfa Aesar 98,8%
DMF Baker 99,95%
HNO3 Baker Para análisis 69-70%
H2SO4 Merck Para análisis 95-97%
Isopropanol Biopack Para Análisis ACS
KBr Merck Para Espectroscopia IR

PVDF Millipore 0,22 µm de poro
MWCNTs Sun Nano Diámetro: 10-30 nm
Largo: 1-10 µm / Pureza: > 90%
Carbón amorfo: < 5% / Fe: 1,3%
SOCl2 Merck Grado ACS
Tabla 1. Materiales y reactivos.
71
4. Caracterización de los MWCNTs comerciales
El certificado de los MWCNTs comerciales brinda información sobre las

dimensiones (largo y diámetro) y grado de impurezas de los nanotubos. Para
verificar esta información y poder compararla con la que se genere luego de la

realización de las modificaciones se caracterizó la materia prima.
En la Figura 1 se presentan imágenes SEM a distinta magnificación que

permiten observar la morfología de los MWCNTs comerciales.
a) b)
Figura 1. Imágenes SEM de los MWCNTs comerciales.
Las imágenes nos permiten observar una alta densidad de nanotubos no

siendo posible identificar ningún subproducto de síntesis. Las paredes se
observan limpias, sin depósitos sobre las mismas, los cuales se observan en
MWCNTs de poca calidad, donde es alta la concentración de carbono amorfo.

Tampoco se detectan partículas brillantes que pudiesen atribuirse a una gran
concentración de nanopartículas metálicas utilizadas como catalizador. Se
observan estructuras bastantes homogéneas en relación a sus diámetros y

largos. También pueden apreciarse algunas aglomeraciones de MWCNTs. Los
nanotubos se encuentran distribuidos en forma aleatoria debido a las

interacciones hidrofóbicas entre sus superficies que provocan la repulsión entre
los tubos. Este fenómeno es también apreciable a nivel macroscópico
72
dificultando su manipulación. Se observa la estructura característica de plato de

espaguetis reportada por numerosos autores [Thostenson, E. T. y col. 2001].
En la Figura 2 se observan las imágenes obtenidas por TEM. En ellas

pueden verse las estructuras de los nanotubos con mayor magnificación siendo
posible identificar extremos cerrados y la presencia de nanopartículas metálicas

provenientes del proceso de síntesis. Las nanopartículas observadas se
encuentran en el interior de los nanotubos y tienen un tamaño de entre 20 y 40

nm aproximadamente. Al igual que en las imágenes SEM las superficies de los
nanotubos se presentan lisas y limpias, sin embargo, a este nivel de

magnificación es posible observar los defectos en las paredes debido a los
daños provocados en los procesos de síntesis. En la Figura 2.d) se realizó la
medición de un nanotubo aislado para verificar su diámetro. Si bien el
certificado de origen indica que los diámetros se encuentran en el rango de los

10-30 nm se encontraron nanotubos de hasta 100 nm de diámetro exterior
(Figura 2.e)).
a) b)
c) d)
73
e)
Figura 2. Imágenes TEM de a) MWCNTs comerciales, b) extremo cerrado y
nanopartícula metálica en el interior de un nanotubo, c) nanopartícula metálica

en el interior de un nanotubo, d) y e) mediciones sobre nanotubos.
Se realizaron análisis por EDS para determinar los elementos químicos
presentes en los MWCNTs, detectándose la presencia de Fe como único

elemento además del C y oxígeno debido seguramente a algunas partículas
presentes como óxido del metal o impurezas, verificándose la información
suministrada por el fabricante. En la Figura 3 se observa el espectro obtenido

por el detector acoplado al FEGSEM, la presencia de Al se debe al portamuestra
utilizado como soporte. El espectro obtenido al realizar el análisis por TEM es

similar, pudiéndose verificar que el Fe se encuentra localizado sobre las
nanopartículas halladas en el interior de algunos nanotubos, Figura 2 c).
Figura 3. Espectro EDS de los MWCNTs comerciales.
74
A partir de los análisis termogravimétricos se puede conocer la

estabilidad frente a la temperatura, oxidación térmica y el contenido de cenizas
(Figura 4). Se determinó la presencia de ~11% de residuo, correspondiéndose

con el contenido de impurezas inorgánicas de Fe detectado por EDS. Este valor
fue calculado a partir del peso del residuo obtenido después de la oxidación
completa. El contenido de impurezas carbonosas está reportado en la
bibliografía como la pérdida de masa por debajo de los 500 ºC [Zou, Y. y col.
2004]. No se encontró pérdida de masa por debajo de esta temperatura, por lo
tanto no se evidenció la presencia de contenido carbonoso. La descomposición

de los MWCNTs comerciales comenzó ~500 ºC y aumentó rápidamente hasta
los ~700 ºC.
Figura 4. Termograma de los MWCNTs comerciales.
La caracterización de los MWCNTs mediante espectroscopia Raman se

muestra en la Figura 5, reportándose los espectros de primer orden entre 1100
a 1800 cm-1. Esta técnica es una herramienta muy importante para la

caracterización de los MWCNTs. No requiere preparación de la muestra, es
relativamente rápida y no destructiva. En el caso de los nanotubos tuvo que
75
ajustarse la potencia del láser para evitar producir daños en las muestras. Es una
técnica útil para detectar el grado de desorden luego de los procesos de
funcionalización. Las bandas más características de los nanotubos de carbono se

encuentran en la región de altas frecuencias y son una banda intensa sobre
1600 cm-1, correspondiente a la vibración fundamental (primer orden) de

elongación tangencial denominada G, que se relaciona con la energía de los
enlaces sp2 y se asigna a las estructuras grafíticas normales y una intensa banda
en la zona de 1300 cm-1, denominada D ("Disorder induced"). Esta banda D es
indicadora de la presencia de defectos en las paredes [Eklund, P. C. y col. 1995]

de manera que de la relación de intensidades entre las bandas D y G puede
extraerse información sobre el número de defectos. Por lo tanto, la relación de
área entre las bandas D y G (AD/AG) puede utilizarse para cuantificar el proceso
de oxidación [Rosca, I. D. y col. 2005]. Para los MWCNTs comerciales se obtuvo

una relación AD/AG de 0,92. Este valor se compara en los siguientes párrafos con
los valores obtenidos para los nanotubos oxidados y funcionalizados ya que un

incremento en este valor corresponde a una mayor proporción de carbono sp 3,
la cual es atribuida a la presencia de mayores defectos en la estructura [Flahaut,

E. y col. 2005]. La banda D es ligeramente menor que la banda G siendo ésta la
relación reportada para MWCNTs comerciales [Shi, J. y col. 2009].
Figura 5. Espectro Raman de MWCNTs comerciales.
76
Se utilizó FTIR-DRS para investigar la estructura de la superficie de los
MWCNTs y tratar así de identificar los grupos funcionales sobre los mismos. En
la Figura 6 se presentan los espectros obtenidos de los MWCNTs: comerciales,
oxidados y funcionalizados con L-prolina. Si bien el espectro obtenido para los

MWCNTs es comparable con el reportado en bibliografía [Ávila-Orta, C. A. y col.
2009] no fue posible identificar los grupos funcionales introducidos por la

oxidación ni por la funcionalización. La región por debajo de los 1400 cm -1 es la
denominada huella digital y es muy difícil utilizarla para identificar grupos

debido a su complejidad. Los MWCNTs presentan alta simetría lo que produce
señales débiles en el infrarrojo debido a la poca diferencia en los estados de
carga entre los átomos de carbono. Esta escasa diferencia entre los estados de
carga genera dipolos inducidos muy débiles que producen un espectro

silencioso. Es por ello que no se detecta la banda a 1600 cm -1 debida a los
enlaces C=C. La amplia banda observada en ~3400 cm -1 puede deberse a la

presencia de grupos OH provenientes del agua que se encuentra como
contaminación en la superficie de los nanotubos [Colthup, N. y col. 1990]. La

banda observada a 1445 cm-1 está reportada como característica de los
MWCNTs [Misra, A. y col. 2007]. Si bien la región huella digital es muy difícil de
asignar, la banda en ~650 cm-1 se encuentra presente en espectros reportados
en la bibliografía para nanotubos pero sin asignación a un grupo específico

[Misra, A. y col. 2007].
77
Figura 6. FTIR de MWCNTs: comerciales, oxidados y funcionalizados con L-

prolina.
Del estudio de adsorción de N2 se obtuvo un área superficial BET de 169

m2 g-1, valor en concordancia con los reportados para MWCNTs comerciales
[Zhang, H. y col. 2002].

Mediante los difractogramas obtenidos por XRD es posible obtener
información sobre el espaciado interplanar, las tensiones estructurales y las

impurezas. La naturaleza estructural de los nanotubos hace que los patrones de
difracción sean muy similares al patrón del grafito, identificándose el pico (002l)
típico de una estructura grafítica, sin embargo el valor de d 002 es de 0,343 nm,
un 2% mayor que el reportado para un grafito perfecto (0,335 nm), esto es

habitual para MWCNTs y se encuentra reportado en la bibliografía [Salernitano,
E. y col. 2007]. En el difractograma de la Figura 7 se ven los picos típicos de los

MWCNTs y no se observan picos de Fe de residuos del catalizador de síntesis.
78
Figura 7. XRD de los MWCNTs.
5. Metodología utilizada para la oxidación de los MWCNTs
En la Figura 8 se presenta el esquema con la metodología de oxidación
utilizada.
Figura 8. Esquema de oxidación de los MWCNTs comerciales.
Se oxidaron 500 mg de MWCNTs comerciales colocándolos en un baño
ultrasónico con 20 ml de una mezcla de H2SO4 y HNO3 concentrados en una

relación 3:1 v/v durante 30 minutos a temperatura ambiente. Luego se
colocaron en una plancha calefactora en baño de agua y con agitación

magnética durante 4 horas a 55 ºC. Finalizado el proceso de oxidación se
agregó cuidadosamente agua desionizada (DDW) y las muestras se sometieron

a un proceso de limpieza. Alícuotas de la solución oxidante con los nanotubos
79
se colocaron en bolsas de diálisis que se cerraron y sumergieron en DDW. Se

realizó el recambio de agua hasta que no se observó variación en el valor de pH.
Para finalizar, se retiró la suspensión del interior de las bolsas y se secó en

estufa a 50 ºC hasta obtener el material sólido. Para homogeneizar el tamaño
de partícula, el sólido obtenido fue molido en un mortero de ágata. Los

MWCNT-COOH se conservaron en desecador.
Durante esta etapa se probaron diferentes alternativas hasta obtener la

metodología que se describió anteriormente. Dentro de las alternativas
consideradas, dos estrategias utilizadas merecen su comentario ya que su

análisis permitió desarrollar la metodología definitiva.
A) Oxidación con una mezcla de H2SO4 y HNO3 concentrados en una
relación 1:3 v/v. Las muestras obtenidas de esta forma se compararon con las
muestras oxidadas con una mezcla de H2SO4 y HNO3 concentrados en una

relación 3:1 v/v. En esta instancia del desarrollo del proceso de oxidación, la
neutralización y limpieza de las muestras consistió en una etapa de

centrifugación, seguida del retiro del sobrenadante y agregado de agua para
remover el exceso de ácido. Estas etapas se realizaron en forma sucesiva varias

veces. Luego se filtró la solución con membrana de PDVF de 0,22 µm por vacío
obteniéndose así las muestras sólidas. Para realizar un estudio comparativo se
colocó una porción de cada una de las muestras en contacto con DDW y se
analizó el contenido de Fe en el sobrenadante por ICP OES. Se obtuvo una

concentración de 460 µg l-1 de Fe en el extraído de los nanotubos oxidados
relación H2SO4:HNO3 3:1 y 100 µg l-1 de Fe en el extraído de los nanotubos

oxidados relación 1:3. La mayor concentración de Fe presente en el extraído de
los MWCNT-COOH con la relación de ácidos 3:1 se debe a su mayor eficiencia

para remover las nanopartículas de Fe, sin embargo el proceso de limpieza fue
insuficiente para lograr la completa remoción del Fe liberado en la oxidación. En

cambio, en los MWCNT-COOH con la mezcla de ácidos en la relación 1:3 solo
fue posible remover el Fe que se encontraba entre los manojos de nanotubos
80
pero no fue posible abrir los extremos y conseguir la remoción del Fe del
interior.
Se estudió el comportamiento térmico y el termograma obtenido de los

MWCNT-COOH con la relación de ácidos 1:3 v/v resultando similar al de los
MWCNTs comerciales, es decir, no se evidenció la incorporación de grupos

funcionales (Figura 9).
La mayor eficiencia en la remoción del Fe de los nanotubos estuvo

acompañada de una deficiente limpieza de los mismos, ya que si bien el Fe se
solubilizó no fue capaz de removerse mediante la limpieza por

centrifugación/extracción. La falta de remoción del Fe luego de haber sido
extraído del interior de los nanotubos se mejoró implementando membranas de
diálisis. Se utilizaron membranas de celulosa con un tamaño de poro promedio
de 48 Å permitiendo el pasaje de agua y compuestos de bajo peso molecular en

solución mientras que se retienen materiales con un peso molecular mayor a 12
kDa. Estudios reportados en la literatura destacan la importancia de utilizar

procesos de purificación por diálisis para eliminar completamente los posibles
reactivos sin reaccionar y/o los productos secundarios que pudiesen quedar
atrapados en los nanotubos [Georgakilas, V. y col. 2002].
Figura 9. Termogramas de los MWCNTs comerciales y de los MWCNT-oxidados

con la relación oxidante 1:3.
81
B) Como se mencionó en A se probaron distintas metodologías para la
neutralización y limpieza de los nanotubos oxidados. Durante el proceso de

filtración por membrana utilizando una bomba de vacío de anillo de agua para
evitar el deterioro de la misma por los vapores ácidos se obtuvieron films que se
desprendieron de la membrana filtrante. A este tipo de producto en la
bibliografía se lo denomina buckypaper y se corresponde con una delgada

lámina compuesta por el agregado de nanotubos oxidados (Figura 10) [Belloni,
F. y col. 2009]. Al evitar el proceso de filtración en la metodología de limpieza

adoptada no se volvió a obtener este producto, sin embargo se menciona por
sus posibles aplicaciones como membrana filtrante en futuros trabajos.
a) b)
Figura 10. a) Imagen SEM a baja magnificación de la superficie de los MWCNT-

COOH buckypaper, b) imagen macroscópica.
6. Caracterización de los MWCNT-COOH
Luego del proceso de oxidación los MWCNT-COOH se estudiaron para

determinar cómo se afectó su estructura.
En la Figura 11 se muestran imágenes SEM de los MWCNT-COOH donde

puede observarse su similitud con las imágenes de los MWCNTs comerciales.
Las superficies de los nanotubos se aprecian lisas y limpias y tal como se

observa en las micrografías, a pesar del fuerte tratamiento de oxidación al que
82
fueron sometidos, los MWCNT-COOH conservan su estructura sin

modificaciones apreciables. Si comparamos las imágenes a menor
magnificación (20000x) observamos una estructura más compacta en los

MWCNT-COOH, ello puede deberse a las fuertes interacciones electrostáticas
(versus las interacciones de van der Waals) originadas por la incorporación de

grupos oxigenados.
Figura 11. Imágenes SEM de los MWCNT-COOH.
En la Figura 12 se muestran imágenes TEM de los MWCNT-COOH y al

igual que en el caso de la microscopia electrónica de barrido puede observarse
que las imágenes son similares a las de los MWCNTs comerciales, sin presentar
una alteración significativa en su estructura. Sin embargo, si bien se conserva la
estructura tubular es posible apreciar los defectos en las paredes de los

nanotubos. En el caso de los extremos, se consiguió que algunos se abrieran
aunque otros continúan cerrados y si bien se logró extraer el Fe en forma

mayoritaria se pueden observar aún algunas nanopartículas atrapadas en el
interior de los nanotubos.
83
a) b)
c) d)
Figura 12. a y b) Imágenes TEM, c) nanotubos con extremo cerrado y

nanopartículas atrapadas, d) nanotubo con extremo abierto.
El análisis del espectro de EDS permite verificar que no se logró remover
la totalidad de las nanopartículas de Fe. Asimismo, es posible identificar la

presencia de S sobre la superficie del nanotubo. Este hecho ya fue observado en
muestras de nanotubos oxidados por mezcla sulfonítrica [Yu, R. y col. 1998] y
fue atribuido a la formación de grupos sulfato (Figura 13). El Ca seguramente
provenga de los sucesivos lavados a los que son sometidos los nanotubos y
quede ligado a los grupos sulfatos.
84
Figura 13. EDS y representación de los grupos sulfato sobre la pared del
nanotubo.
Los análisis termogravimétricos de los MWCNT-COOH muestran
que el proceso de descomposición comienza a una temperatura inferior que la

observada para los MWCNTs comerciales (Figura 14). La descomposición a
menor temperatura ha sido reportada debido a la liberación de CO 2 proveniente

de la incorporación de grupos funcionales carboxílicos [Xia, W. y col. 2007]. El
proceso de oxidación provocó la modificación de los MWCNTs en los cuales se

encontró que la pérdida en peso observada por debajo de los 500 ºC es ~30%.
La masa remanente se estimó en ~4%, observándose una disminución de las

nanopartículas de Fe. A partir de los análisis de pérdida de masa se calculó el
contenido de grupos carboxílicos en los nanotubos oxidados. Se obtuvo un

resultado de ~7 mmol de COOH por gramo de MWCNT-COOH. El termograma
obtenido es comparable con el que han obtenido otros autores [Samorì, C. y

col. 2010]. La cuantificación de los grupos carboxílicos se realizó para identificar
la cantidad de sitios donde los aminoácidos podrían unirse.
85
Figura 14. Termograma de los MWCNT-COOH.
Con el propósito de confirmar por una técnica alternativa, la cantidad de

grupos carboxílicos presentes en los nanotubos oxidados, se utilizó el cálculo a
partir de la formación del zwitterion con la DDA empleando el peso del

complejo formado. Esta técnica arrojó una concentración de ~6 mmol g-1 de
COOH. La cantidad de grupos COOH obtenidos es menor que la que se obtuvo

por TGA y ello se explica debido al impedimento estérico que limita el acceso a
algunos grupos COOH principalmente los localizados en los extremos para

formar el complejo, resultando en un menor porcentaje de uniones amidas
formadas [Samorì, C. y col. 2010].

