7971
7971
7971
SKRIPSI
Oleh:
KHALIMATUL ULYAH
NIM. 14630014
JURUSAN KIMIA
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI MAULANA MALIK IBRAHIM
MALANG
2019
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL 96% BEKATUL
(Rice bran) DAN PENGARUH TERAPINYA TERHADAP GAMBARAN
HISTOLOGI PANKREAS MENCIT (Mus musculus) DIABETES
MELLITUS
SKRIPSI
Oleh:
KHALIMATUL ULYAH
NIM. 14630014
Diajukan Kepada:
Fakultas Sains dan Teknologi
Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim Malang
Untuk Memenuhi Salah Satu Persyaratan dalam
Memperoleh Gelar Sarjana Sains (S.Si)
JURUSAN KIMIA
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI MAULANA MALIK IBRAHIM
MALANG
2019
i
PERNYATAAN KEASLIAN TULISAN
menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa skripsi yang saya tulis ini benar-benar
merupakan hasil karya saya sendiri, bukan merupakan pengambilan data, tulisan
atau pikiran orang lain yang saya akui sebagai hasil tulisan atau pikiran saya sendiri,
kecuali dengan mencantumkan sumber cuplikan pada daftar pustaka. Apabila
dikemudian hari terbukti atau dapat dibuktikan skripsi ini hasil jiplakan, maka saya
bersedia menerima sanksi atas perbuatan tersebut.
Khalimatul Ulyah
v
MOTTO
v
HALAMAN PERSEMBAHAN
vi
KATA PENGANTAR
vii
8. Seluruh dosen Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi UIN Maulana
Malik Ibrahim Malang yang telah memberikan ilmu, pengetahuan,
pengalaman, wacana dan wawasannya, sebagai pedoman dan bekal bagi
penyusun.
9. Teman-teman kelompok DM (Marsya dan Nafis) dan semua mahasiswa
kimia angkatan 2014 Fakultas Sains dan Teknologi UIN Maulana Malik
Ibrahim Malang yang telah memberikan motivasi dan informasi kepada
penulis.
Wassalamu’alaikum Wr.Wb
Malang, 11 Januari 2019
Penulis,
Khalimatul Ulyah
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL...............................................................................................i
LEMBAR PENGESAHAN .................................................................................. ii
HALAMAN PERSETUJUAN ............................................................................iii
LEMBAR ORISINALITAS ................................................................................iv
MOTTO .................................................................................................................v
HALAMAN PERSEMBAHAN ..........................................................................vi
KATA PENGANTAR ........................................................................................vii
DAFTAR ISI ......................................................................................................... ix
DAFTAR TABEL ................................................................................................ xi
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xii
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xiii
ABSTRAK .......................................................................................................... xiv
ABSTRACT ......................................................................................................... xv
الملخص البحث.......................................................................................................... xvi
ix
3.5.2 Penentuan Kadar Air secara Thermogravimetri ..................... 30
3.5.3 Ekstraksi bekatul .................................................................... 31
3.5.4 Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode DPPH (1,1-
difenil-2-pikrilhidrazil) ........................................................... 31
3.5.5 Persiapan Hewan Coba dan Pengkondisian Mencit Diabetes
mellitus ................................................................................... 33
3.5.6 Terapi Hewan Coba ................................................................ 35
3.5.7 Pengambilan Pankreas dan Pewarnaan Hematoxylin Eosin
(HE) ........................................................................................ 35
3.5.8 Analisis Data .......................................................................... 37
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................ 38
4.1 Preparasi Sampel ................................................................................ 38
4.2 Analisis Kadar Air .............................................................................. 39
4.3 Ekstraksi Bekatul................................................................................ 40
4.4 Pengujian Aktivitas Antioksidan Pada Sampel .................................. 42
4.4.1 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum........................... 42
4.4.2 Pengukuran Aktivitas Antioksidan Pada Sampel ................... 43
4.5 Potensi Ekstrak Etanol 96% Bekatul Sebagai Antidiabetes Terhadap
Mencit (Mus Musculus, L.) Diabetes Mellitus ................................... 48
4.5.1 Pengkondisian Mencit Diabetes Mellitus ............................... 48
4.5.2 Pengaruh Esktrak Etanol 96% Bekatul Terhadap Histologi
Pankreas Mencit (Mus Musculus L.) Diabetes Mellitus ........ 50
4.6 Pemanfaatan Tanaman Bekatul Sebagai Antidiabetes dalam Perspektif
Islam....................................................................................................59
x
DAFTAR TABEL
xi
DAFTAR GAMBAR
xii
DAFTAR LAMPIRAN
xiii
ABSTRAK
Ulyah, Khalimatul. 2019. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol 96% Bekatul
(Rice Bran) dan Pengaruh Terapinya Terhadap Gambaran Histologi
Pankreas Mencit (Mus musculus) Diabetes Mellitus. Skripsi. Jurusan
Kimia Fakultas Sanis dan Teknologi Universitas Islam Negeri Maulana
Malik Ibrahim Malang. Pembimbing I: Diana Candra Dewi, M.Si.;
Pembimbing II: Ahmad Hanapi, M.Sc.; Konsultan: Akyunul Jannah, S.Si,
M.P.
xiv
ABSTRACT
Ulyah, Khalimatul. 2019. Test of Antioxidant Activity of Ethanol Extract 96% Bran
(Rice Bran) and Effect of Treatment on Histology of Pancreas Diabetes
Mellitus Mice (Mus musculus). Essay. Department of Chemistry, Faculty
of Science and Technology, State Islamic University of Maulana Malik
Ibrahim Malang. Supervisor I: Diana Candra Dewi, M.Si.; Supervisor II:
Ahmad Hanapi, M.Sc.; Consultant: Akyunul Jannah, S.Si, M.P.
xv
الملخص البحث
العليا ،حليمة .٩١٠٢ .اختبار مضادات األكسدة لمستخلص اإليثانول ٢٩٪النخالة (نخالة
االرز) وتأثير العالج على األنسجة البنكرياس نظرة عامة على الفئران ( )Mus musculusداء
السكري .بحث جامعى.قسم الكيمياء,كليةالعلوم والتكنولوجيافي جامعة اإلسالمية الحكومية
موالنامالك إبراهيم ماالنج المشرفة األولى :ديانا جندرا ديوي الماجستير ,المشرفة الثانية :اعين
الجنة الماجستير ,المشرف الثالث :أحمد حنفي الماجستير.
كلمات االمفتاح :مرض السكري ،نخالة األرز ،والتنعيم ،ومضادات األكسدة ،واألنسجة من
أعضاء البنكرياس
داء السكري هو أكثر متالزمة المراض شيوعا التي تتميز ارتفاع السكر في الدم (ارتفاع
مستويات السكر في الدم) الناجمة عن فشل إفراز األنسولين .نخالة األرز هي أحد البدائل التي
لديها القدرة على أن تكون مضادات السكر ،ويعتقد أنها تحتوي على مركبات مضادة لألكسدة
التي يمكن أن تزيد من حساسية االنسولين .تهدف هذه البحث إلى تحديد نشاط مضادات
األكسدة في استخراج اإليثانول ٢٩٪نخالة األرز وتأثير عالجه على نسيج البنكرياس الفئران الناجم
عن اللوكسان.
هذا البحث بحث تجريب باستخدام الحيوانات التي اختبرت ذكور الفئران البيضاء
)(BALB / Cبالغ من العمر ٣-٩أشهر وزنها ٣١-٩١جر ًاما مع ٥معامالت و ٤مكررات.
كان العالج المستخدم هو السيطرة الطبيعية (دون معالجة) ،والتحكم اإليجابي (الناجم عن
آلوكسان بجرعة ٩١١ملغم /كلغ ب ب) داخل الصفاق ،جرعة السيطرة ( ٠استخراج عالجي
٣٥١مجم /كلغ ب ب) ،جرعة التحكم ( ٩جرعة استخراج ٤١١مجم /كلغ ب ب) ،جرعة
السيطرة ( ٣استخراج الجرعة ٥١١ملغ /كلغ ب ب).استخراج اإليثانول أعطيت ٪ ٢٩نخالة
عن طريق الفم لمدة ٠٤يوما .المعلمات قياس النشاط المضادة لألكسدة ، IC50 ،والجلوكوز
في الدم وعدد خاليا البنكرياس مجهريا.
أظهرت النتائج أن استخراج اإليثانول بنسبة ٪٢٩كان لديه نشاط مضاد لألكسدة بنسبة
٪.٠8.٣١وقيمة ٠.٥81 IC50ملغم /لتر .نتائج معالجة استخراج االيثانول بنسبة ٪٢٩من
النخالة عن طريق الفم بجرعة قادرة على خفض مستويات الجلوكوز في الدم والتأثير على الزيادة في
عدد خاليا البنكرياس في الفئران المصابة بداء السكري بأفضل جرعة من ٤١١ملغم /كغ ب.
xvi
BAB I
PENDAHULUAN
menjadi ancaman utama bagi kesehatan manusia di abad 21. Berdasarkan data
dunia pada tahun 2011 telah mencapai 366 juta orang dan diperkirakan akan
meningkat dua kali lipat pada tahun 2030 (IDF, 2011). Diabetes mellitus merupakan
progresif terhadap struktur sel beta pankreas. Diabetes Mellitus dapat terjadi ketika
pankreas tidak mampu memproduksi insulin yang cukup, atau ketika tubuh tidak
dapat menggunakan insulin yang diproduksi secara efektif. Secara garis besar
diabetes mellitus dibagi menjadi dua kelompok, yaitu diabetes mellitus tipe I dan
Penyakit diabetes mellitus merupakan salah satu penyakit kronik yang tidak
Pengobatan diabetes mellitus yang telah dilakukan yaitu injeksi insulin dan
pemberian obat oral antidiabetes (OAD) yang diketahui memiliki efek samping dan
penyakit diabetes mellitus memicu para ahli untuk mencari obat alternatif dari
bahan alami yang dapat dijangkau oleh masyarakat serta meminimalkan efek
hamba Allah SWT yang beriman, senantiasa diperintahkan untuk berfikir dan
1
2
mencari manfaat dari apa-apa yang diciptakan oleh Allah di muka bumi untuk
pengobatan. Sebagaimana Allah SWT berfirman dalam Al-Qur’an pada surat Qaf
ayat 9:
“Dan Kami turunkan dari langit air yang banyak manfaatnya lalu Kami tumbuhkan
dengan air itu pohon-pohon dan biji-biji tanaman yang diketam” (QS. Qaf: 9).
manusia di muka bumi yakni dengan diturunkannya air dari langit yang membawa
kebaikan dan manfaat serta ditumbuhkannya dengan air itu, kebun-kebun yang
yang dituai (Shihab, 2002). Tujuan diturunkan dan ditumbuhkan pula aneka
tumbuhan adalah agar manusia senantiasa mencari dan mengambil manfaat dari
setiap sesuatu yang diciptakan oleh Allah SWT. Salah satu pemanfaatan tumbuhan
Setiap manusia yang hidup pasti akan diuji oleh Allah SWT misalnya berupa
sebuah penyakit. Maka sebagai hambanya yang beriman juga dibekali sebuah akal
oleh Allah SWT mempunyai kewajiban untuk senantiasa berfikir dan mencari
sesuatu yang ada di bumi tiadalah yang sia-sia. Allah SWT memberikan suatu
penyakit tentu ada penawarnya (obat), hal ini diperkuat dengan hadits yang
ِ ِ ِ
َّ َ ضي اللهُ َع ْنهُ َع ِن النَّبِِّي
ُاء إِال أَنْ َز َل لَه
ً صلى اللهُ َعلَْيه َو َسلِّم َما أَنْ َز َل اللهُ َد ِ َع ْن أ
َ َبى ُه َريْ َرَة َر
اء ِ
ً ش َف
“Tidaklah Allah turunkan penyakit kecuali Allah turunkan pula obatnya.” (HR.
