Master II Chimie pharmaceutiqueDr. W.

BENABDERAHMANE

Chapitre II
Production industrielle des médicaments issus de la biotechnologie

I- Généralités
II- Production de biomédicaments issus des biotechnologies
III. Particularités des biomédicaments
IV- Principaux biomédicaments.

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I- Généralités &Définitions
I.1.Les biotechnologies
C’est l’ingénieur hongrois Károly EREKY qui inventa le mot « biotechnologie » en 1913.

Il est composé de « bio » du grec bios, vie, et de « technologie » qui désigne les études des
outils et des techniques (du grec techné, art manuel). Les biotechnologies correspondent donc
aux techniques qui utilisent le vivant.

Les premières domestications d'animaux et acclimatation de plantes marquent les prémices de

l’utilisation du vivant mais c’est réellement avec les débuts de l'agriculture et les
premiersproduits fermentés comme le pain et le fromage que vont naître les biotechnologies
dites « traditionnelles » et dont les procédés mis en jeu n’étaient pas totalement compris.

Ainsi l’évolution et la modernisation des techniques utilisées dans l’agriculture, l’élevageet

l’agroalimentaire permettent de produire d’avantage mais c’est au cours du XIXesiècle que la
biologie a été réellement étudiée. On peut notamment citer Pasteur et ses travaux sur la
fermentation dans les années 1850 qui permirent de démontrer l’existence de
microorganismes. Ses successeurs ainsi que lui-même sont considérés comme de véritables
pionniers dans le domaine de la microbiologie industrielle. C’est à partir de la seconde guerre
mondiale que l’utilisation de ce qu’on appelle aujourd’hui les biotechnologies modernes
serépand avec notamment la production à grande échelle du premier antibiotique, la
pénicilline, grâce à la fermentation d’un champignon.

La découverte de la structure en double hélice de l’ADN par Watson et Crick en 1953 a permis à
de nombreuses disciplines telles que la biologie cellulaire, la biologie moléculaire, et la
biochimie de prendre leur essor. Cette découverte signe également le point de départ du génie
génétique.

Donc , en bref et selon l’OCDE (Organisation de Coopération et de Développement

Economique):
« Les biotechnologies se définissent comme les applications des sciences et techniques à des
organismes vivants, qu’il s’agisse d’éléments, de produits ou d’échantillons, pour transformer les
matériaux vivants ou non, dans le but de produire des connaissances, des biens et des services
»

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• Ensemble des méthodes ou techniques utilisant des éléments du vivant (organismes,cellules,
éléments subcellulaires ou moléculaires) pour rechercher, produire ou modifier des éléments
ou organismes d’origine végétale ou animale (ou non).

• Les biotechnologies concernent donc des procédures qui peuvent contribuer au

développement de nouveaux produits ou de services et des produits déterminés.

• Elles regroupent les méthodes traditionnelles (fabrication du pain, de la bière, du vinaigre,

etc.) et les biotechnologies modernes fondées sur la génétique moléculaire et le génie
génétique.

I.1.1. Histoire des biotechnologies

 Biotechnologies anciennes ou de premières générations
La biotechnologie est un processus multidisciplinaire mis en place par l’humanité,de manière
période correspondante à l’apparition de l’agriculture et del’élevage ; l’homme s’est intéressé à
la transformation des produits de sa production «agricole » en transformant :

 Le lait en lait caillé en l’exposant aux bactéries.

 La farine en pain en ajoutant de la levure.
 Les transformations, par fermentation, constituent les prémices de la biotechnologieau
sens large. Les applications liées à la fermentation ont évolué progressivementau gré
des découvertes de concepts biologiques et de la maitrise de nouvellestechniques.
 Biotechnologie de seconde génération
L’évolution de la biotechnologie et l’élargissement de ces champs d’application sontfortement
liés :
 D’une part à la découverte et la compréhension de nouveaux concepts biologiques
etsurtout ceux de biologie moléculaire à savoir, l’ADN, le gène et leur fonctionnent.
 Et, d’autre part avec le perfectionnement des procèdes techniques qui sont de plus
enplus informatisés (numérisés).

Dans le domaine de la biotechnologie, la production en masse des produits de qualité

estpossible grâce à 3 outils de base:
• La maitrise des techniques de culture cellulaire (humaine, animal, végétal
etmicroorganismes),qui permet de maintenir longtemps des cultures cellulaires
decaractéristiques constantes.

