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    Genetica 5

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    Dennise Cabrera
    El Southern blot es una técnica que se usa para detectar secuencias específicas de ADN. Involucra la digestión del ADN con enzimas de restricción, electroforesis para separar los fragmentos por tamaño, transferencia a una membrana, y hibridación con una sonda marcada para revelar las secuencias complementarias. Se usa para aplicaciones como huellas genéticas, detección de mutaciones y secuencias adquiridas. Fue desarrollado por Edwin Southern en 1975.

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    Dennise Cabrera
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    El Southern blot es una técnica que se usa para detectar secuencias específicas de ADN. Involucra la digestión del ADN con enzimas de restricción, electroforesis para separar los fragmentos por tamaño, transferencia a una membrana, y hibridación con una sonda marcada para revelar las secuencias complementarias. Se usa para aplicaciones como huellas genéticas, detección de mutaciones y secuencias adquiridas. Fue desarrollado por Edwin Southern en 1975.

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    El Southern blot es una técnica que se usa para detectar secuencias específicas de ADN. Involucra la digestión del ADN con enzimas de restricción, electroforesis para separar los fragmentos por tamaño, transferencia a una membrana, y hibridación con una sonda marcada para revelar las secuencias complementarias. Se usa para aplicaciones como huellas genéticas, detección de mutaciones y secuencias adquiridas. Fue desarrollado por Edwin Southern en 1975.

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    El Southern blot es una técnica que se usa para detectar secuencias específicas de ADN. Involucra la digestión del ADN con enzimas de restricción, electroforesis para separar los fragmentos por tamaño, transferencia a una membrana, y hibridación con una sonda marcada para revelar las secuencias complementarias. Se usa para aplicaciones como huellas genéticas, detección de mutaciones y secuencias adquiridas. Fue desarrollado por Edwin Southern en 1975.

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    de 11

    Universidad Popular Autónoma del Estado de Puebla

    Facultad de Medicina

    Genética Molecular Humana


    “Southern blot”

    Integrantes:
    Cruz Guzmán Adriana 909580
    Aimeé Méndez Franco 9010758
    Serafín Vera Rosalba Joselyn 9010799
    Ramirez Olvera Frida Sabina 9011063

    Verano 2018 Grupo: 2

    Mtra. Cristina López García


    Historia
    ● El Southern Blot o Hibridación Southern,
    es una técnica empleada en los laboratorios
    de biología molecular que se usa para
    detectar secuencias de ADN específicas por
    electroforesis en gel y transferidos a una
    membrana de nitrocelulosa o en Nylon.
    ● También se utiliza esta técnica como “prueba
    del ADN” para detectar la presencia del ADN
    de un individuo en un lugar
    ● Edwin Southern
    Historia

    ● Southern significa “sureño” en inglés y

    Northern “norteño” .

    ● El inmunoblot: detecta proteínas

    mediante un proceso dependiente de

    anticuerpos.

    ● Se desarrolló en 1975
    las enzimas más utilizadas son la : Hae III y Hinf I

    Protocolo
    -Digestión enzimática
    -Electroforesis en gel
    -Desnaturalización de la sonda
    -Transferencia del ADN a la membrana
    -Hibridación
    -Revelado
    Pasos de realización del análisis
    1. Extraer y purificar el adn ( este puede ser de animal, vegetal, etc)
    2. Una vez obtenido un ADN purificado se corta con enzimas de restricción
    3. Una vez tenemos el ADN digerido con enzimas y en cantidad suficiente se
    corre una electroforesis en un gel1 de agarosa para separar los diferentes
    fragmentos de ADN según su tamaño
    4. En este punto se baña el gel en un tratamiento alcalino, normalmente
    hidróxido de sodio (NaOH)
    5. separar la doble hebra y eliminar los restos de ARN que puedan quedar.

    Gel=> Agente intercalante fluorescente


    1

    Patrón de referencia => ADN genómico SMEAR


    A partir de este punto empieza el
    Southern Blot propiamente dicho
    1. Traspasa el ADN del gel a una membrana de nailon=> Desnaturalización
    de la sonda.
    2. Se incuba en una solución salina que contiene una sonda de ADN o ARN
    complementaria a una secuencia específica
    3. La sonda se construye con nucleótidos, añadiendo el fosfato radioactivo o
    uniendo la sonda a una molécula fluorescente para poder verla más
    adelante.
    4. Finalmente se revela con una película fotográfica, si la sonda es radioactiva
    o con luz fluorescente si es el caso. Esta prueba permite diferenciar dos
    individuos que tengan diferencias en la diana de un enzima de restricción,
    es decir que uno la tenga y otro no
    La hibridación se debe realizar con
    sondas específicas marcadas y luego se
    realizan dos o más lavados.

    Previo a la hibridación:
    Se debe incubar la membrana con una solución
    que tenga ADN de esperma de salmón.
    Aplicaciones

    ● Elaboración de huellas genéticas.

    ● Estudios de mutaciones estructurales.

    ● Detección de secuencias adquiridas

    ● Pruebas del ADN.


    Video
    Referencias
    ● Lodish, H., Matthew, P., Scott, M., Matsudaira, P., Darnell, J., Zipursky, L., Kaiser, C., Berk, A.,
    Krieger, M. 2000. Molecular Cell Biology.
    ● Pierce, B.A. Genética. Un enfoque conceptual. 2da. Ed. Médica Panamericana. Madrid. 2006.

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