Imam Bukhari No.5678) (Al-albani, 2008).
Sebuah usaha untuk senantiasa berfikir dan mencari manfaat tersebut adalah
pemanfaatan bekatul. Bekatul (Rice bran) merupakan lapisan terluar dari beras
yang terlepas dari proses penggilingan gabah (padi) atau hasil samping
padi yang dipanen di seluruh dunia kurang lebih sekitar 600 juta ton setiap tahun
(Esa, dkk., 2013). Hasil dari penggilingan padi yang melimpah menyebabkan
memiliki banyak manfaat bagi kesehatan, sehingga selama ini hanya dimanfaatkan
sebagai pakan ternak. Oleh karena itu, sehingga perlu adanya pemanfaatan bekatul
lebih luas.
antioksidan yang dapat menurunkan kadar gula darah di dalam tubuh atau bahkan
hampir normal. Adom K dan Liu R (2002) melaporkan bahwa bekatul beras
mengandung total fenol 5,56 µmol/g, asam ferulat total 153,39 µmol/100g,
Flavonoid total 0,92 µmol/g dan aktivitas antioksidan total 71%. Penelitian lain dari
Xu, Z., Hua, N., dan Godber, J (2002) menunjukkan bahwa bekatul beras dari
Bekatul yang digunakan untuk uji coba merupakan ekstrak bekatul. Untuk
Maserasi menggunakan prinsip like dissolve like, yakni zat yang bersifat polar akan
larut dalam pelarut polar dan zat yang bersifat non polar akan larut dalam pelarut
non polar (Khopkar, 2008). Maserasi dilakukan menggunakan pelarut etanol 96%
karena etanol mempunyai titik didih yang rendah (78,5ºC), tidak beracun dan tidak
senyawa antioksidan lebih banyak dibandingkan jenis pelarut organik yang lain.
Widarta dkk (2013) telah melakukan ekstraksi maserasi pada bekatul beras putih
dengan berbagai pelarut yakni metanol pa, etanol 96% dan aqua DM, diperoleh
rendemen aqua DM sebesar 6,42%, etanol 96% sebesar 5% dan metanol pa sebesar
3,91%. Rima dkk (2014) telah melakukan ekstraksi dengan cara maserasi
menggunakan pelarut etanol 96% selama 3 × 24 jam dengan bantuan shaker dan
diperoleh rendemen ekstrak tertinggi yakni 38,55 (%b/b) dibandingkan etanol 70%,
80%, dan 95%. Kelebihan dari metode maserasi adalah biayanya yang murah,
mudah untuk dilakukan dan tanpa pemanasan sehingga tidak merusak senyawa
Musculus) putih jantan yang diinduksi agen diabetagonik. Pada penelitian ini
(2011) aloksan dapat meningkatkan kadar glukosa darah dalam waktu 2-3 hari
menginjeksikan mencit dengan dosis aloksan 5,04 mg/ 20gBB secara intraperitonial
dan rata-rata kadar gula darah (KGD) pada hari ke-4 menunjukkan terjadinya
5
peningkatan KGD mencit sebesar 300 mg/dL. Sinata dan Arifin (2016) juga
melakukan perlakuan induksi aloksan terhadap mencit putih jantan diabetes dengan
di dalam tubuh sehingga menimbulkan kerusakan pada sel β pankreas dan karena
jumlah antioksidan tubuh yang mengikat radikal bebas tidak seimbang sehingga
Antioksidan sekunder diperoleh melalui terapi ekstrak etanol 96% bekatul beras.
menggunakan metode DPPH merupakan metode yang sederhana, cepat dan mudah
Widarta dkk (2013) aktivitas antioksidan bekatul beras putih pada berbagai pelarut
yang sudah diasamkan dengan HCl 37% pH 1 diperoleh pada pelarut aqua DM
menggunakan pelarut etanol 96% yang diasamkan dengan HCl 37% pH 1 dengan
dengan pelarut yang tidak diasamkan sebesar 88,10%. Ulfa, S.M (2016) juga
dengan pelarut etanol 99%, kloroform dan petroleum eter dan menunjukkan bahwa
pada pelarut etanol 99% memiliki aktivitas antioksidan tertinggi dibanding pelarut
kloroform dan petroleum eter sebesar 61,17% pada konsentrasi maksimum 800
ppm. Adanya potensi bekatul sebagai antidiabetes maka pada penelitian ini
dilakukan terapi ekstrak bekatul dengan dosis terapi dikembangkan dari penelitian
Dwinani (2014) dan Arifah (2015) dengan dosis 350 mg/KgBB, 400 mg/KgBB dan
500 mg/KgBB.
(HE) dapat mengetahui Gambaran kerusakan jaringan yang diakibatkan oleh benda
toksik yang masuk dalam tubuh, yakni meningkatnya radikal bebas. Penelitian ini
akan dilakukan untuk mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak etanol 96% bekatul
diabetes mellitus.
diabetes mellitus dan hasil penelitian akan dapat dijadikan sebagai obat alternatif
DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)?
1. Bahan yang digunakan adalah bekatul hasil dari proses penggilingan beras
2. Hewan coba yang digunakan adalah mencit (Mus Musculus) putih jantan
galur BALB/C.
4. Variasi dosis terapi ekstrak etanol 96% bekatul yang digunakan dalam
penelitian ini adalah 350 mg/KgBB, 400 mg/KgBB dan 500 mg/KgBB.
Hematoxylin-Eosin (HE).
8
1.6 Hipotesis
TINJAUAN PUSTAKA
penggilingan padi yang berasal dari lapisan terluar beras yaitu antara butir beras dan
kulit padi berwarna cokelat (Sukma, 2010). Bekatul merupakan produk samping
Gambar 2.1 Skema morfologi gabah kering (Champagne, 1994 dalam Swastika,
2009)
Menurut Susanto (2010) berikut kandungan zat gizi bekatul beras putih yang
9
10
melaporkan bahwa bekatul memiliki banyak manfaat. Hal ini telah dijelaskan dalam
Allah SWT menciptakan segala sesuatu yang ada di muka bumi ini tidak
ada yang sia-sia. Berdasarkan Q.S. An-Nahl: 11 menjelaskan bahwa hanya Allah
dan segala macam buah-buahan dengan air yang diturunkan dari langit sebagai rizki
dan makanan pokok bagi manusia dengan maksud agar menjadi nikmat dan tanda
memikirkannya (Shihab, 2002). Salah satu manfaat dari bekatul adalah dapat
dimanfaatkan sebagai salah satu obat alternatif untuk penyakit diabetes mellitus dan
hal tersebut merupakan salah satu wujud bahwa kita mampu mengambil dan
polar mampu menghambat proses peroksidasi lemak dan mencegah stres oksidatif.
11
Penelitian lain juga telah dilakukan oleh Chen dan Cheng (2006) pada tikus yang
lemak, dan protein yang disebabkan oleh penurunan sekresi insulin atau penurunan
merupakan jenis diabetes yang mengalami kerusakan pankreas berat yang memiliki
ketergantungan pada asupan hormon insulin dari luar. Sedangkan diabetes mellitus
12
diabetes yang tidak memiliki ketergantungan asupan hormon insulin dari luar,
namun jumlah insulin yang disekresikan berkurang, dan pada organ pankreas tidak
hasil pemeriksaan kadar glukosa darah sewaktu 200 mg/dL. Hasil pemeriksaan
kadar glukosa darah puasa 126 mg/dL juga dapat digunakan sebagai patokan
2.3 Antioksidan
2007).
13
a) Antioksidan Alami
secara toksikologi lebih aman untuk dikonsumsi dan lebih mudah diserap oleh
tubuh daripada antioksidan sintesis. Salah satu antioksidan alami yang sering
Vitamin C (asam askorbat) merupakan antioksidan alami yang mudah dan murah
molekul 178 gr/mol dengan rumus molekul C6H8O6, dalam bentuk kristal tidak
berwarna, memiliki titik leleh 190-192ºC, bersifat larut dalam air, sedikit larut
dalam aseton/alkohol dan sukar larut dalam kloroform, eter, dan benzen. Berikut
b) Antioksidan Sintetis
fenolik seperti BHA (butylated hydroxy anisole), BHT (butylated hydroxy toluene),
TBHQ (tersier butylhydroquinone) dan ester dari asam galat, misalnya propil
antioksidan sintetik ini harus memenuhi beberapa syarat, misalnya tidak berbahaya
bagi kesehatan, tidak menimbulkan warna yang tidak diinginkan, efektif pada
Radikal bebas (free radical) adalah suatu senyawa atau molekul yang
mengandung satu atau lebih elektron tidak berpasangan pada orbital luarnya.
reaktif mencari pasangan, dengan cara menyerang dan mengikat elektron molekul
lemak. Oksidasi lemak terdiri dari tiga tahap utama yaitu inisiasi, propagasi, dan
terminasi. Pada reaksi 1 atau tahap inisiasi terjadi pembentukan radikal asam lemak
yang bersifat tidak stabil dan sangat reaktif yang disebabkan oleh hilangnya satu
atom hidrogen. Pada tahap selanjutnya yaitu propagasi (reaksi 2 dan 3), radikal
asam (R∙) lemak yang telah terbentuk pada reaksi 1 akan bereaksi dengan oksigen
15
aldehida dan keton yang bertanggung jawab atas flavor makanan berlemak. Tanpa
(Nugroho, 2007).
R∙ + R∙ →Non Radikal
Gambar 2.4 Reaksi antara radikal bebas membentuk kompleks bukan radikal
16
N N
N* N H
NO2 NO2
untuk menangkap radikal bebas. Salah satu metode yang digunakan untuk
mudah, cepat dan membutuhkan sedikit sampel. DPPH merupakan radikal bebas
sintetik berwarna ungu. Aktivitas peredaman DPPH dari zat antioksidan didasarkan
pada kemampuan zat antioksidan dalam menetralkan radikal DPPH dengan cara
ungu dari larutan DPPH dan semakin aktif zat yang ditambahkan maka larutan
DPPH akan berubah menjadi warna semakin kuning (Muharni, dkk., 2013).
konsentrasi ekstrak uji yang mampu menangkap radikal bebas sebanyak 50% yang
dkk., 2007).