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• Le génie génétique qui permet de modifier de façon contrôlée le génome d’unorganisme.

• L’informatique sans laquelle il est impossible de traiter et d’exploiter l’informationgénétique.

I.1.2. Principales applications de la biotechnologie utilisant le code des couleurs.

Les secteurs qui utilisent les biotechnologies ont également donné naissance à une classification
qui permet de les distinguer : les biotechnologies vertes trouvent leurs applications dans
l’agriculture et l’alimentation, les biotechnologies blanches ont pour objet la production de
molécules à partir de biomasse et sont la base d’une chimie durable, la bleue désigne la
biotechnologie marine, et enfin les biotechnologies rouges concernent le secteur médical.

Domaine Application
- Production de vaccin et d’antibiotique
Biotechnologie Rouge /Médecine - Techniques de diagnostic moléculaire
- Industrie pharmaceutique et cosmétique
- Production de variétés végétales modifiées
BiotechnologieVerte / Agriculture - Production de races animales modifiées
- Production de biofertilisants et de biopesticides.
- Agroalimentaire
Biotechnologiejaune /Environnement - Entretient de la biodiversité.
- Dépollution.
-Procédés industrielles (conception et production
de nouveaux matériaux à usage quotidien comme
les matières plastiques, textiles, …) non polluants.
Biotechnologie blanche /industrie
- Développement de nouvelles sources d’énergie
durable comme les biocarburants.
- Exploitation des ressources maritimes pour
Biotechnologiebleu /Mer créer de nouveaux produits.
- Production de biomatériaux et agents
pharmacologiques régénératifs.

I.1.3. Biotechnologies rouges/ Médicale

(Médecine, santé humaine, médecinevétérinaire, cosmétologie, diagnostic, nouveaux procédés

thérapeutiques moléculaires ou cellulaires):

La biotechnologie rouge rassemble toutes les utilisations de la biotechnologieliées à la

médecine. Elle comprend la production de vaccins etd'antibiotiques, le développement de
nouveaux médicaments, les techniques dediagnostic moléculaire, les thérapies de régénération
et le développement du géniegénétique pour guérir les maladies par la manipulation
génétique.Certains exemples pertinents de biotechnologie rouge sont la thérapie cellulaire etla

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médecine régénérative, la thérapie génique et les médicaments à base demolécules biologiques
telles que les anticorps thérapeutiques.

 Biotechnologie pharmaceutique
Ensemble des procédés biotechnologiques utilisant des microorganismes, plantes etanimaux ou
leurs constituants pour la production de produits pharmaceutiques

I.2.Biomédicaments (Médicament biologique)

Les Biomédicaments ou médicaments biologiques sont des produits issus des biotechnologies.
En plus des protéines thérapeutiques dont les anticorps monoclonaux représentent une grande
part, cette classe de médicaments comprend également les vaccins, les produits pour thérapie
génique et cellulaire, et les dérivés du sang ou du plasma humain.

D’autre terme un biomédicamentesttout médicament dont la substance est produite à partir

d’une source biologique ou en est extraite et dont la caractérisation et la détermination de la
qualité nécessitent une combinaison d’essais physiques, chimiques et biologiques ainsi que la
connaissance de son procédé de fabrication et de son contrôle.

 Traditionnels: Extraction
– D'origine animale : produits sanguins, hormones, stéroïdes, catécholamines, prostaglandines,
anticorps, insuline, vaccins…
– D'origine microbienne : antibiotiques, enzymes, protéases, vaccins, …
– D'origine virale: vaccins
I.2.1.Historique
 1680: microscope: observation des cellules (Leuvwenhoek)
 1860- 1890 :Premiers procédés de culture cellulaire ( pasteur, Koch)
 1900-1920: Utilisation d’enzymes pour applications techniques, lessives (Rhom,
Takamine)
 1929: Fleming, découverte de la pénicilline.
 1949: Début des transformations microbiennes à l’échelle industrielle.
I.2.2.Intérêt des Biomédicaments :
Les biomédicaments apportent de plus en plus de solutions dans des pathologies souvent mal
connues (maladies orphelines) ou des domaines limites en termes de traitements.

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Parmi ceux-ci on trouve différents domaines, comme la cancérologie et l’hématologie,
l’endocrinologie, l’infectiologie, les troubles métaboliques (diabète), etc.

