COURS D’HEMATOLOGIE

TAM-2
PREPARE PAR Mr YENGA VIETER

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 TRANSFUSION SANGUINE
1- LE DON DU SANG

La transfusion sanguine est une discipline aux confins de l’hématologie et de l’immunologie :

elle implique la médecine, la biologie, la bio-industrie et la sociologie ; elle repose sur
l’éthique.

La transfusion sanguine consiste à administrer le sang ou l’un de ses composants (globules

rouges, plaquettes, granulocytes, plasma, protéines) provenant d’un ou plusieurs sujets
appelés « donneurs », à un ou plusieurs sujets malades appelés « receveurs ».

L’élaboration de produits cellulaires dits labiles, nécessaires au traitement des malades,

n’est possible que par la mise en œuvre d’une chaîne de solidarité dont le premier maillon
est constitué par les donneurs de sang bénévoles.

La mise à disposition des produits doit obligatoirement répondre à des règles de bonnes
pratiques transfusionnelles : prélèvement, préparation, qualification biologique, distribution
et indications cliniques. Le respect de ces règles est une nécessité absolue.

Le plasma permet la préparation d’albumine, de facteurs de coagulation et

d’immunoglobulines.

2-LA SELECTION DU DONNEUR DE SANG

Le don de sang sain passe donc par l’identification des donneurs à faible risque, leur
recrutement, leur sélection et leur rétention.
La sélection médicale précède le prélèvement sanguin.
Elle se déroule dans un service réservé au donneur, chargé entre autre de la promotion du
don, du recrutement et de la collecte de produits sanguins. La sélection médicale constitue
la première étape de la sécurité du produit sanguin et est particulièrement importante
lorsque les tests de dépistage ne peuvent pas encore identifier le donneur infecté (au
cours de la période de préséroconversion). Elle vise à éliminer au sein d’un groupe de
donneurs à faible risques ceux qui présentent un risque pour eux-mêmes ou pour le
receveur.
La sélection médicale se déroule en quatre phases essentielles : Le counselling pré-don qui
permet l’information du donneur sur les comportements à risque (I), et l’auto-exclusion (ii).
L’entretien sur l’histoire médicale à travers un questionnaire pré-rempli et discuté avec le
médecin pour s’assurer de l’absence d’antécédents médicaux à risque tant pour la sécurité

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du donneur que pour celle du receveur (iii) L’examen physique qui complète l’entretien (iv)
et la phase d’inclusion/exclusion qui sélectionne le candidat au don à l’issue de la
concertation. Le donneur sélectionné est accepté pour le prélèvement, et les produits
sanguins orientés vers le laboratoire de préparation ou de qualification biologique.

3 - LE PRELEVEMENT SANGUIN

3.1. Généralités

*Qu’est-ce que le prélèvement sanguin en transfusion ?

C’est la procédure technique qui consiste à collecter dans une poche adaptée une
quantité de produits sanguins (sang total ou composants sanguins d’aphérèse) à
partir d’une veine périphérique d’un donneur de sang en vue d’une transfusion. Il
s’accompagne habituellement du prélèvement d’une petite quantité de ce sang
dans des tubes, destinée aux analyses biologiques.
* Quel est son but ?
Le prélèvement constitue la première étape du processus de production des
composants sanguins. Il vise à obtenir une quantité de composants sanguins
suffisante pour :
 L’approvisionnement des unités de soins
 L’approvisionnement des laboratoires de préparation des
médicaments dérivés du sang (essentiellement le plasma)
 Le contrôle de qualité des unités de sang collectées les analyses
biologiques (sang prélevé dans les tubes) et plus rarement, le sang
prélevé sert à la recherche. Le prélèvement doit se dérouler de telle
sorte à éviter les complications du don et les appréhensions négatives
chez le donneur. Il est indispensable d’arriver à collecter du sang sans
faire disparaitre, chez le donneur, l’envie de revenir.
*Qui prélève-t-on ?
Après avoir été informé et sensibilisé, le donneur de sang est sélectionné au
cours d’un entretien médical sur la base d’un questionnaire et d’un examen
physique. Cette sélection vise à garantir :
• Le caractère bénévole, anonyme, volontaire et responsable du don.
• La sécurité du receveur
• La tolérance du donneur
• Un approvisionnement suffisant et efficace

Les prélèvements sont effectués chez des sujets ne présentant pas de contre-
indications médicales au don de sang. Les critères de sélection tiennent compte
de :

 L’âge du donneur (habituellement entre 18 et 60 ans)

 Son poids (≥50kg)
 Sa tension artérielle (diastolique comprise habituellement entre 50 et
100mmHg, systolique entre 100 et 160mmHg) sa concentration sanguine
en hémoglobine (habituellement comprise entre 11 et 18 g/dl)

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  Ses antécédents médicaux (y compris les maladies infectieuses)
 Ses antécédents chirurgicaux
 Ses antécédents médicamenteux
 Son état général de santé au moment du don
 Le délai entre le dernier don et le don actuel (au moins 3 mois chez
l’homme, et au moins 4 mois chez la femme)
 L’absence de comportements à risque

*Qui effectue le prélèvement ?

Il est nécessaire de disposer d’un personnel qualifié et en nombre suffisant pour

réaliser parfaitement le prélèvement que les donneurs redoutent : ce sont des
techniciens de laboratoire, des techniciens adjoints de laboratoire et des
infirmiers formés à la pratique du prélèvement sanguin. Les fonctions du
personnel doivent être attribuées par le biologiste responsable qui coordonne
l'activité de prélèvement. Les prélèvements effectués chez les enfants ou
destinés à l’autotransfusion doivent être effectués autant que possible par le
biologiste lui-même.
3.2. La préparation du prélèvement
3.2.1. Préparation du local de prélèvement
Il est indispensable que le prélèvement se déroule dans un local propre, spacieux,
aéré, bien éclairé et calme. Un confort supplémentaire favorise la détente,
participe à la fidélisation et limite les effets indésirables liés au stress. Dans tous
les cas, le local doit être aseptisé une à deux fois par jour (sol et plan de travail)
à l'aide d'un produit adapté (par exemple l’eau de javel diluée à 1-5g/l.) En cas
de contamination accidentelle du local de prélèvement, la désinfection doit être
renouvelée immédiatement. Des toilettes et un point d’eau doivent être
disponibles à proximité du local de prélèvement.
3.2.2. Hygiène du personnel
L’hygiène, la santé et la protection du personnel doivent faire l’objet d’une
procédure rédigée par les responsables. Des dispositions doivent être prises pour
éviter la contamination du prélèvement :
- Le port d'une blouse propre est obligatoire
- Le lavage suivi de la désinfection des mains avec des produits
adaptés systématiquement en cas d’accident d’exposition au sang (AES)
est obligatoire. On peut se contenter d’une bonne désinfection cutanée
avec une solution hydroalcoolique avant chaque prélèvement.
- Si possible, le personnel de prélèvement doit pouvoir bénéficier
d’examens médicaux simples qui garantissent leur bonne santé quand ils
sont dans l’exercice de leur fonction. Ils doivent être normalement
vaccinés contre certaines affections comme l’hépatite virale B ou le
tétanos.

3.2.3. Choix du matériel

Le matériel de prélèvement comprend principalement des gants, du coton, du
ruban adhésif, un antiseptique cutané, des aiguilles, des tubes, des poches de

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sang et des plateaux. La poche et sa tubulure doivent être stériles. Il est
indispensable de vérifier que la date de stérilisation est valable, que la date de
péremption du dispositif de prélèvement n'est pas dépassée et que l'emballage de
protection est intact. Si plusieurs poches sont emballées dans une feuille
d’aluminium, la péremption est généralement limitée à 10-15 jours après
ouverture de cette feuille ! La procédure de prélèvement doit mentionner la liste
du matériel nécessaire. Elle doit tenir compte du nombre de fauteuils et de
l'affluence des donneurs.
Le don de sang peut être effectué de plusieurs manières : le don de sang total ou
le don d’aphérèse.
Le don de sang total est effectué dans une poche simple, double ou triple, avec
ou sans filtre à déleucocyter, en fonction des produits sanguins à préparer. Dans
tous les cas, la poche de prélèvement choisie doit être atoxique, apyrétique,
flexible, transparente, soudable, résistante à des températures comprises entre -
40°C et 100°C, à la pression et enfin la moins coûteuse.
Chaque poche principale ou satellite doit mentionner obligatoirement :
 L’anticoagulant utilisé et sa composition (habituellement le citrate)
 La contenance de la poche (habituellement 500mL pour l’adulte,
100 à 200 ml pour l’enfant)
 La solution de conservation : elle doit permettre de conserver les
composants sanguins le plus longtemps possible en gardant leur meilleure
qualité. Elle doit être choisie de manière à assurer un rythme
D’approvisionnement adapté à la demande des unités des soins mais aussi tenir
compte des moyens financiers de la banque de sang (Tableau I.)
 La solution additive éventuelle
 La date de péremption de la poche vide
 Le produit sanguin qui correspond à la poche
Les noms et adresses du fabricant
Le numéro du lot.
L’intégrité de la poche doit être parfaite jusqu’aux tubulures ainsi que la couleur
et la texture de ses composants.
Chaque prélèvement doit s’accompagner d’au moins un tube de 5mL de sang sur
EDTA (tests hématologiques et immuno-hématologiques) et un tube de 5mL de
sang sans anticoagulant (dépistage des germes pathogènes, tests
immunohématologiques et sérothèque).
La poche de sang de chaque donneur est individuelle : on doit y porter
obligatoirement (enregistrement électronique, code à barre ou manuscrits) les
numéros du donneur et du don, le groupe sanguin, les dates et heures de
prélèvement et de péremption. D’autres tests infectieux (ITT dépistés) ou
immuno-hématologiques (recherche d’agglutinines irrégulières, titre des
anticorps etc…) peuvent être inscrits sur la poche.

