Scribd Logo
Cargar

¡Te damos la bienvenida a Scribd!

  • 23 vistas

    PMMA GeneXpert XDR

    Cargado por

    Flower Rouss AQ
    gene xpert

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    PMMA GeneXpert XDR

    Cargado por

    Flower Rouss AQ
    23 vistas34 páginas
    gene xpert

    Título original

    5. PMMA GeneXpert Xdr

    Derechos de autor

    © © All Rights Reserved

    Formatos disponibles

    PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    ¿Le pareció útil este documento?

    ¿Este contenido es inapropiado?

    gene xpert

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    23 vistas34 páginas

    PMMA GeneXpert XDR

    Cargado por

    Flower Rouss AQ
    gene xpert

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    de 34

    CURSO

    Actualización en los procedimientos de laboratorio para la


    detección de la tuberculosis y la tuberculosis
    drogorresistente en el Perú

    Amplificación Automatizada del Ácido


    Nucleico en Tiempo Real para la Detección
    de la Resistencia a Drogas Antituberculosis
    de Primera y Segunda Línea.
    Blgo: Alexis Medina Caller
    Laboratorio de Referencia Nacional de Micobacterias
    Instituto Nacional de Salud

    2023
    EL BOOM DE LAS PRUEBAS MOLECULARES

    La plataforma molecular multifuncional


    GeneXpert es un sistema que simplificó
    las pruebas moleculares, al integrar la
    amplificación y la detección del
    material genético, el cual ha permitido
    hacer pruebas fuera de los laboratorios
    clínicos especializados.
    EL BOOM DE LAS PRUEBAS MOLECULARES
    La OMS recomienda que las pruebas moleculares reemplacen o complementen las
    pruebas convencionales por ser más sensibles, se deben utilizar como prueba
    diagnóstica inicial para detección de MTB y la resistencia por lo menos a rifampicina,
    a fin de minimizar los retrasos en el inicio de tratamientos adecuados.
    Dimensiones del
    equipo:

    Ancho 27 cm.

    Profundidad
    29.5 cm.

    Altura de 30 cm.
    El desarrollo diagnóstico más importante y
    revolucionario de la última década es el Xpert®,
    una plataforma molecular sensible, específica,
    totalmente automatizada y de fácil manejo, que
    permite su instalación en el lugar de atención
    cercano al paciente.

    Esta plataforma puede utilizarse para pruebas de


    detección de TB y resistencia a drogas de primera
    y segunda línea, reduciendo así el tiempo de
    retorno de resultados y el inicio de la terapia anti-
    tuberculosis en PAT.
    Amplificación Automatizada del Ácido Nucleico en Tiempo
    Real para la Detección de la Resistencia a Drogas
    Antituberculosis de Primera y Segunda Línea.

    • Utiliza La PMMA automatizada.


    • Detección simultanea
    ₋ Mutaciones asociadas a la amplia resistencia a
    fármacos y el complejo MTB.
    • Controles internos incorporados para cada
    muestra.
    ₋ Adecuación del volumen de la muestra (SVA)
    ₋ Control de comprobación de la sonda (PCC)
    ₋ Control de procesamiento de muestras (SPC)
    Amplificación Automatizada del Ácido Nucleico en Tiempo
    Real para la Detección de la Resistencia a Drogas
    Antituberculosis de Primera y Segunda Línea.

    • Resultados en aproximadamente:
    - Menos de 90 minutos
    • Sistema de cartucho cerrado que minimiza
    el riesgo de contaminación.
    El ensayo Xpert MTB/XDR, es una prueba de diagnóstico in vitro de
    reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real, anidada, para la
    detección del ADN del complejo MTB extremadamente resistente a
    fármacos (XDR) en muestras de esputo sin procesar o en sedimentos
    concentrados a partir de esputo.

    En muestras en las que se detecta MTB, el ensayo Xpert MTB/XDR también


    puede detectar mutaciones asociadas a la isoniacida (INH); la etionamida
    (ETH); la fluoroquinolona (FLQ) y fármacos inyectables de segunda Línea
    (SLID).
    El ensayo Xpert MTB/XDR está indicado para utilizarse como prueba refleja
    para una muestra que se haya determinado como positiva para MTB. Esta
    prueba está concebida como una ayuda para el diagnóstico de tuberculosis
    (TB) XDR cuando se utiliza junto con los resultados clínicos y otros
    hallazgos de laboratorio.
    MTB/XDR
    ▪ Esta diseñado para detectar:
    ▪ Mutaciones asociadas a la isoniazida (INH) en los
    genes KatG y fabG1, la región intergénica oxyR-ahpC y
    el promotor inhA.
    ▪ Mutaciones asociadas a la resistencia a etionamida
    (ETH) sólo en el promotor inhA.
    ▪ Mutaciones asociadas a la resistencia a
    fluoroquinolona (FLQ) en las regiones determinantes
    de resistencia a las quinolonas gyrA y gyrB (QRDR).
    ▪ Mutaciones asociadas a la resistencia a fármacos
    inyectables de segunda línea (SLID) en el gen rrs y la
    región promotor eis.
    No se debe USAR ESTA PRUEBA PARA
    MONITOREAR LA RESPUESTA AL TRATAMIENTO
    ANTITUBERCULOSIS, ya que puede detectar ADN
    de bacilos muertos
    Condiciones de las muestras
    • Las muestras deben llegar al laboratorio acompañadas de sus
    respectivas fichas bacteriológicas y sin tener ningún tipo de
    preservante (ejm. formol), caso contrario solicitar una nueva
    muestra.

