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    Células en Suspensión y Cultivo de Raíces

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    DANIELA SOLIS MARROQUIN
    En el presente documento se explica qué es un cultivo en célula en suspensión y un cultivo de raíces.

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    Células en Suspensión y Cultivo de Raíces

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    En el presente documento se explica qué es un cultivo en célula en suspensión y un cultivo de raíces.

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    Células en suspensión y cultivo de raíces

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    Células en Suspensión y Cultivo de Raíces

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    Células en suspensión y cultivo

    de raíces
    Dra. Daniela Solís Marroquín
    Células en suspensión

     Se denomina cultivo en células en suspensión al cultivo in vitro de


    células vegetales aisladas o en pequeños agregados, distribuidos en
    medio líquido y en un constante movimiento, las cuales presentan
    una tasa de división celular y una homogeneidad relativamente alta.
    Diferencias básicas entre células microbianas y
    células vegetales cultivadas en suspensión

    Características Células microbianas Células vegetales

    Tamaño 1 – 5 µm3 Mayores de 105 µm3

    Formación de agregados celulares Frecuentemente Muy frecuentemente

    Tiempo de generación Usualmente menor de 1 h 24 – 150 h

    Densidad de inóculo 0.5 – 1 % del volumen total 5 – 20 % del volumen total

    Tolerancia al estrés causado por la Alta Baja


    agitación

    Contenido de agua Alrededor del 75% Alrededor del 90%

    Consumo de oxígeno 5 -9mm I -1 h -1 1 – 4 mmol I -1 h -1

    Producto Frecuentemente extracelular Frecuentemente intracelular

    Complejidad del medio de cultivo Baja Alta o muy alta

    Costo aproximado del producto U.S. $ 6 m3 U.S. $ 50 m3

    Modificado de Taticek y col. 1991


    Cinética de crecimiento de un cultivo in vitro
    de células vegetales en suspensión
    Cinética de crecimiento
    8

    6 Fase de desacele-
    ración progresiva
    FASE ESTACIONARIA
    DENSIDAD CELULARr

    4 FASE LINEAR

    3
    FASE lag
    2
    FASE log

    0
    0 1 2 3 4 5 6 7 8

    TIEMPO
    Parámetros para medir el crecimiento de las
    suspensiones celulares
     Volumen del paquete celular.
     Número de células por unidad de volumen.
     Peso fresco y peso seco.
     Conductividad eléctrica del medio.
     Contenido de proteína y ADN.
     Viabilidad celular ( técnicas para medirla: observaciones de las corrientes citoplasmáticas,
    mediciones de la integridad de las membranas – liberación de electrolitos, plasmólisis y
    exclusión o retención de colorantes-, mediciones de actividad bioquímica - síntesis de
    proteínas, reducción de sales de tretrazolio, síntesis de ADN y ARN, contenido de ATP y
    tinción con diacetato de fluoresceína).
    Plaqueo de suspensiones celulares

     EP = Número final de colonias obtenidas X 100


    Número de células inoculadas

    donde EP es eficiencia de plaqueo.


    Cultivo de raíces

     Es un sistema de gran interés para el estudio de los procesos metabólicos que se llevan
    acabo en estos órganos y que se revelaron y que se relacionan de carbohidratos, vitaminas,
    reguladores de crecimiento y absorción y traslocación de nutrientes.
    División del cultivo in vitro de las raíces en
    tres grupos de especies
    1. Raíces que pueden desarrollarse indefinidamente in vitro, requiriendo únicamente del
    medio y de los subcultivos apropiados.
    2. Raíces que crecen y se desarrollan in vitro durante periodos viables de tiempo pero que no
    se ha logrado que lo haga de manera indefinida, por lo que en todo los casos tarde o
    temprano se presenta una disminución paulatina en la tasa de crecimiento, se inhibe la
    formación de raíces laterales y el cultivo finalmente muere.
    3. Raíces que hasta el momento no se ha logrado que prosperen in vitro, ni siquiera por
    periodos limitados en el tiempo.
    Ventajas y limitantes de la utilización de raíces
    transformadas
    Ventajas 1. Estabilidad genética y bioquímica
    2. Crecimiento rápido
    3. Capacidad biosintética similar a las
    raíces de la planta completa
    4. Cultivo en fermetadores, sin pérdida de
    las propiedades anteriores
    5. Posibilidad de manipulación genética
    Limitantes 1. Rango de hospederos de Agrobacterium
    rhizogenes limitado
    2. Se requiere que la biosíntesis del
    metabolito buscado se lleve a cabo en la
    raíz Rhodes y col. 1990
    Referencia

     Pérez Molphe Balch, E. M., Ramírez Malagón, R., Núñez Palenius, H. G., & Ochoa Alejo,
    N. (1999). INTRODUCCIÓN AL CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES. Aguascalientes, México:
    Universidad de Autónoma de Aguascalientes. 

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