3.5. Le volume à prélever.

Le volume de sang prélevé dépend du poids, de la taille et du sexe du donneur,

mais également du type de poche. Il doit généralement être compris entre 430ml
et 500ml sans jamais dépasser 13% du volume sanguin total. Les donneurs de moins
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de 50kg et âgé de moins de 18 ans ne seront pas prélevés sauf indication
particulière.
Le volume prélevé est calculé selon la formule suivante
:

Formule de Mollison :
Volume Sanguin Total (Sexe féminin) =
0,3561T³+0,03308P+0,1833
Volume Sanguin Total (Sexe masculin)
=0,3669T³+0,03219P+0,6041
T = Taille (m) et P = Poids (kg)

NB : Nous pouvons considérer également, Le volume maximal prélevé lors du don est
de 8ml/kg.
La compensation des pertes subies lors d’un don de sang total s’effectue normalement en
quelques semaines.
3.6. Le transport et conservation du sang total.
Le sang prélevé doit être rapidement acheminé au laboratoire d’analyses pour
être qualifié et préparé. Si le prélèvement se fait en collecte mobile, le sang est
transporté dans des containers jusqu’au laboratoire de préparation de ses
composants. Il doit être conservé ainsi entre +18°C et 20°C pendant 4H pour
permettre aux composants de se stabiliser et favoriser l’action bactéricide des
leucocytes. Ensuite, après validation, il peut être conservé tel quel (sang total)
entre +2°C et +6°C pendant environ 35 jours (selon le type d’anticoagulant). S'il
doit être préparé, il peut être conservé entre 20°C et 24°C pendant un maximum
de 6 heures. La température de conservation doit être rigoureusement respectée
pour minimiser l'altération progressive des facteurs de coagulation, de la viabilité
des globules rouges.

Dans tous les cas, la chaine de froid doit être rigoureusement respectée, depuis
le prélèvement jusqu’au lit du receveur en passant par la préparation des
produits sanguins. Le processus doit utiliser en permanence des thermomètres de
laboratoire et des relevés de températures deux à trois fois par jour.

3.7. Les complications du prélèvement.

La gestion des complications du prélèvement est sous la responsabilité du
biologiste préleveur. Elle doit faire l’objet d’une procédure qui vise à la
prévention, au diagnostic et à la prise en charge de ces complications. La
rédaction d’un rapport d’incident est obligatoire. Il peut se faire sur la fiche de
prélèvement. On distingue 3 groupes de complications immédiates du
prélèvement :

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  Les lésions du bras : hématome, ponction artérielle et lésion d’un nerf sont
les plus fréquentes
 Les malaises légers à modérés : syncope vagale, hyperventilation liée à
l’angoisse ou à la douleur, vomissements, vertiges et nausées liées à
l’hypoglycémie, aux repas trop copieux ou aux locaux surchauffés
 Réactions sévères ou très sévères : convulsions, choc anaphylactique,
collapsus, embolie pulmonaire, arrêt cardiaque… Elles nécessitent une
réanimation médicale d’urgence.
La prise en charge des complications doit être initiée immédiatement par le
préleveur, suivi obligatoirement d’une assistance médicale entretemps sollicitée
(Tableau V). Il est important d’isoler le donneur de sang, pour éviter une
contagion « psychologique » des autres.

4-. LA COMPOSITION DU SANG

Le sang se compose de cellules et de plasma.

Le plasma contient des protéines diverses, dont :

§ Les immunoglobulines,
§ L’albumine,
§ Les facteurs de coagulation.

Les cellules du sang se divisent en trois catégories :

§ Les globules rouges qui transportent

l’oxygène des poumons aux tissus et
captent le gaz carbonique qui est éliminé
ensuite par les voies respiratoires ;

§ Les globules blancs qui défendent

l’organisme contre les agressions des
microbes, bactéries et virus ;

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 § Les plaquettes qui empêchent le saignement en
colmatant les lésions des vaisseaux.

5 : DIFFERENTS
PRODUITS
SANGUINS LABILES

1. Généralités sur les produits sanguins labiles

Les produits sanguins labiles (PSL), issus du sang de donneurs, ne subissent aucune
transformation. Toutes les étapes de préparation des PSL visent à accroître leur pureté et
leur sécurité.

Les produits sanguins labiles (PSL) se caractérisent d’abord par une conservation
limitée dans le temps. Ils diffèrent des produits sanguins stables (PSS), obtenus
par fractionnement du plasma et qui ont une durée de conservation prolongée.
Les PSL sont aussi caractérisés par une présentation en unité (issus d'un ou de
quelques donneurs), des règles de compatibilités à respecter, un risque plus
important de transmission des maladies (car inactivation microbienne limitée) et
une possibilité accrue d'immunisation du receveur.

Les 6 principaux PSL accessibles dans les pays en développement qui vont être
décrits ici sont :
 Le sang total (ST),
 Le concentré érythrocytaire standard (CE), avec ou sans solution additive
-Le concentré érythrocytaire appauvri en leucocytes (CE
Appauvri), avec ou sans solution additive  le concentré
plaquettaire standard (CPS)  le plasma frais congelé (PFC).
Tous ces composants peuvent être obtenus à partir du sang total après
centrifugation (Figure 5) puis séparation. Ceci apporte un gain en sécurité (on ne
transfuse que le composé nécessaire), en rentabilité (2 ou 3 produits issus du
même donneur), et en efficacité (produits concentrés).

6-DEPISTAGE DES PRINCIPALES INFECTIONS TRANSMISSIBLES PAR LA

TRANSFUSION
(sang).
6-1. Dépistage des principales infections
La transmission des maladies infectieuses par le sang est une des complications
les plus redoutées de la transfusion sanguine.

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Les maladies transmissibles par la transfusion sont très nombreuses mais
cinq. Parmi elles sont habituellement dépistées dans les pays en développement :
l'infection à VIH, l'hépatite virale B, l'hépatite virale C, la syphilis et moins
souvent le paludisme. Les agents responsables de ces affections sont tous
transmissibles par voie sanguine, sont présents dans le sang pour une longue
période, présentent une longue incubation au cours de laquelle des signes
cliniques ne sont pas souvent observés. Leur dépistage se fait en routine par la
mise en évidence de leurs antigènes et/ou de leurs anticorps spécifiques. Les
marqueurs sérologiques les plus fréquemment recherchés sont :
- Infection à VIH : Anticorps anti-VIH-1 et anti VIH-2, ou Anticorps
anti-VIH-1 et antiVIH-2 + Antigène P24 (Test combiné).
- Hépatite virale B : Antigène Hbs (AgHBs),
- Hépatite virale C : Anticorps anti HCV ou anticorps anti
HCV+Antigène du core (test combiné)
- Syphilis : Anticorps anti phospholipides (RPR, VDRL) ou anti glyco-
protéiques du tréponème (TPHA).
Le dépistage du paludisme se fait habituellement par la recherche du parasite
directement au microscope (goutte épaisse) ou de ses antigènes par des
techniques immunologiques (histidine-Rich protéine du P. falciparium, ou le
lactate déshydrogénase spécifique du parasite)
La période qui suit la contamination et qui précède la mise en évidence du
marqueur sérologique spécifique correspond à la fenêtre sérologique ou de pré
séroconversion.
Le risque résiduel de transmettre un agent infectieux est principalement lié à
cette fenêtre puisque le test de dépistage fournira un résultat négatif. Un test de
dépistage sera d'autant plus sensible et précoce que son seuil de détection sera
bas. Il permettra alors de détecter plus précocement l’infection.

6-2. LES CONTROLES

A l’occasion de chaque don, le donneur fait l’objet :

contrôle clinique :

§ Entretien médical (un document de préparation à l’entretien médicale

préalable au don du sang) est remis au donneur de sang, lors de
l’enregistrement  Examen général.
Il permet d’éliminer certaines contre-indications au don.

Cette étape est définie comme « l’ensemble des mesures visant à réduire ou à éliminer les
risques immunologiques ou infectieux liés à la transfusion de produits sanguins.

contrôles biologiques obligatoires :

§ NFS
§ dépistage syphilis
§ détection de l’Ag HBs, anticorps anti-HBc
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 § dépistage des anticorps anti VIH1/VIH2
§ dépistage des anticorps anti VHC
§ diagnostic génomique viral : VIH/VHC
§ dépistage des anticorps anti-HTLV1/HTLV2
§ groupe sanguin et phénotype rhésus Kell
§ dépistage des hémolysines Anti-A et Anti-B  recherche des anticorps anti-
érythrocytaires (RAE)
§ dépistage du CMV (cytomégalovirus) non obligatoire.
Et en cas de voyage en zone d’endémie du Paludisme : sérologie anti-paludéenne.