(%) aktivitas antioksidan. Nilai ini diperoleh dengan persamaan berikut (Molyneux,
2004):
𝐴0−𝐴1
% Aktivitas Antioksidan = 𝐴0
x 100%
senyawa yang terkandung dalam ekstrak uji. Semakin kecil nilai IC 50 maka
kemampuan senyawa sebagai penangkal radikal bebas semakin besar (Indranila dan
Ulfah, 2015). Ketentuan kekuatan antioksidan dapat dilihat pada Tabel 2.4 berikut:
antioksidan beras putih lebih rendah dibandingkan dengan beras hitam dan beras
2.4 Aloksan
hidrofilik dan tidak stabil (Gambar 2.6). Sebagai agen diabetogenik, aloksan dapat
subkutan adalah 2-3 kalinya. Memiliki waktu paro pada suhu 37ºC dan pH netral
adalah 1,5 menit dan bisa lebih lama pada suhu yang rendah (Szkudelski, 2001;
Rees dan Alcolado, 2005 dalam Nugroho, 2006). Aloksan memiliki struktur yang
O
NH
O O
NH
O
alloxan
Kerusakan pada sel β terjadi melalui beberapa proses secara bersamaan, yaitu
yang mengandung gugus sulfidril, asam-asam amino sistein, dan protein yang
bereaksi dengan gugus SH. Aloksan bereaksi dengan dua gugus SH yang berikatan
pada bagian sisi dari protein atau asam amino membentuk ikatan disulfida sehingga
(Szkuldelski, 2001).
dapat terakumulasi di sel-sel β sebagai analog yang masuk ke dalam sel melalui
sekresi insulin sehingga menyebabkan peningkatan kadar glukosa dalam tubuh atau
sebagai berikut:
20
Kingdom: Animalia
Filum: Chordota
Kelas: Mamalia
Ordo:Rodentia
Famili: Muridae
Genus: Mus
Spesies: Mus musculus L.
rambut berwarna keabu-abuan atau putih, warna perut sedikit lebih pucat, mata
berwarna hitam, dan kulit berpigmen. Berat badan bervariasi, tetapi umumnya pada
umur empat minggu berat badan mencapai 18-20 gram. Makanan yang diberikan
untuk Mus musculus biasanya berbentuk pelet secara tanpa batas (ad libitum). Air
minum dapat diberikan dengan botol-botol gelas atau plastik dan Mus musculus
dapat minum air dari botol tersebut melalui pipa gelas. Kandang Mus musculus
berupa kotak sebesar kotak sepatu yang terbuat dari bahan plastik (propilen atau
dibersihkan, tahan lama, tahan gigitan dan aman (Smith dan Mangkoewidjojo,
1988).
21
dan tidak memerlukan tempat yang luas. Keuntungan mencit yang tinggi membuat
percobaan dalam model penelitian penyakit pada manusia seperti diabetes mellitus
Organ pankreas terdiri atas eksokrin dan endokrin. Bagian sel-sel endokrin
jaringan ikat retikulum dan berada tersebar diantara asini, yaitu bagian eksokrin
ribuan sel. Pulau Langerhans tampak lebih pucat dibandingkan dengan area
pembentukan spesies oksigen relatif (ROS= reactive oxygen spesies). ROS yang
Laju kerusakan sel beta pankreas dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti
konsumsi diet tinggi karbohidrat dan diet tinggi lemak yang akan menyebabkan
peningkatan glukosa darah dan plasma insulin, dislipidemia serta resisten insulin.
dan banyak sel mengalami apoptosis termasuk sel beta pankreas. Sel beta pankreas
kelarutannya terhadap dua cairan yang tidak saling larut. Prinsip dari ekstraksi
adalah Like Dissolve Like, bahwa sebuah senyawa polar hanya dapat larut pada
pelarut yang polar dan senyawa non polar larut dalam pelarut non polar. Faktor-
faktor yang berpengaruh terhadap proses ekstraksi adalah lama ekstraksi, suhu,
23
jenis pelarut, titik didih, sifat toksik, dan sifat korosif terhadap peralatan ekstraksi
(Khopkar, 2008).
tersedianya waktu kontak yang cukup antara pelarut dan jaringan yang akan
diekstraksi. Proses ini sangat menguntungkan dalam isolasi bahan alam karena
dalam perendaman sampel metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma akan
2006).
yang paling umum dipakai . Prosedur ini digunakan dalam proses pembuatan
preparat histopatologi dari berbagai spesies hewan sakit atau mati clan memerlukan
antara bahan cat (zat warna) dengan bahan yang diwarnai (sel/jaringan).
Hematoksilin merupakan zat yang diambil dari ekstrak getah pohon haematoxylon
dengan bahan lain agar dapat mempercepat proses pewarnaan, yaitu mewarnai inti
sel. Eosin merupakan zat warna pembanding (counter stain) yang digunakan untuk
mewarnai sitoplasma sel, agar pengamatan inti nampak dengan jelas (Sudiana, 2004
eosin (HE) adalah inti yang bersifat akan menarik zat/larutan yang bersifat basa
sehingga berwarna biru. Sedangkan sitoplasma yang bersifat basa akan menarik
Organ pankreas mencit yang normal dapat dilihat pada Gambar 2.10 berikut
(Nubatonis, 2017):
organ pankreas, berbentuk seperti pulau dan banyak dilalui oleh kapiler kapiler
25
darah yang terlihat lebih pucat dibandingkan dengan sel-sel kelenjar asinar yang
terdiri dari duktus kelenjar, bagian eksokron dan bagian endokrin. Kelenjar
dengan sel-sel asinarnya. Bagian sitoplasma dari sel-sel di pulau Langerhans yang
mengambil warna bersifat eosinofilik lemah dan lebih muda pada pewarnaan HE
sehingga sangat mudah untuk dibedakan dengan bagian eksokrin sel-sel asinar serta
daerah pulau Langerhans menunjukkan batas yang jelas. Sel-sel yang terdapat di
dalam pulau Langerhans ada;ah sel alfa dan sel beta. Sel beta berperan dalam proses
sekresi insulin 70% dari sel-sel endokrin pulau langerhans dan terletak di tengah
pulau Langerhans serta mempunyai inti besar dan bulat, sedangkan sel alfa berperan
Sel alfa merupakan 15% dari sel-sel endokrin pulau Langerhans dan terletak
sepanjang bagian perifer pulau Langerhans serta mempunyai inti yang berbentuk
Gambar 2.10 bagian C dan D pada kontrol positif yang dinduksi aloksan secara
(kematian dini sel sebagai akibat adanya kerusakan sel akut atau trauma), selain itu
batas dari pulau Langerhans yang tidak jelas lagi, sel alfa dan sel beta terlihat tidak
jelas sehinggga sulit untuk membedakan antara sel alfa dan sel beta, warna tampak
pucak atau keruh dan ukuran pulau Langerhans yang mengecil (atrofi) (Nubatonis,
2017).
26
ukuran pankreas, atrofi pada bagian eksokrin pankreas, dan atrofi sel-sel asinar di
mellitus tipe II yang terjadi adalah ketidakseimbangan dari sekresi endokrin dan
METODOLOGI PENELITIAN
Maulana Malik Ibrahim Malang pada bulan Februari sampai Agustus 2018.
3.2.1 Alat-alat
ayakan 40 mesh, oven, cawan porselen, neraca analitik, kertas saring Whatman,
penangas air, desikator, batang pengaduk, spatula, bola hisap, pipet tetes, tabung
reaksi, rak tabung reaksi, penjepit kayu, shaker, aluminium foil, penyaring Buchner,
× 40 cm, sarung tangan, tempat air minum, tempat makan, spuit 1 mL, sonde
lambung, jarum suntik, meja preparat, pisau bedah, gunting, pinset, lemari freezer,
3.2.2 Bahan
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah bekatul dari hasil
penggilingan padi beras putih yang diperoleh dari mesin penggilling padi di Desa
Lasem Kab. Gresik Jawa Timur. Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades,
aloksan, ekstrak bekatul, gas N2, NaCl 0,9%, CMC-Na 0,5%, larutan Netral buffer
27
28
Formalin 10%, plastik, alkohol 70%, 80%, 90%, alkohol absolut I, absolut II, xylol
untuk mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak etanol 96% bekatul beras putih dan
mencit (Mus musculus L.) diabetes mellitus. Sampel bekatul diayak dengan ayakan
40 mesh dan diuji kadar air. Serbuk yang diperoleh dimaserasi menggunakan
pelarut etanol 96% selama 3x24 jam. Ekstrak yang diperoleh dipisahkan dari
pelarutnya menggunakan rotary evaporator dan dialiri dengan gas N2. Ekstrak
pekat yang diperoleh dimasukkan ke dalam gelas vial yang dilapisi alumunium dan
disimpan pada suhu 4°C. Ekstrak selanjutnya, diuji aktivitas antioksidan dengan
DPPH (1,1-difenil-hidrazil) pada konsentrasi ekstrak bekatul sebesar 10, 50, 100,
150, 200, 400 dan 800 ppm. Pembanding yang digunakan adalah asam askorbat
(RAL) dengan menggunakan subjek uji sebanyak 20 ekor mencit (Mus musculus
L.) putih jantan galur BALB/C yang memiliki berat rata-rata 20-30 gram, dibagi
secara acak sederhana menjadi 5 kelompok. Mencit putih jantan galur BALB/C
sebagai hewan coba diinduksi dengan senyawa diabetagonik aloksan 200 mg/kgBB
untuk menjadikan hewan tersebut menderita penyakit diabetes mellitus (Sinata dan
Arifin, 2016). Variasi dosis terapi yang digunakan dikembangkan dari penelitian
Dwinani (2014) yakni 350 mg/KgBB, 400 mg/KgBB dan 500 mg/KgBB. Pada hari
29
ke-15 dilakukan pembedahan terhadap mencit (Mus Musculus L.) putih jantan galur
BALB/C diabetes, dan dilakukan pengambilan organ pankreas dengan cara satu
irisan kelenjar pankreas pada tiap ulangan dalam satu perlakuan dan untuk
mikroskop olympus dengan pembesaran 400x per lapang pandang. Perolehan data
dari beberapa perlakuan tersebut kemudian diolah menggunakan uji statistik one
1. Preparasi Sampel
pikrilhidrazil)
6. Terapi variasi dosis terhadap hewan coba (350 mg/KgBB, 400 mg/KgBB
Pankreas
8. Analisis data
30
Bekatul yang digunakan dalam penelitian ini adalah bekatul dari jenis beras
putih hasil penggilingan padi. Bekatul sebanyak 250 gram diayak dengan ayakan
ukuran 40 mesh dan dibungkus dengan alumunium foil. Setelah itu, sampel
diinkubasi menggunakan oven selama 3 menit pada suhu 102 °C, kemudian
didinginkan pada suhu ruang. Sampel kering disimpan pada suhu 4 °C untuk
pada sampel bekatul. Disiapkan cawan porselen kemudian di oven pada suhu 100-
105 °C sekitar 15 menit untuk menghilangkan kadar air yang terdapat pada cawan
menit, kemudian ditimbang berat cawan porselen kosong hingga diperoleh berat
bekatul ke dalam cawan porselen dan di oven pada suhu 100-105 °C sekitar 15
menit untuk menghilangkan kadar air yang terdapat pada sampel. Kemudian sampel
dipanaskan kembali dalam oven sekitar 15 menit dan didinginkan dalam desikator
selama 10 menit dan ditimbang kembali hingga diperoleh berat konstan. Diulang
perlakuan ini hingga diperoleh berat konstan. Kadar air dalam bekatul dapat
(𝑏−𝑐)
Kadar air = (𝑏−𝑎) 𝑥 100%
Perbandingan bahan dengan pelarut adalah 1:6 b/v (Widarta, 2013). Kemudian di-
shaker selama 24 jam dan disaring menggunakan penyaring vacum. Ampas yang
diperoleh dimaserasi kembali sebanyak dua kali dengan perlakuan yang sama.