I.2.3.ProcédésMédicaments issus des biotechnologies :

Médicaments faisant appel à une des procédés biotechnologiques suivants :
 Technique de l’ADN recombinant.
 Expression contrôlée de gènes codant pour des protéines biologiquement actives dans
des procaryotes et eucaryotes, y compris des cellules transformées de mammifères.
 Méthodes à base d’hybridomes et d’anticorps monoclonaux.

II. Production des biomédicaments

Les médicaments dérivés du génie génétique sont fabriqués selon les étapes présentes dans la
Figure 1: La séquence codante pour la protéine désirée est insérée dans un vecteur d’expression
qui sera transféré dans une cellule hôte, issue d’une lignée cellulaire définie, afin de synthétiser
la dite protéine. Cette cellule hôte servira de base pour la production de banques cellulaires. Les
cellules seront ensuite mises en culture dans des bioréacteurs de tailles croissantes pour
accroître leur quantité avant d’être cultivée dans le bioréacteur final (jusqu’à 20m3) qui se
finalisera par la récolte de la protéine désirée. Cette première phase qui correspond à la culture
cellulaire est également appelé phase « Upstream ». Elle est suivie de la phase « Downstream »
qui consiste à purifier la protéine. Celle-ci est ensuite formulée et conditionnée.

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Figure 1: Etapes de la production des biomédicaments

 Principe :

Le principe de production se base sur la modification génétique des cellules vivants(micro-

organismes),séparées et sélectionnées de leur milieu puis mises en culture oufermentation.

Les molécules produites présentent tous les caractéristiques de leur modèle humaindont les
ordres sont donnés à la cellule productrice sous forme d’ADN reconstitué(technique d’ADN
recombinant).

Exemples :

 Hormones, tels que l’insuline

 Anticorps monoclonaux contre le cancer.
 Interférons contre l’hépatite C.
 Etapes :
Les micro-organismes sont cultivés pour la production de molécules identiques à celles
produites par l’homme. (Figure 2)

 Couper l’ADN (un gène humain codant par la protéine X) de manière définie et
reproductible à l’aide d’un enzyme de restriction.

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 Insérer l’ADN dans un vecteur d’expression
 Introduire le vecteur d’expression dans un organisme hôte (bactérie, levure, ou une cellule
d’origine animale) qui assurera la synthèse de la protéine par transcription et traduction de
l’ADN. (Les cellules sont génétiquement modifiées)
 Mettre l’ensemble dans des conditions adéquates de croissance (fermentation et culture),
pour obtenir une grande quantité de gène.
 Extraction et purification.
 Les cellules recombinantes (ADNr) ainsi sélectionnées sont analysées pour leurs propriétés
en termes de croissance, de productivité et de viabilité.

Figure 2: Etapes de la production de l’ADNr

 Vecteurs :
ADN plasmidique :

Les plasmides sont des petites molécules d’ADN bicatinaires, Circulaires, extra-
chromosomiques, susceptibles de se répliquer de façon autonome.

Ils sont présents dans le cytoplasme de nombreuse espèce.

Ils peuvent porter des gènes de résistances aux antibiotiques ce qui permet la sélection de
bactéries possédants le plasmide.

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ADN phagique :

Les phages sont des particules virales qui infectent les bactéries.
Leur multiplication est rapide et le nombre de copies par cellule bactérienne est très important.
Deux types de phages qui infectent E. coli sont d’usage fréquent : le phage Y et le phage M13.
o Phage Y

Constitué d’un ADN double brin linaire de 48,502 paires de bases.

Les extrémités appelées COS sont constituées par l’ADN sous forme simple brin sur une
longueur de 12 bases.

o Phage M13

Constitué d’une molécule d’un ADN circulaire monocaténaire de 6407 paires de bases.

Cosmides :

Vecteurs hybrides constitués d’un plasmide classique auquel ont été ajoutées les séquences
COS du phage Y.