7-TECHNIQUES DE SEPARATION DES COMPOSANTS

*La centrifugation

La séparation du sang total nécessite une centrifugation douce ou forte en

fonction des composés qu'on désire obtenir.

Le résultat de la séparation dépend de la viscosité du plasma, la taille, la forme

et la densité des cellules, ainsi que de la température du milieu lors de la
centrifugation. Ainsi la qualité de la centrifugation souhaitée dépend de :
 sa vitesse : Elle est proportionnelle au rayon de l’axe de rotation. Le
nombre de g (nG) = 1,118 X n2 X r X10-3, avec r (m), n (rpm). Une
centrifugation forte est supérieure à 4000g.
 la température de centrifugation : +4°C est favorable à une bonne
préservation des éléments cellulaires De la disposition des poches dans la
centrifugeuse : un équilibre parfait et stable est indispensable entre les
poches

Figure : L’équilibrage de la centrifugeuse

Bon remplissage

Mauvais équilibrage

*La décantation

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Elle consiste à la séparation physique du plasma surnageant des cellules
(concentré de globules rouges ou concentrés de plaquettes). Elle se fait
manuellement à l’aide une presse qui élimine le plasma dans un conteneur
(circuit ouvert) ou dans une poche satellite (circuit fermé) et conserve les
cellules dans la poche d’origine. La manipulation est rapide et facile mais
nécessite une dextérité relative pour éviter le mélange des composants séparés.

8- : GROUPAGE SANGUIN

Elle consiste à déterminer les caractéristiques immunologiques et infectieuses du

produit sanguin sans modifier sa composition ni ses propriétés. Dans les pays en
développement, c’est essentiellement :
- Le groupe sanguin dans le système ABO et la recherche de l’antigène
D
- La détermination du phénotype dans le système Rh et
Kell
- La recherche des anticorps irréguliers
- Le dépistage de l’infection à VIH, VHB, VHC, de la syphilis, du
paludisme, accessoirement de l’infection à HTLV-1 et au CMV
8.1. Le groupage sanguin

* L’agglutination :
L’agglutination est l’expression visuelle de la réaction immunologique
anticorps/antigène lors de la détermination des groupes sanguins. Elle se déroule
en deux étapes essentielles : - la fixation sur les GR des anticorps spécifiques
- l’agglutination, entre eux, des GR recouverts d’anticorps. Cette
agglutination est facilitée par des conditions adéquates comme un milieu
enzymatique, ou le réactif de Coombs. On la provoque mécaniquement par une
centrifugation ou par un mélange manuel des GR et des anticorps.
Une agglutination peut se faire sur une plaque, dans un tube de verre, dans un
micropuits ou dans un gel. Pour la faciliter, certains milieux diminuent la valeur
absolue du potentiel zêta de répulsion entre les globules rouges (ex: milieu
enzymatique ; milieu albumineux à 20%) et rendent la réaction antigène anticorps
plus forte et plus spécifique. Le réactif LISS (Low Ionic Strenght Solution) permet
quant à lui de réduire la durée de l’incubation en accélérant la vitesse de
fixation de l’anticorps et en augmentant son affinité. Le lavage des hématies à
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l’eau physiologique les débarrasse des résidus plasmatiques et favorise
l’agglutination. Nous n’évoquerons que l’agglutination sur plaque et
l'agglutination en tube de verre. En tube, l’agglutination est confirmée par une
absence de remise en suspension du culot de centrifugation.

Tableau : Principaux résultats de l’agglutination

Ce qu’on voit sur la plaque Ce qu’on voit dans le tube Agglutination SCORE
(ou lame)
1 gros agglutinat 1 gros agglutinat ++++ 12
2-5 Gros agglutinats, dans un 1-5 gros agglutinats dans un +++ 10
sérum clair sérum clair
6-10 agglutinats moyens dans 6-10 agglutinats dans un ++ 8
un sérum clair sérum clair
6-10 agglutinats moyens dans 6-10 agglutinats dans un ++/ double 8
un sérum rose sérum rose population/
hémolyse
Nombreux petits agglutinats Nombreux petits agglutinats + 5
Rares agglutinats à l’œil nu/ Rares agglutinats à l’œil ± 2
Agglutinats nets au nu/ Agglutinats nets au
microscope microscope
Pas d’agglutinats Pas d’agglutinats 0 : Réaction 0
négative ou
hémolyse

Le score de l’agglutination est très important notamment pour apprécier les phénotypes
faibles et évaluer la puissance des anticorps irréguliers.

Lors de l’agglutination, il est important de respecter :

1. La concentration cellulaire indiquée selon la technique (1%,2%,5%)
2. Un excès de GR (suspension trop concentrée) peut rendre la réaction
faussement négative.
3. Le volume de GR demandé (1, 2 ou 3 gouttes)
4. Les paramètres de centrifugation (temps ; vitesse)
5. Les temps d’incubation
6. Les températures d’incubation.
L'agglutination sur plaque (ou lame) de verre est moins spécifique qu'en tube.
Elle peut donner de nombreux faux positifs si la plaque est rayée ou sale. Elle
peut donner des faux négatifs en cas de titre d’anticorps faibles (contre-épreuve
ABO par exemple). Elle est en revanche plus rapide et plus facile (30 à 60
secondes), et permet de révéler facilement une double population. Cette
technique est indiquée en cas d’urgence ou en absence d’équipement pour la
centrifugation mais ses résultats doivent être confirmés par un groupage en
tubes, en microplaque ou en gel. Etant accessible pour plusieurs centres de
transfusion, la méthode en tube est préférable s’il n’ya pas d’urgence.

Figure 2 : Schéma des scores de l’agglutination sur plaque

Score : 12

Score : 10

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Score : 8

Score : 5

Score : 2

Score : 0
* 8-2-Le système ABO en bref.
Le système ABO est le plus important des systèmes de groupes sanguins
érythrocytaires. Les gènes qui codent pour la synthèse des antigènes
membranaires du globule rouge sont transmis héréditairement selon les lois de
Mendel. Les gènes A et B induisent la synthèse d’enzymes (glycosyltransférases)
qui fixeront ou non un sucre spécifique de groupe sur une sorte de matrice
commune (substance H). Dans le système ABO, un individu peut avoir l’une des
expressions phénotypiques suivantes :
-l’antigène A -l’antigène B
-
L’antigène A et l’antigène B
-
Aucun des antigènes A ou B
Il sera dit respectivement de groupe A, B, AB ou O. Le groupe A possède des
sous-groupes A1 (environ 80%) et A2 (environ 20%) qui diffèrent par le nombre de
sites antigéniques membranaires. D’autres variants antigéniques existent mais
sont rares (A3, Am, Ax, B3, Bx…) Un sujet AB pourra dont être A1B, A2B, A3B….
Les anticorps du système ABO sont naturels et réguliers (surtout de type IgM),
et apparaissent autour du 3ème-6ème mois de vie chez tous les sujets qui ne
possèdent pas l’antigène correspondant. Ainsi, un sujet de groupe A aura
obligatoirement l’anticorps anti B, un sujet de groupe B aura un anticorps anti
A, un sujet de groupe O aura un anticorps anti A et un anticorps anti B, et un
sujet de groupe AB n’aura pas naturellement d’anticorps du système ABO. Un
individu qui ne possède pas un antigène est susceptible de développer des
anticorps immuns (IgG) contre celui-ci s’il le rencontre à l’occasion d’une
transfusion, d’une vaccination ou d’une grossesse. Les anticorps immuns issus de
cette stimulation peuvent devenir hémolysants in vivo. C’est ainsi qu’un sujet
de groupe O développant des anticorps immuns anti A et/ou anti B contre des
antigènes A et/ou B est un « donneur dangereux ». Un individu A1 peut
développer des anticorps anti-H (immuns et irréguliers) et un individu A 2 des
anticorps anti-A1 (naturels/immuns et irréguliers). Ces anticorps peuvent
provoquer une agglutination des globules rouges O lors de l’épreuve sérique !!!
Les anticorps IgM de ce système sont spontanément agglutinants en milieu salin à
+4°C.

8-3. Détermination du groupe sanguin ABO (méthode en tubes)

Principe : La détermination d’un groupe sanguin ABO comporte deux épreuves :

une épreuve globulaire (dite de Beth-Vincent) qui permet de rechercher les
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antigènes portés par les globules rouges du sujet testé à l’aide d’antisérums anti-
A et anti-B, et une épreuve sérique (dite de Simonin) qui met en évidence les
anticorps présents dans le sérum à l’aide de globules rouges de phénotype connu.
Dans l’épreuve de Simonin, les globules rouges O Rh négatif servent de contrôle
négatif. Si une réaction est positive avec eux, il faut rechercher des anticorps
irréguliers (RAI) et si possible les identifier (avec un panel d’identification).
Tableau : Principaux résultats du groupage dans le système ABO

BETH VINCENT SIMONIN

Recherche des antigènes Recherche des résultat
érythrocytaires anticorps sériques
Sérums tests Globules rouge test groupe
(GRT)

Anti-A Anti-B Anti-AB Glob-A Glob-B Glob-O

+++ - +++ - +++ - A
- +++ +++ +++ - - B
- - - +++ +++ - O
+++ +++ +++ - - - AB
La distinction entre un sujet A1 et un sujet A2 est possible si l’on dispose d’un sérum
anti H (+++ avec un A2) ou d’un réactif anti-A1 (lectine) Matériel et réactifs :
pipette pasteur et tubes en verre
poire
centrifugeuse
Globules rouges-tests : A1 Rh-, B Rh-, O Rh- à 2,5% et conservés à +4°C
Sérums-tests : anti-A, anti-B, Anti-AB,
Echantillon de sang sur EDTA

La préparation d’une suspension de 2,5% de GR en milieu salin se fait en ajoutant

1,25ml de culot globulaire dans 48,75 mL de solution de Na Cl à 9‰.