Filtrat bekatul dipekatkan dengan rotary evaporator. Kemudian, dialiri dengan gas
N2 untuk menghilangkan pelarut yang masih tersisa pada filtrat etanol. Ekstrak
pekat dimasukkan ke dalam gelas vial yang dilapisi aluminium dan disimpan pada
suhu 4°C (Moko dkk., 2014). Kemudian dihitung rendemen dari ekstrak bekatul
𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘
%Rendemen = 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 × 100% ........................................................3.2
pikrilhidrazil)
ditambahkan larutan DPPH 0,2 mM sebanyak 1 mL. Selanjutnya dicari λmaks larutan
pada rentangan panjang gelombang 500-600 nm dan dicatat hasil pengukuran untuk
etanol 96% sebanyak 3 mL. Tabung reaksi ditutup dengan alumunium foil, lalu
diinkubasi pada suhu 37ºC selama 30 menit (Dewi, dkk., 2007). Setelah itu larutan
sebelumnya.
dengan konsentrasi 10, 50, 100, 150, 200, 400 dan 800 ppm. Disiapkan tabung
reaksi untuk masing-masing ekstrak kasar dan diisi dengan 3 mL ekstrak dan
yang dilarutkan dengan konsentrasi tertentu 1:3). Setelah itu larutan ditutup dengan
alumunium foil dan diinkubasi pada suhu 37ºC selama 30 menit, kemudian
dkk., 2007). Perlakuan tersebut diulangi sebanyak tiga kali. Pembanding asam
khusus untuk menyeragamkan cara hidup, makan dan kondisi kandang percobaan,
seluruh mencit diberi pakan komersial dan air secara ad libitum. Sebelum diinduksi
dengan diabetogenik aloksan, mencit terlebih dahulu diukur kadar glukosa dalam
darah dengan pengambilan sampel melalui ujung ekor yang dipotong sedikit,
federer: (n-1)(t-1) ≥ 15, dimana n menunjukkan jumlah ulangan minimal dari tiap
(n-1)(t-1) ≥ 15
(n-1)(6-1) ≥ 15
5n ≥ 20
n≥4
diperlukan adalah 4 ekor mencit untuk setiap kelompok perlakuan. Sehingga jumlah
minimal seluruh sampel yang digunakan adalah 20 ekor mencit. Ketentuan dari
secara peroral.
secara peroral.
secara peroral.
aloksan yang akan diinjeksikan diambil dari larutan stok. Volume yang diambil
disesuaikan dengan berat badan mencit yang akan diinjeksi. Digunakan dosis 200
mg/KgBB yang dilarutkan dalam 1 mL NaCl 0,9% untuk 1 kali injeksi (Sinata dan
alkohol 70%, kulit dicubit hingga terasa bagian ototnya. Kemudian spuit
dimasukkan pada bagian abdomen dan dicoba digerakkan, apabila terasa berat,
berarti sudah masuk pada daerah intraperitonial. Setelah yakin pada daerah
variasi dosis ekstrak bekatul. Perlakuan kelompok D1, D2 dan D3 diberikan ekstak
etanol bekatul dengan dosis yang berbeda yaitu 350 mg/KgBB (KD1), 400
mg/KgBB (KD2) dan 500 mg/KgBB (KD3) yang diberi perlakuan secara oral
Mencit terlebih dahulu dilakukan dislokasi leher dengan cara bagian pundak
mencit ditekan menggunakan benda tumpul dan tarik bagian ekor mencit, pastikan
saat melakukan penarikan hanya satu kali agar tidak menyakiti mencit. Skalpel dan
alat bedah disiapkan untuk membantu mengambil organ pankreas. Setelah mati,
mencit diletakkan pada papan fiksasi dan ditata pada posisi ventral diatas. Organ
pankreas diambil masing-masing 1 irisan kelenjar pankreas tiap ulangan dalam satu
perlakuan selanjutnya direndam dengan larutan buffer formalin 10% sebagai tahap
Mencit kelompok kontrol negatif, kontrol positif, dan hasil terapi ekstrak
bekatul masing-masing dibedah setelah terap terakhir yaitu pada hari ke-15.
organ pankreas difiksasi dengan menggunakan larutan buffer formalin 10% selama
36
dimasukkan ke dalam alkohol konsentrasi bertingkat yaitu alkohol 70%, 80%, 90%,
dimasukkan ke dalam paraffin cair dengan suhu 56ºC selama 2 jam sebanyak 2 kali.
dalam air hangat bersuhu 60°C untuk meregangkan agar jaringan tidak berlipat.
Sediaan kemudian diangkat dan diletakkan dalam gelas objek untuk dilakukan
direndam dalam larutan xylol dengan konsentrasi bertingkat yaitu xylol I, xylol II,
dan xylol III masing-masing selama 5 menit. Kemudian preparat direndam dalam
dalam acid alkohol 1% selama 7-10 celupan lalu direndam dalam aquades seama
dilakukan pengamatan.
37
olympus. Pada setiap pulau langerhans yang dipilih dihitung jumlah sel yang berada
didalamnya tanpa melihat tipe sel yang ada didalamnya karena teknik pewarnaan
HE tidak dapat membedakkan jenis sel yang ada secara spesifik (Sumarsono, dkk.,
baik berupa Gambar, Tabel, dan grafik. Data analisis antioksidan yang diperoleh
(Vitamin C). Setelah didapatkan data persen (%) aktivitas antioksidan pada masing-
masing konsentrasi sampel dan pembanding. Selanjutnya, data persen (%) aktivitas
menggunakan one way ANOVA pada tingkat kepercayaan 5% dan apabila terdapat
perbedaan nyata antar perlakuan dilanjutkan dengan uji jarak berganda Duncan.
BAB IV
Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah bekatul beras putih
lokal sebesar 250 gram yang diperoleh dari penggilingan di daerah Lasem, Gresik
antara sampel dan pelarut menjadi lebih efektif serta mempermudah kelarutan
diinkubasi dengan menggunakan oven selama 3 menit pada suhu 102 ºC. Hal
enzim lipase agar sampel tidak mengalami kerusakan dan dapat bertahan lama.
Menurut Siswanti, dkk (2018) kandungan lemak pada bekatul yang cukup tinggi
sehingga menghasilkan asam lemak dan gliserol yang sangat mudah dioksidasi.
38
39
Penentuan kadar air merupakan salah satu analisis penting dan paling luas
dilakukan dalam pengolahan dan pengujian bahan, karena kadar air berkaitan
dengan kualitas dan stabilitas bahan. Analisis kadar air pada sampel bekatul
thermogravimetri yaitu dengan menguapkan air yang terdapat dalam bahan melalui
proses pemanasan. Penguapan air yang terdapat dalam sampel bekatul dilakukan
pada suhu 100-105ºC hingga diperoleh berat konstan. Selisih kadar air sebelum dan
setelah pengeringan merupakan kadar air yang menguap. Menurut Indah, dkk
(2017) apabila kadar air masih tinggi maka hal tersebut merupakan media yang baik
stabilisasi pada sebuah bahan. Berdasarkan hasil penelitian, kadar air sampel
bekatul diperoleh sebesar 1,211% (b/b) (lampiran 5). Kadar air yang diperoleh telah
tradisional bahwa kadar serbuk simplisia adalah ≤ 10%. Menurut Ketaren (1986)
semakin rendah kandungan kadar air pada simplisia maka semakin tinggi nilai
rendemen ekstrak yang berarti bahwa interaksi pelarut dan sampel bekerja
maksimal. Sedangkan menurut Winarno (1997) dalam Fauziyah (2011) kadar air
umumnya berbanding lurus dengan aktivitas air (aw), yaitu semakin kecil kadar air,
40
maka semakin kecil aw sehingga semakin awet bahan pangan tersebut. Nilai aw yang
kelarutannya terhadap dua cairan yang tidak saling larut yang berbeda, biasanya air
dan yang lainnya pelarut organik. Pada penelitian ini, metode ekstraksi yang
dengan cara merendam sampel uji dalam cairan pada temperatur ruang.
dengan perbandingan 1:6 (b/v). Ulfa (2016) dan Syafitri (2016) melaporkan bahwa
flavonoid. Oleh karena senyawa flavonoid dan tanin bersifat polar, alkaloid bersifat
semi polar, sedangkan steroid dan triterpenoid bersifat non polar. Sehingga etanol
merupakan pelarut yang cocok digunakan sebagai pelarut untuk proses ekstraksi
bekatul. Hal ini sesuai menurut Sa’adah (2015) bahwa etanol merupakan pelarut
yang bersifat semi polar, dapat membentuk ikatan hidrogen antara molekul-
molekulnya. Sehingga dapat menarik seluruh senyawa aktif yang terdapat dalam
bekatul, baik senyawa polar, semi polar maupun non polar. Dalam maserasi, pelarut
akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel, zat aktif dalam rongga
sel karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dan di
luar sel, maka larutan dengan konsentrasi lebih tinggi akan terdesak keluar.