Al observar los espectros Raman obtenidos es posible identificar los picos
característicos de los MWCNTs comerciales demostrando que el tratamiento

ácido no ha dañado su estructura (Figura 15). Se calculó la relación de área
AD/AG obteniéndose un valor de 1,31. Tal como se esperaba se verificó un

aumento en el valor de la relación. El proceso de oxidación de los MWCNTs
rompe algunos de los enlaces C=C e inserta grupos funcionales que son
interpretados como defectos en la estructura. La banda G presenta un hombro
en 1610 cm-1, conocido como D´ que se debe a un máximo en la densidad de
86
estados de fonones, que puede atribuirse a un efecto de desorden inducido

debido al efecto de tamaño finito o distorsión de red [Rosca, I. D. y col. 2005].
Figura 15. Espectros Raman.
El difractograma realizado a los MWCNT-COOH muestra los picos
característicos de la estructura grafítica y no presenta grandes diferencias con el

patrón obtenido para los MWCNTs comerciales (Figura 16). Sin embargo, se
detectan nuevos picos que coinciden con el patrón de difracción del CaSO 4. Este
resultado se encuentra en concordancia con el análisis realizado por EDS, y su
presencia se explica debido al proceso de oxidación que incorpora los grupos

sulfato a la estructura de los nanotubos. En relación a la distancia interplanar el
valor obtenido es similar al de los MWCNTs (d=0,3437 Å).
87
Figura 16. XRD de los MWCNT-COOH.
7. Metodología de funcionalización con aminoácidos
En la Figura 17 se presenta el esquema de funcionalización utilizado en

dos etapas: la primera consiste en la obtención del cloruro de acilo y la segunda
corresponde a la reacción de sustitución con el aminoácido.
Figura 17. Esquema de obtención de los MWCNTs funcionalizados con

aminoácidos.
88
La funcionalización con aminoácidos se realizó por el método indirecto.

Una alícuota de 500 mg de MWCNT-COOH se suspendió en 2 ml de DMF (la
DMF es un solvente que logra suspensiones muy estables con los MWCNTs
[Kakade, B. A. y col. 2008]). A la suspensión se le agregó 50 ml de SOCl2 y se
colocó a reflujo a 70 ºC durante 24 horas para convertir los ácidos carboxílicos

en cloruros de acilo. Luego se filtró con membrana de PVDF de 0,22 µm, se lavó
con THF para remover el exceso de SOCl2 y finalmente los nanotubos se secaron
en estufa. Los MWCNT-COCl se pusieron en contacto con cada uno de los
aminoácidos utilizados para la funcionalización ( L-prolina y L-alanina) durante

96 horas a 45 ºC con agitación magnética. Luego, se filtraron, lavaron con
etanol, resuspendieron en cloroformo y filtraron nuevamente. Para finalizar se
secaron en estufa y conservaron en desecador.
8. Caracterización de los MWCNTs funcionalizados con
aminoácidos
Los MWCNTs funcionalizados se analizaron por diversas técnicas con el

fin de confirmar la funcionalización y realizar una completa evaluación de su
morfología y estructura.
En la Figura 18 se presentan las imágenes SEM obtenidas para los
MWCNTs funcionalizados con L-prolina y L-alanina. Las imágenes son similares a

las obtenidas tanto para los MWCNTs comerciales como para los MWCNT-
COOH. Podemos observar que luego de atravesar todos los procesos descriptos
(oxidación, funcionalización, lavados, molienda) se conserva la estructura de los
nanotubos y al igual que en el caso de los MWCNT-COOH a menor aumento se

observa una estructura más compacta, lo que se debe a las cargas superficiales
que mejoran la dispersión.
89
a) b)
c) d)
Figura 18. a) Imágenes SEM de MWCNT-pro a 20000x, b) MWCNT-pro a

150000x, c) MWCNT-ala a 20000x, d) MWCNT-ala a 150000x.
En la Figura 19 se observan las imágenes obtenidas por TEM para los
MWCNT-pro. Se puede ver conservada la estructura tubular de los nanotubos y

una ligera desaglomeración comparándolos con los MWCNT-COOH que puede
deberse a la mayor cantidad de grupos funcionales presentes debido a la
incorporación de los aminoácidos.
a) b)
90
c) d)
Figura 19. Imágenes TEM de MWCNT-pro.
En la Figura 20 se presenta el espectro obtenido por EDS para las
muestras intermedias con la formación del cloruro de acilo y el EDS de los

nanotubos donde se realizó el reemplazo con L-prolina. Se observa una
disminución en el porcentaje de Fe, asimismo, se sigue detectando S como

consecuencia de la oxidación con ácido sulfúrico que genera los grupo sulfato y
aparece el Cl debido a la formación del cloruro de acilo. Si bien en los MWCNT-

pro la concentración de Cl es menor (25% menor), el espectro pone de
manifiesto que no todos los grupos acilo fueron reemplazados por la L-prolina.
MWCNT-cloruro de acilo MWCNT-pro
Figura 20. EDS de los nanotubos con cloruro de acilo y con L-prolina.
91
Los análisis termogravimétricos de los MWCNTs funcionalizados con
aminoácidos presentan diferencias con el termograma de los MWCNT-COOH

evidenciando la presencia del aminoácido. Se observa un incremento en la
pérdida de masa en el rango de temperaturas hasta 350 ºC. En la Figura 21 se

presenta el análisis realizado sobre MWCNT-pro y su comparación con los
nanotubos de las etapas previas. Asimismo, el termograma no muestra la

descomposición característica de la L-prolina no encontrándose aminoácido
libre. En la Figura 22 se presenta el termograma del aminoácido L-prolina.
Figura 21. Termograma de los MWCNTs funcionalizados con L-prolina.
92
Figura 22. Termograma de la L-prolina.
Al analizar los espectros Raman no se observan cambios significativos,

obteniéndose una relación de área AD/AG de 1,25. La ligera disminución
confirma que la funcionalización de los nanotubos tiene lugar en los grupos

funcionales presentes en las paredes de los nanotubos y no agrega desorden a
la estructura de los mismos. En la Figura 23 se presentan en forma comparativa

los espectros Raman de los diferentes nanotubos utilizándose como
funcionalizados los MWCNT-pro.
Figura 23. Espectros Raman de los diferentes MWCNTs.
93
El patrón de difracción obtenido para la muestra de MWCNT-pro (Figura

24) refleja la conservación de la estructura grafítica de los nanotubos
coincidente con todas las técnicas utilizadas para caracterizar. Asimismo se

observa la desaparición de los picos pertenecientes al CaSO 4 coincidente con el
espectro de EDS.
Figura 24. XRD de los distintos nanotubos estudiados.
9. Observaciones generales
El objetivo de conocer el impacto de los procesos realizados sobre los

nanotubos de carbono está enfocado en su aplicación. Como se mencionó en el
Capítulo 1 el material debe reunir determinadas características para su uso

como sorbente, entre ellas es fundamental la estabilidad. En procesos de SPE los
nanotubos deben soportar condiciones severas: soluciones en un amplio rango

de pH, numerosos ciclos de elución con ácidos inorgánicos en diferentes
concentraciones, soluciones orgánicas, entre otras. Es por ello que la

complementariedad de técnicas utilizadas para su caracterización permite armar
el rompecabezas y arribar a algunas consideraciones sobre las particularidades
94
que alcanzaron los nanotubos sometidos a diversos procesos para su

funcionalización.
Las microscopias electrónicas, de barrido y de transmisión, el análisis por

TGA y por XRD permitieron corroborar que todos los procesos a los que fueron
sometidos los nanotubos no alteraron significativamente la integridad de su

estructura. Esto es importante ya que permite suponer que podrán resistir las
condiciones de los procesos de SPE sin sufrir daños considerables en su

morfología y podrán ser utilizados en un gran número de ciclos.
Las técnicas de EDS y XRD permitieron determinar la identidad y

estructura tanto de las impurezas como de compuestos intermedios presentes
en los nanotubos. Esta información permite predecir si estos compuestos
podrán o no actuar como interferentes en alguna de las técnicas analíticas
espectroscópicas de detección y cuantificación de elementos. De esta forma, al

analizar la información en su conjunto, es posible arribar al % de pureza de la
materia prima (~11%) y la composición del residuo inorgánico (Fe) y observar la

formación de estructuras intermedias (CaSO 4). Asimismo, la termogravimetría
permite observar la disminución de las impurezas inorgánicas al 4% debido al

proceso de oxidación y posterior limpieza.
Los termogramas, el espectro de EDS y las técnicas de cuantificación de
grupos carboxílicos permitieron determinar que no todos los grupos fueron
sustituidos por el aminoácido, quedando grupos carboxílicos libres que también

aportaran en el proceso de retención de cationes. Un indicio de esto lo aportó
la técnica de cuantificación de grupos carboxílicos por el método del zwitterion

ya que no todos los grupos pudieron reaccionar debido a un impedimento
estérico y es probable que lo mismo ocurriese con los aminoácidos L-prolina y

L-alanina.
La espectroscopia Raman, al igual que las microscopías electrónicas,

permitió observar la integridad de los nanotubos como estructura, pero,
además, aportó información que permite suponer la unión de los aminoácidos a
95
la pared de los nanotubos. En los MWCNT-COOH se observó un aumento del

desorden (mayor cantidad de uniones sp 3), con lo cual se observa la
incorporación de los grupos a la pared de los nanotubos. Este desorden no se

vio incrementado en los MWCNT-pro, es decir que el proceso de amidación no
rompió enlaces sp2 de la estructura tubular de los nanotubos, por lo tanto, el

aminoácido se unió a los grupos carboxílicos formados en la etapa de la
oxidación.
Algunas técnicas utilizadas no aportaron información significativa pero
representaron un desafío en la manipulación y preparación de las muestras. Por

lo tanto, el aprendizaje adquirido resultó valioso para comprender los desafíos
que se deben enfrentar al tener que rellenar microcolumnas en los sistemas de
SPE.
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98
Capítulo 4
Desarrollo del Sistema de
Preconcentración: el Cu(II) como
analito modelo
En este capítulo se utilizará al ión Cu(II) como modelo para evaluar las
capacidades analíticas de los nanotubos de carbono como material sorbente en

sistemas de preconcentración. Se desarrollarán los conceptos relacionados con
la utilización de microcolumnas, los acoplamientos instrumentales para estudios

de preconcentración en línea, la optimización de parámetros analíticos y la
aplicación de la metodología optimizada a la determinación de Cu en aguas

naturales de diversos orígenes.
Capítulo 4 Desarrollo del Sistema de Preconcentración, el Cu(II) como analito
modelo
Abreviaturas

FAAS Flame atomic absorption spectrometry (Espectrometría de

FI Flow injection (Inyección en línea)

Inductivamente)

LOD Limit of detection (Límite de detección)

LOQ Limit of quantification (Límite de cuantificación)
MWCNTs Multi-walled carbón nanotubes (Nanotubos de carbono de
pared múltiple)
con L-prolina
PDVF Fluoruro de polivinilideno

RSD Relative standard deviation (Desviación estándar relativa)
100
modelo
1. Introducción
El Cu es un elemento esencial para el hombre desde la prehistoria. La
Edad de Bronce lleva el nombre de una aleación de Cu y es en este período

histórico donde se desarrolló su proceso metalúrgico. Este elemento y sus
aleaciones tienen un rol significativo en el desarrollo de las distintas

civilizaciones, desde los antiguos egipcios y romanos hasta la sociedad actual.
Sus excelentes propiedades relacionadas con la conductividad y ductilidad
hacen que se lo utilice en la fabricación de componentes eléctricos, materiales

para la construcción y tuberías de conducción de agua [Tobiasz, A. y col. 2012].
La utilización del Cu y aleaciones con Cu en las cañerías para el transporte de

agua es particularmente importante y debe prestarse especial atención por la
posibilidad de liberar iones al agua de bebida debido al contacto directo. Esto

adquiere especial relevancia en algunas situaciones particulares, por ejemplo, si
el pH del agua se encuentra por encima de 7 o presenta una alta concentración

de carbonatos, ya que puede aumentar la solubilidad del Cu y aumentar así su
concentración en el agua de bebida. Otra fuente importante de Cu se adscribe a

la presencia de compuestos químicos que se utilizan en grandes cantidades,
como alguicidas y fungicidas (por ej. sustancias para la limpieza del agua en
piletas de natación), sustancias para preservar la madera y fertilizantes [Tobiasz,
A. y col. 2012].
También debemos destacar la presencia del Cu en el ambiente debido a
fuentes naturales como la meteorización de las formaciones rocosas y la

actividad volcánica que aportan una concentración basal en aguas naturales en
el rango 1- l-1 para aguas dulces superficiales, y del l-1,

para agua de mar [Hodson, P. V. y col. 1979]. Estos valores se ven
incrementados por los diversos aportes antropogénicos.
101
modelo
Los iones de Cu que se liberan al ambiente pueden acumularse en
organismos vivos [Tobiasz, A. y col. 2012]. Los efectos en la salud debido tanto a
la deficiencia como a la excesiva exposición al Cu para plantas, organismos
acuáticos y seres humanos han sido ampliamente reportados [WHO reporte,

2004].
La deficiencia del Cu en la nutrición humana puede provocar anomalías

como anemias o malformaciones óseas, por lo que el Cu se considera un
elemento esencial [Nath, R. 1997]. Vestigios de Cu intervienen en reacciones

metabólicas formando parte de diversas proteínas [Aitio, A. y col. 1991], tales
como la ceruloplasmina, la citocromoxidasa, etc. Sin embargo la exposición a
altas concentraciones de Cu puede producir daños oxidativos a lípidos,
proteínas y ADN, contribuyendo a desórdenes neurodegenerativos [Gaetke, L.

M. y col. 2003].
En ambientes oxigenados el Cu se encuentra en estado de oxidación +2,

siendo éste el predominante en aguas naturales superficiales. El estado de
oxidación +1 se encuentra presente en ambientes acuáticos reductores. El ión
libre en estado de oxidación +1 (Cu +) es inestable en soluciones acuosas,

tendiendo a desproporcionarse a Cu (+2) y Cu elemental, excepto que esté
estabilizado por un agente ligante. En medio acuoso el Cu (+1) solo es capaz de

formar compuestos muy poco solubles con cianuro, sulfuro y fluoruro [IPCS,
1998].
En su estado de oxidación (+2), además del ión libre (Cu 2+), el Cu se
compleja con ligandos inorgánicos tales como H 2O, OH-, CO32-, Cl- y SO42-;
asimismo, se compleja con ligandos orgánicos a través de grupos fenólicos y
carboxílicos [Cotton, F.A. y col. 1989].

El contexto brevemente descripto, las características fisicoquímicas y su
potencial toxicidad hacen que este estudio esté enfocado en la necesidad de
102
modelo
disponer de métodos analíticos sensibles y confiables que permitan la
determinación del estado de oxidación +2 del Cu a bajos niveles de

concentración, que es además en el que se encuentra en una gran variedad de
aguas.
En la revisión bibliográfica realizada, encontramos que los MWCNTs se
han utilizado para preconcentrar Cu utilizando como agente complejante la o-

cresolftaleína aplicándose a la determinación de este metal en aguas [Duran, A.
y col. 2009]. También se ha utilizado el complejo ditiocarbamatopirrolidina de

amonio [Tuzen, M. y col. 2008] con el mismo propósito. El Cu ha sido retenido y
preconcentrado en forma directa utilizando MWCNT-COOH como sustrato por
Stafied A. y col. En su publicación encontraron que la mayor adsorción ocurría a
pH 9 explicando que probablemente la preconcentración es posible en la región

alcalina debido a un proceso simultáneo de adsorción/precipitación.
En este capítulo se utilizan microcolumnas rellenas con MWCNT-pro

como sustrato para retener y preconcentrar Cu(II). Se buscan las condiciones de
trabajo apropiadas para conseguir su retención cuantitativa. La retención se
realiza en línea con las consiguientes ventajas en la manipulación de muestras y

consumo de reactivos. La utilización de la espectrometría de absorción atómica
con llama (FAAS), una técnica conocida para la detección de Cu(II), permite
hacer foco en la implementación del sistema en línea con columna.
2. Técnicas para la determinación de Cu
Las técnicas más extendidas para la determinación de Cu en solución son

las espectrometrías atómicas. Existe bibliografía donde se utilizan desde las
metodologías más avanzadas como la espectrometría de masas con fuente de

plasma acoplado inductivamente (ICP MS) hasta las técnicas más tradicionales
como la FAAS [Bora, T. y col. 2015, Tobiasz, A. y col. 2012].
103
modelo
Cuando se utilizan espectrometrías atómicas o las técnicas basadas en el
uso de plasmas para la detección y cuantificación del Cu(II) es necesario hacer

una serie de etapas de pretratamiento, en particular preconcentración, para
mejorar los límites de detección que nos permitan determinar Cu(II) en matrices
naturales a los niveles esperados y/o reducir los efectos de potenciales
interferentes.
La FAAS pertenece a las espectroscopias de absorción atómicas donde se
utiliza una llama para generar átomos libres en estado basal. En FAAS, la
muestra luego de una serie de procesos se convierte en aerosol para que el
solvente (generalmente agua), pueda evaporarse fácilmente dejando partículas
de sales, las cuales se convierten en gases debido a la alta temperatura de la
llama y después en átomos neutros, capaces entonces de absorber radiación

electromagnética a una longitud de onda específica. Para ello, la muestra es
aspirada por un nebulizador neumático y se libera como finas gotas en una

cámara donde se mezcla con el gas combustible y el oxidante antes de alcanzar
la rendija del quemador, donde se encuentra la llama. Para producir la llama, se
utilizan generalmente mezclas de aire-acetileno (temperatura aproximada de

2200 °C-2400 ºC) u óxido nitroso-acetileno (temperatura de 2950 °C).
El proceso de análisis por FAAS se mejora significativamente cuando la

introducción de muestras se realiza en forma continua (FI). La modalidad de
inyectar la muestra en un flujo continuo (FI FAAS) permite disminuir el consumo

de muestra y preconcentrar el analito de interés. Además, tiene como ventaja la
disminución tanto del tiempo de análisis como de los efectos de matriz en la

etapa de preconcentración y la introducción directa de la muestra en el
nebulizador disminuyendo el riesgo de contaminación.