Mode opératoire :

Réactifs Anti-A Anti-B Anti-AB Anti-Rh D Glob A Glob B Glob O Auto-test

Couleur Bleu Jaune incolore

1 goutte 1 goutte 1 goutte 1 goutte

Globules
patients à 1 goutte 1 goutte 1 goutte 1 goutte 1 goutte
2,5%

Sérum 1 goutte 1 goutte 1 goutte 1 goutte

patient

GRT 1 goutte 1 goutte 1 goutte

Incuber 15 à 30 minutes à température ambiante (idéalement à +4°C)

Centrifuger à 4000G pendant 1 minute

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 Lire

Noter les résultats dans un registre et sur les poches de composants sanguins

NB: 4000G = 3000trs/min pour un rayon de rotor=25-30 cm

Interprétation :
La présence d’agglutinats indique des réactions positives (1+, 2+, 3+, 4+).
L’absence d’agglutinats indique une réaction négative ou une hémolyse. En
effet, il peut se produire une hémolyse dans le test de Simonin, indiquant la
présence d’anticorps hémolysants chez le donneur. La réaction sera considérée
dans ce cas comme positive 3+.
Des antigènes faibles peuvent exister chez certains individus et leur expression
également affaiblie ; il s’agit des nouveaux-nés, des patients transfusés avec des
globules rouges
O, en cas d'hémopathies malignes…

De même, des taux faibles d’anticorps sont parfois difficilement détectables :

nouveau-nés, hypo ou agammaglobulinémies… Dans d’autres circonstances
(polyagglutinabilité, B acquis, agglutinines froides, autoanticorps…), on peut
noter des discordances complexes entre les deux épreuves. Il faut consulter le
biologiste. En effet, il peut être nécessaire de faire des investigations
supplémentaires (reprendre le groupage sanguin après traitement, changement
de méthodes et de conditions d’analyses en fonction de la cause suspectées). Des
erreurs peuvent aussi être à l’origine de faux positifs ou de faux négatifs. Ce sont
:
- Des particules de poussières dans les tubes ou une contamination
bactérienne de l’un ou l’autre des réactifs
- La contamination issue d’un tube voisin
- Une centrifugation trop longue ou trop forte
- Le lavage insuffisant des globules rouges
- Le non-respect des conditions d’analyses (température, pH, durée
d’incubation)
- L’effet de prozone (proportion de volume non respectée
entre la suspension globulaire et le sérum dans le tube)
- Sérum du malade vieilli ou mal conservé
- La formation de pseudo agglutination (rouleaux) dues à un excès
d’albumine bovine ou à la substance de Wharton (cordon ombilical). Dans
ce cas, les rouleaux ne disparaissent pas après dilution de l’agglutinat à
l’eau physiologique.
Dans tous les cas, recommencer la détermination avec des globules rouges lavés
en respectant scrupuleusement les procédures. Des investigations
supplémentaires peuvent être utiles (données de la clinique, tests de Coombs ou
RAI).

P a g e 15 | 33
La validation du groupe sanguin d'un donneur de sang exige deux
techniques différentes (dont au moins une comporte une épreuve
de Beth-Vincent et une épreuve de Simonin), deux déterminations
effectuées sur deux prélèvements différents, par deux techniciens,
sur deux lots de réactifs différents (règle du 4X2). En pratique, ce
groupe est confirmé après deux dons successifs.

8- 4. Détermination du groupe sanguin Rh D (méthode en tube)

Le système Rh est le système érythrocytaire le plus souvent impliqué dans l’allo
immunisation. Son expression phénotypique chez chaque individu est composée
d’un grand nombre d’antigènes dont de 5 principaux (D, c, C, E et e) sont
couramment étudiés en routine, présents ou absents en fonction de l’expression
allélique des deux gènes D et CE transmis par les parents. Ces gènes sont transmis
héréditairement. Le gène D est transmis sous un mode dominant : un individu
ayant reçu le gène D d’un ou des deux parents sera Rh D positif ; il sera Rh D
négatif si le gène est absent ou non fonctionnel chez aucun des deux parents. Les
sujets qui ne portent pas l’antigène D ou qui portent seulement une partie de sa
structure (sujets dits D partiel) peuvent être exposés à une allo immunisation dont
les complications les plus sévères sont materno-foetales et post transfusionnelles.
Les anticorps anti RhD sont immuns et irréguliers, et apparaissent seulement après
une stimulation allo génique. Ils sont plus souvent de type IgG, agglutinants à
chaud, et parfois hémolysants.

Le principe et la technique de détermination du groupe sanguin RhD sont les

mêmes que pour le système ABO (voir mode opératoire précédent). Cependant,
selon les réactifs, l’incubation peut se faire à température ambiante ou à 37°C
pendant au moins 15 minutes. Elle peut aussi se faire en milieu albumineux (1
goutte d’albumine bovine à 20-30% en plus, avec une incubation à 37°C pendant
15 minutes supplémentaires). La réalisation d'un témoin albumineux est alors
absolument indispensable (ce dernier doit être négatif pour interpréter les
résultats). Le GR test est RhD positif. L’anti D doit être poly spécifique pour
détecter aussi les sujets D partiels. Mais la recherche de l’anticorps anti D est
habituellement effectuée par la technique de RAI (Recherche d’anticorps
irréguliers). La lecture des agglutinations sur plaque peut utiliser un «
rhésuscope » si disponible.
*Cas particulier du D faible (anciennement dénommé Du)
Un donneur D faible possède très peu de sites antigéniques D sur ses globules
rouges. C’est pourquoi le sujet peut apparaitre Rh- ou ± à l’épreuve groupage Rh. La
recherche du D faible est obligatoire chez le donneur de sang D négatif à la première
épreuve. Il n’est pas recommandé chez le receveur de produit sanguin. Pour vérifier
qu’il s’agit bien d’un phénotype D faible, il faut établir une procédure qui consistera
à:
 Effectuer la détermination à 37°C avec des GR lavés, puis

P a g e 16 | 33
  Effectuer une détermination en milieu enzymatique (bromélie,
Papaïne). Si la réaction est toujours négative,
 Laver les hématies et effectuer le test de Coombs indirect (préférer
cette fois ci un anti-D monoclonal, reconnaissant la majorité des D
faibles et une anti globuline poly spécifique)
 Si le test est positif, le sujet est D faible: Un donneur D faible est déclaré D positif
pour le don mais D négatif s’il est un jour receveur de PSL.
S’il est négatif, le sujet est déclaré comme D négatif
*Cas particulier du D partiel

La structure de l’antigène D normal est faite d’une mosaïque de sous-unités

(épitopes). Un donneur de sang est dit RHD partiel lorsque ses antigènes D ne
possèdent pas toutes ces sous-unités. Ces sujets peuvent développer des anticorps
contre les épitopes manquants en cas de sensibilisation. En pratique, la recherche
du D partiel peut être négative si les anticorps utilisés ne reconnaissent que
l’épitope manquant (anticorps monoclonal). Pour vérifier qu'’il s’agit d’un D partiel,
on utilise habituellement des Ac poly clonaux, ou monoclonaux dirigés contre les
épitopes les plus courants.

8.5. La détermination des phénotypes érythrocytaires.

Ceci correspond à la détermination des antigènes érythrocytaires de groupes

sanguins, en particulier dans les systèmes les plus immunogènes :
 Rh ( D,C,c,Cw,E,e),
 Kell (K, k),
 Duffy (Fya, Fyb),
 Kidd (Jka, Jkb),
 MNSs (M, N, S,s), et Lewis (Le a, Leb), ces derniers étant
classiquement concernés par des anticorps dits « froids ».

Le phénotypage est indiqué principalement en cas d'existence d'anticorps

irréguliers chez le donneur ou chez le receveur, chez les malades polytransfusés
et les sujets de sexe féminin en âge de procréer. Lorsqu'on a identifié un patient
immunisé, on doit impérativement lui délivrer du sang présentant un phénotype «
négatif » pour la spécificité anticorps qu’il possède.
En routine, les phénotypage dans les systèmes Rh et Kell sont les plus
couramment effectués car les plus immunogènes. La recherche d’autres
antigènes, le « phénotypage étendu », peut être important à réaliser avant
l'instauration d'un programme transfusionnel régulier chez un malade.