dalam pelarut dengan konsentrasi dalam sel tanaman (Hargono, 1986 dalam
senyawa yang terdapat dalam sampel, sehingga pelarut mampu menembus dinding
sel dan masuk ke dalam rongga sel dan zat aktif dalam sampel dapat terdesak keluar
susunan sel dalam tanaman sehingga zat aktif yang terkandung di dalam sampel
akan terlarut dalam pelarut. Setelah proses ekstraksi, pelarut dipisahkan dari sampel
karena memisahkan endapan dari pelarutnya dari residunya dengan cara menyedot
udara di dalam corong dengan pump Buchner atau pompa vakum sehingga tekanan
didalamnya lebih kecil daripada yang didalamnya sehingga filtrat dapat mengalir
dengan cepat. Filtrat yang diperoleh berwarna coklat kekuningan. Ampas hasil
bertujuan untuk memisahkan antara zat pelarut dengan minyak bekatul berdasarkan
perbedaan titik didih. Prinsip utama dari rotary evaporator terletak pada penurunan
tekanan pada labu alas bulat dan pemutaran labu alas bulat hingga berguna agar
pelarut dapat menguap lebih cepat dengan ketentuan bahwa pelarut yang memiliki
titik didih lebih rendah dibandingkan minyak bekatul akan menguap terlebih dahulu
42
karena pemanasan dan akan diembunkan oleh kondensor yang selanjutnya akan
dialirkan ke wadah penampung limbah, dari proses pemisahan ini akan didapat
ekstrak pekat dari minyak bekatul beserta zat-zat pengotor. Proses evaporasi
dilakukan hingga didapatkan ekstrak etanol 96% bekatul kental. Hasil rendemen
kecoklatan. Hasil ekstraksi maserasi etanol 96% bekatul dapat dilihat pada Gambar
4.2.
besarnya panjang gelombang yang dibutuhkan oleh larutan DPPH untuk mencapai
serapan maksimal. Menurut Rohman dan Gandjar (2007) pengukuran sampel harus
Berdasarkan spektra pada Gambar 4.3, panjang gelombang (λ) maks DPPH
0,2 mM pada penelitian ini adalah 514,9 nm dengan absorbansi 0,241 yang
memiliki warna ungu. Panjang gelombang maksimum yang diperoleh tidak jauh
berbeda dengan penelitian yang telah dilakukan oleh Kuntorini dkk (2010) dan
Hartati dkk (2015) bahwa panjang gelombang maksimum DPPH adalah 515 nm.
Hal ini sesuai menurut Prakash (2001) bahwa panjang gelombang maksimum
DPPH dengan menggunakan pelarut etanol adalah 515 – 520 nm. Panjang
Metode ini menggunakan radikal DPPH sebagai radikal yang akan bereaksi dengan
antioksidan yaitu larutan DPPH 0,2 mM yang dilarutkan pada pelarut etanol 95%.
44
antioksidan pada sampel dan mengetahui absorbansi radikal DPPH pada saat
sebelum direduksi oleh sampel. DPPH memiliki warna komplementer ungu karena
Sampel ekstrak etanol 96% bekatul dengan variasi konsentrasi yang diuji
yaitu 10, 50, 100, 150, 200, 400 dan 800 ppm, ditambahkan larutan DPPH dan
menyatakan bahwa DPPH memiliki kestabilan absorbansi pada menit ke-30 sampai
40. Pada waktu tersebut merupakan waktu yang dibutuhkan oleh radikal DPPH
Perubahan warna yang terjadi yaitu dari warna ungu menjadi kekuningan. Hal ini
sesuai menurut Molyneux (2004) DPPH yang bereaksi dengan antioksidan akan
mengalami perubahan warna dari ungu menjadi kuning yang disebabkan oleh
antioksidan akan bereaksi dengan DPPH yang menstabilkan radikal bebas dan
mereduksi DPPH. Kemudian DPPH bereaksi dengan atom hidrogen dari senyawa
Perubahan warna DPPH dari ungu menjadi kuning juga disebabkan karena
terjadinya transisi n-π*. Keadaan dasar pada transisi ini lebih bersifat polar
senyawa antioksidan maka akan membentuk ikatan hidrogen antara elektron dari
45
atom N dan atom H dari antioksidan. Ikatan hidrogen pada transisi n-π* akan
yang berwarna kuning. Berdasarkan hal tersebut, berubahnya warna dari larutan
esktrak etanol 96% bekatul dari ungu menjadi kuning menunjukkan bahwa ekstrak
etanol 96% bekatul memiliki potensi sebagai antioksidan yang ditunjukkan dengan
spektrofotometri UV-Vis dan diukur pada panjang gelombang 514,9 nm. Selisih
absorbansi kontrol dengan absorbansi sampel yang telah direduksi oleh DPPH
N N
N* N H
NO2 NO2
Gambar 4.4 Mekanisme reaksi DPPH dengan antioksidan (Prakash, dkk., 2001)
diperoleh berupa absorbansi dari kontrol dan sampel yang selanjutnya digunakan
46
untuk menentukan persen (%) aktivitas antioksidan. Hasil persentase ekstrak etanol
120
% Aktivitas Antioksidan
100
80
60 Pembanding (Vitamin C)
0
10 50 100 150 200 400 800
Konsentrasi (ppm)
ekstrak maka semakin besar pula nilai % aktivitas antioksidannya. Menurut Rahayu
ppm sangat aktif dalam meredam radikal DPPH yaitu sebesar 96,098% lebih besar
dibandingkan ekstrak etanol bekatul yaitu 81,830%. Selain persen (%) aktivitas
mampu menghambat proses oksidasi sebesar 50%. Persen (%) aktivitas antioksidan
GraphPad Prism 8 software sehingga didapatkan nilai IC50. Data nilai IC50
Berdasarkan Tabel 4.1 diketahui bahwa nilai IC50 ekstrak etanol bekatul
lebih besar daripada nilai IC50 asam askorbat. Hal tersebut menunjukkan bahwa
ekstrak etanol 96% bekatul memliki kemampuan yang lebih rendah dibandingkan
dengan asam askorbat dalam menghambat aktivitas radikal bebas DPPH. Menurut
Molyneux (2004) jika nilai IC50 suatu ekstrak berada dibawah 50 ppm maka
aktivitas antioksidannya kategori sangat kuat, nilai IC50 berada diantara 50-100 ppm
berarti aktivitas antioksidannya kategori kuat, nilai IC50 berada di antara 100-150
ppm berarti aktivitas antioksidannya kategori sedang, nilai IC50 berada di antara
nilai IC50 berada diatas 200 ppm maka aktivitas antioksidannya dikategorikan
sangat lemah. Sehingga dapat diketahui bahwa ekstrak etanol 96% bekatul memiliki
dibandingkan dengan hasil penelitian dari Ulfa (2016) yang melaporkan bahwa
48
nilai IC50 bekatul beras dengan pelarut etanol 99% sebesar 437 mg/L dan positif
bahwa aktivitas antioksidan ekstrak etanol bekatul memiliki nilai IC50 sebesar 29,27
µg/mL dan positif mengandung senyawa alkaloid, tanin, saponin, steroid dan
flavonoid. Diketahui pada hasil penelitian ini menghasilkan nilai IC50 bekatul beras
putih lokal dengan pelarut etanol 96% sebesar 185,7 ppm (lampiran 7) dan positif
putih jantan (Mus musculus L.) galur BALB/C yang berumur 2-3 bulan dengan
berat badan 20-30 gram, yang sebelumnya diaklimitisasi selama satu minggu agar
dapat menyesuaikan diri dengan lingkungan baru. Pada penelitian ini mencit yang
masing kelompok terdiri dari 4 ekor mencit. Masing-masing diberi makan dan
minum setiap hari secara ad libitum, dan mengganti sekam setiap alas sekam basah
(± 2 hari).
(KN) adalah kelompok yang tidak diberikan perlakuan (hanya aquades), kelompok
kontrol positif (KP) adalah kelompok mencit yang diinduksi aloksan, kelompok
kontrol dosis (KD 1-3) adalah kelompok mencit yang diinduksi aloksan dan diterapi
dengan ekstrak etanol 96% bekatul dengan variasi dosis 350 mg/KgBB; 400
mg/KgBB; 500 mg/ KgBB. Kelompok kontrol positif dan semua kelompok kontrol
49
fresh karena aloksan termasuk dalam bahan yang mudah teroksidasi dan tidak stabil
sehingga perlakuan induksi terhadap mencit dengan warna larutan berwarna merah
jambu dilakukan sesegera mungkin. Apabila larutan aloksan telah teroksidasi maka
larutan aloksan akan mengalami perubahan warna dari merah jambu menjadi
bening. Dosis aloksan yang digunakan dalam penelitian ini adalah 200 mg/kgBB
dan mencit dikategorikan diabetes apabila kadar glukosa ≥ 200 mg/dL. Pemilihan
dosis induksi aloksan sesuai dengan penelitian Sinata dan Arifin (2016) yang telah
secara intraperitonial dengan dosis 200 mg/kgBB dan tidak menyebabkan kematian
terhadap mencit.
penyerapan cepat oleh oksigen, aktivasi NADPH oksidase dan produksi radikal
anion superoksida.
menjadi hidrogen peroksida (H2O2) oleh SOD (super okside dismutase) (Nimse dan
Pal, 2015).
ferinitin, dan mereduksi menjadi ion ferro. Adanya ion ferro dan hidrogen peroksida
membentuk radikal hidroksil yang sangat reaktif melalui reaksi fenton (szkuldezki,
2001).
dan menimbulkan kematian sel (Takasu, dkk., 1991 dalam Widowati, dkk., 2004).
Kerusakan dan kematian sel pada pankreas menyebabkan sel mengalami disfungsi
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh dari ekstrak etanol 96%
bekatul (Rice Bran) terhadap pankreas mencit dalam berbagai variasi dosis yaitu
350 mg/KgBB; 400 mg/KgBB; 500 mg/KgBB. Pankreas merupakan sebuah organ
yang memiliki 2 fungsi utama menjalankan fungsi eksokrin dan endokrin. Eksokrin
mengubah glukosa (gula) menjadi sumber energi. Pankreas mencit diambil setelah
14 hari terapi (hari ke-15). Preparat histologi dibuat dengan metode blok paraffin
mencit kontrol normal, kontrol positif, dan kontrol dosis 350 mg/KgBB; 400
adalah jumlah sel pankreas secara umum. Data pengamatan histologi dapat dilihat
Sel yang terdapat dalam pulau Langerhans ada empat jenis sel (alfa, beta,
delta dan F). Oleh karena hasil pengamatan pulau Langerhans menggunakan
53
mikroskop sel-sel hasil penelitian tersebut tidak dapat dibedakan, sehingga pada
penelitian ini hanya fokus terhadap jumlah sel pankreas. Berdasarkan hasil
penelitian yang terdapat pada Gambar 4.6 diketahui bahwa pada Gambar A
(Kontrol Normal) yakni tanpa diberi perlakuan menunjukkan kondisi sel pankreas
yang normal, terlihat bahwa susunan sel teratur menyebar di dalam pulau
langerhans dan bentuk sel yang seragam. Menurut Zubaidah (2014) pulau
langerhans dikatakan normal apabila terdapat susunan sel endokrin yang teratur
yang menyebar di pulau langerhans dengan bentuk sel yang seragam, bentuk bulat
dan inti sel nampak jelas serta sel-sel tidak mengalami edema (pembengkakan).