Por ese motivo se ha popularizado el uso de sistemas de FI FAAS para la
preconcentración de metales pesados, por ejemplo en muestras de agua de
104
modelo
origen industrial [Tiwari, S. y col. 2015]. La mayoría de estos métodos utilizan la
separación en fase sólida (SPE) como método de preconcentración. En el trabajo

de Saxena, R. y col. utilizan una resina modificada como sorbente, encontrando
que el sistema propuesto es capaz de detectar la presencia de Cu(II) inclusive

ante la presencia de altas concentraciones de interferentes. El método se
presenta automatizado y alcanza un buen límite de detección cuando se aplica

a muestras de agua industriales [Saxena, R. y col. 2016].
La metodología propuesta en este trabajo combina ambas ventajas: la

preconcentración utilizando SPE y el sistema de FI. De esta forma se pretende
mejorar tanto los límites de detección como el control de los posibles
interferentes sumado a las ventajas del sistema FI en relación al mínimo
contacto con la muestra y disminución del consumo de reactivos.
3. Analito modelo
La irrupción de los MWCNTs en la química analítica llevó a varios autores

a evaluarlos como posibles sustratos para la preconcentración de distintos
metales en solución. La información consultada pone de manifiesto la alta
afinidad de los iones divalentes como el Cu(II), Pb(II), Zn(II), Co(II), Ni(II), Cd(II) y
Mn(II) por los MWCNTs oxidados con distintas metodologías [Stafiej, A. y col.
2008, Zawisza, B. y col. 2012].
En relación al Cu(II), se encuentran publicados muy buenos resultados

analíticos empleando sistemas de preconcentración en batch alcanzándose
límites de detección de 2,1 µg l-1 utilizando FAAS [Stafiej, A. y col. 2008]. Stafied,
A. remarca la alta afinidad de los MWCNTs frente al Cu(II) comparado con otros
iones divalentes. Asimismo, esta alta afinidad por el Cu(II) hizo que se utilizaran
MWCNTs en sistemas de filtración para purificar agua [Tian, Y. y col. 2012].
105
modelo
Todos estos antecedentes motivaron la utilización de Cu(II) como ión
modelo para desarrollar e implementar un sistema aún más eficiente y con

menor participación del operador como es el SPE en línea y estudiar los factores
que afectan los resultados analíticos para posteriormente aplicarlo a la

preconcentración de otros elementos de interés ambiental y ecotóxico como
son el Hg y Bi.
4. Materiales, reactivos e instrumentos utilizados
En la Tabla 1 se describen los materiales, reactivos e instrumentos

utilizados.
Instrumento
Agua destilada y Barnstead Obtenida por sistema

desionizada (DDW) mixto de intercambio
iónico
Bomba Peristática Gilson De alto caudal,
Minipuls®3 multicanal, con
mangueras resistentes a
los productos químicos
Espectrómetro de Shimadzu Modelo AA-6800
Absorción Atómica Corrector de lámpara de
deuterio
Lámpara de Cu de Hamamatsu, Photonics K.
cátodo hueco
Mangueras de Tygon Ismatec d.i.: 1,52; 1,14 mm
Resistente a ácidos
PVDF Millipore 0,22 µm de poro
Solución de Cu(II) 1000 Merck Solución comercial
mg ml-1 estándar
Tabla 1. Materiales, reactivos e instrumentos utilizados.
106
modelo
5. Metodología utilizada
5.1. Experimentos preliminares, materiales y métodos
Para evaluar las posibilidades de retención del Cu(II) se realizaron

estudios en sistemas discontinuos (batch) utilizando una variedad de
nanosustratos que presentan diferentes características: a) MWCNTs, b) MWCNT-

COOH oxidados con la relación H2SO4:HNO3 3:1 v/v, c) MWCNT-COOH
oxidados con la relación H2SO4:HNO3 1:3 v/v y d) MWCNT-pro. Si bien, como se

explicó en el capítulo anterior, la oxidación con la relación de ácidos de 1:3 se
descartó por no resultar la más apropiada luego de su caracterización, se la
incluyó en las pruebas preliminares a fin de verificar su comportamiento en este
caso específico.
Todo el material utilizado para contener soluciones, tanto de vidrio como
de plástico, se lavó con DDW, se dejó en remojo con HNO 3 10% v/v durante 24
h y finalmente se enjuagó varias veces con DDW. Todas las muestras y
estándares se conservaron en botellas de polietileno (50 ml) o tubos Falcon® a

pH<2 con HNO3, refrigeradas (2 ºC) según las recomendaciones de la EPA para
la conservación y almacenamiento de muestras de agua [Code of Federal
Regulations, 1984].
Se utilizaron soluciones comerciales estándar de Cu(II) de 1000 mg l-1

(Merck) para realizar con ellas todas las diluciones necesarias. Las diluciones se
prepararon diariamente.
La metodología empleada para los estudios en batch se hicieron
siguiendo los lineamientos de Stafiej, A. y col. 2008. Se pusieron en contacto 20

mg de cada uno de los sustratos estudiados con 10 ml de una solución de Cu(II)
de 1 µg ml-1 preparado en agua DDW sin ajuste de pH. Las muestras se agitaron
durante 4 h a temperatura ambiente. Las suspensiones se centrifugaron a 3000
rpm y el sobrenadante se filtró con membrana de PDVF de 0,22 µm de tamaño

107
modelo
de poro. Las soluciones de Cu(II) de 1 µg ml-1 se prepararon desde soluciones
comerciales estándar de 1000 mg l-1. Las soluciones se midieron por

espectrometría de emisión óptica con fuente de plasma acoplado
inductivamente (ICP OES) y los resultados se presentan en la Figura 1. La

cantidad de Cu(II) retenido se calculó por diferencia entre la concentración de la
solución inicial (C0) y la concentración medida en la solución al finalizar la

experiencia (Cf). Los experimentos se realizaron por triplicado.
Figura 1. Porcentaje de retención de Cu(II) en los experimentos en batch.
Los resultados reflejan la posibilidad de mejorar notablemente la
selectividad de los nanotubos al modificarlos con aminoácidos.

La bibliografía consultada y los resultados obtenidos son consistentes en
el uso de Cu(II) como ión modelo para la implementación del sistema de SPE en
línea.
108
modelo
5.2. Condiciones operativas
En la Tabla 2 se presentan las condiciones de operación del equipo de

FAAS.
Parámetros Instrumentales
Longitud de onda 324,8 nm

Ancho de rendija 0,5 nm
Corriente de la lámpara 6 mA
Corrección de fondo BGC-D2
Caudal de C2H2 1,8 l min-1
Tabla 2. Parámetros de operación.
5.3. Preparación de la columna
En base a los resultados obtenidos se eligió como substrato para las

subsecuentes experiencias a los MWCNT-pro. Se utilizaron ~20 mg de MWCNT-
pro para rellenar las puntas cónicas de una micropipeta de plástico (tips
amarillos), Figura 2. Se eligió este soporte ya que el grupo de trabajo tiene
experiencias exitosas utilizando tips como microcolumna [Pacheco, P. H. y col.

2009]. Las columnas se rellenaron en forma manual por el método de
empaquetamiento en seco y se utilizaron topes de fibra de vidrio para evitar la
migración del sorbente al sistema en línea. Las columnas se pre-acondicionaron

antes de cada medida haciendo pasar i) solución de HNO 3 10% v/v, ii) DDW y iii)
solución acuosa del mismo pH de la solución conteniendo al Cu.
Figura 2. Tip relleno con MWCNT-pro.
109
modelo
5.4. Procedimiento general
Las soluciones se ajustaron a los pHs seleccionados y se hicieron pasar a

través de la columna utilizando la bomba peristáltica a una velocidad de 1,0 ml
min-1. El sistema utilizado para la carga y elución de la muestra se encuentra

esquematizado en la Figura 3. Se comienza acondicionando la columna con una
solución de igual pH que la solución que contiene al analito colocando la

válvula V1 en la posición B. La válvula de inyección (V2) se coloca en la posición
de carga (a) y se pasa la muestra conteniendo al Cu(II). La válvula V2 se coloca en

la posición de elución (b) y se eluye el Cu retenido con una solución de HNO 3
10% v/v con un caudal de 1,0 ml min-1. Todo esto se realiza con una bomba
peristáltica y una válvula externa al equipo de FAAS. Seguidamente se introduce
el analito. Para finalizar, la microcolumna se regenera haciendo pasar i) solución

de HNO3 10% v/v, ii) DDW y se vuelve a utilizar iniciándose un nuevo ciclo.
Figura 3. Esquema instrumental utilizado, M. muestra; B. solución con el pH
seleccionado, E. eluyente, D. descarte, B1 y B2. Bombas peristáticas, C.

microcolumna (tip) rellena con MWCNT-pro, V2. Válvula de inyección. Posiciones
de la válvula: (a) carga y (b) elución.
110
modelo
5.5. Optimización de variables
A continuación se describe la optimización de los parámetros químicos y

físicos del sistema de análisis en línea.
5.5.1. Efecto del pH
Como se mencionó en capítulos anteriores el pH tiene un papel
fundamental en la retención de especies cargadas sobre la superficie de los

nanotubos de carbono. Esto se debe a la relación entre la carga de la superficie
y la carga del analito en función del pH de la solución. De esta forma el pH de la

solución está condicionando la relación entre el sustrato y el analito. Cuando el
pH se encuentra por encima del punto isoeléctrico (punto de carga cero) de los
MWCNT-pro, la superficie del sustrato adquiere carga negativa y permite la
atracción de cationes en solución.

Para estudiar el efecto del pH de la solución de carga en la retención del
Cu se prepararon soluciones en un rango de pH comprendido entre 1,0 y 9,0.

Las muestras se procesaron según el Procedimiento general (punto 5.4.). Los
resultados obtenidos se presentan en la Figura 4 donde se grafica el porcentaje

de Cu retenido por la columna.
Figura 4. Efecto del pH en la retención de Cu utilizando MWCNT-pro

como sustrato.
111
modelo
El estudio muestra un incremento en el porcentaje de retención del Cu(II)
en pHs cercanos a 3 por lo que este valor se seleccionó para continuar el

estudio de variables. La disminución de la retención a pHs altos se puede deber
a la formación del hidróxido (pH>6) y, a pHs muy bajos, ocurre la competencia

del H+ con las especies catiónicas.
5.5.2. Efecto del caudal de carga
La optimización del caudal de carga permite encontrar las condiciones
óptimas para lograr la retención cuantitativa del Cu(II) en la microcolumna

buscando el compromiso entre la máxima retención y un tiempo de análisis no
muy prolongado. Se estudió la influencia del caudal de carga a pH 3 (pH

optimizado). Tal como se observa en la Figura 5 la retención disminuye
ligeramente a partir de un caudal superior a 1 ml min-1. Con el objetivo de evitar

el empaquetamiento de la microcolumna con la consecuente sobrepresión en el
sistema se adoptó un caudal de carga de 1 ml min-1.
Figura 5. Efecto del caudal de carga en la retención del Cu(II).
112
modelo
5.5.3. Efecto de la concentración y caudal del eluyente
En la bibliografía se menciona que los procesos hidrometalúrgicos de

extracción de Cu(II) se realizan con H 2SO4 [Tobiasz, A. y col. 2012]. Sin embargo,
en el trabajo de S. Walas y col. se probaron soluciones de HNO 3 y H2SO4 para

realizar la elución de iones Cu(II) de un sorbente sólido (silica modificada)
encontrándose que el HNO3 5% v/v resultaba ser el eluyente más eficiente

[Walas, S. y col. 2006].
Teniendo en cuenta este estudio y entendiendo que el proceso de

elución involucra el desplazamiento del analito retenido por los H+ [Pacheco, P.
H. y col. 2009], para conseguir la elución del Cu(II) se utilizó HNO3 y se
estudiaron concentraciones en el rango entre 1 a 15% v/v. Se obtuvieron
recuperaciones cuantitativas utilizando HNO3 10% v/v.

El caudal de elución tiene influencia no solo en el desplazamiento del
analito retenido en los MWCNT-pro sino que también afecta al proceso global
de medición. Se estudiaron varios caudales de elución y se encontró que al
utilizar un caudal de 1 ml min-1 se alcanzan buenos resultados en cuanto a la
repetibilidad de la medición.
5.5.4. Volumen de elución
Para calcular el volumen en el que se eluye el Cu(II) retenido se midió el

tiempo en el que se obtiene la señal de Cu(II) y se utilizó el caudal de elución
para calcular el volumen. La experiencia se realizó varias veces dando como

resultado que el Cu(II) se eluye en 2,2 ml.
5.6. Capacidad y re-utilización de la microcolumna
La capacidad de adsorción de la microcolumna es el parámetro que
determina la cantidad máxima de analito capaz de ser retenida por gramo de

sorbente (en este caso MWCNT-pro). La capacidad de retención de la
113
modelo
microcolumna de MWCNT-pro se estudió de forma dinámica utilizando una
solución de 200 µg l-1 de Cu(II) con un caudal de carga de 1 ml min-1. La

determinación del total de Cu(II) retenido se realizó integrando el área bajo la
curva de la Figura 6. Se obtuvo una capacidad de retención de Cu(II) de 0,09 mg

g-1.
Asimismo se estudió la estabilidad y capacidad de regeneración de la

microcolumna. Para regenerarla se utilizaron 3 ml de HNO3 10% v/v y DDW. La
microcolumna se mantuvo estable sin observarse deterioro ni disminución del

porcentaje de recuperación del Cu(II). Se realizaron 200 ciclos de
preconcentración sin observarse ninguno de los efectos mencionados.
Figura 6. Estudio de la capacidad de retención de Cu(II).
6. Desempeño Analítico
Se obtuvo un factor de preconcentración de 27 teniendo en cuenta la

relación de pendientes del sistema con preconcentración y sin
114
modelo
preconcentración, utilizando un volumen de muestra de 5 ml. El desvío estándar
relativo (RSD) alcanzado es de 6,5 % al medir 10 muestras de Cu(II) a un nivel de

20 µg l-1. Se alcanzó un límite de detección (LOD) de 8 µg l-1. Para calcularlo se
desvío estándar de las medidas realizadas. El límite de cuantificación (LOQ) es
de 28 µg l-1 utilizando do se
estudió desde valores cercanos al LOD hasta 200 µg l-1 con un coeficiente de
correlación de 0,9986.
Lamentablemente no fue posible en esta etapa de la tesis conseguir
material de referencia certificado para poder procesarlo con la metodología
propuesta y comparar los resultados alcanzados. Se midieron las muestras en
forma directa (Tabla 3) y luego se realizó un estudio de recuperación agregando

30 µg l-1 de Cu(II). Las recuperaciones variaron entre 97 y 108 %. En la Tabla 4 se
presentan los datos obtenidos del estudio de recuperación.
Muestra Metodología
desarrollada [µg l-1]
H2O de red 16,3 ± 1,0

Agua de río de Mendoza <LOD

Agua en cercanía a una mina 39,4 ± 2,5

Agua en cercanía a una mina 15,6 ± 0,9
Agua en cercanía a una mina <LOD
Tabla 3. Determinación de Cu(II) en distintos tipos de aguas.
115
modelo
Muestra Cantidad de Cu % de
Cu agregado encontrado Recuperación
(µg l-1)
Agua de río de Mendoza 30,0 29,1±1,9 97%

Agua en cercanía a una mina 30,0 29,7±1,9 99%
Tabla 4. Resultados del estudio de recuperación.
7. Efecto de iones concomitantes
Es necesario estudiar cómo afecta a la señal de Cu(II) la presencia de
otros iones en solución, para ello, se estudia como interfieren otros iones que
normalmente coexisten con el Cu(II). Para realizar este estudio se emplearon
soluciones de 30 µg l-1 de Cu(II) a las que se le adicionaron concentraciones de

Ni(II), Cd(II), Zn(II), Mn(II), Co(II), SO 42- y Cl-1 en dos niveles de concentración: a)
100 µg l-1 y b) 1000 µg l-1. Las soluciones preparadas de esta forma se

procesaron según la metodología analítica optimizada (5.4. Procedimiento
general). Se observó que la presencia de los iones estudiados hasta una
concentración de 1000 µg l-1 no afectan la señal de Cu(II) lo que demuestra la
selectividad del método desarrollado.
8. Análisis de aguas naturales
La metodología desarrollada se empleó para la determinación de Cu(II)
en aguas procedentes de ríos de la provincia de Mendoza. Las muestras
colectadas se filtraron utilizando membrana de PDVF de 0,22 µm de tamaño de

poro y almacenadas a 2 ºC. Los resultados están presentados en la Tabla 3.
116
modelo
9. Conclusiones
Mediante la utilización del Cu(II) como ión modelo fue posible desarrollar
la metodología analítica utilizando MWCNT-pro como sorbente en sistemas de

SPE en línea. Se encontraron las condiciones apropiadas para lograr la retención
del Cu(II) en los nanotubos funcionalizados y su posterior desorción para poder

realizar la medición en forma cuantitativa.
Esta primera etapa de trabajo analítico permitió identificar puntos donde
implementar optimizaciones que permitan obtener mejores desempeños

analíticos. La implementación de sistemas de SPE en línea acoplados a
instrumentos comerciales tiene la ventaja de que es posible aplicarlo en la

mayoría de los Laboratorios Analíticos pero muestra también la necesidad de
adaptar algunos parámetros instrumentales a las limitaciones de los softwares

comerciales. Por ejemplo, el reemplazo del loop por el tip de micropipeta a
modo de columna fue exitoso, pero también se identificó como un punto a

mejorar; por un lado no permitió utilizar el flujo reverso para la elución, por el
otro, la geometría del tip y el sentido del caudal de carga y elución produjeron
la prematura compactación del sistema.
Otro aspecto relevante de esta etapa de trabajo fueron las experiencias
en batch, que mostraron la posibilidad real de conseguir selectividad a partir de
la funcionalización de MWCNTs con aminoácidos. Si bien esto es particular para

cada sistema sustrato/analito/matriz y debe ser estudiado en forma específica,
en este capítulo quedó demostrado que los aminoácidos son una posibilidad
concreta de lograr selectividad.
El trabajo realizado con Cu(II) permitió implementar el método de SPE y

aportó información valiosa para aplicar esta metodología a otros analitos de
interés ecotóxico. Es importante resaltar que esta primera experiencia sirve de
117
modelo
guía para optimizar el desempeño analítico incorporando mejoras en los puntos
identificados.
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120
Capítulo 5
Retención, preconcentración y
determinación de Hg(II) en aguas
naturales
450 ciclos
Epolene ®
En este capítulo se evalúa la capacidad de los nanotubos de carbono oxidados

para la retención, preconcentración y posterior determinación de Hg(II) en
diferentes tipos de aguas a niveles de ng l-1.