Principe de la méthode en tubes :

P a g e 17 | 33
Il s’agit d’une réaction d'agglutination en tube. Il est indispensable de respecter
pour chaque sérum-test et pour chaque antigène érythrocytaire les conditions
opératoires qui lui sont propres : milieu réactionnel (salin, enzymatique,
albumineux...), Coombs indirect en LISS, température d'incubation (4°C, 20°C,
37°C) et durée d'incubation. Les conditions opératoires sont détaillées par les
fabricants de réactifs. Par exemple, la détermination des phénotypes Rh et Kell
se fait habituellement en Coombs indirect et/ou papaïne à 37°C, les phénotypes
Duffy en Coombs indirect mais jamais en papaïne, et les phénotypes MN du
système MNS en Salin à 4°20°C.

Réactifs et échantillon:

 sérums-tests spécifiques pour chaque antigène recherché

 Bromeline ou papaïne
 réactif de Coombs
 LISS
 milieu salin
 Echantillon de sang prélevé sur EDTA

Mode opératoire:
1. Laver les GR à typer 3X en milieu salin
2. Préparer une suspension à 2,5%
3. Mettre une goutte de sérum spécifique de l'antigène à
déterminer dans un tube
4. Ajouter 1 goutte de suspension globulaire
5. Ajouter éventuellement le réactif de LISS (selon
l'antigène recherché, voir la notice)
6. Incuber à la température et durée recommandées
(dépendent de l'antigène recherché, et de la présence ou
l’absence du LISS)
7. Si le test de Coombs indirect est nécessaire, ne pas
oublier de faire un test de Coombs direct auparavant
(auto-anticorps éventuel)
8. Centrifuger à 3000trs/min pendant 1 minute
9. Lire
10. Enregistrer les résultats

Le test ne sera validé que si un témoin négatif et un témoin positif (obtenu par
exemple à partir des cellules du panel RAI) sont valides dans la série d’analyses
effectuée. En dehors du cas des auto-anticorps, on doit, si possible et en
l’absence de transfusion au cours des 4 derniers mois, confirmer le phénotype du
système correspondant aux anticorps identifiés dans le sérum du sujet.

_8-6. La recherche des anticorps irréguliers (RAI).

P a g e 18 | 33
 Elle se fait habituellement chez le receveur. Le donneur de sang, souvent le
nouveau donneur, peut aussi bénéficier d'une RAI en cas de suspicion
d'immunisation (antécédent de grossesse chez une donneuse RhD négatif ou
antécédent de transfusion).
Les anticorps sont des protéines synthétisées par le système immunitaire
spécifique de l'organisme en réponse à des stimulations par des substances
antigéniques étrangères.

En pratique, on distingue les allo-anticorps, dirigés contre un antigène d'une

même espèce, les auto-anticorps, dirigés contre les antigènes du soi et
accessoirement les xéno-anticorps (ou hétéro-anticorps) dirigés contre les
antigènes d'une espèce différente. Il est aussi important de faire la différence
entre les anticorps dits « naturels » présents spontanément sans « immunisation »
préalable, et des anticorps « immuns », secondaires à une stimulation
immunologique. Les anticorps peuvent être « réguliers » ou « irréguliers ».
Les plus importants et les plus dangereux en pratique transfusionnelle sont les
allo-anticorps, résultat d'une allo immunisation du receveur. Ils peuvent être
libres dans le sérum ou fixés sur les hématies, agglutinants ou hémolysants. En
cas de transfusion de produits sanguins chez un receveur immunisé, ces anticorps
peuvent occasionner des réactions transfusionnelles sévères intravasculaires
prédominantes par activation du complément (anticorps des systèmes ABO,) ou
extravasculaire prédominante (anticorps du système Rh, Jk, Fy…)
.

Principe :

Un panel de 3 types de GRT de groupe O est sélectionné de telle sorte que ces
cellules possèdent à leur surface tous les antigènes nécessaires au dépistage des
anticorps les plus courants et les plus dangereux. La RAI se fait avec trois
méthodes différentes de manière à mettre en évidence les anticorps les plus
courants : le milieu enzymatique à 37°C, la méthode de Coombs indirect en LISS,
le milieu salin à 4-20°C. NB. S’il ne faut en faire qu’une, choisir toujours la
méthode en Coombs indirect.

Matériel et réactifs :

 pipettes en verre
 tubes en verre
 poire
 centrifugeuse
 incubateur à 37°C
 Hématies tests et leur phénotype complet
ème
 Papaïne 1% dilué à 1/20 (avec du salin à 9‰)
 Coombs polyspécifique (anti IgG, IgM et C3)
 Sérum patient ( ! ne pas utiliser le plasma: certains anticorps ont besoin
du complément, lequel est inactivé par le citrate et l’EDTA)

P a g e 19 | 33
Mode opératoire (technique Coombs Liss et en papaïne)

La technique en salin en Liss n’est habituellement effectuée que lorsque la

lecture directe de la réaction ci dessous est positive ou si on suspecte fortement
un anticorps « froid » (Ex : données cliniques, précipité à froid dans le tube de
prélèvement, discordance de résultats en l’épreuve de BethVincent et l’épreuve
de Simonin)

1. Laisser les échantillons et les GR tests revenir à la température ambiante

2. Préparer une suspension de GR test à 2,5%
3. Préparer les tubes et les identifier
Milieu en Liss Milieu en papaïne
4. 1 2 3 1P 2P 3P
5. 2 gouttes de GR tests + 2 gouttes de 2 gouttes de GR tests
Liss
6. 2 gouttes de sérum patient 1 goutte de papaïne***
7. Centrifuger 1 minute à 4000G Incuber 10 minutes à 37°C
8. Faire une lecture directe Ajouter 2 gouttes de sérum patient
9. Incuber 10 minutes à 37°C Mélanger et incuber 10 minutes à 37°C
10. Laver 3X Centrifuger 1 min à 4000G

Lire, Noter le résultat

11. Essorer
12. Ajouter 1 goutte de Coombs polyvalent
13. Centrifuger 1 min
14. Lire
15. Noter le résultat
***Si on dispose de GR déjà papaïnés, seule une incubation en présence du sérum du patient pendant 15min à 37°C est
nécessaire.

Interprétation:
Une RAI négative ne garantit pas l'absence d'anticorps: les anticorps apparaissent
et disparaissent progressivement jusqu'à un seuil indétectable, mais des
lymphocytes mémoire restent présents. La bonne période de recherche des RAI
se situe entre le 7ème et le 21ème jour qui suit l'éventuelle immunisation. Il
n'est pas rare de trouver plus d'un anticorps irrégulier.
Si la RAI est positive, il faut identifier l'anticorps en question. Pour cela, un
panel de 10 cellules tests différentes est au minimum nécessaire.

Le principe de l'identification est identique et le mode opératoire repose

également sur l'utilisation des 3 milieux de réaction. Une auto-épreuve en
Coombs indirect chez le receveur est indispensable (autoanticorps ou
autopapaine). L'identification définitive après la réalisation du panel est
effectuée par le biologiste qui prend soin, lorsque c’est possible, de confirmer
l'identité de l'anticorps trouvé par un phénotypage du receveur.

*Le titre d'un anticorps:

P a g e 20 | 33
 Il est effectué avec des cellules d’expression homozygote pour l'antigène
correspondant à l'anticorps à titrer. Les cellules des patients ou du panel
d'identification peuvent être utilisées après lavage en solution saline. Des dilutions
successives de 2 en 2 (1/2, 1/4, 1/8...) sont faites sur le sérum du patient et une
recherche spécifique effectuée sur chacune de ces dilutions. Le titrage de
l'anticorps doit respecter la technique préconisée par le fabricant. Centrifuger et
noter le titre. Titre = inverse de la dernière dilution donnant une agglutination
> ou = 1+ (score = 5). Un titre >32 est considéré dangereux. Le titre de l'anticorps
anti IgA dans le plasma d’un receveur est important pour ceux qui ont déjà
présenté des réactions immuno-allergiques après transfusion de plasma. Le titre
des Ac anti A et anti B est également important en cas de présence d’hémolysines
chez le donneur de sang

Le plasma frais congelé issu des hommes, sans antécédents transfusionnels est le
moins à risque de contenir des anticorps irréguliers de type IgG chauds.

8.7. Le test de Coombs (ou test à l’anti globuline)

Le réactif de Coombs est une anti globuline dirigée contre la fraction Fc des
immunoglobulines humaines (IgG, IgA, IgM) ou/et certaines fractions du
complément (Ex : C3b, C3d). Des anticorps dits « incomplets » (souvent des IgG)
peuvent « sensibiliser » les globules rouges sans pouvoir provoquer leur
agglutination. Servant de pont entre les extrémités terminales Fc de ces
anticorps, les anti globulines contenues dans le réactif de Coombs servent à
révéler la réaction existante. Certains anticorps fixent facilement le complément
(anticorps des systèmes Rh, Kidd, Lewis, I) et d’autres très peu (Kell, Duffy, P1,
MNs) déterminant ainsi le type de réactif à utiliser (poly spécifique ou mono
spécifique). Le réactif de Coombs permet ainsi la mise en évidence d’anticorps
en cas d’auto-immunisation ou d’allo immunisation et pour la détermination de
certains phénotypes érythrocytaires. En présence d’un milieu spécifique, le
réactif de Coombs est aussi utilisé si la densité antigénique érythrocytaire est
faible, si le titre de l’anticorps est faible, ou si son affinité est insuffisante. Les
globules rouges doivent être bien lavés pour éliminer les protéines sériques avant
d'être mis en contact avec le réactif de Coombs.