Pada Gambar B (Kontrol Positif) yang telah diinduksi aloksan terjadi perubahan sel
dengan susunan sel tidak teratur menyebar di pulau langerhans, bentuk sel tidak
seragam dan adanya ruang kosong pada islet langerhans disebabkan oleh sel telah
sekresi insulin sehingga tidak mampu bekerja dengan baik, sehingga mencit
Sedangkan pada Gambar (C), (D) dan (E) masih nampak ruang kosong akan
tetapi lebih baik dibandingkan dengan perlakuan kontrol positif, akan tetapi kondisi
islet langerhans masih belum seperti kondisi sel pankreas normal. Hal tersebut
dapat terlihat dengan luas area kosong relatif berkurang dan terlihat adanya
perbaikan jaringan yang ditandai dengan adanya pertambahan jumlah inti sel islet
langerhans. Namun pada Gambar (D) yaitu hasil terapi dosis 400 mg/KgBB terlihat
lebih baik dibandingkan Gambar (C) dan (E) ditandai dengan jumlah sel pankreas
lebih padat dan area kosong relatif kecil. Data tersebut dapat dilihat pada Tabel 4.2.
54
Tabel 4.2 Jumlah sel pankreas mencit sesudah terapi ekstrak etanol 96% bekatul
Perlakuan Rata-rata ± SD
Kontrol Normal 86 ± 15.77
Kontrol Positif 36,75 ± 13.60
Kontrol Dosis 1 36 ± 7.11
Kontrol Dosis 2 52 ± 5.16
Kontrol Dosis 3 50,5 ± 18.50
Berdasarkan Tabel 4.2 diketahui bahwa rata-rata jumlah sel pankreas mencit
kontrol normal yaitu 86 buah sel, lebih banyak dibandingkan dengan jumlah sel
pankreas mencit kontrol positif dan kontrol dosis. Pada kontrol positif hanya
terdapat 36,75 buah sel, tidak jauh berbeda dengan jumlah sel dari kontrol dosis 1
yaitu 36 buah sel. Sedangkan pada kontrol dosis 2 dan 3 juga tidak jauh berbeda
yaitu 52 dan 50,5 buah sel. Namun rata-rata jumlah sel pankreas pada kontrol dosis
2 lebih baik dibandingkan kontrol dosis 1 dan 3. Terapi ekstrak etanol 96% bekatul
dilakukan selama 14 hari sehingga diperoleh data kadar glukosa darah dan jumlah
sel pankreas hasil pengamatan menggunakan mikroskop. Data tersebut dapat dilihat
Gambar 4. 7 Diagram batang rata-rata kadar glukosa darah dan jumlah sel
pankreas
Keterangan: KN : Kontrol Normal
KP : Kontrol Positif
KD1 : Kontrol Dosis 1 (350 mg/KgBB)
KD2 : Kontrol Dosis 2 (400 mg/KgBB)
KD3 : Kontrol Dosis 3 (500 mg/KgBB)
Berdasarkan Gambar 4.7, terlihat bahwa jumlah sel pankreas dengan kadar
glukosa darah memiliki diagram yang sama, yang menunjukkan bahwa pada
perlakuan dosis 2 memiliki grafik lebih baik namun belum seperti keadaan pada
terdapat penurunan kadar glukosa darah setelah terapi ekstrak etanol 96% bekatul
beras padi selama 14 hari dan kenaikan jumlah sel pankreas. Hal tersebut
menunjukkan bahwa terdapat senyawa dalam ekstrak etanol 96% bekatul yang
pankreas yang mati dapat beregenerasi kembali yang ditunjukkan dengan jumlah
sel pankreas yang bertambah dan penurunan kadar glukosa darah. Akan tetapi, hasil
penelitian yang telah diperoleh tidak sesuai menurut Rizkayanti, dkk (2017) yang
56
besar pula kemampuan untuk meredam radikal bebas. Hal ini disebabkan oleh
penurunan kadar glukosa darah dan peningkatan jumlah sel pankreas oleh ekstrak
etanol 96% bekatul disebabkan oleh adanya kandungan antioksidan yang terdapat
bahwa ekstrak etanol 96% bekatul memiliki aktivitas antioksidan pada konsentrasi
800 ppm sebesar 81,830% dan nilai IC50 sebesar 185,7 ppm dan positif
mengandung senyawa aktif saponin, tanin, steroid dan alkaloid. Adanya kandungan
senyawa alkaloid pada ekstrak etanol 96% bekatul termasuk dalam senyawa yang
berpotensi sebagai antioksidan yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen.
nitrogen dari bahan alam dapat menghambat proses oksidatif. Karena senyawa
radikal turunan dari senyawa amina memiliki tahap terminasi yang sangat lama,
sehingga mampu menghentikan reaksi rantai radikal secara efisien. Menurut Zahra,
dkk (2017) menyebutkan bahwa tanin dan alkaloid berpotensi menurunkan kadar
reseptor insulin, namun bukan hanya itu senyawa fitokimia tersebut dapat memiliki
senyawa saponin dan tanin. Saponin bekerja dengan cara menghambat kerja
enzim α-glukosidase yaitu enzim yang ada di dalam usus yang berfungsi untuk
menghambat absorpsi glukosa pada usus halus, sehingga berfungsi sebagai anti
hiperglikemi (penurun kadar glukosa darah). Selain saponin, tanin juga memiliki
peranan dalam menurunkan kadar glukosa darah. Tanin bersifat astringen (zat
bekerja dalam membentuk lapisan dari protein selaput lendir yang melindungi
usus sehingga dapat menghambat penyerapan glukosa (Fiana dan Oktaria, 2016).
terdistribusi normal dan homogen. Setelah itu data diuji menggunakan analisis
variansi (ANOVA) satu arah dengan taraf signifikansi 5%. Hasil analisis ANOVA
dilakukan untuk mengetahui pengaruh terapi ekstrak etanol 96% bekatul terhadap
jumlah sel pankreas mencit (Mus musculus) dapat dilihat pada Tabel 4.3 berikut:
Tabel 4. 3 Hasil perhitungan ANOVA jumlah sel pankreas mencit (Mus musculus
L.) setelah perlakuan terapi ekstrak etanol 96% bekatul beras pada α
0,5%
Berdasarkan Tabel 4.3 hasil yang diperoleh dari uji ANOVA dengan taraf
signifikansi α 5%, didapatkan silai signifikansi 0,000 < 0,05 dan nilai Fhitung (9.648)
> FTabel 3,06, sehingga H0 ditolak. Berdasarkan hal tersebut menunjukkan bahwa
terdapat pengaruh terapi ekstrak etanol 96% bekatul terhadap jumlah sel pankreas
maka dilakukan uji lanjut dengan uji jarak duncan pada α 5% sebagaimana
pernyataan oleh Hanafiah (2014), bahwa jika KK bernilai besar (minimal 10% pada
kondisi homogen atau minimal 20% pada kondisi heterogen) karena data yang
diperoleh yakni data jumlah sel pankreas memiliki koefisien keragaman 25%.
Berdasarkan uji duncan 5% maka didapatkan notasi seperti pada Tabel 4.4 berikut:
Tabel 4. 4 Ringkasan uji duncan α 5% pengaruh ekstrak etanol 96% bekatul beras
terhadap jumlah sel pankreas mencit (Mus musculus) yang diinduksi
aloksan
Perlakuan Jumlah sel dan notasi pada α 5%
KN 86a
K+ 36,75b
KD1 36 b
KD2 52 b
KD3 50,5 b
Hasil uji duncan pada Tabel 4.4 diatas menunjukkan bahwa terdapat perbedaan
pengaruh yang tidak nyata pada jumlah sel pankreas mencit (Mus musculus L.)
beras yakni dosis 1, 2 dan 3. Namun pada dosis 2 dan 3 memiliki peningkatan
jumlah sel pankreas yang lebih baik dibandingkan dengan dosis 1. Berdasarkan hal
tersebut, ekstrak etanol 96% bekatul beras memiliki pengaruh terhadap jumlah sel
pankreas mencit (Mus musculus) namun 3 dosis perlakuan memiliki pengaruh yang
Allah SWT menciptakan segala sesuatu yang ada di dunia ini tidak ada yang
sia-sia. Allah menghamparkan bumi dan menurunkan air hujan dari langit sehingga
manusia, membuka jalan-jalan untuk dapat dilalui dan menurunkan hujan diatas
bumi sehingga terciptalah sungai-sungai dan dengan air itu Allah menumbuhkan
berwarna putih dan hitam, ada pula yang rasanya manis dan pahit.
Kekuasaan Allah SWT yang tidak berbatas bagi makhluk hidup yang ada di
bumi merupakan suatu tanda bagi mereka yang dibekali oleh Allah sebuah
pemikiran, serta nikmat kehidupan dan pemeliharaan tentang adanya sang pencipta.
Salah satu nikmat terbesar Allah SWT yang seringkali terlupakan adalah berupa
nikmat sehat. Allah juga akan menguji hamba-Nya melalui nikmat sehat dengan
dicabutlah nikmat sehat tersebut dari manusia dan diuji dengan sebuah penyakit,
misalnya menderita diabetes mellitus. Namun, sebagai hamba-Nya, kita harus tetap
bertawakkal kepada Allah SWT. Karena Allah SWT dalam firmannnya yang
Allah yang memberikan ujian sebuah penyakit juga yang akan menyembuhkan.
Allah SWT menganjurkan kepada hambanya untuk selalu berserah diri dan
berusaha apabila sedang ditimpa ujian ketika sakit. Salah satu bentuk usaha yang
dapat dilakukan adalah dengan mencari obat yang terdapat di alam. Salah satunya
bekatul yang dimanfaatkan sebagai obat alternatif untuk penyakit diabetes mellitus.
nilai aktivitas antioksidan pada konsentrasi maksimum yaitu 800 ppm sebesar
81,830 % dan nilai IC50 sebesar 185,7 ppm. Pada penelitian ini juga dilakukan
secara in-vivo dengan menggunakan mencit sebagai hewan coba. Berdasarkan hasil
terapi terhadap mencit dengan variasi dosis yaitu 350 mg/KgBB; 400 mg/KgBB;
jaringan sel pankreas mencit yang ditunjukkan dengan adanya peningkatan jumlah
PENUTUP
5.1 Kesimpulan
pankreas mencit diabetes mellitus dan pada dosis 400 mg/KgBB merupakan
dosis terbaik.
5.2 Saran
61
DAFTAR PUSTAKA
Adom, K.K dan Liu, R.H. 2002. Antioxidant Activity Of Grains. Journal of
Agricultural and Food Chemistry. 50(21):6182-6187.
Afriani, S., Idiawati, N., Destianti, L. Arianie, L. 2014. Uji Aktivitas Antioksidan
Daging Buah Asam Paya (Eleiodoxa conferta Burret) dengan Metode
DPPH dan Tiosianat. JKK, 3 (1): 49 –56.
Al-albani, M.N. 2008. Ringkasan Shahih Bukhari 3 & 4. Depok: Gema Insani.