Capítulo 5 Retención, preconcentración y determinación de Hg(II) en aguas
naturales
Abreviaturas
AAS Atomic absorption spectrometry (Espectrometría de
absorción atómica)
CV Cold vapor (Vapor frío)
CV AAS Cold vapor atomic absorption spectrometry (Espectrometría
de absorción atómica por vapor frío)

EDL Electrodeless discharge lamp (Lámpara de descarga sin

electrodo)
EPA The US Environmental Protection Agency (Agencia de

Protección Ambiental de los Estados Unidos)
FE Factor de enriquecimiento
FIAS Flow injection analysis system (Sistema de inyección en
línea)
HPLC High-performanced liquid chromatography (Cromatografía
líquida de alta resolución)


Inductivamente)
ICP OES Inductively coupled plasma optical emission spectrometry

LOQ Limit of quantification (Límite de cuantificación)

pared múltiple)
122
naturales
NaBH4 Borohidruro de sodio

PET Polietilentereftalato
PTFE Politetrafluoroetileno
RSD Relative standard deviation (Desviación estándar relativa)
SnCl2 Cloruro de estaño (II)

barrido)

TREs Traffic related elements (Elementos relacionados con el
transporte automotor)
WHO World Health Organisation (Organización Mundial de la
Salud)
123
naturales
1. Introducción
El mercurio (Hg) es un polutante ambiental, mundialmente distribuido,
conocido por sus altos niveles de toxicidad y efectos adversos sobre la salud
humana. Es por ello que está considerado como uno de los metales tóxicos más
peligrosos debido a su habilidad de bioacumularse en tejido vivo y

biomagnificarse en las cadenas tróficas [Nabais, J.V. y col. 2006, Okoronkwo, N.
E. y col. 2007, Ramamoorthy, S. y col. 1979]. Esto ha motivado que

organizaciones como la Unión Europea haya restringido la concentración de Hg
en agua de bebida a 1 µg l-1 y el límite de vuelco en cursos de agua a 5 µg l-1

[Ghodbane, I. y col. 2008]. Para la EPA, en cambio, el límite fijado en agua de
bebida es de 2 µg l-1 y el límite de vuelco en cursos de agua es 10 µg l-1 [EPA

reporte, 2001] y para la WHO es de 6 µg l-1 el límite admisible para agua de
bebida [WHO reporte, 2010].

El Hg es emitido al ambiente mayoritariamente en su forma elemental,
como Hg0, por fuentes naturales como las emisiones del suelo, erupciones
volcánicas, incendios forestales y por fuentes antropogénicas como la
combustión de combustibles fósiles y la minería del oro. La principal emisión de

Hg al ambiente ha ocurrido a partir del 1800 y está asociada a la revolución
industrial en varias partes del mundo [UNEP reporte, 2013]. Sin embargo, las
primeras investigaciones sobre los problemas ecotoxicológicos asociados al uso
y liberación del Hg fueron realizados a partir de 1960 como consecuencia de un

hecho conocid ejemplo
emblemático de liberación directa de compuestos orgánicos de mercurio que

provocó el envenenamiento por metilmercurio en Minamata, Japón, en los años
1950. Se vertieron en esa bahía subproductos orgánicos de mercurio resultado

de la producción industrial de acetaldehído y la población de la zona consumió
peces y mariscos contaminados. En mayo de 1956 se descubrió oficialmente lo
que se llamó la enfermedad de Minamata, detectándose los síntomas de

124
naturales
toxicidad aguda, malformaciones en fetos cuyas madres consumieron alimento
contaminado y con los años comenzaron a detectarse los efectos de la toxicidad

crónica [Harada, M. 1995].
Así, los estudios se han enfocado en la relación entre la composición del

ecosistema (agua, suelos, sedimentos y biota), bioacumulación, transferencia en
la cadena trófica y la toxico-dinámica del Hg [Berlin, M., B. y col. 2007, Harada,
M. 1995, Kojima, K. y col. 1973].

Al enfocarnos en las áreas urbanas, la presencia de Hg se debe
principalmente a actividades antropogénicas como la combustión de

combustibles fósiles, refinación de petróleo, producción de cemento,
fundiciones, transporte, quema de residuos sólidos urbanos y diferentes tipos

de industrias [Biester, H. y col. 2002, Tack, F. M. G. y col. 2005]. Por ejemplo,
estudios realizados sobre la composición del polvo de la calle de Buenos Aires

demuestran que el Hg es un elemento relacionado al transporte automotor
(TREs), especialmente ligado a la fracción de menor tamaño de partícula

asociada a los escapes de los vehículos, debido a la combustión de los
combustibles líquidos [Londonio, A. y col. 2012].

La mayor consciencia sobre los problemas ambientales y el avance en la
legislación de numerosos países ha provocado la reducción de las aplicaciones

industriales del Hg [UNEP reporte, 2013, Berlin, M., B. y col. 2007]. Además,
países industrializados como EEUU y Canadá han implementado programas de

reducción de emisiones de Hg [Cooney, C. M. 2007].
Como consecuencia de ello, la utilización de Hg en distintos procesos

industriales, como la producción electrolítica de cloro-soda y en productos
comerciales como baterías, equipamientos eléctricos y electrónicos, pesticidas y

biocidas ha disminuido. Estas políticas lograron la reducción de las emisiones
antropogénicas de Hg a la atmósfera en Europa en un 40% entre 1990 y 2000

[Pacyna, E. G. y col. 2006]. Sin embargo, este descenso no ha ocurrido a nivel
125
naturales
mundial ya que la industrialización y la excesiva explotación de la minería de oro
(en baja escala) en la última década provocaron un aumento de las emisiones

de Hg de origen antropogénico en Asia, América del Sur y África, provocando
que la cantidad anual de emisiones globales de Hg por la actividad humana

haya aumentado ligeramente de 1900 toneladas en 1995 a 1960 toneladas en
2010 [UNEP 2013, UNEP 2002]. Este aumento compromete a la comunidad
internacional en su conjunto debido a que el Hg atmosférico se distribuye

globalmente, a causa de su elevada vida media y deposición tanto por vía
húmeda como por vía seca, provocando una considerable contaminación de la

hidrósfera [Lamborg, C. H. y col. 2014]. La presencia de mayores contenidos de
Hg en la hidrósfera es lo que ocasiona el incremento del nivel de Hg en peces

de consumo humano. Teniendo en cuenta la capacidad de bioacumulación del
Hg en la cadena trófica, con factores de hasta 106, el consumo de pescado es

actualmente la principal fuente de exposición humana no-ocupacional al Hg
[Burger, J. y col. 2005].

Este escenario hace que exista continuo interés por el monitoreo de la
concentración de Hg en aguas, existiendo por ejemplo, la Directiva del

Programa Marco Europeo para el Agua (2000/60/EC) y la EPA que declaran al
Hg como un contaminante peligroso y consideran de carácter obligatorio su

monitoreo en la hidrósfera a niveles de ultratraza.
La presencia de Hg en aguas naturales varía en función de su estado de

oxidación: el Hg elemental es un vapor insoluble, el Hg(II) como cloruro es muy
soluble mientras que el Hg(I) como cloruro es mucho menos soluble y el Hg(II)
como sulfuro es prácticamente insoluble. Un proceso muy importante que
puede ocurrir tanto en aguas naturales como en agua de mar es la metilación

del Hg inorgánico [IPCS, 1989]. Existen bacterias (Pseudomonas spp.) presentes
en la mucosa superficial de peces y en sedimentos, capaces de metilar al Hg en

condiciones aeróbicas. Existen también otro tipo de bacterias capaces de metilar
126
naturales
al Hg en condiciones anaeróbicas [Wood, J. M. y col. 1983]. Una vez que el
metilmercurio es liberado por los microorganismos, entra en la cadena trófica

como consecuencia de su rápida difusión, y se une a las proteínas de la biota
acuática. Esto es lo que provocó el envenenamiento por consumo de peces

contaminados en el desastre de Minamata. El contenido de Hg total es la suma
de las diferentes especies de Hg que sufren procesos de oxidación, reducción y
biometilación.
La concentración de Hg total disuelta en aguas naturales sin
contaminación está en el orden de los sub-ng l-1 para agua de mar llegando a
10 ng l-1 para aguas dulces y aguas costeras [WHO, 1990, Gilmour, C. C. y col.
1991]. En relación con el agua de lluvia, los niveles de Hg están reportados en el
rango de 5 100 ng l-1, llegando a niveles tan bajos como 1 ng l-1 [IPCS, 1990]. La
concentración natural de Hg en aguas subterráneas y aguas superficiales es

<0,5 µg l-1, sin embargo depósitos minerales y/o actividades mineras pueden
provocar aumentos de estos valores.

Esta situación plantea, por lo tanto, el desafío de la necesidad de
determinar Hg a niveles extremadamente bajos cuando se deben monitorear

aguas naturales. Esto hace que la determinación directa utilizando técnicas
instrumentales sea muy limitada. Inclusive, una técnica tan sensible como la
espectrometría de masas con fuente de plasma acoplado inductivamente (ICP
MS) conlleva a un desafío para la medición directa de Hg en determinadas

aguas, como por ejemplo agua de mar, por su elevada concentración salina. Es
por ello que es fundamental la incorporación de una etapa de separación y

preconcentración previa a la detección y determinación cuantitativa de Hg.
En este capítulo se presenta el desarrollo de la metodología analítica para

separar, preconcentrar y determinar cuantitativamente Hg(II) en aguas naturales
utilizando la separación en fase sólida como metodología y los nanotubos de

carbono de pared múltiple oxidados (MWCNT-COOH) como sustrato. La
127
naturales
optimización de este proceso permite realizar las determinaciones mediante
espectrometría de absorción atómica por vapor frío (CV AAS), técnica

ampliamente utilizada para la determinación cuantitativa de Hg en varios tipos
de muestras debido a su alta sensibilidad y selectividad como así también a su

relativamente bajo costo de operación y bajo límite de detección (<1,0 µg l-1)
[Wuilloud, J. C. A. y col. 2002, Capelo, J. L. y col. 2004, Torres, D. P. y col. 2005].
2. Técnicas para la determinación de Hg
Para la determinación de Hg total es posible utilizar técnicas

instrumentales como ICP MS [Zhao, Y. y col. 2012, Karunasagar, D. y col. 1998],
la espectrometría de fluorescencia atómica (AFS) [Leopold, K. y col. 2008], la

espectrometría de absorción atómica (AAS) [Ferrua, N. y col. 2007, Rofouei, M. K.
y col. 2011] y la florescencia de Rx por reflexión total (TXRF) [Marguí, E. y col.

2010]. Asimismo, con la finalidad de mejorar la sensibilidad de estas técnicas es
posible combinar algunas de ellas con CV y la técnica de amalgama de oro para

la separación y preconcentración de Hg, respectivamente [Leopold, K. y col.
2008; Sánchez, R. y col. 2015; Pyhtilä, H. y col. 2012]. Además, para la separación
de las distintas especies de Hg es posible utilizar cromatografía líquida de alta
resolución (HPLC) [Jones, P. y col. 1997].

El acoplamiento CV AAS es frecuentemente utilizado para la
determinación cuantitativa de Hg en varios tipos de muestras, por su

sensibilidad y selectividad. Es una técnica relativamente económica y accesible
en el Laboratorio Analítico, aún en aquellos que realizan análisis de servicios.

Sin embargo, la determinación directa de metales a concentraciones del
orden de trazas y ultratrazas presenta dificultades asociadas como: i) posibles

interferencias de la matriz, y, ii) sensibilidad insuficiente de la técnica. Es por ello
128
naturales
que la separación y preconcentración es fundamental para obtener límites de
detección adecuados a las necesidades ambientales actuales.

En el Capítulo 4 se utilizó la AAS para la determinación de Cu, la técnica
está fundamentada en la capacidad que tienen los elementos, en su estado

atómico basal, de absorber radiación electromagnética a longitudes de onda
específicas para cada elemento. La cantidad de energía absorbida es
directamente proporcional a la concentración de los átomos del metal

analizado, de acuerdo con la Ley de Lambert-Beer. Para generar el Hg en estado
elemental se hace uso de la volatilidad del Hg. El vapor de Hg 0 se forma por la

reducción mediada por un agente reductor como el SnCl 2 o NaBH4. El Hg
metálico así originado es arrastrado por un gas hacia el camino óptico del
aparato donde ocurre la interacción con la radiación, produciéndose la
absorción.
En este capítulo se utiliza la separación en fase sólida para separar y
preconcentrar el Hg(II), seguido de la generación del vapor frío para luego

realizar la cuantificación por AAS. Toda la metodología se realiza en línea,
minimizando la manipulación y potencial contaminación de la muestra y

disminuyendo los tiempos de análisis.

utilizados.
129
naturales

Instrumento
Agua destilada y Barnstead Obtenida por sistema
desionizada (DDW) mixto de intercambio
iónico
Bomba Peristática Gilson Minipuls®3
Resistente a los
productos químicos, de
alto caudal, multicanal
Epolene® Eastman Chemical Cera de polietileno de
Products, Inc. bajo peso molecular
Espectrómetro de PerkinElmer AAnalyst 200, con celda
Absorción Atómica de cuarzo, manta de
calentamiento eléctrica
Filtros de jeringa de Waters Corp. 0,45 µm tamaño de poro
PDVF
HCl Merck Para análisis 37%
Lámpara de Hg de PerkinElmer
descarga sin electrodos
(EDL)
Equipo de dispersión de Malvern Instruments Ltd. Mastersizer 2000
rayo láser
Sistema de Análisis por PerkinElmer FIAS 100
Inyección en Línea
Solución de Hg(II) 1000 Merck Solución comercial
mg l-1 estándar
Solución NaBH4 0,2 % Merck Estabilizada en NaOH
(m/v) 0,1% (m/v), filtrada con
papel Nº 42 Whatman
Tabla 1. Materiales, reactivos e instrumentos.
130
naturales
4.1. Materiales y métodos
Se utilizó un espectrómetro PerkinElmer AAnalyst 200 con celda de
cuarzo y manta de calentamiento eléctrica. El equipo está provisto de un

sistema de inyección de muestra en línea (PerkinElmer FIAS 100) acoplado al
espectrómetro. El separador gas-líquido es de tipo modular fabricado en un

plástico con alta resistencia química y una membrana de PTFE intercambiable.
Para complementar el sistema FIAS se utilizó una bomba peristáltica adicional,

Minipuls 3 de Gilson. Las conexiones entre los distintos componentes se
realizaron con tubos de Teflón® de 1,0 mm (d.i.). La muestra y los diferentes

reactivos utilizados se condujeron a través de mangueras de Tygon® con
diámetros internos de 1,52 mm para los reactivos y eluyente y de 1,14 mm para

el reductor y la muestra.
Se utilizó una lámpara de descarga sin electrodos (PerkinElmer) con una

corriente de 190 mA y a una longitud de onda de 253,7 nm, paso de banda
espectral de 0,7 nm. Las EDL están formadas por un tubo de cuarzo
herméticamente cerrado que contiene un gas inerte, como el argón, a unos
pocos torr y una pequeña cantidad del metal (o su sal) cuyo espectro se desea
obtener. Producen intensidades radiantes que son uno o dos órdenes de

magnitud superiores a las lámparas de cátodo hueco.
Todo el material utilizado para contener soluciones, tanto de vidrio como

de plástico, se lavó con DDW, se dejó en remojo con HNO3 10% v/v durante 24
h y finalmente se enjuagó varias veces con DDW. Todas las muestras y

estándares se conservaron en botellas de polietileno (50 ml) o tubos Falcon® a
Regulations, 1984].
131
naturales
Se utilizaron soluciones estándares comerciales de Hg de 1000 mg l-1
(Merck) y se realizaron diariamente todas las diluciones necesarias. Los reactivos

utilizados son de calidad analítica, la solución de NaBH4 se preparó diariamente
por disolución en DDW y se estabilizó con NaOH al 0,1% (m/v). Luego de

disolución completa se filtró con papel Whatman Nº 42 para eliminar turbidez.
4.2. Condiciones de operación
En la Tabla 2 se presentan las condiciones de operación del equipo de CV
AAS.
Parámetros instrumentales
Temperatura de celda 110 ºC

Señal registrada área de pico
Generación de vapor
Concentración de NaBH4 0,2% (m/v); NaOH 0,1% (m/v)

Caudal de NaBH4 5,5 ml min-1
Caudal de HCl 10 ml min-1
Concentración de HCl 15% (v/v)
Caudal de N2 30 ml min-1
4.3. Preparación de la microcolumna
Se realizaron pruebas preliminares utilizando como sustrato los MWCNT-
COOH que se obtuvieron del proceso de oxidación desarrollado en el Capítulo

3. Los resultados obtenidos mostraron que los nanotubos oxidados poseen una
elevada afinidad por el Hg(II). Esta gran afinidad hizo posible el procesamiento
de un gran volumen de muestra, lo cual impacta directamente en el factor de
enriquecimiento (FE) [Arpadjan, S. y col. 1997]. Sin embargo, a medida que se
132
naturales
incrementó el volumen procesado se detectaron problemas de compactación
de la columna. Luego de muchos ciclos, se observó una sobrepresión en el

sistema que no permitía continuar con el procesamiento de las muestras.
Para resolver esta dificultad se probaron diferentes sustancias inertes que

se mezclaron con los MWCNT-COOH. La variedad de sustancias que se
probaron difieren en sus características fisicoquímicas como la capacidad de
retención hacia especies cargadas (resinas de intercambio, esferas de vidrio de

poro controlado), la morfología y los tamaños.
Luego de varias pruebas se encontró que los mejores resultados se

obtenían cuando se agregaba al sustrato otro producto que impidiera la
compactación. Para ello, se agregó al relleno pequeñas escamas de cera de

polietileno de bajo peso molecular llamada Epolene ®. Las pruebas se realizaron
rellenando microcolumnas con una mezcla de nanotubos:Epolene® en

diferentes relaciones. La gran afinidad que presentan los nanotubos oxidados
por el Hg(II) permitió probar su desempeño utilizando una muy baja cantidad
de MWCNT-COOH. Se encontraron buenos resultados al rellenar
microcolumnas con tan solo ~1 mg de MWCNT-COOH y 10 mg de Epolene®.