8.7.1. Le test de Coombs direct ou test direct à l’anti globuline(TDA)

Principe:

Les globules rouges éventuellement sensibilisés in vivo, du receveur, du nouveau-

né ou du donneur vont être directement mis en présence du réactif de Coombs.
Matériel et réactifs:
 pipettes
 poire
 tubes en verres
P a g e 21 | 33
  centrifugeuse
 réactifde Coombs
 Echantillon de sang prélevé sur EDTA

Mode opératoire:

1. Laver 3X les GR à tester

2. Préparer une suspension à 2,5% en salin
3. Mettre 1 goutte de la suspension lavée dans un tube.
Incuber
4. Centrifuger à 4000G pendant 1 minute
5. Essorer
6. Ajouter 1 goutte de réactif de Coombs
7. Centrifuger à 4000G pendant 1 min
8. Lire

Interprétation:
Une agglutination signifie un test de Coombs direct positif. Le test est négatif s'il
n'y a pas d'agglutination.
Le TDA peut s’accompagner d’un test d’élution des anticorps incomplets suivie
d’une identification et d’une titration (voir RAI). Ceci est en particulier
important lors d'une exploration d'un accident transfusionnel, même si le TDA est
négatif, le test d'élution étant plus sensible.

P a g e 22 | 33
 Qualité d'un anti sérum anti A, Anti B et anti AB:

L'évaluation de tous les réactifs doit en principe être faite à

l'ouverture de chaque lot et lorsqu'on doute de la qualité de la
conservation.
Elle se fait avec des GR lavés et suspendus à 5% dans le salin.
Quatre paramètres permettent de déterminer la qualité d'un

anti sérum :
- la spécificité: le réactif ne contient que l'anticorps
correspondant aux mentions du fournisseur. Il ne réagit pas
avec une cellule qui ne porte pas l'antigène correspondant.
On peut utiliser les cellules du panel d’identification ou de la

RAI, ou des cellules de phénotype connu

- l'avidité: on mesure le temps d'apparition des premiers

agglutinats visibles à l'œil nu au cours d'une agglutination sur
lame. Avec des cellules A et B, ce temps est inférieur à 5
secondes pour l'anti A l'anti B et l'anti AB.
- L'intensité: définie par l'aspect de l'agglutination
obtenue avec le réactif non dilué; elle doit être de 3+
- tre de l'antisérum: il correspond à la dernière dilution
de 2 en 2 de l'anticorps qui a agglutiné à 1+ (score
d’agglutination=5).

Le score total d'un antisérum est la somme des scores d’ale

tigglutination observés dans les différentes dilutions. Il est
normalement ≥50 pour un bon antisérum.

8.7.2. Le test de Coombs indirect

Principe:

Les anticorps recherchés et éventuellement présents dans le sérum du receveur

ou de la mère vont sensibiliser les globules rouges du donneur ou du bébé; la
réaction va être révélée par le réactif de Coombs. Le test de Coombs peut se
faire en milieu Liss
Matériel et réactifs :
P a g e 23 | 33
  GR tests
 LISS
 réactif de Coombs
 Incubateur
 Centrifugeur

Mode opératoire (LISS addition):

1. Préparer une suspension de globules rouges test de 2,5% en

salin
2. Ajouter 1 goutte de sérum du patient
3. Mettre 1 goutte de la suspension globulaire dans un tube
4. Ajouter 1 goutte de LISS
5. Agiter, incuber 10 minutes à 37°C (45 minutes en absence de
LISS)
6. Laver 3X et essorer
7. Ajouter 1 goutte de réactif de Coombs
8. Centrifuger immédiatement
9. Lire. S'il ya un doute reprendre tout depuis le début.

Un contrôle positif est recommandé. Il est composé d’hématies Rh positives

sensibilisées insérées au niveau de l’étape 7.
Interprétation:
Un test de Coombs indirect est positif lorsque qu'il y a une agglutination et
négative en l'absence d'agglutination.

8.7.3. La recherche d’hémolysines chez le donneur de sang « dangereux »

Principe:
Des donneurs de sang de groupe O peuvent développer des anticorps immuns IgG
contre les antigènes A et B lors d’une transfusion de globules rouges ABO
incompatibles, de plasma contaminé par des cellules A, B ou AB, de concentrés
plaquettaires A, B ou AB ou lors d’une vaccination. Ils développent des anticorps
anti A et anti B, chauds, et hémolysants à 37°C. Ces anticorps résistent à la
chaleur (56°C pendant 30 minutes) alors que les anticorps naturels sont détruits.
Le pouvoir hémolysant est révélée en présence du complément apporté par le
sérum d’un cobaye (commercialisé) ou par le sérum frais d’un sujet normal de
groupe AB (préparé au laboratoire).

Matériel et réactifs :
 GRT A et B
 Sérum de sujet AB contenant le complément
 Sérum du patient chauffé à 56°C pendant 30 minutes
 LISS

P a g e 24 | 33
  Incubateur
 Centrifugeur

Mode opératoire (LISS addition):

1. Préparer une suspension de 2,5% en salin des GRT A et B, GRT

témoin O
2. Ajouter 1 goutte de sérum préparé du patient dans chaque tube
A et B
3. Mettre 1 goutte du sérum AB
4. Ajouter 1 goutte de LISS
5. Agiter, incuber 1heure à 37°C
8. Centrifuger et lire
Interprétation:

La présence d’hémolyse des globules rouges A et B sans hémolyse des globules

rouges O témoins signe la présence d’hémolysines anti A ou anti B.

9-REGLES TRANSFUSIONNELLES

La transfusion sanguine est un acte qui sauve la vie mais qui peut aussi entraîner
la mort si toutes les précautions ne sont pas prises. C’est pourquoi on ne doit
transfuser que si on ne peut pas faire autrement, c’est-à-dire s’il n’y a pas une
autre alternative. Un autre point sur lequel on doit insister c’est que tout malade
sous transfusion doit être surveillé minutieusement pendant au moins les 15
premières minutes après la pose de la transfusion en notant toutes les 5 minutes
sur une fiche les paramètres suivants : le pouls, la tension artérielle, la
température, le rythme respiratoire, l’aspect du malade.

9.1. Les indications

Quand transfuser ?
On admet en général qu’il ne faut pas transfuser au-delà de 10g/l de taux
d’hémoglobine et qu'’il faut transfuser du sang total ou le concentré
érythrocytaire quand ce taux est < 7 g/dl. En fait il faut prendre en compte la
tolérance clinique de l’anémie, la rapidité de l’installation de l’anémie, l’âge et
l’état cardiovasculaire du malade. Les anémies chroniques sont de très loin mieux
supportées que les anémies aiguës (hémorragie, hémolyse). Les sujets jeunes, les
sujets avec un système cardiovasculaire en bon état tolèrent mieux l’anémie que
les personnes âgées ou ceux qui ont une anomalie cardiovasculaire ou
respiratoire. On peut ne pas transfuser un malade qui a 4g/dl d’hémoglobine et
transfuser un autre qui a 8 ou 9 g/dl, la tolérance de l’anémie étant le critère
ultime de décision. En effet, quand l’anémie est chronique l’organisme s’adapte
et supporte des taux d’hémoglobine très bas (3 à 4 g/dl par exemple).

P a g e 25 | 33
La transfusion des plaquettes n’est habituellement indiquée qu’en dessous d’un
seuil de 20.000/µl (avec saignements actifs, fièvre, troubles de la coagulation,
hypertension…), de 30.000/µl (avec cathéter veineux central) ou de 50.000/µl
(en cas d’acte chirurgical mineur comme une ponction médullaire ou une
extraction dentaire).
L’indication première de la transfusion plasmatique est le déficit sévère et en
facteurs de coagulation.
Dans tous les cas, les stratégies d’épargne sanguine disponibles doivent limiter
autant que possible le volume de sang transfusé.
Quoi transfuser ?
La règle c’est de donner à chaque patient le composant sanguin dont il a besoin
et uniquement ce dérivé. Si le malade a besoin du sang total, du CE, ou du
plasma on le lui donne et pas autre chose. En l’absence de possibilité de
préparation des PSL, le sang total frais apporte le composant nécessaire mais
expose plus à des complications immunologiques et infectieuses.

Comment transfuser ?
Il faut choisir la veine à prélever. Elle doit être adaptée au calibre de l’aiguille
du transfuseur. Il faut préférer les veines du pli du coude : elles sont aisément
accessibles, de bon calibre et permettent au patient un minimum de mobilité et
de confort. L’asepsie doit être rigoureuse, le sang étant un excellent milieu de
culture.
Le débit et la vitesse de la transfusion dépendent de l’état du malade. Quant il
faut compenser une perte sanguine due à une hémorragie abondante c’est à dire
lutter contre l’état de choc, le rythme doit être rapide. Parfois on est obligé
d’exercer une pression sur la poche de sang (brassard de tensiomètre) pour
accélérer l’écoulement du sang. Mais s’il n’y a pas d’urgence vitale, on doit
utiliser un débit normal.
Dans tous les cas, le débit doit être faible pendant les premières minutes de la
transfusion et augmenté ensuite. Le transfuseur et son aiguille doivent être
changés après une réaction transfusionnelle, lorsque le groupe du sang à
transfuser change, ou si on veut administrer d’autres solutions (colloïdes ou
cristalloïdes). Le calcium contenu dans ces solutions peut en effet provoquer une
agrégation plaquettaire dans le transfuseur. Dans tous les cas, pour éviter la
contamination bactérienne, le transfuseur doit être changé toutes les 12 heures
ou après la transfusion de 4 unités de PSL. Ne pas essayer de « purger le
transfuseur » au risque de l’obstruer d’avantage ou de le contaminer. Aucun
médicament ne doit être ajouté dans le PSL à transfuser !
La transfusion doit commencer dans les 30 minutes suivant le retrait de la poche
du réfrigérateur. Si la transfusion n’est pas faite dans ces délais, la poche doit
être conservée entre +2°C et +4°C. La transfusion doit se faire dans les 4heures.