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia. 2014. Peraturan Kepala
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia Nomor 12 Tahun
2014 Tentang Persyaratan Mutu Obat Tradisional.
Chen, C.W and Cheng, H.H. 2006. A Rice Bran Oil Diet Increases LDL-Receptor
and HMGCoA Reductase mRNA Expressions and Insulin Sensitivity in
Rats with Streptozotocin/Nicotinamide-Induced Type 2 Diabetes. Journal
of Nutrition. 136:1472-1476.
Chen, M.H. dan Bergman, C.J. 2005. A Rapid Procedure for Analysing Rice Bran
tocopherol, Tocotrienol and ϒ-Oryzanol Contents. Journal Food Compos
Analysis. 18: 139-151.
Damardjati, D.S., santosa, B.A., dan Munarso, J. 1990. Studi Kelayakan dan
Rekomendasi Teknologi PabrikPengolahan Bekatul. Laporan akhir. Balai
penelitian Tanaman Pangan Sukamandi.
Esa, N.M., Ling, T.B., dan Peng, L.S. 2013. By-Products Of Rice Processing. An
Overview Of Health Benefits And Applications. Journal Of Rice
Research, 1(1): 107-117.
62
63
Hartati, S., Marsono, Y., Suparmo dan Santoso, S. 2015. Komposisi Kimia Serta
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Hidrofilik Bekatul Beberapa Varietas Padi.
Agritech, 35 (1).
Indah., Mappiratu dan Musafira. 2017. Produksi Enzim Lipase Dari Aspergillus
Niger Isolat Kapang Kopra dengan Menggunakan Medium Kelapa Parut.
Kovalen, 3 (3):269-276.
Indranila dan Ulfah, M. 2015. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun
Karika (Carica Pubescens) Dengan Metode DPPH Beserta Identifikasi
Senyawa Alkaloid, Fenol dan Flavonoid. Prosiding seminar nasional
peluang sebagai alternatif medicine.
International Diabetes Federation. 2011. One Adult In Ten Will Have Diabetes By
2030. http://www.idf.org/media-events/press-releases/2011/diabetes-
atlas-8thedition. Diakses 6 Mei 2017.
Jusman, S. W., & Halim, A. 2009. Oxidative Stress In Liver Tissue Of Rat Induced
By Chronic Systemic Hypoxia. Makara kesehatan, 13(1):34-38.
Kemit, N., Widarta, W.R., Nocianitri, K.A. Pengaruh Jenis Pelarut Dan Waktu
Maserasi Terhadap Kandungan Senyawa Flavonoid Dan Aktivitas
Antioksidan Ekstrak Daun Alpukat. Jurnal Online. Diakses pada tanggal
7 November 2017.
64
Kuntorini, E.M dan Astuti, M.D. 2010. Penentuan Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Etanol Bulbus Bawang Dayak (Eleutherine Americana Merr.). Sains dan
Terapan Kimia, 4 (1).
Lu, F.C. 1995. Toksikologi Dasar. Asas, Organ Sasaran dan Penilaian Resiko.
Edisi ke 2. Jakarta: UI Press.
Mas’ud, F dan Pabbenteng. 2016. Rasio Bekatul Padi Dengan Pelarut Pada
Ekstraksi Minayk Bekatul Padi. Journal INTEK. 3(2): 82-86.
Moko, E. M., Purnomo, H., Kusnadi, J. Dan ijong, F.G. 2014. Phytochemical
Content And Antioxidant Properties of Colored and non Colored Varieties
ff Rice Bran Form Minahasa, North Sulawesi, Indonesia. International
Food Research Journal 21(3): 1053-1059.
Mutiyani, M., Soeatmadji, D.W., Sunindya, B.R. 2014. Efek Diet Tinggi
Karbohidrat dan Diet Tinggi Lemak Terhadap Kadar Glukosa Darah Dan
Kepadatan Sel Beta Pankreas Pada Tikus Wistar. Indonesian Journal Of
Human Nutrition 1(2): 106-113.
Nimse, S.B dan Pal, D. 2015. Free Radicals, Natural Antioxidants, and Their
Reaction Mechanisms. Royal society of chemistry Advances, (5).
Nugroho, A.E. 2006. Review Hewan Percobaan Diabetes Mellitus : Patologi dan
Mekanisme Aksi Diabetogenik. Biodiversitas. ISSN: 1412-033X.
7(4):378-382.
Nugroho.2007.Antioksidan.https://nugrohob.wordpress.com/2007/12/03/antioksid
an/ diakses pada tanggal 24 Desember 2017.
Rakhmadi, I., Muladno., Siregar, H.C.H dan Siagian, P.H. 2009. Performa Mecit
Jantan (Mus musculus) Umur 28-63 Hari Pada Alas Kandang Sekam, Pasir
Dan Zeolit Dengan Dan Tanpa Sekat Alas. Jurnal Zeolit Indonesia,
8(2):1411-6723.
Rima, Y.S. 2014. Perbandingan Metode Ekstraksi Dan Variasi Pelarut Terhadap
Rendemen Dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kubis Ungu (Brassica
oleracea L. Var. Capitata f. Rubra).
Rizkayanti, Anang, W.M., Diah dan Jura, M.R. 2017. Uji Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Air Dan Ekstrak Etanol Daun Kelor (Moringa Oleifera LAM).
Jurnal Akademika Kimia, 6 (2): 125-131.
66
Robertson, R.P., Harmon, P.O.T, Tanaka, Y., dan Takahashi, H. 2003. Glucose
Toxicity In Beta-Cells: Type 2 Diabetes, Good Radicals Gone Bad, And
The Glutathione Connection. Diabetes 52: 581-587.
Rohman, A dan Gandjar, I.G. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka
Pelajar.
Rudy, W.B. 2003. Seri kesehatan bimbingan dokter pada diabetes. Jakarta: Dian
Rakyat.
Sa`adah, H dan Nurhasnawati, H. 2015. Perbandingan Pelarut Etanol Dan Air Pada
Pembuatan Ekstrak Umbi Bawang Tiwai (Eleutherine Americana Merr)
Menggunakan Metode Maserasi. Jurnal Ilmiah Manuntung, 1(2):149-153.
Sandberg, A.A dan Philip, D.H. 2008. Interactions Of Exocrine And Endocrine
Pancreatic Diseases. J. Pancreas, 9(4): 541-575.
Sayuti, K dan Yenrina, R. 2015. Antioksidan, Alami dan Sintetik. Padang: Andalas
University Press.
Shihab. 2002. Tafsir Al-Misbah Pesan, Kesan, dan Keserasian Al-Qur’an Volume
10. Jakarta: Lentera Hati.
Sinata, N dan Arifin, H. 2016. Antidiabetes Dari Fraksi Air Daun Karaunting
(Rhodomytrus Tomentosa (Ait.) Hassk.) Terhadap Kadar Glukosa Darah
Mencit Diabetes. Jurnal Sains Farmasi & Klinis, 03 (01).
Sukandar,Y.E., Andrajati, R., Sigit, I.P., Adyana, K.I., Setiadi, P., Adji, A.,
Kusnandar. 2008. ISO Farmakoterapi. Jakarta: PT. ISFI Penerbitan, 26-8.
Sukma, L.N., Zackiyah, dan Gumilar, G.G. 2010. Pengkayaan Asam Lemak Tak
Jenuh Pada Bekatul dengan Cara Fermentasi Padat Menggunakan
Aspergillus terreus. Jurnal Sains dan Teknologi Kimia. 1(1): 66-72.
Sundaryono, A., Firdaus, M.L. Firdaus, S., Karyadi, B. 2016. Potensi Ekstrak Daun
Tanaman Betadin Untuk Meningkatkan Jumlah Trombosit Penderita DBD
Melalui Uji Terhadap Mus Musculus. Prosiding Seminar Nasional
Pendidikan Sains (SNPS) 2016.
Syafitri, S. 2016. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol dan Fraksi Bekatul Dengan
Metode 1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil. Bogor: Biokimia Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor.
Ulfa, S.M. 2016. Identifikasi Dan Uji Aktivitas Senyawa Antioksidan Dalam
Bekatul Dengan Menggunakan Variasi Pelarut. Skripsi. Malang:
Universitas Islam Negeri Malang.
Wardani, N.P. 2016. Uji Aktivias Antidiabtes Ekstrak Kering Biji Mahoni
Terstandar (Swietenia Mahagoni Jacq) Pada Mencit Yang Diinduksi
Aloksan. Skripsi. Surabaya: Universitas Airlangga.
Windono, T., Soedirman, S., Yudawati, U., Ermawati, E., Srielia, Erowati, T.I.
2001. Uji Peredam Radikal Bebas Terhadap 1,1-Diphenyl-2-
Picrylhydrazyl (DPPH) Dari Ekstrak Kulit Buah dan Biji Anggur (Vitis
Vinfera L.) Probolinggo Biru Dan Bali. Artocarpus. 1: 34-44.
Wirawati, C.U dan Nirmagustina, D.E. Studi In Vivo Produk Sereal Dari Tepung
Bekatul dan Tepung Ubi Jalak Sebagai Pangan Fungsional. Jurnal
teknologi industri dan hasi pertanian. 14 (2).
Xu, Z., Hua, N., dan Godber, J. 2002. Rice And Rice Bran Oil In Functional Foods
Development. Louisiana Agriculture. 45(4):9-10.
Zahra, F., Budhiarta, A.A.G dan Pangkahila, W. 2017. Pemberian Ekstrak Daun
Cincau (Mesona Palustris BL) Oral Meningkatkan Jumlah Sel Β Pankreas
dan Menurunkan Gula Darah Puasa Pada Tikus Putih (Rattus Norvegicus)
Jantan Galur Wistar Diabetes. Jurnal e-Biomedik (eBm), 5 (1).
Zubaidah, E dan Izzati, N.F. 2014. Efek Cuka Apel dan Cuka Salak terhadap
Penurunan Glukosa Darah dan Histopatologi Pankreas Tikus Wistar
Diabetes. Jurnal Kedokteran Brawijaya, 28 (4).
LAMPIRAN
Pengkondisian lingkungan
Analisis Data
69
70
Hasil
Sampel bekatul
Hasil
71
Hasil
- Diambil sebanyak 1 mL
- Ditambahkan etanol 95% 3 mL
- Dimasukkan dalam kuvet
- Diukur panjang gelombang maksimum dengan
spektrofotometer UV-Vis
Hasil
72
- Diambil 1 mL
- Dimasukkan ke dalam tabung reaksi
- Ditambahkan etanol 95% 3 mL
- Diinkubasi pada suhu selama waktu kestabilan yang telah
didapatkan
- Dimasukkan ke dalam kuvet hingga penuh
- Diukur pada yang didapatkan dengan spektrofotometer UV-Vis
Ekstrak Bekatul
Hasil
Hasil
73
Hasil
Mencit
Hasil
74
Mencit DM terapi
- Dijepit kepala mencit diantara jari telunjuk dan jari tengah tangan kiri
dan diangkat
- Diposisikan dalam keadaan terlentang dan mulut terbuka
- Diambil ekstrak etanol bekatul dengan variasi dosis 350 mg/KgBB,
400 mg/KgBB dan 500 mg/KgBB menggunakan alat sonde
- Diterapikan ekstrak secara oral
- Dilakukan terapi setiap hari selama 14 hari
Hasil
Mencit
Hasil
Organ Pankreas
Hasil
75
Organ pankreas
Hasil
76
mL aquades. Aquades dialirkan pada gelas arloji (untuk mengambil sisa NaCl yang
terdapat pada gelas arloji). Dilakukan pengadukan dengan gelas pengaduk sampai
larut sempurna. Setelah larut sempurna, dimasukkan ke dalam labu takar 100 mL
menggunakan pipet tetes hingga tanda batas dan dikocok hingga homogen.