Las dimensiones de la microcolumna también se optimizaron ensayando
diferentes longitudes y diámetros. Se buscó la menor cantidad de sustrato y las

menores dimensiones que permitieran el cómodo pasaje de las soluciones y
mostraran buenos resultados de retención. Finalmente, la mezcla optimizada

(MWCNT-COOH:Epolene® 1:10) se utilizó en una microcolumna fabricada
especialmente en acrílico de 20 mm de longitud, 2,25 mm de diámetro interno y

5,5 mm de longitud útil. El volumen nominal de la microcolumna es de ~22 µL y
se rellenó por el método de empaquetamiento en seco.
133
naturales
Se presenta de manera esquemática el procedimiento llevado a cabo

para realizar las optimizaciones del sistema. Es una visión esquemática para
poder comprender como se han realizado las optimizaciones. El sistema

utilizado permite optimizar los diferentes parámetros analíticos, por ejemplo, es
posible evaluar distintas microcolumnas colocándolas en el sistema mediante

las mangueras y conectores correspondientes, también se varían los caudales de
carga y elución variando los parámetros del software del equipo o en forma
manual en el caso de la bomba de carga externa.
En todos los casos, las soluciones de carga se ajustaron a los pHs
seleccionados y se hicieron pasar a través de la microcolumna utilizando la
bomba peristáltica externa. El diseño experimental utilizado para la carga y la

elución de la muestra se encuentra esquematizado en la Figura 1. Se comienza
acondicionando la microcolumna con una solución de igual pH que la solución

que contiene al analito, luego se realiza la carga de la muestra conteniendo al
Hg(II) utilizando en ambos casos la bomba 1. Este proceso se realiza colocando

la válvula del FIAS en la posición de carga. Para el proceso de elución se coloca
la válvula del FIAS en posición de elución y se utiliza la bomba 2 para impulsar
el eluyente y el reductor. La elución se realiza con HCl con un caudal optimizado
de 10 ml min-1. Seguidamente el analito se introduce en el equipo (CV AAS).

Para finalizar, la microcolumna se regenera haciendo pasar i) 0,5 ml de una
solución de HCl 15% v/v ii) 2 ml de DDW y se vuelve a utilizar iniciándose un

nuevo ciclo. El esquema de lavado del sistema y regeneración de la
microcolumna propuesto es el resultado de sucesivas pruebas que permitieron

encontrar los volúmenes mínimos para los cuales se obtenía la completa
limpieza del sistema.
134
naturales
Figura 1. Diseño experimental utilizado.
4.5. Características y tratamiento de las muestras a analizar
Cuando se analiza Hg en aguas naturales es necesario considerar la

posibilidad de encontrarlo en dos formas, inorgánica y orgánica. Como la
metodología desarrollada fue diseñada para la determinación de Hg total fue

preciso realizar un preacondicionamiento de las muestras reales. Existen
procedimientos reportados en la bibliografía donde se utilizan diferentes

agentes y mezclas oxidantes [Welz, B. y col. 1992, Capelo, J. L. y col. 2000 y
Wuilloud, J.C.A. y col. 2002]. En este trabajo se utilizó la fotooxidación de los

posibles compuestos orgánicos de Hg mediante la irradiación de las muestras
durante 0,5 h con una lámpara UV de 78 W.

Las muestras de agua que se analizaron fueron recolectadas en diversos
lugares de la República Argentina y con distintas procedencias: agua de río,

agua de mar, aguas en cercanías de actividades mineras y efluentes de plantas
de tratamiento. Además, se incluyó para su análisis agua recolectada en la

Antártida. Esta muestra de agua fue obtenida en la Estación Carlini (ex. Jubany),
135
naturales
Luego de la recolección, las muestras se colocaron en botellas de
polietilentereftalato (PET), previamente sometidas a un proceso de limpieza con

HNO3 10% (v/v) y las muestras de agua de la Antártida, en tubos de Teflón ®. La
utilización de estos envases se decidió en base a los estudios de Fadini, P. S. y

Jardim, W. F.; en ellos se reportan niveles no detectables de contaminación,
tanto por lixiviado del material del envase como por pérdida de metales cuando
se utilizaron envases de PET y Teflón ® para la recolección y almacenamiento de

Hg previo a su detección [Fadini, P. S. y col. 2000]. Previo a su análisis las
muestras de agua de río, de mar y efluentes se filtraron con filtros de jeringa de

PVDF de 0,45 µm de tamaño de poro. El pH de las muestras se ajustó antes de
comenzar cada ciclo de preconcentración.
4.6.1. Características de la microcolumna y material de relleno
En el punto 4.3. Preparación de la microcolumna se analizaron las

características de las microcolumnas ensayadas y los materiales de relleno
estudiados. Como resultado, la cera de polietileno de bajo peso molecular

llamada comercialmente Epolene® fue seleccionada por su eficaz
comportamiento, evitando la aglomeración de los nanotubos. En cuanto a sus

características, esta cera presenta buena estabilidad térmica y muy buena
compatibilidad química frente a ácidos minerales. Asimismo, si bien es conocido

que el polietileno es un material sumamente inerte, se verificó que su presencia
no modificase el proceso de retención de Hg(II). Para realizar esta verificación se

rellenó una microcolumna con ~10 mg solamente de Epolene ® y se colocó en el
sistema de preconcentración. Como resultado de la elución no se detectó señal

de Hg(II) asegurándonos de esta forma que en la retención del Hg(II) solo
tienen participación los MWCNT-COOH.
136
naturales
Para complementar la información sobre la cera de polietileno se estudió
el tamaño y la distribución de las partículas de Epolene® por dispersión de rayo

láser, encontrándose que el ~75% de las partículas tienen un diámetro de ~800
µm con una importante dispersión en el tamaño y forma de partícula lo que

contribuye a evitar la agregación de los MWCNT-COOH. Se realizaron cinco
medidas consecutivas de dos muestras y se promediaron los resultados
utilizando un equipo Mastersizer 2000 ®. En la Figura 2 se presenta el gráfico

obtenido observándose el porcentaje en volumen acumulativo versus el tamaño
de partícula. No se detectaron partículas por debajo del micrómetro en las

muestras analizadas en el Laboratorio Control Químico y Físico del
Departamento de Combustibles de la CNEA.
Figura 2. Distribución del tamaño de las partículas del Epolene ®.
En la Figura 3 se presentan imágenes SEM donde puede observarse la
morfología de la cera de polietileno. En el análisis por dispersión láser se

observa la dispersión de tamaños y en las imágenes SEM es posible apreciar la
irregularidad en las formas.
137
naturales
Figura 3. Imágenes SEM de las partículas de Epolene®.
También se observaron mezclas de MWCNT-COOH con Epolene®
encontrándose manojos de nanotubos sobre las partículas de polietileno (Figura

4).
Figura 4. Imágenes SEM de la mezcla MWCNT-COOH / Epolene®.
138
naturales
Luego de utilizarse la microcolumna durante 450 ciclos de
preconcentración / elución y limpieza, la mezcla se retiró de la microcolumna, se

secó y se observó nuevamente al SEM para poder evaluar la integridad
estructural de los nanotubos. En la Figura 5 se observan las imágenes obtenidas,

las cuales reflejan la conservación de la estructura de los nanotubos.
Figura 5. Imágenes a distinta magnificación de los MWCNT-COOH extendidos
sobre las partículas de Epolene®.
4.6.2. Efecto del pH
Como ya se ha mencionado en capítulos anteriores, el valor del pH de la

solución de carga tiene un rol fundamental en la retención de especies cargadas
sobre la superficie de los MWCNT-COOH [Gil, R. A. y col 2007, Datsyuk, V. 2008].

Cuando el pH de la solución es mayor que el punto isoeléctrico de los MWCNT-
139
naturales
COOH, la carga negativa de la superficie favorece las interacciones
electrostáticas para la adsorción de cationes. La disminución en el pH lleva a la

neutralización de la carga de la superficie con lo cual la retención de cationes
sobre la superficie de los MWCNT-COOH disminuye rápidamente.

Se evaluó el efecto del pH en el rango comprendido entre 1,0 y 9,0 con 4
ml de soluciones de Hg(II) de 5 µg l-1. Las muestras preparadas se
preconcentraron y analizaron con la metodología descripta en 4.4. Se hizo

atravesar la solución por la microcolumna con un caudal de carga de 1,7 ml min-
1
. Se utilizó el área de pico para evaluar la señal producida por las diferentes
soluciones. En la Figura 6 se presentan los resultados obtenidos del proceso de
retención/elución. Se encontró que la retención máxima de Hg(II) se consigue

en pHs cercanos a 5. Por encima de este pH la señal de Hg(II) disminuye
significativamente. A pHs superiores a 8, el descenso de la retención se puede

atribuir a la hidrólisis del metal y a muy bajos pHs a la competencia del metal
con los protones por los sitios de unión. De acuerdo a los resultados obtenidos
se eligió el pH 5 como el adecuado para los siguientes experimentos.
Figura 6. Efecto del pH en la retención de Hg(II) utilizando MWCNT-COOH

como sustrato.
140
naturales
4.6.3. Efecto de la concentración del eluyente
Se seleccionó el HCl como eluyente para producir la desorción del Hg(II)

retenido en la microcolumna. La elección de este ácido se basó a que por un
lado, ocurre el intercambio entre el analito y los H +, y al mismo tiempo los iones
cloruro pueden interactuar con el Hg(II) removido mediante la formación de
HgCl2 y mejorar la elución [Pillay, K. y col. 2013].
Se estudió la capacidad de elución del HCl en un amplio rango de

concentraciones, entre 1 y 20% (v/v). Tal como puede observarse en la Figura 7
la máxima señal se alcanza al eluir con HCl 15% (v/v).
Figura 7. Efecto de la concentración de eluyente.
4.6.4. Efecto del caudal de carga y elución
Los caudales de carga y elución son cuidadosamente estudiados en los

sistemas en línea buscando optimizar la sensibilidad del método y el factor de
preconcentración. La velocidad con la que la muestra atraviesa la microcolumna,

caudal de carga, tiene impacto directo en el tiempo de análisis y determina el
tiempo en el cual debe ocurrir la retención, es decir, el tiempo de contacto entre
141
naturales
el analito y los sitios activos del material sorbente. El efecto del caudal de carga
en la señal de Hg se estudió entre 0,5 y 2,7 ml min-1 mientras que el caudal de

elución se mantuvo constante en 10 ml min-1. En la Figura 8 se observan los
resultados obtenidos. La señal aumenta hasta alcanzar un máximo en 1,7 ml

min-1 y luego disminuye. Se observó una relación prácticamente lineal entre el
aumento del caudal y la señal evidenciando una rápida transferencia de masa
entre el analito y los MWCNT-COOH lo que asegura una retención eficiente del
analito. Esto es una gran ventaja a resaltar en este tipo de estudios porque hace
posible obtener elevados factores de enriquecimiento durante el procesamiento

de muestras. El caudal optimizado en 1,7 ml min-1 es suficiente para obtener un
consumo de muestra razonable. Asimismo, no fue necesario trabajar con
caudales inferiores ya que no se observó una sobrepresión en el sistema.
La influencia del caudal de elución se estudió entre 6,5 ml min-1 y 10 ml

min-1 que son los rangos admisibles por el equipo de CV AAS. En el rango
estudiado no se encontraron diferencias significativas en el proceso de

desorción y detección, por lo tanto el caudal se utilizó en 10 ml min-1.
Figura 8. Influencia del caudal de carga en la señal de Hg(II).
142
naturales
Para calcular el volumen en el que se eluye el Hg(II) retenido se midió el

tiempo en el que se observa la señal y se utilizó el caudal de elución optimizado
para calcular el volumen. La experiencia se realizó cinco veces dando como

resultado que el Hg(II) se eluye en 1,7 ml.
4.6.6. Capacidad de retención de la microcolumna
Para realizar este estudio se diseñó una experiencia dinámica. Se utilizó

una solución de 100 µg l-1 de Hg(II) y se registró la señal en forma continua. Se
utilizó una microcolumna de 35 mm de largo y 3 mm de d.i. que permitió

utilizar una mayor cantidad de sorbente. Para rellenarla se utilizaron 10 mg de
MWCNT-COOH y 60 mg de Epolene®. Al hacer pasar la solución de carga con el

analito debería ocurrir que al alcanzar la máxima capacidad de retención la
microcolumna no retenga más Hg y entonces la señal alcanzaría un valor

constante e igual a la señal que se obtendría si no estuviese la columna en el
sistema. Al procesar un elevado volumen de muestra, de 250 ml (más de 2

horas) sin conseguir saturar la microcolumna se detuvo el experimento.
Volúmenes o tiempos mayores no tienen sentido práctico.

Entonces, se incrementó la concentración de la solución de carga a 800
µg l-1 de Hg(II) y luego de 40 minutos se detuvo la experiencia obteniéndose el

14% de la señal que debería obtenerse para alcanzar la saturación.
Estos resultados son el reflejo de la gran capacidad que tienen los

MWCNT-COOH para retener Hg(II).
Para poder calcular la capacidad de retención de Hg(II) por gramo de

MWCNT-COOH se decidió utilizar una solución de 3000 µg l-1 de Hg(II) y un
volumen de 20 ml. También se redujo la dimensión de la microcolumna para

utilizar una menor cantidad de MWCNT-COOH (25 mm totales, 10 mm de largo
útil, y 2,25 mm de d.i.). La columna se rellenó con 2,1 mg de MWCNT-COOH y
143
naturales
20,7 mg de Epolene®. En la Figura 9 se presenta el resultado del experimento
que permitió calcular la capacidad de retención y obtener un valor de 3,2 mg de

Hg(II) retenido por gramo de MWCNT-COOH. Sin embargo, considerando el
valor máximo de absorbancia alcanzado y comparándolo con el valor de

absorbancia de una muestra de 3000 µg l-1 de Hg(II) que se midió sin el sistema
de preconcentración, el porcentaje de saturación de la columna es del 90%.
Figura 9. Curva de experimento de capacidad de retención dinámica para

obtener la capacidad de retención de Hg(II) de los MWCNT-COOH.
4.7. Capacidad de re-utilización de la microcolumna
Como se mencionó en 4.4. Procedimiento general, se estudió la

estabilidad y regeneración de la microcolumna. Se encontró que para poder re-
utilizar la columna es necesario regenerarla con 0,5 ml de HCl 15% (v/v) y luego
2 ml de DDW. Con este tratamiento la columna se mantuvo estable y sin
detrimento de la señal de Hg(II). Durante este estudio la columna se utilizó en
144
naturales
más de 450 ciclos de preconcentración / elución sin evidenciar signos de
deterioro en su capacidad.
La determinación de Hg puede verse afectada por la presencia de

metales de transición y elementos capaces de formar hidruros. Por este motivo
se evaluó la potencial interferencia de distintas especies metálicas. Se estudió el

efecto de iones como el Cd, Cu, Fe, Mn, Mo, Ni y Zn en la generación del vapor
de Hg ya que estos elementos compiten con el analito durante la reducción y

catalizan la descomposición del NaBH4. También se evaluaron como posibles
interferentes a aquellos capaces de formar hidruros volátiles (Grupos 14, 15 y

16).
Los estudios de interferencias se realizaron en las condiciones

optimizadas. Las variaciones superiores al ±5% en la señal de Hg debido a la
presencia de otros iones se consideraron como interferencia. Las muestras

analizadas contienen 5 µg l-1 de Hg(II) y los resultados informados son el
promedio de tres mediciones. Los resultados se presentan en la Tabla 3. Se

observaron efectos de aumento de señal en presencia de Bi y Mn mientras que
la presencia de As, Al, Fe, Mo y Sb mostraron una disminución de la señal de Hg

(<11,5 en todos los casos).
145
naturales
Elemento Concentración de % variación
interferente (mg l-1)
Al (III) 10 -11,0
As (III) 5 -10,4
Bi (III) 5 11
Cd (II) 5 0
Cu (II) 10 0
Fe (III) 10 -11
Mn (II) 10 9,7
Mo (VI) 5 -11,1
Ni (II) 5 0
Pb (II) 5 0
Sb (III) 10 -10,2
Se (IV) 10 0
Sn (II) 10 0
Zn (II) 10 0
Tabla 3. Interferencias de metales pesados y elementos formadores de hidruros
en la determinación de Hg(II).
6. Desempeño analítico
Se estudió la repetibilidad, entendida como la desviación relativa

estándar de 10 muestras utilizando el método de preconcentración/detección
con los parámetros optimizados hallándose un valor de 1,6% (RSD). Al realizarse

10 mediciones independiente de un blanco (criterio 3 veces el
valor del desvío estándar) se obtuvo un límite de detección (LOD) de 0,29 µg l-1.
El límite de cuantificación (LOQ) obtenido es de 0,97 µg l-1. Estos valores se
obtienen teniendo en cuenta la pendiente de la recta de calibración del sistema

con preconcentración para un volumen de muestra de 2 ml. El factor de
preconcentración se obtuvo de la relación entre las pendientes de las curvas de
146
naturales
calibración sin y con preconcentración. Para un volumen tan bajo como 2 ml de
muestra se obtuvo un factor de preconcentración de 4. El factor de

enriquecimiento (FE), entendido como la relación entre el volumen de muestra
retenido cuantitativamente y el volumen de elución es 30 [Arpadjan, S. y col.

1997]. Este valor es estimativo y se obtuvo de un video donde se registró la
experiencia dinámica de saturación de columna con una solución de 400 µg l-1.
Luego de cargar 52 ml de muestra no se detectó pérdida en la columna y se

tomó ese valor como volumen máximo.
El límite de detección que es posible alcanzar con esta metodología está

íntimamente relacionado con el volumen de muestra y su concentración. Al
atravesar la columna un mayor volumen de una dada concentración de Hg, la

masa de analito retenida por la columna es mayor obteniéndose un aumento de
señal. Si se construyese una curva de calibración con este nuevo volumen, la

pendiente obtenida sería mayor. Para verificar esto, se calculó el LOD de la
misma forma pero utilizando un volumen de muestra de 4 ml y se obtuvo un

LOD de 0,18 µg l-1. Es por ello que es posible disminuir el LOD haciendo pasar
un mayor volumen de muestra. Para estimar el volumen máximo se utilizó el

experimento dinámico que se realizó con la solución de 400 µg l-1, se analizó el
video y se obtuvo el volumen para el cual la lectura de la señal es menor al 5%

de la señal que se obtendría si la columna no estuviese, considerándose que
hasta esa masa de analito la retención es cuantitativa. La muestra con un

volumen de 52 ml fue retenida cuantitativamente. La experiencia se detuvo en
ese punto por lo tanto es posible incrementar ese volumen a ese nivel de
concentración y si se utilizara una solución con una concentración menor el
volumen sería muchísimo mayor.