    • No aceptar muestras inadecuadas (muestras con sangre, restos de


    alimentos muestras con volumen insuficiente.

    • En caso suceda, se debe informar para el envío de una nueva


    muestra..
    Transporte y conservación de muestras
    • Las muestras deben llegar al laboratorio dentro de las 72 horas en
    cadena de frio.
    • Sedimento de esputo: conservar el sedimento resuspendido a una
    temperatura entre 2°C – 8°C durante un máximo de siete días.

    • Esputo sin procesar: Siempre que sea posible, transportarlo y


    conservarlo a una temperatura de 2°C – 8°C antes de procesarlo.

    • En caso necesario, las muestras de esputo si procesar pueden


    conservarse hasta tres días a una temperatura máxima de 35°C y
    luego a una temperatura entre 2°C – 8°C durante siete días.
    • Una sola muestra es recomendada para analizarla por
    Xpert MTB (1-4 ml de esputo purulento/ mucoide).

    • Las muestras no deben contener alimentos u otras


    partículas que pueden interferir en el resultado de la
    prueba Xpert MTB.

    • La saliva o secreciones nasales no son muestras adecuadas

    • Muestras sanguinolentas es de calidad no adecuada.


    Proceso del ensayo “Amplificación Automatizada del Ácido
    Nucleico en Tiempo Real para la Detección de la Resistencia a
    Drogas Antituberculosis de Primera y Segunda Línea

    Rotular tubo de Agregar 1ml de muestra Agregar reactivo de Agitar de 10 a 20 veces dejar
    centrifuga de 15 ml el con una pipeta de la muestra incubar temperatura
    código de muestra transferencia proporción 1:2 ambiente 10min Agitar y
    darle 5min. mas
    Abrir la tapa del cartucho Ajustar la tapa del En el software del Ingresar el cartucho
    y con la pipeta cartucho sistema escanear los al modulo asignado
    suministrada aspirar la datos de la muestra y
    muestra justo por encima el módulo a usar
    de la línea y transferir a la
    cámara de muestras del
    cartucho
    Relación muestra-
    Volumen mínimo de Volumen máximo de
    Tipo de muestra reactivo para
    la muestra la muestra
    muestras

    Sedimento de esputo 0,5 ml 2,5 ml 1:3*

    Esputo sin procesar 1 ml 4,0 ml 1.2

    * La relación muestra-reactivo para muestra 1:2 debería utilizarse con un volumen de la muestras 0,7 ml o
    superior para una prueba
    PRMIENOCEDITO ANALÍTICO: EXTRAPULMONARES

    MUESTRAS LÍQUIDAS:
    1. Muestras con más de 5mL
    • Transfiera la muestra a un tubo de centrífuga cónico y concentre la muestra a
    3000xg durante 15 minutos.
    • Decantar el sobrenadante y resuspenda en 2 ml de buffer fosfato salino (PBS).
    • Transferir 1mL de la muestra a un tubo cónico para realizar el proceso de
    inactivación.
    • Adicionar el reactivo de la muestra en una proporción de 1:2 y seguir el
    mismo proceso ya conocido.
    PROCEDIMIENTO ANALÍTICO: EXTRAPULMONARES

    MUESTRAS LÍQUIDAS:
    2. Muestras con 1-5mL
    • Transferir 1 mL de la muestra a un tubo cónico para realizar el proceso de
    inactivación.
    • Adicionar el “reactivo de la muestra” en una proporción de 1:2 y siga el
    mismo proceso ya conocido.

    3. Muestras con 0.1-1mL


    • Añadir 2mL de reactivo de muestra de Xpert.
    • Seguir el mismo proceso ya conocido.
    PROCEDIMIENTO ANALÍTICO: EXTRAPULMONARES

    MUESTRAS SÓLIDAS:
    1. Ganglios Linfáticos y Otros Tejidos
    • Corte la muestra de tejido en pequeños trozos en un mortero.
    • Añada aproximadamente 2 ml de solución salina tamponada con fosfatos
    (PBS) estéril.
    • Triture la solución de tejido y PBS en un mortero hasta obtener una
    suspensión homogénea.
    • Transferir 1mL de la muestra a un tubo cónico para realizar el proceso de
    inactivación.
    • Adicionar el reactivo de la muestra en una proporción de 1:2
    • Siga el mismo proceso ya conocido.
    CONSIDERACIONES PARA PREPARACIÓN DE MUESTRAS

    • Preparar el número de muestras de acuerdo a la cantidad de módulos disponibles


    en el equipo Xpert (o sea, solo los que se encuentren en funcionamiento).

    • Inicie la prueba en las 4 horas siguientes a la adición de la muestra tratada con el


    reactivo para muestras al cartucho.

    • Cuando procese más de una muestra a la vez, abra solo un cartucho, añada la
    muestra tratada con el reactivo para muestras y cierre el cartucho antes de pasar a
    la siguiente muestra.

    • Utilice el cartucho dentro de 30 minutos después que se destape el cartucho.


    ALGORITMO DE INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
    Picos de Fusión
    (Melt Peeaks)
    No se detecta resistencia
    Resistencia INH-FLQ-SLID-ETH
    Resistencia INH
    Resistencia FLQ
    Resistencia a INH + baja resistencia a FLQ
    + resistencia a KAN
    CURSO
    Actualización en los procedimientos de
    laboratorio para la detección de la
    tuberculosis y la tuberculosis
    __
    drogorresistente en el Perú

    ____ FOTO DE
    LABORATORIO

    Gracias
    Blgo. Alexis Medina Caller
    [email protected]
    0051 7481111 – anexo:1596

    También podría gustarte