Ferramentas Moleculares

Pontifcia Universidade Catlica de Gois Departamento de Biologia
Seminrio: Identificao de sexo gentico humano e animal por ferramentas moleculares
Alunos: Brbara Hilrio Jssica Lopes Priscila Rezende Sandro Henrique

Prof. Alex Silva da Cruz, MSC
Sexagem : - A sexagem e realizada por meio de tcnicas invasivas ou no pelo feto animal ou humano.
Ferramentas moleculares: -So tecnologias e processos (ou metodologia) que empregam equipamentos e protocolos da rea de biologia molecular.
Ferramentas moleculares utilizadas em sexagem:
-PCR (reao em cadeia da polimerase) a ferramenta mais utilizada em sexagem.

- Tcnica no invasiva. -Amnioncetese uma tcnica utilizada mais invasiva trazendo riscos ao feto.
- Um mtodo muito conhecido envolve a visualizao de cromossomos sexuais a partir da realizao do caritipo.
PCR (Reao em cadeia da polimerase) : - uma tcnica de Biologia Molecular que permite replicao in vitro do DNA de forma extremamente rpida. - Esta a mais bsica de todas pois seu principal objetivo amplificar uma sequencia do DNA afim de se obter uma quantidade suficiente para qualquer estudo. - Atravs da PCR analise do DNA possvel realizar diversos diagnsticos dentre eles: investigao da paternidade, deteo de doenas, alm da identificao do sexo.
Possui trs passos:
1 Desnaturao trmica
-A temperatura elevada (geralmente >90C) separa a cadeia dupla de DNA em dois filamentos, sendo este processo conhecido como desnaturao.
2 Hibridizao
-O objetivo da PCR no replicar a cadeia inteira de DNA, mas apenas replicar a sequncia de interesse .
- Os iniciadores (ou primers) marcam as

extremidades da sequncia alvo.
- Numa
reao de PCR so includos dois primers, um para cada cadeia simples de DNA que foi produzida durante o passo de desnaturao.
3 Extenso
-Aps a ligao dos primers ou iniciadores s sequncias complementares de DNA, a temperatura eleva-se e a enzima Taq polimerase replica a cadeia de DNA. - A extenso inicia-se sempre no extremo 3 do primer, criando uma cadeia dupla a partir de cada uma das cadeias simples. A Taq polimerase sintetiza exclusivamente na direo 5 para 3.
Final do primeiro ciclo:
-No final do primeiro ciclo da PCR, encontramos duas novas cadeias de DNA idnticas original. - no ciclo seguinte, esta cadeia vai servir de molde sntese de uma nova cadeia, limitando o primer a outra extremidade da cadeia.
- O ciclo ocorre em um numero especifico de vezes que varia entre

30 e 40 ciclos.
Separao dos fragmentos de DNA : - Eletroforese em gel -Para realizar uma eletroforese, um gel de agarose preparado, agarose um polissacardeo (como gar e pectina) que dissolve em gua fervente e ento gelifica quando esfria como a gelatina - O DNA introduzido em pequenos poos de gel, e ento uma corrente eltrica aplicada atravs do gel. Como o DNA negativamente carregado, ele atrado pelo eletrodo positivo. - Aps a eletroforese em gel, os fragmentos de DNA normalmente so corados com brometo de etdeo, que possui afinidade pelo DNA e fluorece (torna-se visvel) vivamente em contato com a luz ultravioleta. Dessa forma pode-se localizar as bandas que correspondem ao DNA.
Tcnica fenol-clorofrmio : desnatura as protenas de modo eficiente e, provavelmente, as solubiliza.
PCR em Humanos:
-Detecta o DNA fetal no sangue perifrico materno. Podendo ser realizada nas primeiras semanas de gestao. Sendo realizada dessa forma uma tcnica no invasiva.
Tcnica de amniocentese: -Coleta de amostra de vilo corinico seguida de PCR. - uma tcnica invasiva, pois uma amostra do liquido amnitico retirada de dentro do tero. - Riscos so: infeco podendo levar a perda do beb, perda de liquido amnitico, a agulha pode atingir o beb ( raro). - custo 170 ( 524,40) reais.
PCR em animais: -Pode ser aplicada a vrios tecidos ou clulas de embries, fetos, liquido amnitico, sangue, penas e pelos ( devem ser obtidos com bulbo). - Nas aves a tcnica do bulbo ainda no e eficaz e precisa ser padronizada. A tcnica utilizada e de grande eficcia a de fenol-clorofrmio. - O sexo gentico e determinado pela presena do cromossomo Y em mamferos . - Sexagem de espermatozoides, associada a programas de inseminao artificial ou fertilizao in vitro de embries possui um mercado potencial para bovinos. - em animais uma tcnica invasiva.
- O preo varia entre 50,00 a 300,00 reais.
OBRIGADA!!!

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Ferramentas moleculares utilizadas em sexagem:

-PCR (reao em cadeia da polimerase) a ferramenta mais utilizada em sexagem.

Possui trs passos:

- Os iniciadores (ou primers) marcam as

Final do primeiro ciclo:

- O ciclo ocorre em um numero especifico de vezes que varia entre

Tcnica fenol-clorofrmio : desnatura as protenas de modo eficiente e, provavelmente, as solubiliza.

- O preo varia entre 50,00 a 300,00 reais.

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