YAC :

Chromosome artificiel de levure

 Cellules hôtes

La cellule hôte peut être :

 Une cellule bactérienne ( E. coli, Bacillus subtilis , …ect) ;

 Une levure ;
 Un champignon filamenteux ;
 Une cellule végétale ;
 Une cellule de mammifères (CHO, …) ect.
Les cellules qui sont les plus utilisées sont répertoriées dans le tableau suivant :

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Tableau 1: Lignées cellulaires les plus utilisées
Cellule Origine Application courante
Vero Cellules épithéliales du rein de singe vert Vaccins viraux humains et
vétérinaires
ST Cellluleséptihéliales de testicules de porc Vaccins viraux vétérinaires
MDCK et de rein de chien
CHO Cellules d’ovaired’hamster chinois Protéinesrecombinantes
BHK Cellules de rein de bébé Hamster Facteur VIII, vaccins viraux
et vétérinaires
Sf9 Cellules d’insectes Protéinesrecombinantes
High-5
HEK293 Cellules épithéliales de rein humain Adénovirus
transformées
PER.C6 Cellules de rétinehumaine Protéinesrecombinantes
NS0 Cellules de myélome de souris Protéinesrecombinantes
Sp 2/0
Anticorps monoclonaux
Hybridomes Cellules murineshybridées utilisés pour le diagnostic

 La Récolte
Une fois que le temps de culture dans le bioréacteur final est atteint, il s’ensuit l’étape de
récolte ou « clarification primaire » où le produit d’intérêt est principalement séparé des
cellules et de diverses impuretés. Cependant, deux cas peuvent se présenter : soit la protéine
d'intérêt reste dans le milieu intracellulaire soit elle est secrétée dans le milieu extracellulaire.
Dans le premier cas, il faut d'abord récupérer toute la biomasse contenue dans le bioréacteur et
éliminer le milieu de culture. Les cellules sont ensuite lysées et la protéine se retrouve alors
dans un mélange constitué de débris cellulaires et du reste du contenu intracellulaire. Dans le
deuxième cas, on doit séparer le milieu de culture, qui contient la biomolécule et différentes
impuretés, des cellules.

A l’issue de ces deux cas, la protéine devra être isolée à l’aide d’opérations de centrifugation et
de filtration en profondeur. Une filtration tangentielle est souvent ajoutée pour concentrer le
filtrat avant de passer à la phase de purification.

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 Bioréacteurs : une production à grande échelle

Un bioréacteur est une enceinte de 2 à 100000 litres permettant la culture de tout type de
cellule (animale, végétale, levures, bactéries) et répondant a des critères de conception
permettant d’influer efficacement sur la culture, de contrôler et piloter les paramètres
physiques et chimiques.

Figure 3: Bioréacteurs à 4000 litres

Paramètre à maitriser :

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III. Particularités des biomédicaments
Contrairement aux médicaments classiques qui sont pour la plupart des petites molécules,
synthétisées chimiquement avec une structure bien définie et caractérisée, la plupart des
produits biopharmaceutiques présentent un poids moléculaire élevé avec des formes
complexesqui ne sont pas facilement caractérisées. Les protéines, par exemple, sont constituées
d'uneséquence primaire (séquence d'acides aminés), secondaire (par exemple des motifs
structuraux sous la forme d'une hélice alpha et d'un feuillet bêta) et d'une structure tertiaire (la
forme globale d'une protéine). Elles présentent parfois une structure qu’on appelle quaternaire,
c'est-à-dire que plusieurs chaînes polypeptidiques (sous-unités) forment un complexe protéique
(par exemple, l’hémoglobine).

Figure 4: Comparaison des tailles entre les entités chimiques et les entités biologiques

Les produits biologiques peuvent être modifiés de manière imprévisible par le processus de
fabrication, ce qui peut entraîner une modification dans l’activité biologique ou l’induction
d’une immunogénicité du fait de leur présence. Ils ont tendance à être sensibles à des facteurs
environnementaux tels que les changements de température, le cisaillement et l'oxydation. Par
conséquent, ils sont moins stables et se dégradent plus facilement que les médicaments
chimiques. Ils sont également sensibles à tout type de contamination comme les virus, les
bactéries, les endotoxines bactériennes, les champignons, les levures et les mycoplasmes dont
la présence dépend de la lignée cellulaire et des matières premières utilisées au cours du

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procédé de fabrication. Par conséquent, il est nécessaire de mettre en place des contrôles et
d'utiliser des procédés qui maîtrisent ces contaminations lors des étapes de fabrication. Un
autre point important est que dans un procédé de fabrication biotechnologique il doit être
prouvé que les cellules utilisées permettent de synthétiser un produit qui est sûr pour le
patient. Ceci doit être assuré en générant une banque cellulaire de fin de production (EOP ou
End of Production) dans le but de tester la stabilité génétique et la sécurité virale et
microbienne.

IV-Principaux biomédicaments issus des biotechnologies

 Les anticorps monoclonaux
 Les hormones
 Les cytokines
 Les enzymes …ect

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