La linealidad se estudió entre valores cercanos al LOD y 25 µg l-1
obteniéndose un coeficiente de correlación de R2= 0,998 utilizando 2 ml de

muestra.
147
naturales
La cantidad de muestras que pueden procesarse depende esencialmente
del volumen de muestra en la cual se quiera determinar al analito. El tiempo

necesario para preconcentrar 2 ml de muestra a 1,7 ml min-1, utilizando un
caudal de elución de 10 ml min-1 considerando el tiempo de adquisición/lectura

de muestra y acondicionamiento es de aproximadamente 3 min, por
consiguiente es posible procesar 20 muestras por hora.
El material de referencia disponible en el Laboratorio, SLRS-5 (Material de

referencia para agua de río, NRCC, Otawa, Canadá) no reporta valores
certificados para Hg. Por este motivo y para poder evaluar el método se
hicieron estudios de recuperación. Para estos estudios se realizaron adiciones
estándar de distintas concentraciones de Hg(II) a diferentes muestras reales de

agua y se procesaron con la metodología optimizada. Se realizaron agregados
de 500 µl de distintas concentraciones de Hg(II) a 2 ml de muestra y se

preconcentraron en línea con el método desarrollado. Se registraron las
concentraciones recuperadas en función de las concentraciones agregadas. En

promedio se obtuvieron recuperaciones en el rango del 96 al 103%. En la Tabla
4 se observan los resultados obtenidos del estudio de recuperación realizado

para diferentes tipos de aguas.
148
naturales
Muestra Cantidad Hg % de
de Hg encontrado Recuperación
agregado
(µg l-1)
Agua CRM-SLRS-5 2,0 1,94±0,03 97
Agua Potable Capilla del Señor

de la canilla 1,5 1,52±0,02 101
Agua Potable Pcia. Córdoba 1,2 1,22±0,02 101
Agua de pozo de Monte Grande 1,0 1,05±0,02 105
Agua de pozo de Castelar 2,0 1,92±0,03 96
Agua de la Antártida (Estación 1,5 1,54±0,03 103

Carlini)
Tabla 4. Estudio de recuperación para los distintos tipos de aguas.
Las muestras de agua recolectadas se analizaron con la metodología de
preconcentración propuesta y desarrollada en 4.4. Procedimiento general

(volumen de muestra 10 ml, LOD 70 ng l-1). En la mayoría de las muestras
analizadas los niveles de Hg(II) se encontraron por debajo del límite de

detección. En cuatro de las muestras analizadas se encontraron niveles de ng l-1
de Hg(II): muestra de agua de mar de Mar del Plata 330±8, muestra de río de la
Pcia. de Bs. As. 85±2, muestra de un efluente municipal de la Pcia. de Bs. As.
342±8 y una muestra de efluente en una zona con actividad minera en la Pcia.
de Córdoba 514±10. La concentración de Hg(II) en estas muestras fue obtenida

mediante la técnica de adición estándar con tres replicados.
149
naturales
8. Conclusiones
Los resultados obtenidos permiten utilizar adecuadamente los MWCNT-

COOH como relleno de microcolumnas en sistemas de preconcentración en
línea en combinación con la técnica de CV AAS para la determinación de Hg(II)

en aguas en niveles de ng l-1. La etapa de preconcentración es crucial para la
determinación de Hg(II) en aguas naturales debido a su presencia en niveles

extremadamente bajos y los MWCNT-COOH demostraron ser sorbentes muy
eficientes. La etapa de preconcentración desarrollada permite el análisis por CV

AAS que es un equipamiento disponible en laboratorios de mediana
complejidad.
La mezcla de MWCNT-COOH con la cera de polietileno de bajo peso
molecular resultó ser una alternativa sencilla y eficiente, sin necesidad de

recurrir a procesos de inmovilización de los nanotubos, evitando la
aglomeración de los mismos con la consecuente sobrepresión en el sistema en

línea. Asimismo, la microcolumna presentó excelente estabilidad química y
eficiente retención sin apreciar pérdidas de Hg(II) en el sistema para un volumen

de 52 ml de muestra (solución de 400 µg l-1) y un buen desempeño durante al
menos 450 ciclos de preconcentración/elución.
La metodología desarrollada es medianamente rápida, simple y lo
suficientemente sensible como para ser considerada una alternativa de menor

costo frente a técnicas como ICP MS para el análisis de aguas con matrices
complejas como agua de mar o efluentes.
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280 285.
155
Capítulo 6
MWCNT-pro para un analito poco
estudiado como el Bismuto
En este capítulo se evalúa la capacidad de los nanotubos de carbono

funcionalizados con L-prolina para la retención y preconcentración de Bi(III) y
posterior determinación en diferentes tipos de aguas a niveles de ng l-1,

aportando información sobre este analito poco conocido.
Capítulo 6 MWCNT-pro para un analito poco estudiado como el Bismuto
Abreviaturas
AFS Atomic fluorescence spectrometry (Espectrometría de

fluorescencia atómica)
ANOVA Análisis de la varianza

ASV Adsorptive stripping voltammetry (Voltamperometría de
redisolución anódica de adsorción)

ET-AAS Electrothermal atomic absorption spectrometry

(Espectrometría de absorción atómica electrotérmica)
HG Hydride generation (Generación de hidruros)
FAAS Flame atomic absorption spectrometry (Espectrometría de

FE Factor de enriquecimiento
FIAS Flow injection analysis system (Sistema de inyección en

línea)
FI HG AAS Flow injection-hydride generation-atomic absorption

spectrometry (Espectrometría de absorción atómica con
generación de hidruros en línea)
GF AAS Graphite furnace atomic absorption spectrometry
(Espectrometría de absorción atómica con horno de grafito)

ICP Inductively coupled plasma (Fuente de plasma acoplada
inductivamente)
(Espectrometría de masas con fuente de plasma acoplado

inductivamente)
157
ICP OES Inductively coupled plasma optical emission spectrometry


pared múltiple)

con L-prolina
NaBH4 Borohidruro de sodio
PET Polietilentereftalato
PTFE Politetrafluoroetileno

158
1. Introducción
En el capítulo anterior se presentaron los resultados obtenidos para la

dupla MWCNT-COOH / Hg(II). En este capítulo se retoma el objetivo de emplear
sustratos más específicos. Basándonos en los resultados obtenidos en el

Capítulo 4, en el que se había utilizado MWCNT-pro como sustrato y al Cu(II)
como analito modelo para poner a punto la metodología analítica.

Para determinar las capacidades de los MWCNT-pro como sustrato en
sistemas SPE se diseñó un experimento con distintos metales y metaloides y se

estudió su interacción con los MWCNT-pro encontrándose que retienen al Bi(III)
de forma selectiva. Es por ello que se desarrolló la metodología para la
preconcentración y subsecuente determinación de Bi(III) en línea generando
Esta denominación se debe a los pocos estudios que se han realizado sobre
este elemento, en comparación con otros metales/metaloides, a pesar de su

importancia.
El Bi es un elemento que se encuentra naturalmente en la corteza

terrestre a bajos niveles, hay bibliografía que reporta una concentración de 127
ng g-1 de Bi en la corteza terrestre superior [Taylor, S. R. 1964]. El Bi puede
existir en cuatro estados de oxidación (-III, 0, III, V). Entre ellos el Bi(V) es un
poderoso oxidante en solución acuosa, por lo cual se encuentra en muestras

ambientales y biológicas en el estado de oxidación trivalente. Esto marca una
diferencia con otros elementos del Grupo 15 como el As y el Sb donde el estado

pentavalente es el más abundante. La estabilidad del estado de valencia III
encuentra su explicación en el par inerte que estabiliza los electrones que se

encuentran en el nivel s y es por ello que encontramos al Bi como Bi(III) en
muestras de origen ambiental, biológicas y geológicas [Filella, M. 2010]. De

acuerdo al artículo de la Dra. Montserrat Filella, si bien el Bi es relativamente no-
tóxico para el ser humano en comparación con otros metales y metaloides de la

159
tabla periódica (como el Hg, Sn, Pb, etc.), el Bi es tóxico para algunos
procariotas. Y si bien no se conoce ningún rol biológico del Bi, sus compuestos
han sido utilizados por más de 200 años para tratar dolencias debido a
infecciones bacterianas [Filella, M. 2010]. Otros autores, sin embargo, reportan
que el uso de este metaloide se encuentra en expansión a pesar de conocerse

su potencial toxicidad para seres humanos, animales y plantas [Fayazi, M. y col.
2011].
Más allá de esta controversia sobre el potencial tóxico del Bi, es conocido
su uso solo, y en sus compuestos derivados, en varias industrias y productos

farmacéuticos no existiendo mucha información sobre su concentración en
diferentes matrices y siendo necesario realizar aportes para obtener información
que ayude a entender su comportamiento ecotoxicológico y su transporte en
general y en cursos de aguas en particular. Esta falta de información se

encuentra atribuida por Fillela a: i) la baja concentración en la que se encuentra
el Bi en sistemas medioambientales, muchas veces justificado por la

insolubilidad de algunos de sus compuestos y, ii) la baja toxicidad reportada
para los seres humanos.

Los niveles esperables de Bi(III) en aguas naturales y matrices de interés
ambiental se encuentran en el orden de ng l-1. Al igual que para otros
elementos, el análisis directo de estos niveles de concentración es dificultoso,
existiendo muy pocas técnicas analíticas disponibles para su determinación a

nivel de ultratrazas. Para superar esta dificultad se propone en este trabajo de
Tesis doctoral una metodología que incorpora la etapa de preconcentración.

Se estudian los nanotubos de carbono de pared múltiple, funcionalizados
con L-prolina, como sustrato para la preconcentración y posterior determinación

cuantitativa de Bi(III), utilizando un sistema de preconcentración en línea con
generación de hidruros acoplado a un espectrómetro de absorción atómica (FI

HG AAS). También se incorporan herramientas estadísticas para realizar la
160
optimización de variables mediante el uso del diseño factorial. Las condiciones

optimizadas se utilizan para determinar la concentración de Bi(III) en diferentes
tipos de aguas.
2. Elección del Bi
Por lo expuesto y por la gran capacidad de los MWCNT solos y/o
funcionalizados para retener metales y metaloides, como se ha demostrado en

capítulos anteriores, se eligió al Bi para hacer un aporte al estudio de este
elemento, tan poco estudiado y con tan poca información sobre sus niveles en
aguas naturales. Se diseñó una experiencia donde se analizó la concentración
de la solución a la salida de la columna (residuo) y se comparó con la

concentración inicial. Esta diferencia es el porcentaje retenido por la columna.
Se analizaron soluciones conteniendo iones de Al, Gd, Sc, Tl, Te, Bi y Dy a pH 5 y

pH 8 por ICP MS. En la Figura 1 se presentan los resultados obtenidos. Se
observa que a pHs cercanos a 8 el porcentaje de retención aumenta para todas

las especies. Asimismo, el Bi es la especie que mostró mayor porcentaje de
retención, más del 95% tanto a pH 5 como a pH 8.
161
Figura 1. Porcentaje de retención de distintas especies.
3. Técnicas para la determinación de Bi
Para la determinación de Bi puede utilizarse la fuente de plasma acoplada

inductivamente (ICP), tanto con espectrometría de emisión óptica (ICP OES),
como de masas (ICP MS), también pueden utilizarse las espectrometrías
atómicas con atomización electrotérmica (ET AAS), de llama (FAAS) o con
generación de hidruros (HG AAS) [Marrero, J. y col. 1999; Zhang, N. y col. 2011].
También es posible utilizar técnicas electroanalíticas como la
voltamperometría de redisolución anódica de adsorción (ASV) [Koper, A. y col.

2014] y la voltamperometría de redisolución [Fathirad, F. y col. 2013]. Utilizando
estas técnicas, las publicaciones consultadas reportan límites de detección (LOD)

de 20 µg l-1. Calvo Fornieles y col. han reportado un método analítico utilizando
una minicolumna rellena con sílica gel modificada con 1,5-bis(di-2-piridil)

metilen tiocarbonohidracida para obtener información sobre la concentración
162
de Sb, Bi y Sn en muestras de agua de mar utilizando dicho sistema y realizando

la detección por ICP MS con HG [Calvo Fornieles, A. 2013]. Estos autores
reportaron un LOD de 2,0 ng l-1. La espectrometría de fluorescencia atómica

(AFS) también puede ser utilizada para la determinación de Bi alcanzándose
LOD de 0,2 µg l-1 [Zhang, N. y col. 2011].

En relación con la metodología de preconcentración, existen en la
bibliografía estudios donde se utilizan cartuchos de sílica modificados con

Cyanex 301 para preconcentrar y espectrometría de absorción atómica con
horno de grafito para la determinación de Bi (GF AAS) [Yamini, Y. y col. 2002];

también, han sido utilizadas la resina quelante Lewatit TP-207 y la
espectrometría de absorción con
de Pourreza, N. y col. emplean nanotubos de carbono modificados con un
agente quelante para la retención selectiva de Bi(III) seguido de la cuantificación

con FAAS obteniéndose un LOD de 2,3 µg l-1[Pourreza, N. 2012].

utilizados.
163

Instrumento
Agua destilada y Barnstead Obtenida por sistema mixto

desionizada (DDW) de intercambio iónico
Bomba Peristáltica Gilson De alto caudal, multicanal,
Minipuls®3 con mangueras resistentes a
los productos químicos
Epolene® Eastman Chemical Cera de polietileno de bajo
Products, Inc peso molecular
Espectrómetro de PerkinElmer AAnalyst 200, con celda de
Absorción Atómica cuarzo, manta de
calentamiento eléctrica
Filtros de jeringa de Waters Corp. 0,45 µm tamaño de poro
PDVF
HCl Merck Para análisis 37%
Lámpara de Bi de PerkinElmer Proporciona mejor
descarga sin electrodos sensibilidad y más bajos
(EDL) límites de detección para
elementos volátiles
MES AppliChem Ácido 2-
morfolinoetanosulfónico
Na2HPO4.12H2O Carlo Erba
NaH2PO4.H2O Carlo Erba
Ftalato de potasio Sigma-Aldrich
monobásico
Sistema de Análisis por PerkinElmer FIAS 100
Inyección en Línea
Solución de Bi(III) 1000 Merck Solución comercial estándar
mg l-1
Solución NaBH4 0,4 % Merck Estabilizada en NaOH 0,2 %
(m/v) (m/v), filtrada con papel Nº 42
Whatman
TRIS AppliChem tris(hidroximetil)aminometano
Tabla 1. Materiales, reactivos e instrumentos.
164
5.1. Materiales y métodos
Se utilizó un espectrómetro PerkinElmer AAnalyst 200 con celda de
cuarzo y manta de calentamiento eléctrica. Se utilizó el sistema de inyección de

flujo en línea (PerkinElmer FIAS 100) acoplado al espectrómetro. El separador
gas-líquido de tipo modular está fabricado en un plástico con alta resistencia
química y una membrana de PTFE intercambiable. Para complementar el

sistema FIAS se usó una bomba peristáltica adicional, Minipuls 3 de Gilson. Las
conexiones entre los distintos componentes se realizaron con tubos de Teflón ®

de 1,0 mm (d.i.). La muestra y los diferentes reactivos utilizados se transportaron
a través de mangueras de Tygon® con diámetros internos de 1,52 mm para los

reactivos y eluyente, y de 1,14 mm para el reductor y la muestra.
Se utilizó una lámpara de descarga sin electrodos (PerkinElmer) con una

corriente de 370 mA y a una longitud de onda de 223,1 nm, paso de banda
espectral de 1,8 nm.

Todo el material empleado para contener soluciones, tanto de vidrio
como de plástico, se lavó con DDW, se dejó en remojo con HNO3 10% v/v
durante 24 h y finalmente se enjuagó varias veces con DDW. Todas las muestras
y estándares se conservaron en botellas de polietileno (50 ml) o tubos Falcon® a


Regulations, 1984].
Se utilizaron soluciones comerciales estándar de Bi de 1000 mg l-1

(Merck) para hacer con ellas todas las diluciones necesarias. Las diluciones se
prepararon diariamente. Los reactivos utilizados son de calidad analítica, la

solución de NaBH4 se preparó diariamente por disolución en DDW y se
165
estabilizó con NaOH 0,2% (m/v). Luego de disolución completa se filtró con
papel Whatman Nº 42 para eliminar turbidez.
Los MWCNT-pro empleados fueron sintetizados como se describe en el

Capítulo 3.
5.2. Condiciones de operación
En la Tabla 2 se presentan las condiciones de operación del equipo de FI

HG AAS.
Parámetros instrumentales
Temperatura de celda 940 ºC

Señal registrada área de pico
Generación de hidruros
Concentración de NaBH4 0,4 % (m/v); NaOH 0,2 % (m/v)

Caudal de NaBH4 4,4 ml min-1
Caudal de HCl 8,8 ml min-1
Concentración de HCl 10 % (v/v)
Caudal de N2 30 ml min-1
5.3. Preparación de la microcolumna
Para armar las microcolumnas que se utilizan en este capítulo se tuvo en

cuenta el estudio de optimización presentado en el capítulo 5 sobre su diseño y
relleno y se usaron como sustrato los MWCNT-pro obtenidos del proceso de

funcionalización desarrollado en el capítulo 3.
Se evaluaron distintas medidas de columnas utilizando como relleno la

mezcla formada por la cera de polietileno de bajo peso molecular, Epolene®, y
los MWCNT-pro en una relación 10:1, respectivamente. Los mejores resultados

se obtuvieron al utilizar microcolumnas de 25 mm de longitud, 2,3 mm de
166
diámetro interno y 10 mm de longitud útil, rellenas con una mezcla de ~3 mg

de MWCNT-pro y 30 mg de Epolene®. El volumen nominal de la microcolumna
fue de ~42 µl, y se rellenó empleando el método de empaquetamiento en seco.