Aloksan sebanyak 112 mg dilarutkan pada NaCl 0,9% sampai volumenya 20 mL,
M1 x V 1 = M 2 x V 2
96% x V1 = 70% x 100 mL
V1 = 72,9 mL
V1 = 73 mL
Cara pembuatannya adalah diambil larutan alkohol 96% sebanyak 73 mL, kemudian
dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL. Selanjutnya ditambahkan aquades sampai tanda
M1 x V 1 = M 2 x V 2
96% x V1 = 80% x 100 mL
V1 = 83 mL
Cara pembuatannya adalah diambil larutan alkohol 96% sebanyak 83 mL, kemudian
dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL. Selanjutnya ditambahkan aquades sampai tanda
M1 x V 1 = M 2 x V 2
96% x V1 = 90% x 100 mL
V1 = 93,7 mL
V1 = 94 mL
Cara pembuatannya adalah diambil larutan alkohol 96% sebanyak 94 mL, kemudian
dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL. Selanjutnya ditambahkan aquades sampai tanda
M1 x V 1 = M 2 x V 2
37% x V1 = 10% x 100 mL
V1 = 13,513 mL
V1 = 13,52 mL
Cara pembuatannya adalah diambil larutan formalin 37% sebanyak 13,52 mL,
kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL. Selanjutnya ditambahkan aquades
= 0,78866 mg
= 0,8 mg
Cara pembuatannya adalah ditimbang DPPH 0,8 mg, kemudian dilarutkan dan
ditandabataskan dengan etanol 95% dalam labu takar 10 mL dan dikocok hingga homogen.
79
Berdasarkan penelitian Sinata dan Arifin (2016) dosis aloksan yang digunakan
adalah 200 mg/KgBB yang merupakan konversi dari dosis aloksan untuk tikus
200 𝑚𝑔 200 𝑔 40 𝑚𝑔
Pada tikus 200 g = 𝑘𝑔𝐵𝐵
𝑥 1000 𝑔 = 200 𝑔𝐵𝐵
Faktor konversi dari tikus 200 g ke mencit 20 g adalah 0,14. Sehingga dosisnya
menjadi:
40 mg x 0,14 = 5,6 mg
80
yakni 350 mg/kgBB, 400 mg/kgBB dan 500 mg/kgBB. Namun Dwinani
menggunakan hewan coba tikus, sehingga dosis yang digunakan harus dikonversi
terlebih dahulu. Setiap variasi dosis terapi dilarutkan dalam 1 mL CMC-Na 0,5%
350 𝑚𝑔 200 𝑔 75 𝑚𝑔
Pada tikus 200 g= 𝑘𝑔𝐵𝐵
𝑥 1000 𝑔 = 200 𝑔𝐵𝐵
400 𝑚𝑔 200 𝑔 80 𝑚𝑔
Pada tikus 200 g= 𝑘𝑔𝐵𝐵
𝑥 1000 𝑔 = 200 𝑔𝐵𝐵
(b-c)
Kadar air = x 100 %.
(b-a)
(b-c)
Kadar air = x 100 %
(b-a)
58.853 − 58.792
= × 100%
58.853 − 54.259
0.061
= × 100%
4.594
= 1.323 %
54.398 − 54.344
= × 100%
54.398 − 49.822
0.054
= × 100%
4.576
= 1.18 %
60.361 − 60.309
= × 100%
60.361 − 55.769
0.052
= × 100%
4.592
= 1.132 %
Kadar air rata-rata dari ulangan ke 1 sampai ulangan ke 3 adalah sebagai berikut:
= 1.211
83
36,6335 gram
= 250 gram
× 100%
= 14,6534 %
84
Konsentrasi Absorbansi %
sampel (ppm) Kontrol Asam askorbat Antioksidan
10 0.6556 0.1309 80.033
50 0.4656 0.0513 88.982
100 0.4645 0.0315 93.218
150 0.4650 0.025 94.624
200 0.4640 0.0217 95.323
400 0.4637 0.0198 95.730
800 0.4639 0.0181 96.098
Top = 100.0
LogIC50 2.269
HillSlope 0.6923
IC50 185.7
Span = 100.0
95% CI (profile likelihood)
LogIC50 2.046 to 2.499
HillSlope 0.3746 to 1.173
IC50 111.1 to 315.5
Goodness of Fit
Degrees of Freedom 5
R squared 0.8968
Sum of Squares 269.6
Sy.x 7.343
Constraints
Bottom Bottom = 0
Top Top = 100
Number of points
# of X values 7
# Y values analyzed 7
86
% Aktivitas Antioksidan
80
60
40
20
0
0 1 2 3 4
Log ppm
% Aktivitas
antioksidan Global (shared)
Comparison of Fits Can't calculate
Null hypothesis Different curve for each data set
Alternative hypothesis One curve for all data sets
P value
Conclusion (alpha = 0.05) Models have the same DF
Preferred model Different curve for each data set
F (DFn, DFd)
Number of points
# of X values 7
# Y values analyzed 7
88
Asam Askorbat
100
% Aktivitas antioksidan
95
90
85
80
75
0 1 2 3 4
log ppm
89
8.3 Hasil Uji Normalitas (Saphiro-wilk) Jumlah Sel Pankreas Mencit Dengan
α : 0,05
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
8.4 Hasil Uji Homogenitas Jumlah Sel Pankreas Mencit dengan Menggunakan
SPSS 16.00
sama
α : 0,05
Jumlah_Sel_Pankreas
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1.579 4 15 .231
Kesimpulan : Nilai signifikansi > 0,05 sehingga H0 diterima dan kelima perlakuan
adalah sama.
8.5 Hasil Uji ANOVA Jumlah Sel Pankreas Mencit Dengan Menggunakan
SPSS 16.00
yang sama
α : 0,05
Penarikan kesimpulan:
92
ANOVA
Jumlah_Sel_Pankreas
Total 9145.750 19
Kesimpulan: Nilai signifikansi ≤ 0,05 dan nilai Fhitung (9.648) ≥ FTabel 3,06. Sehingga
H0 ditolak dan terdapat pengaruh perlakuan terhadap jumlah sel pankreas.
Post Hoc Test
Jumlah_Sel_Pankreas
Duncan
Perlakuan N 1 2
Dosis 1
4 36.0000
Kontrol Positif
4 36.7500
Dosis 3
4 50.5000
Dosis 2
4 52.0000
Kontrol Normal
4 86.0000
Sig.
.130 1.000
SK Db JK KT F Sig.
Perlakuan 4 6586.000 1646.500 9.648 .000
Galat 15 2559.750 170.650
Total 19 9145.750
√𝑲𝑻𝒈𝒂𝒍𝒂𝒕
KK = 𝒀
× 100%
√𝟏𝟕𝟎,𝟔𝟓𝟎
= 𝟓𝟐,𝟐𝟓
× 100%
= 25 %
8.7 Hubungan Rata-rata Kadar Glukosa Darah dengan Jumlah Sel Pankreas
Kelompok Kadar Glukosa Jumlah Sel
Perlakuan Darah Pankreas
KN 84.4 86
KP 278.5 36.75
KD1 299.75 36
KD2 177.75 52
KD3 266.75 50.5
299,75
278,5 266,75
300
250
177,75
Pankreas (Buah)
200
150
84,4 86
100 52 50,5
36,75 36
50
0
KN KP KD1 KD2 KD3
Perlakuan
Sampel 100 dan 150 ppm Sampel 200 dan 400 ppm Sampel 800 ppm
Normal U1 Normal U2
97
Normal U3 Normal U4
Positif U1 Positif U2
Positif U3 Positif U4
98
Dosis 1 U1 Dosis 1 U2
Dosis 1 U3 Dosis 1 U4
Dosis 2 U1 Dosis 2 U2
99
Dosis 2 U3 Dosis 2 U4
Dosis 3 U1 Dosis 3 U2
Dosis 3 U3 Dosis 3 U4
100
Method:
Operator: Rika
Peak Table
________________________________
514.9 0.241
101
Method
Vitamin C (07-08-2018).BAB
Operator Rika
Instrument Settings
Instrument Cary 50
Replicates 3
Comments:
Zero Report
Read Abs nm
________________________________________________
Analysis
Collection time 8/7/2018 3:44:26 PM
102
____________________________________________________________
Kontrol 0.6560
0.6561
10 ppm 0.1302
0.1310
Kontrol 0.4651
0.4658
50 ppm 0.0511
0.0515
Kontrol 0.4646
0.4646
0.0315
Kontrol 0.4646
0.4653
0.0248
Kontrol 0.4639
0.4639
0.0218
Kontrol 0.4639
0.4636
0.0199
Kontrol 0.4640
0.4639
0.0181
Method
Operator Rika
Instrument Settings
Instrument Cary 50
Replicates 3
Comments:
Zero Report
Read Abs nm
________________________________________________
Analysis
Collection time 8/31/2018 1:39:57 PM
____________________________________________________________
Kontrol 0.6065
0.6002
10 ppm U1 0.4681
0.4685
Kontrol 0.6044
0.6038
10 ppm U2 0.4780
0.4765
Kontrol 0.6027
0.6026
10 ppm U3 0.4659
0.4662
Kontrol 0.6088
0.6094
50 ppm U1 0.4241
0.4241
Kontrol 0.6043
0.6042
50 ppm U2 0.4096
0.4098
Kontrol 0.6047
0.6043
50 ppm U3 0.4252
0.4255
Kontrol 0.6050
0.6054
0.3847
Kontrol 0.6041
0.6037
0.3942
Kontrol 0.6035
0.6039
0.3916
Kontrol 0.6031
107
0.6026
0.3640
Kontrol 0.6038
0.6044
0.3519
Kontrol 0.6044
0.6048
0.3478
Kontrol 0.6045
0.6046
0.3295
Kontrol 0.6041
0.6037
0.3272
108
Kontrol 0.6072
0.6070
0.3381
Kontrol 0.6040
0.6042
0.2101
Kontrol 0.6036
0.6032
0.2084
Kontrol 0.6032
0.6030
0.2033
Kontrol 0.6035
0.6034
0.0773
Kontrol 0.6032
0.6037
0.1243
Kontrol 0.6029
0.6031
0.1276