9.2. La surveillance du malade sous transfusion sanguine

L’erreur étant humaine malgré les précautions ci-dessus, elle peut passer
inaperçue. Des accidents graves (en particulier l’hémolyse intra vasculaire
secondaire à une incompatibilité immunologique) peuvent survenir dans les

P a g e 26 | 33
minutes qui suivent le début de la transfusion. Si le malade est bien surveillé, on
peut limiter les conséquences de cette erreur en arrêtant immédiatement la
transfusion de sang incompatible. Les éléments de surveillance sont :
- la tension artérielle et le pouls
- le rythme respiratoire
- la température
- l’aspect du malade (calme, serein, angoissé, agité)
- l’apparition des éruptions cutanées
- le débit urinaire et l’aspect des urines, quand c’est possible
- l’hypersudation, etc.

Les paramètres doivent être mesurés toutes les 5 minutes, au temps T0, c’est-à-
dire avant la transfusion, puis à T5, T10, T15 (voir fiche de surveillance en
annexe). Ces valeurs doivent être consignées sur la fiche de surveillance de la
transfusion sanguine. Dès qu’il y a une modification de l’un ou plusieurs de ces
paramètres, on doit arrêter immédiatement la transfusion et alerter le médecin
transfuseur et la Banque de sang sans délais. Cela exige que le personnel reste à
côté du malade pendant ces 15 premières minutes. L’évaluation du sujet
transfusé doit se poursuivre à la 4ème heure après la fin de la transfusion et même
à la 12ème et 24èmeheures après, pour les patients à risque de surcharge volémique.
Une transfusion sanguine parfaitement compatible ne s’accompagne d’aucune
apparition ou altération des signes précédents.

10-REGLES D’HEMOVIGILANCE
Le système d’hémovigilance permet de recueillir, d’analyser et de diffuser
l’information sur les effets indésirables attendus et inattendus qui surviennent au
cours de l’activité transfusionnelle. Il a pour but d’assurer la prévention des
accidents et incidents transfusionnels. Grâce à un enregistrement systématique
des non conformités par les techniciens de laboratoire et les infirmiers des unités
de soins, une identification de l'origine de l'effet indésirable peut être évidente et
des mesures correctives apportées.

L’hémovigilance est sous la responsabilité d’un comité hospitalier dit « de

sécurité transfusionnelle et d’hémovigilance » (CSTH) chargé d’élaborer les
procédures de prévention, de contrôle, du suivi des incidents et accidents
transfusionnels. Ce comité est aussi chargé de l’information et de la formation du
personnel aux règles de la sécurité transfusionnelle. Il est composé des
responsables de la banque de sang, de quelques chefs d’unités de soins, du
responsable infirmier et du directeur de l’établissement hospitalier.

L’hémovigilance comporte :

 L’enregistrement des incidents et accidents sur une fiche

 Leur déclaration (au Comité d’hémovigilance)
 Leur analyse par ce comité : Cette analyse ne peut pas se faire sans
la traçabilité des informations.

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La notion de traçabilité est ici essentielle : elle permet grâce à des données des
registres et du système informatique, de relier le(s) donneur(s) au(x) receveur(s)
et vice versa, et tous les dérivés et produits en cause dans les complications.
Tous les receveurs ayant été transfusés par du sang provenant d’un même
donneur, et inversement tous les donneurs ayant contribué à la transfusion d’un
même receveur doivent pouvoir être identifiés. Cela suppose un bon système
d’archivage
 Le suivi des receveurs de produits sanguins labiles (le Dépistage du
VIH, de l’hépatite C et B, de la syphilis avant la transfusion puis trois
mois après la transfusion ; recherche d’agglutinines irrégulières (RAI)
avant la TS chez les polytransfusés, les femmes multipares puis trois mois
après la TS).
 L’information des banques de sang et unités de soins pour apporter
des mesures correctives aux défaillances à l’origine de l’incident
Les données indispensables pour l’hémovigilance sont :
• les conditions de prélèvement du produit sanguin
• les renseignements sur les antécédents du donneur
• les résultats de la qualification biologique du produit
• la « fiche d’incident transfusionnel » (type de réaction et délai
d’apparition après la transfusion, imputabilité, gravité, produit
transfusé…)
• dossier médical du patient (antécédents médicaux)
• les résultats d’analyse des échantillons de la sérothèque
• les résultats d’analyses biologiques du produit transfusé et du sang
du receveur après l’incident (groupages sanguins, RAI, tests de
compatibilité, hémoculture….)
Grâce à elles le Comité d ’hémovigilance réalise un « lookback », c'est-à-dire une
rétrospective de toutes actions menées depuis le prélèvement jusqu’à l’incident
transfusionnel, en passant par les tests de compatibilités et le stockage du
produit concerné.

Il est habituellement recommandé d’informer le receveur sur les causes de la

complication, en particulier lorsque leur imputabilité est certaine. Le principe
d’anonymat doit être rigoureusement respecté et le donneur de sang ne doit pas
être tenu pour responsable.
NB : L’hémovigilance est aujourd’hui étendue au processus de prélèvement, le
donneur de sang étant capable de renseigner la banque de sang des jours après
son don (post don), sur les risques liés à son état de santé au moment du don. Ou
en cas de séroconversion  enquête rétrospective.

11- LES ACCIDENTS DE LA TRANSFUSION SANGUINE

Ils sont l’ensemble des effets indésirables du fait de la transfusion, survenant au

cours ou après elle. Ils proviennent entre autres de :
1. Un don de sang contaminé

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 2. Une erreur d’identification des prélèvements sanguins, du donneur
ou du receveur (défaillances de la traçabilité) 3. Une erreur lors des
analyses de laboratoire
4. Une erreur de compatibilité entre le donneur et le receveur
5. Une contamination microbienne du PSL 6. Une non conformités de la
poche (trouée, non
Réchauffée, mal décongelée, périmée, mal étiquetée…)
7. Un non-respect des examens biologiques pré
Transfusionnels (contrôle ultime au lit du malade)
8. L’état immunoallergique incompatible du receveur
Ces risques parfois aboutissent à des complications sévères aggravées par
l’absence de surveillance du receveur pendant la transfusion.
Chaque hôpital doit disposer de procédures de prises en charge des accidents
transfusionnels.
On distingue trois types d’accidents : les accidents immunologiques, les accidents
de surcharge et les accidents infectieux. Ils peuvent être immédiats (dans les 24
heures suivant la transfusion) ou retardés (au plutôt dès le 3 ème jour après la
transfusion).

11.1. Accidents immunologiques

Ils sont le plus souvent dus aux incompatibilités immunologiques ABO, RH ou Kell
11.1.1 Accidents immédiats : l’hémolyse intravasculaire aigue

Manifestations :
Dès les premiers millilitres de sang incompatibles (10 à 50 ml) le malade va
présenter : malaise général, frissons, agitations, angoisse, élévation de la
température, douleur lombaire en barre, chute de la tension artérielle pouvant
aller jusqu’au collapsus. Par la suite va s’installer une oligurie pouvant évoluer
vers l’anurie. Si le malade ne meurt pas de collapsus, il risque de mourir plus tard
d’une insuffisance rénale. L’ictère à bilirubine libre apparaît plus tard (dès le
lendemain).

Diagnostic :
La poche de sang doit être acheminée au laboratoire et un prélèvement après
transfusion doit être effectué sur le receveur et également acheminé au
laboratoire. Le diagnostic consiste en la mise en évidence de l’hémolyse intra
vasculaire.
Le diagnostic de l’hémolyse est posé par :
- La teinte rosée du plasma (hémoglobinémie)
- L’hémoglobinurie
Prélever du sang dans un tube à hémolyse avec un anticoagulant et le
centrifuger. S’il y a hémolyse, le plasma surnageant sera rouge porto ou noir.
Dans le cas contraire il sera jaune citrin. S’il s’agit d’une hématurie, on aura un
culot globulaire au fond du tube urinaire et le surnageant sera clair.
- L’élévation des LDH
- La baisse de l’haptoglobine

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Démontrer l’incompatibilité
Sur le prélèvement pré transfusionnel du receveur et conservé au labo :
 Vérifier le groupe sanguin
 Vérifier la compatibilité avec la poche de sang Sur le
prélèvement post transfusionnel :
 Vérifier le groupe sanguin

 Réaliser un test de Coombs direct

 Rechercher les anticorps irréguliers
 Réaliser au besoin des examens supplémentaires
(Bilirubine, LDH, Haptoglobine, hémoculture) Sur la poche de sang
transfusée :
 Vérifier le groupe sanguin
 Mettre en culture
Tous les résultats doivent être reportées dans le dossier médical du malade et
analysés communément par l'unité des soins et le laboratoire.