Para verificar que el Epolene® participaba en el proceso de sorción, se
rellenó una microcolumna con 30 mg de polietileno y se colocó en el sistema

FIAS. Se realizó un ciclo de preconcentración y se eluyó, verificando que el
Epolene® no retiene Bi(III).
La forma de procesamiento de las muestras es similar a la desarrollada en

el Capítulo 5. En todos los casos, las soluciones de carga se ajustaron a los pHs
seleccionados y se hicieron pasar a través de la microcolumna utilizando la
bomba peristáltica externa. El diseño experimental utilizado para la carga y la

elución de la muestra se encuentra esquematizado en la Figura 2. Se comienza
acondicionando la microcolumna con una solución de igual pH que la solución

que contiene al analito, luego se realiza la carga de 5 ml de muestra
conteniendo al Bi(III) utilizando en ambos casos la bomba 1. Este proceso se

realiza colocando la válvula del FIAS en la posición de carga. Para el proceso de
elución se coloca la válvula del FIAS en posición de elución y se utiliza la bomba
2 para impulsar el eluyente y el reductor. La elución se realiza en sentido
opuesto al sentido de carga, empleando HCl y un caudal optimizado de 8,8 ml

min-1. Seguidamente el analito se introduce en el equipo (HG AAS). Para
finalizar, la microcolumna se regenera haciendo pasar i) 1 ml de una solución de

HCl 10% v/v ii) 2,5 ml de DDW y se vuelve a utilizar iniciándose un nuevo ciclo.
El esquema de lavado del sistema y la regeneración de la columna propuesto es

el resultado de sucesivos ensayos que permitieron encontrar los volúmenes
mínimos para los cuales se obtenía la limpieza completa del sistema.
167
Figura 2. Diseño experimental utilizado.
5.5. Características y tratamiento de las muestras a analizar
Las muestras de agua que se analizan fueron recolectadas de diversos

lugares de la República Argentina. Tal como se hizo en el capítulo 5 para el
estudio de Hg se analizaron aguas de distintos orígenes y niveles de potencial

contaminación: agua corriente domiciliaria, agua de río, agua de mar, aguas en
cercanías con actividades mineras y efluentes de plantas de tratamiento.

Además, se incluyó para su análisis agua recolectada en la Antártida. Esta
muestra de agua fue obtenida en la Estación Carlini (ex. Jubany), en la isla 25 de
Al igual que en el capítulo anterior se utilizaron envases de

polietilentereftalato (PET) y Teflón® para la toma y almacenamiento de
muestras. Las muestras de agua colectadas se colocaron en botellas de PET,

previamente tratadas con HNO3 10% (v/v) y filtradas con filtros de jeringa de
PVDF de 0,45 µm de tamaño de poro. Las muestras de agua de la Antártida se

almacenaron en tubos de Teflón ®. Luego de la recolección, las muestras se
conservaron apropiadamente en el laboratorio hasta el momento de su análisis.

El pH se ajustó antes de comenzar cada ciclo de preconcentración.
168
5.6.1. Estrategia de optimización
5.6.1.1. Caudal de carga y elución
Estos parámetros pueden ser variados en un rango acotado debido a las

características del equipo utilizado, es por ello que estas variables se
optimizaron en forma individual. El caudal de carga se evaluó entre 2,3 y 4,1 ml

min-1 y el caudal de elución entre 7 y 10,5 ml min-1, Figuras 3 y 4,
respectivamente.
Figura 3. Influencia del caudal de carga en la señal de Bi(III).
169
Figura 4. Influencia del caudal de elución en la señal de Bi(III).
Los resultados obtenidos muestran una respuesta similar en ambos

casos, es decir, gráficamente no se observan diferencias. Para respaldar las
observaciones gráficas, se utilizó el análisis de la varianza (ANOVA), con esta

herramienta estadística es posible comparar varios grupos en una variable
cuantitativa. Con el valor obtenido del estadístico (p-valor) podremos decir con
presentan diferencias entre sí o no. En ambos casos el test de ANOVA arrojó

que no hay diferencia estadística significativa entre los resultados obtenidos. Se
utilizó el estadístico p-valor obteniéndose un valor de 0,704 para el análisis del

caudal de carga y un p-valor de 0,082 para el caudal de elución. El criterio
utilizado es de p-valor<0,05 para significancia estadística. Se seleccionaron para

continuar con las optimizaciones como caudal de carga 3,2 ml min-1 y como
caudal de elución 8,8 ml min-1.
170
5.6.1.2. Diseño Factorial
Se utilizó un diseño factorial de dos factores y cuatro niveles. Se
estudiaron como factores, i) la concentración del eluyente y ii) el pH de la

muestra. En la Tabla 3 se presentan los factores y los niveles estudiados, la
elección del rango se debe a la experiencia adquirida con los analitos ya

estudiados. Como respuesta se utilizó el área de pico. Todos los experimentos
se realizaron por triplicado y en forma aleatoria para minimizar el efecto de

posibles interferencias.
Factor Mínimo (-) Máximo (+)
Concentración del ácido (% v/v) 10 20

pH 3 9
Tabla 3. Factores y niveles del diseño factorial.
Los resultados obtenidos se analizaron mediante el análisis de la varianza,
utilizando como criterio el p-valor, para conocer la significancia estadística y la

influencia de estos factores en la cuantificación del Bi(III).
Para calcular el volumen en el que se eluye el Bi(III) retenido se midió el

tiempo en el que se obtiene la señal de Bi(III) y se utilizó el caudal de elución
para calcular el volumen. La experiencia se realizó varias veces dando como

resultado que el Bi(III) se eluye cuantitativamente en 1 ml.
5.6.3. Capacidad de retención de la microcolumna
Para realizar este estudio se diseñó una experiencia dinámica. Para lograr
saturar la columna en un tiempo razonable, se utilizó una solución de 100 µg l-1

de Bi(III) y se registró la señal en forma continua. Al pasar la solución de carga
con el analito debería ocurrir que al alcanzar la máxima capacidad de retención

la microcolumna no retendría más Bi y la señal alcanzaría un valor constante e
171
igual a la señal que se obtendría si no estuviese la microcolumna en el sistema.

En la Figura 5 se presenta el resultado del experimento que permitió calcular la
capacidad de retención y obtener un valor de 0,1 mg de Bi(III) retenido por

gramo de MWCNT-pro. Esta estimación se realiza teniendo en cuenta el área
bajo la curva (expresada en mg) y dividiéndola por la masa de MWCNT-pro que

se encuentra en la columna. Para realizar esta experiencia se grabó un video del
experimento ya que el software del equipo no tiene la versatilidad para registrar

una señal en forma continua. Se analizó la señal de Bi(III) durante 10 minutos lo
que corresponde, según el caudal de carga (verificado para la experiencia en

3,16 ml min-1), a un volumen total de 31,6 ml. La experiencia se finalizó ya que
se había alcanzado un valor constante que se incrementaba muy lentamente.
Sin embargo, considerando el valor máximo de absorbancia alcanzado y
comparándolo con el valor de absorbancia de una muestra de 100 µg l-1 de

Bi(III) que se midió sin el sistema de preconcentración, el porcentaje de
saturación de la columna resultó ser del 93%.
Figura 5. Curva del experimento de capacidad de retención dinámica para
obtener la capacidad de retención de Bi(III) de los MWCNT-pro.
172
En relación a la estabilidad de la columna, fue posible su utilización en

más de 690 ciclos de preconcentración/elución y con un volumen máximo de
muestra (de una sola vez) de 250 ml sin mostrar deterioro en su capacidad de
adsorción ni compactación, que se hubiese evidenciado como sobrepresión en
el sistema.
5.6.4. Efecto del pH de carga y concentración del eluyente
En la Figura 6 se observan los resultados obtenidos de las experiencias
realizadas. Se graficó el área de la señal de Bi(III) en función de la concentración

de eluyente (HCl) y del pH de carga de la muestra. Con los resultados obtenidos
se realizó el cálculo de la superficie de respuesta que se observa como un
gráfico continuo.
Figura 6. Superficie de respuesta: señal de Bi(III) en función de la concentración

del HCl y el pH de carga.
173
La observación de la superficie de respuesta nos muestra que la

concentración del ácido no tiene influencia en la señal de Bi(III), esto pudo ser
demostrado mediante el cálculo de ANOVA (p-valor=0,571). Asimismo,

podemos observar la influencia clara del pH de carga en el sistema; esto
también se verifica con el cálculo de ANOVA (p-valor<0,001). El análisis de la

interacción (pH vs concentración de ácido) resultó estadísticamente no
significativa (p-valor=0,509).
El pH de carga optimizado se ajustó en 7 y la concentración del ácido
eluyente se utilizó en 10% v/v, mínimo evaluado para evitar el deterioro de la

columna, siendo además el recomendado por el método del equipo para
generar el hidruro de Bi. Como verificación, se estudiaron concentraciones
menores al 10% v/v pero se encontró que no lograban eluír completamente al
analito.
Si bien el HCl es el ácido recomendado por el fabricante del equipo para
la determinación de Bi, con la finalidad de estudiar el desempeño de otros

eluyentes, se probaron otros ácidos como tartárico y HNO 3. Luego de varias
pruebas se encontró que el ácido tartárico 0,5 mol l-1 no eluye al Bi(III), y se
descartó.
Por otro lado, se verificó previamente como afectaba la concentración de
HNO3 en la elución y se encontró que el porcentaje de elución aumentaba hasta
una concentración de 10% v/v para luego permanecer constante (Figura 7)

(similar comportamiento presenta el HCl a concentraciones menores a 10% v/v).
174
Figura 7. Efecto de la concentración de HNO 3 en la señal de Bi(III).
Al igual que para el eluyente HCl, del análisis de resultados se desprende

que el sistema no se ve afectado significativamente por la concentración del
ácido pero si por el pH de carga de la muestra y es por ello que se estudió la

señal de Bi en función del pH de carga eluyendo con HCl y HNO3, ambos 10%
v/v. En la Figura 8 se presentan los resultados obtenidos. La tendencia es similar

para los dos ácidos y se verificó el mejor desempeño del HCl como eluyente.
Figura 8. Señal de Bi en función del eluyente (HCl y HNO3).

175
Con la finalidad de realizar un mejor ajuste del pH se analizó el

comportamiento de la señal de Bi(III) cuando se utilizan distintos buffer con
capacidad reguladora en el rango optimizado (7). Utilizando estos buffers, se

estudió su capacidad de regular el efecto producido por la presencia de los
iones probados como interferentes. Esta alternativa surgió luego de que se

realizara la medición de interferencias utilizando como medio de carga DDW a
pH 7 (ajustado con NaOH) y se observara una severa disminución de la señal de

Bi(III). Se probaron cuatro soluciones buffers: MES (regula en el rango de pH:
5,2-7,2), TRIS (regula en el rango de pH: 7,0-9,0), fosfato de sodio (regula en el
rango de pH: 6,2-8,2) y ftalato de potasio (regula en el rango de pH: 4,4-6,4) a
concentración de 0,01 mol l-1. Para realizar un ajuste fino del pH para cada
buffer, se estudió la señal de Bi(III) en el intervalo de una unidad de pH
alrededor del pKa para cada uno, Figura 9.
Figura 9. Señal de Bi(III) en función del pH del buffer.
176
Se estudiaron las potenciales interferencias de Cd, Cu, Fe, Mn, Mo, Ni y

Zn en la generación de la bismutina, ya que estos metales compiten con el
analito por la reducción y catalizan la descomposición del NaBH4. También se

estudiaron las potenciales interferencias de los elementos que forman hidruros
volátiles de los grupos 14, 15 y 16.

En la Tabla 4 se presentan los resultados obtenidos del estudio de
interferencias. Los interferentes se evaluaron a dos niveles de concentración: 10

y 100 µg l-1 con respecto a una solución de 5 µg l-1 de Bi(III). Se consideró
interferencia la variación de un ±5% en la señal de Bi(III). Todas las mediciones

se realizaron por triplicado. Al analizar los resultados se observó que el buffer
ftalato 0,01 mol l-1 disminuía el efecto de los interferentes en la señal de Bi(III).
Esto promovió la repetición del estudio con una concentración del buffer un
orden de magnitud mayor (0,1 mol l-1). En estas condiciones se logró reducir
significativamente la influencia de los interferentes en la señal de Bi(III).
177
Fosfato de MES TRIS Ftalato de Ftalato de

Interferente sodio Potasio Potasio
-1
[µg l ] 0,01 0,01 0,01 0,01 0,1
mol l-1 mol l-1 mol l-1 mol l -1
mol l-1
As 10 0 -44,3 0 18,3 8,9
As 100 0 -34,0 0 17,4 10,0
Cd 10 -6,8 -33,2 -22,1 0 -6,7
Cd 100 -15,3 -20,2 -12,6 0 -7,7
Co 10 -18,2 -44,6 -29,0 0 0
Co 100 -12,6 -36,2 -20,2 -9,6 0
Cr 10 -53,9 -66,4 -27,4 -44,5 0
Cr 100 -56,1 -54,1 -13,1 -22,6 0
Cu 10 -20,1 -34,9 -19,1 -11,0 0
Cu 100 -34,6 -31,1 -18,7 -36,1 0
Fe 10 -66,4 -32,1 -31,7 -22,1 0
Fe 100 -69,2 -28,7 -52,6 -24,4 0
Ge 10 -18,2 -11,2 -28,7 -11,4 -7,0
Ge 100 -14,0 -6,8 -35,5 -7,9 -6,1
Hg 10 -25,1 -44,1 0 -8,2 0
Hg 100 -17,3 -31,9 0 -15,4 0
Mn 10 -13,4 -43,2 -19,9 -10,1 0
Mn 100 -11,6 -30,3 -17,7 -9,1 0
Ni 10 -7,9 -44,1 -14,0 -9,7 0
Ni 100 -14,9 -38,1 -10,0 -18,3 0
Pb 10 -20,6 -32,3 -11,6 -9,9 -9,4
Pb 100 -39,1 -22,2 -8,1 -11,3 -8,2
Sb 10 0 -12,7 -9,0 0 0
Sb 100 -11,6 -33,2 -8,9 -6,4 0
Se 10 -8,0 -39,6 -18,8 -7,5 0
Se 100 -14,2 -34,4 -14,9 -9,2 0
Sn 10 -9,4 -45,2 -9,0 -8,0 8,5
Sn 100 -15,3 -38,5 -8,9 -23,2 10,9
Te 10 -11,9 -39,1 -11,8 -15,3 -11,9
Te 100 -17,1 -34,4 -10,8 -16,2 -11,0
Zn 10 -27,8 -38,4 0 -17,4 0
Zn 100 -21,5 -29,3 0 -14,6 0
Tabla 4. Interferencias de metales pesados y elementos formadores de hidruros
en la determinación de Bi(III).
178
7. Desempeño analítico
Se estudió la repetibilidad, entendida como la desviación relativa

estándar de 10 muestras utilizando el método de preconcentración/detección
con los parámetros optimizados hallándose un valor de 1,5% (RSD) a un nivel de

Bi de 0,1 µg l-1. Al realizarse 10 mediciones independiente de una solución de
muy baja concentración, 0,10 µg l-1

detección de (LOD) 0,1 µg l-1. El límite de cuantificación (LOQ) obtenido es de
0,36 µg l-1. Estos valores se obtienen teniendo en cuenta la pendiente de la recta

de calibración del sistema con preconcentración para un volumen de muestra
de 5 ml. El factor de preconcentración que se obtuvo de la relación entre las
pendientes de las curvas de calibración sin y con preconcentración para 5 ml de
muestra y resultó ser igual a 5. Con respecto al factor de enriquecimiento (FE),

entendido como la relación entre el máximo volumen de muestra que puede
pasarse por la microcolumna respecto al mínimo volumen en el que puede

eluirse el analito en forma cuantitativa (1 ml) se obtuvo un FE de 250 [Arpadjan,
S. y col. 1997].
El límite de detección que es posible alcanzar con esta metodología está
íntimamente relacionado con el volumen de muestra que es posible pasar por la
microcolumna y su concentración. Al atravesar la microcolumna un mayor
volumen de una dada concentración, la masa de analito retenida por la columna

es mayor obteniéndose un aumento de la señal. Si se construyese una curva de
calibración con este nuevo volumen, la pendiente obtenida sería mayor. Para
verificar esto, se calculó el LOD de la misma forma pero utilizando un volumen
de muestra de 10 ml y se obtuvo un LOD de 0,06 µg l-1. Es por ello que es

posible disminuir el LOD haciendo pasar un mayor volumen de muestra, sin
embargo hay que ponderar el tiempo de análisis que aumenta en función del
caudal de carga. Para estimar el volumen máximo se hicieron experiencias
independientes donde se pasaron por la microcolumna volúmenes cada vez

179
mayores de muestra manteniendo constante la masa de analito en cada una. Se

analizó el residuo de carga y las primeras y segundas eluciones para verificar si
el analito quedaba retenido cuantitativamente en la columna y si era posible

eluirlo en una sola elución. Ese estudio mostró que una muestra de 250 ml y
una concentración final de 0,2 µg l-1 fue retenida por completo y se eluyó en la
primera elución.
La linealidad se estudió entre valores cercanos al LOD y 10 µg l-1

obteniéndose un coeficiente de correlación de R 2= 0,997 utilizando 5 ml de
muestra.
La cantidad de muestras que pueden procesarse depende esencialmente
del volumen de muestra en la cual se quiera determinar al analito. El tiempo
necesario para preconcentrar 5 ml de muestra a 3,2 ml min-1, utilizando un
caudal de elución de 8,8 ml min-1 considerando el tiempo de adquisición/lectura

de muestra y acondicionamiento, es de aproximadamente 3 min, por
consiguiente es posible procesar 20 muestras por hora.

Se aplicó el método desarrollado al material de referencia NIST 1643e
(elementos traza en aguas). Se obtuvieron valores comparables con los

reportados en el certificado, Tabla 5.
Muestra Bi encontrado (µg l-1) Bi certificado (µg l-1)
NIST 1643e 13,77 ± 0,66 14,09 ± 0,15
Tabla 5. Exactitud del método.
Se analizaron muestras de agua de distintos orígenes y se buscó
información en la bibliografía para comparar los resultados obtenidos. Como se

mencionó en la introducción, la información que existe sobre los niveles de
180
Bi(III) en aguas naturales es escasa y la que se encuentra presenta mucha

dispersión. En la Tabla 6 se presentan los resultados obtenidos para las distintas
aguas analizadas.
Muestra [Bi] (ng l-1)
Agua de canilla (Córdoba) < 23

Agua de canilla (Buenos Aires) < 23
Agua de mar (Buenos Aires) < 23
Agua de pozo 1 (Buenos Aires) 23,5 ± 1,1
Agua de pozo 2 (Buenos Aires) 28,2 ± 1,1
Agua de río 1 (Mendoza) 178 ± 8
Agua de río 2 (Mendoza) < 23
Agua termal (Entre Ríos) 38,1 ± 1,9
Agua de la Antártida (Estación Carlini) 166 ± 8
Efluente minero 1 (Córdoba) 25,4 ± 1,2
Efluente minero 2 (Córdoba) < 23
Efluente minero 3 (San Luis) < 23
Efluente minero 4 (San Luis) < 23
Efluente minero 5 (San Luis) 81,0 ± 2,4
Efluente minero 6 (Córdoba) 226 ± 12
Efluente minero 7 (Córdoba) 226 ± 12
Efluente industrial (Buenos Aires) 62,6 ± 3,0
Planta de tratamiento (Buenos Aires) 1580 ± 71
Tabla 6. Concentración de Bi(III) en diferentes aguas (ng l-1) (volumen de
muestra 25 ml).
181
En la muestra de agua de mar no se detectó la presencia de Bi(III)

(volumen de muestra 25 ml, LOD 23 ng l-1). La bibliografía analizada presenta
algunas discrepancias con valores entre 10 y 30 ng l-1 para agua de mar [Filella,
M. 2010]. Para el agua corriente los valores reportados son todavía más difíciles
de homogeneizar y no es posible determinar un rango de concentración

comparable. Las aguas recolectadas en Pcia. de Buenos Aires y Córdoba no
presentaron valores de Bi(III) detectables, pero hay bibliografía donde se

informan valores elevados en agua corriente. Por ejemplo, se han reportado
valores de concentración de Bi(III) de 48 nmol l-1 (equivalente a 16.500 ng l-1)

utilizando electrodos químicamente modificados para preconcentrar seguido de
la determinación y cuantificación mediante voltametría [Dong, K. L. y col. 1991].
Las aguas de río de la Pcia. de Mendoza arrojaron valores desde < al LOD
hasta 178±8 ng l-1 de Bi(III). En relación a la bibliografía consultada,

encontramos valores dispares hallándose concentraciones de hasta 12.000 ng l-1
en aguas recolectadas en Japón [Yoshimura, W. y col. 1995]. Asimismo, y

también en Japón, encontramos reportada una concentración muchísimo menor
en el río Takahashi, 2,08 ng l-1 medidos por ICP MS previo a un proceso de

preconcentración [Oshita, K. y col. 2007].
El agua recolectada en la Antártida arrojó una concentración de Bi(III) de
166±8 ng l-1. Si bien este valor puede parecer un poco elevado en comparación
con aguas de otros orígenes, autores como Boswell y col. reportaron alto
contenido de varios elementos en aguas de la Antártida, medidos con un
método combinado de espectrometría y extracción por solvente para

preconcentrar, obteniendo variaciones de la concentración de Bi(III) en el rango
de <200 a 7100 ng l-1 [Boswell, C. R. y col. 1967].

En las aguas recolectadas en zonas mineras encontramos valores de Bi(III)
en el rango que va desde el LOD y los 81 ng l-1, mostrando una influencia

importante del sitio de toma de muestra. Al igual que para el resto de las aguas
182
analizadas es difícil encontrar información confiable para poder considerar

rangos y hacer comparaciones. Se ha reportado un estudio en las cercanías de
la mina de Cu-W en Corea donde se analizó Bi por ICP OES con generación de
hidruros en diferentes muestras medioambientales, los cursos de agua
analizados presentaron concentraciones variables desde 300 hasta 8.400 ng l-1

[Jung, M. C. y col. 2002].
El análisis realizado al agua termal obtenida en la Pcia. de Entre Ríos

arrojó un resultado de 38,1±1,9 ng l-1. Durante la búsqueda bibliográfica se
encontró un estudio de agua y sedimento de un campo hidrotermal en

Santorini, Grecia, realizado en el marco de un estudio geoquímico. Si bien la
cuantificación se realizó con ICP OES, se reportaron valores inferiores a
800 ng l-1 [Varnavas, S. P. y col. 1988].
9. Conclusiones
Fue posible determinar y cuantificar Bi(III) a niveles de ng l-1 mediante su

preconcentración en línea, utilizando como sustrato MWCNT-pro. Una ventaja a
destacar del trabajo realizado es la utilización de equipamiento tradicional en

laboratorios de análisis químico, tal como la espectrometría de absorción
atómica con generación de hidruros.
El método de SPE desarrollado resultó adecuado para cuantificar Bi(III) a
los niveles esperados en aguas naturales, además, la metodología propuesta es

versátil, pudiéndose mejorar los límites de detección alcanzables adaptando el
volumen de muestra.
Al igual que para la determinación de Hg, el empleo de la mezcla de
Epolene® con los nanotubos permitió la utilización de la microcolumna en una

gran cantidad de ciclos sin mostrar signos de compactación y sobrepresión en
el sistema. Esto es posible debido a la cera de polietileno utilizada en relación a

la masa de nanotubos (10:1). A pesar de la mínima cantidad de MWCNT-pro
183
contenidos en la columna, se pudieron alcanzar excelentes límites de detección

lo que hizo posible la determinación de Bi en aguas naturales. La
heterogeneidad tanto en forma como distribución de las partículas de

polietileno ayudaron a evitar la compactación de la microcolumna.
Este estudio es un aporte significativo a un tema muy poco estudiado

como es la determinación de Bi en aguas naturales. Los niveles informados
aportan información útil para los investigadores involucrados en estudios

ambientales.
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186
Conclusiones
y
Perspectivas
Conclusiones y Perspectivas
La motivación de este trabajo de Tesis doctoral ha sido el desarrollo de
un nuevo material sorbente con una gran capacidad de retención de especies

metálicas en solución, y una metodología analítica que en forma coordinada
fueran capaces de acoplarse a un sistema de análisis en línea utilizando como

detección la espectrometría de absorción atómica para la cuantificación de
analitos de interés ambiental. El sistema de pretratamiento fue propuesto con el

objetivo de alcanzar los límites de detección necesarios para cuantificar los
analitos en las bajas concentraciones a las que se encuentran en aguas naturales

no contaminadas. De esta forma fue posible la utilización de equipamiento de
menor complejidad que los que se utilizan habitualmente para estos análisis,
como la espectrometría de masas con plasma acoplado inductivamente.
Asimismo, la utilización de equipamiento de menor complejidad permite

realizar estas determinaciones en laboratorios de diferentes características y
menores recursos. La versatilidad de la metodología desarrollada hace que el

sistema de preconcentración de muestra pueda acoplarse también a otras
técnicas analíticas.
Este trabajo de Tesis doctoral constituye un aporte al desarrollo de

métodos analíticos sensibles, selectivos y confiables para la cuantificación de
especies químicas presentes a niveles de trazas y ultratrazas en muestras de

origen natural, empleando una técnica analítica de relativamente bajo costo que
puede encontrarse aún en los laboratorios de servicios e investigación.
Para el pretratamiento de muestras, en este trabajo se eligió un sistema
simple, económico y versátil como es la Separación en Fase Sólida y se buscó a

través de la utilización de materiales novedosos, como los nanotubos de
carbono, jerarquizar la metodología al introducir selectividad, miniaturización,
188
automatización y rendimiento. La utilización de nanotubos de carbono,
oxidados y funcionalizados, como sorbente específico permitió alcanzar límites

de detección del orden de los ng l-1.
La metodología analítica desarrollada permitió utilizar

microcolumnas diseñadas para acoplar con una técnica
espectroscópica atómica, como la espectrometría de absorción atómica

disponible en los Laboratorios de Química Analítica de CNEA. Durante la
preparación del sorbente, el problema más serio a abordar fue evitar la

compactación dentro de la columna de los CNTs para controlar así la sobre-
presión del sistema. Para ello se implementó el uso de Epolene ® mezclado en
distintas proporciones con los CNTs. Esta cera de polietileno de muy bajo peso
molecular fue utilizada por primera vez para este propósito y resultó exitosa
para evitar la compactación del sistema y fue parte responsable de que se
pudiesen realizar más de 690 ciclos de preconcentración/elución en el caso de

la retención de Bi(III) sin sobrepresión. También fue posible, debido a que el
material desarrollado resultó ser muy eficiente, disminuir el relleno de las
columnas de 20 mg para el caso de la retención de Cu (usando MWCNT-pro

como sustrato) a 1 mg; en el caso de la retención de Hg (usando MWCNT-
COOH). El sistema microcolumna/relleno (CNTs + Epolene®) permitió:
- una exitosa adaptación e implementación en línea
- utilizar microcolumnas de diferentes dimensiones (longitud, diámetro)

y tipo de rosca para el acople (exterior, interior)
- evitar los conocidos y habituales problemas de compactación de

estos sistemas utilizando una mezcla de nanotubos de carbono con la
cera de polietileno
- modificar fácilmente el sentido de carga y elución de las muestras
- recuperar el sustrato para su análisis posterior
189
Se utilizaron sistemas discontinuos (batch) como primer acercamiento
para seleccionar la relación CNTs/especie metálica óptima en solución. Si bien

son conocidas las características hibrofóbicas y las fuertes energías de
repulsión que presentan los nanotubos comerciales, la realización de las

pruebas en batch pusieron de manifiesto parte de las dificultades que
presentan estos materiales para su utilización, situación que también es

aplicable a la manipulación, funcionalización y caracterización de los mismos.
Es por ello, que su oxidación y funcionalización representó un desafío

experimental que fue abordado y resuelto con buenos resultados en este
trabajo de Tesis doctoral.
Las dificultades encontradas en la preparación de las muestras para los
estudios de caracterización pudieron resolverse satisfactoriamente. Se

utilizaron una gran variedad de técnicas durante las distintas etapas del
proceso de síntesis del sorbente como, SEM, TEM, EDS, TGA, XRD y FTIR. En el
capítulo sobre la obtención de los nanotubos funcionalizados se presentó una
gran cantidad de información que constituye un aporte para comprender las
diferencias en el comportamiento de sorción de los materiales sintetizados.

También se demostró la gran resistencia estructural de estos materiales ya que
luego de ser reutilizados en un importante número de ciclos se comprobó que
seguían manteniendo su esqueleto de base carbono.
La variedad de nanotubos empleados pusieron de manifiesto las

posibilidades que tiene este sustrato de comportarse de forma selectiva,
quedando demostrado en los estudios de evaluación de la capacidad de

retención dinámica. En el caso del Cu se obtuvo una capacidad de retención
dinámica de 0,09 mg g-1 (usando MWCNT-pro), para la retención de Hg se

obtuvo 3,2 mg g-1 (usando MWCNT-COOH), pasando por 0,1 mg g-1 para la
retención de Bi por MWCNT-pro. Esto demuestra las características únicas que
190
posee cada sistema analito/sorbente/SPE y las posibilidades que existen para
el desarrollo de nuevos sorbentes específicos.

El objetivo de retener y preconcentrar analitos de interés ambiental, en
este caso, Cu(II), Hg(II) y Bi(III) se alcanzó con éxito permitiendo cuantificarlos a
niveles muy bajos (ng ml-1 o menor) lo que hizo posible detectarlos en aguas
naturales no contaminadas. La determinación de Bi(II) a estos niveles en

distintas categorías de aguas ha aportado información valiosa sobre un
elemento muy poco estudiado.

Cabe resaltar que la afinidad del sistema MWCNT-COOH por el Hg(II) es
tan alta que motivó a este Grupo de Trabajo a continuar investigando y
proponer nuevas funcionalizaciones utilizando, por ejemplo, aminoácidos
como la metionina (es conocida la afinidad del Hg por el azufre) para abordar
las posibilidades de desarrollar sistemas de SPE en línea que permitan
determinar especies de Hg en forma selectiva, como por ejemplo Hg(II) y

metilHg.
191
Producción Científica
Publicaciones
Parodi, B., Londonio, A., Polla, G. y Smichowski, P. (2015). On-line solid

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substrates for flow injection solid phase extraction associated to
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to Cd monitoring in solid environmental samples. Microchemical
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192
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utilizando nanotubos de carbono funcionalizados con L-
Congreso Argentino de Química Analítica, 3 al 6 de noviembre, 2015,
La Plata, Buenos Aires, Argentina.
and determination by FI-HGAAS involving
an on-line solid phase extraction system and L-proline immobilized
XXXIX, 30 de agosto al 3 de septiembre, 2015, Figueira da Foz,

Portugal.
preconcentration and on-line determination by FI-CV-

Symposium on Atomic Spectrometry, 19 24 de octubre, 2014, Mérida,
Yucatán, México
preconcentración de Hg(II) utilizando un sistema en línea FI-CV-

3er Congreso Uruguayo de Química Analítica, 6 al 9 de octubre, 2014,
Montevideo, Uruguay.
sistema en línea. Determinación de Hg a nivel de trazas en diferentes

tipos de aguas por FI-CV-
Analítica, 1 al 4 de octubre, 2013, Ciudad de Mendoza, Argentina.
de Carbono y Nanotubos de Carbono Modificados Acoplados a
Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica, del 3 al 6

de mayo, 2011, Ciudad de Córdoba, Argentina.
193
as Substrates for flor Injection Solid Phase Extraction. Application to
on the Science and Application of Nanotubes, 10 al 17 de Julio, 2011,

Cambrige, Inglaterra
especiación y determinación de elementos clase en diferentes

ca Analítica, 23 al 26 de
octubre, 2011, Campos do Jordão, Brasil
CNEA Superficies y Materiales Nanoestructurados 2010, 11 al 14 de

mayo, 2010, Centro Atómico Bariloche, Bariloche, Argentina
-CNT as substrate for solid phase extraction
coupled to USN-ICP OES for the on-
Eleventh Rio Symposium on Atomic Spectrometry, 24 al 29 de
octubre, 2010, Mar del Plata, Argentina
funcionalizados con aminoácidos para la retención
, 2009.
retención y preconcentraci
Argentino de Físico Química y Química Inorgánica, 18 al 21 de mayo,
2009, Salta, Argentina
194
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTÍN

INSTITUTO DE INVESTIGACIÓN E INGENIERÍA AMBIENTAL

FUNCIONALIZACIÓN Y APLICACIONES ANALÍTICAS DE NANOMATERIALES

Trabajo de Tesis para optar por el título de Doctor en Ciencia y Tecnología

Por: Lic. María Belén Parodi

Directora de Tesis: Dra. Patricia Nora Smichowski

Co-directora de Tesis: Lic. Griselda Inés Polla

Lugar de Trabajo: Departamento de Química Analítica, Gerencia Química y

Los nanomateriales y en particular los nanotubos de carbono (CNTs) han

inusuales y a su potencial aplicación en numerosas áreas del conocimiento.

modificaciones para cada aplicaci Desde la

modificar su estructura con la incorporación de aminoácidos, que le otorgan

El objetivo de este trabajo de Tesis doctoral fue la búsqueda e

separación en fase sólida utilizando CNTs, oxidados y funcionalizados, como

retención y preconcentración de Cu(II), Hg(II) y Bi(III) que luego se eluyeron y

utilización de estos materiales es posible determinar diferentes tipos de metales

En este trabajo, se emplearon como sustrato, nanotubos de carbono de

pared múltiple oxidados y funcionalizados con aminoácidos. Se utilizó al Cu(II)

línea. Se estudió cuidadosamente la geometría de la microcolumna donde se

optimizar la respuesta del sistema. Como parte de la implementación se estudió

carga y elución, masa de sorbente, capacidad de retención dinámica y efecto de

de la retención y preconcentración de Hg(II) y Bi(III), con aplicación a su

determinación en aguas naturales. Se evaluaron distintos volúmenes de carga

La caracterización de los materiales obtenidos se realizó por SEM, TEM,

El sistema implementado permitió la utilización de una mínima cantidad

de sustrato debido a la especificidad que la funcionalización le confiere a los

microcolumnas rellenas con nanocompuestos y de esta forma el sistema se

Nanomaterials and especially carbon nanotubes (CNTs) have been, and

In this work, multiwalled carbon nanotubes oxidized and functionalized with

The characterization of obtained materials was carried out by SEM, TEM,

The implemented system allowed the used of a minimun amount of

A las Instituciones Públicas y sus autoridades que me permitieron desarrollar

A las personas que me acompañaron durante estos años:

A mis Directoras, Patricia y Griselda, que me acompañan desde el 2003 cuando

A Laura Davidowski por su buena predisposición para firmar los Informes.

A los grupos de trabajo tanto de INTI como de CNEA que me brindaron su

A todos los chicos de Biomateriales que me han bancado con su tiempo y

A las personas que me acompañan siempre:

A mis amigos, afectos y familiares que me acompañan en esta y en todas las

A Luis Galófaro y Alicia Labarta por su apoyo, su interés y estar.

A mi familia, que no deja de preguntar cuando termino de estudiar!!! Espero

pueda decir eso a los 96 años.

Motivación del Trabajo de Tesis Doctoral 1

Capítulo 1 Pretratamiento de Muestras: Separación en fase sólida 5

4. Ventajas de la Separación en Fase Sólida 16

8. Microseparación en fase sólida 28

Capítulo 2 Nanotubos de Carbono como Material Sorbente 35

2. Elección del tipo de CNTs para su uso en SPE 41

4. Modificación de la superficie de los MWCNTs 47

4.2. Funcionalización con aminoácidos 51

4. Caracterización de los MWCNTs comerciales 72

6. Caracterización de los MWCNT-COOH 82

8. Caracterización de los MWCNTs funcionalizados con aminoácidos 89

Capítulo 4 Desarrollo del Sistema de Preconcentración: el Cu(II)

3. Analito modelo 105

5. Metodología utilizada 107

5.2. Condiciones operativas 109

5.4. Procedimiento general 110

5.5.1. Efecto del pH 111