La prise en charge de l’incompatibilité immunologique aigue inclut :

 Arrêt de la transfusion
 Maintien de la voie veineuse
 Donner de l’oxygène
 Sonde urinaire
 Traitement du choc ou du collapsus (y compris
corticothérapie)
 Exsanguino-transfusion si hémolyse importante

11.1.2-Accidents retardés : hémolyse extravasculaire

Ils se manifestent par un ictère, l’anémie et une fièvre en moyenne vers le 3 ème
jour après la transfusion inefficace. Il s’agit d’une hémolyse lente extravasculaire
et moins expressive cliniquement, secondaire à une allo immunisation souvent
anti Kell ou anti Duffy. A cause de leur faible taux sériques, ces anticorps
peuvent ne pas être détectés lors des tests de compatibilités.
11.1.3Les Autres accidents immunologiques
Ce sont :
La Réaction frissons – hyperthermie
Elle est fréquente et est due a une incompatibilité dans le système HLA ou à une
immunisation anti-protéique, et quelques fois à des substances pyrogènes
provenant du matériel de transfusion ou aux solutés de la poche (anticoagulants,
solutions de conservation). Elle survient quelques minutes après le début de la
transfusion et se manifeste par une sensation de froid intense avec frissons,
suivie quelques fois d’une élévation de la température d’au moins 1°C par
rapport à la température avant la transfusion. La prévention consiste à transfuser
du sang déleucocyté. Lorsque ces réactions sont discrètes, il faut ralentir la
transfusion et administrer des antihistaminiques. Lorsqu’elles sont modérées ou
sévères, un arrêt de la transfusion s’impose suivie d’une administration de
corticoïdes. L’indication de la transfusion doit être réévaluée après

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l’amélioration clinique du patient et l’exclusion d’une incompatibilité
immunologique majeure.
Les Réactions allergiques : elles sont très fréquentes et dues le plus
souvent à une intolérance aux protéines plasmatiques, aux anticorps (anti
IgA, anti HPA) ou aux médicaments allergisants contenus dans le sang du
donneur. Ce sont : urticaire, prurit, plaques érythémateuses, parfois œdème
de Quincke ou choc anaphylactique. Lorsque ces réactions sont discrètes, le
traitement est basé sur l’utilisation d’antihistaminiques et de corticoïdes. Si
elles sont modérées ou sévères, un arrêt de la transfusion s’impose jusqu’à
l’amélioration clinique du patient. La transfusion du sang déplasmatisé est
alors recommandée.
L’oedème pulmonaire lésionnel post-transfusionnel ou TRALI (transfusion
related lung injury). Il est parfois dû à une libération des cytokines par des
granulocytes du receveur suite à une incompatibilité granulocytaire HLA ;
des anticorps anti-leucocytes sont alors présents dans le produit sanguin
transfusé. Dans les autres cas, une origine immunologique ne peut pas être
prouvée.
Le Purpura aigu post transfusionnel dû à la destruction des plaquettes du
receveur. Le traitement est basé sur l’utilisation de corticoïdes. Des
échanges plasmatiques peuvent être faits dans les cas graves
La Réaction du greffon contre l’hôte (GVH) : Il survient chez le receveur
immunodéprimé (congénital ou acquis : prématurité, cancer,
chimiothérapie, déficit congénital en immunoglobulines…). Le traitement
consiste en une corticothérapie à hautes doses. La prévention consiste en
l’irradiation des composants sanguins avant transfusion.
L’incompatibilité protéique due à des anticorps anti-IgA chez un receveur
déficitaire en IgA. Il peut provoquer un choc anaphylactique. Le dosage des
IgA dans le plasma du donneur et la sélection de donneurs déficitaires en IgA
est une mesure préventive pour les transfusions ultérieures. La prise en
charge se fait en unité de réanimation.
L’embolie pulmonaire secondaire à la migration d’un caillot ou d’un
embole gazeux dans les vaisseaux pulmonaires (tubulures mal purgée,
embout mal adapté à l’aiguille)
l’alloimmunisation du receveur (contre des antigènes érythrocytaires,
leuco plaquettaires, protéiques y compris le facteur anti hémophilique A ou
B)
11.2 Accidents de surcharge
Ce sont :
La Surcharge citratée avec hypocalcémie : elle se voit en cas de
transfusion massive et d’exsanguino-transfusion (adulte ou nouveau-né).
L’hypocalcémie entraîne l’accélération du rythme cardiaque, quelquefois
des paresthésies, bradycardie et trémulations musculaires. L’injection du
gluconate de calcium permet habituellement de régulariser la situation.
La Surcharge potassique : le potassium provient de la lyse des globules
rouges vieillis. Il faut éviter de transfuser du sang conservé trop longtemps,
surtout chez l’enfant, et surveiller la kaliémie en cas de transfusion massive.

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 L’Acidose : on l’observe aussi en cas de transfusions massives. La
transfusion de culots globulaires plutôt que du sang total en cas d’anémie
est recommandée.
L’Hémosidérose : c’est la conséquence de la surcharge en fer. Elle se voit
chez les polytransfusés chroniques. Le traitement préventif consiste en
l’administration de la déféroxamine à tous les polytransfusés chroniques.
La surcharge volémique : elle est provoquée par des transfusions rapides
ou massives. Les signes cliniques sont : céphalées, sensation de pression
thoracique, dyspnée, parfois œdème aigu du poumon. Le traitement consiste
en l’arrêt de la transfusion, la mise du malade en position assise et
l’utilisation de diurétiques. La prévention consiste à transfuser uniquement
les culots globulaires chez les insuffisants cardiaques et respiratoires. La
transfusion doit être lente.
11.3. Accidents infectieux
11.3.1 Accidents immédiats

Causes :

Cet accident plus rare que l’accident immunologique et cependant redoutable. Il

est dû à une libération dans le sang d’une endotoxine bactérienne. Les germes en
cause sont plus fréquemment les entérobactéries, les cocci, le bacillus ou les
corynébactéries. Ils se retrouvent chez le receveur suite à :
1. Un non-respect de l’asepsie lors du prélèvement du sang.
2. Une poche de sang contaminé (éventualité très rare) par exemple,
en cas de rupture d’intégrité de la poche
3. Un non-respect de la chaîne de froid (sang conservé longtemps à la
température ambiante, cas le plus fréquent)
4. Une bactériémie initiale du donneur

Manifestations
Dès les premiers millilitres de sang transfusés, le malade va présenter : malaise,
agitation, angoisse, accélération du pouls et du rythme respiratoire, élévation de
la température, douleurs abdominales, nausées, vomissements, diarrhées liquides,
cyanose+++. Cette symptomatologie digestive et la cyanose sont les éléments de
diagnostic différentiel avec l’accident de type immunologique.
Les manifestations observées sont dues aux endotoxines bactériennes libérées par
les bactéries.

Diagnostic biologique
Il est caractérisé par :
1. Une absence d’hémoglobinémie
2. Une absence d’hémoglobinurie
3. une goutte du sang incriminé entre lame et lamelle peut montrer
des bactéries mobiles ou immobiles
4. Le frottis du sang incriminé coloré au Gram peut montrer le germe
en cause
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 5. La culture du sang incriminé, isole un germe.

Traitement
Il consiste en :
1. Arrêt de la transfusion
2. Lutter contre le choc (remplissage)
3. Assurer une bonne diurèse
4. Antibiothérapie probabiliste en attendant l’antibiogramme
Prévention
 Asepsie rigoureuse lors du prélèvement
 Surveiller l’intégrité de la poche
 Respecter la chaîne de froid (le sang ne doit pas rester longtemps (>
1 heure) hors du réfrigérateur ou de la glacière.

11.3.2 Accidents retardés

Ce sont les maladies infectieuses secondaires à la transmission des germes

pathogènes lors de la transfusion et développées par le receveur plusieurs jours
après la transfusion : paludisme, hépatites virales, syphilis, infections à VIH, à
Cytomégalovirus ou à Epstein Barr virus, toxoplasmose….

*Quelques Mesures simples à suivre pour éviter les principaux accidents

transfusionnels

1. Faire une qualification infectieuse rigoureuse

2. Faire un groupage sanguin correct du malade et du receveur
3. Faire le test de compatibilité au laboratoire
4. Procéder à la recherche des agglutines irrégulières chez les
polytransfusés et les femmes multipares avant la transfusion
5. Vérifier l’identité du malade et de la poche de sang
6. Vérifier l’étiquette du groupe sur la poche de sang
7. Vérifier la date de péremption sur la poche de sang
8. Vérifier la coloration du sang à transfuser et en particulier la
couleur du plasma surnageant, s’il est trouble, ou rouge porto (hémolyse)
ne pas transfuser
9. Procéder à la vérification ultime au lit du malade avant la
transfusion du groupe sanguin du malade et du donneur avec des
antisérums anti A, anti B, anti AB, anti D.
……………….FIN…….........

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