ANGOLA

-Real Time: Polymerase chain reaction (RT-
PCR);
- Western blot;
-Southern blot;
- Mouthernblot;
- Genexpert
z
Diagnóstico
molecular
(testelaboratorial)
Integrantes do grupo
- Josibell Paulino
- Lukenia Cardoso
- Laureana Feliciana
- Herculano Nhanga
- Eunice Francisco
- Hong Ernesto
- Tarciana Bravo
- Luta dos Santos
- Arnaldo Catimba
- Nerica Santos
- Geovanna Alves
- Leonarda Tumbuleny
INTRODUÇÃO
No presente trabalho falaremos sobre os testes laboratoriais,

presumidamente RT-PCR, Western blot, Southern blot, Mouthern blot e
Genexpert. Eles são ferramentas essenciais que permitem aos
profissionais de saúde obter informações precisas e confiáveis sobre a
saúde de um paciente. Dizer que os testes laboratoriais são realizados em
amostras biológicas, como sangue, urina, fluídos corporais, tecidos e
secreções.
z
1-Teste de RT-PCR (Reação em Cadeia da
Polimerase em Tempo Real)
 O teste de RT-PCR é uma técnica molecular

altamente sensível e específica amplamente utilizada
para a deteção de material genético viral ou
bacteriano em amostras clínicas. Ele é
especialmente útil na deteção de RNA viral, como é o
caso de muitos vírus, inclusive o SARS-CoV-2,
causador da COVID-19. Neste trabalho, vamos
explorar os princípios básicos do teste de RT-PCR e
sua aplicação na deteção do vírus SARS-CoV-2.
A técnica de RT-PCR (Reação em Cadeia da Polimerase com Transcrição
Reversa) é amplamente utilizada em diversas aplicações:
1. *Detecção de RNA:* A RT-PCR
2. *Diagnóstico de Doenças Infecciosas
3. *Estudos de Expressão Gênica
4. *Identificação de Variantes Genéticas
5. *Pesquisas em Biologia Molecular
6. *Monitoramento de Transcrição Viral
7. *Estudos de Microbioma
8. *Testes de Paternidade
Pontos Principais:-A reação em cadeia da polimerase, ou PCR, é uma técnica
para fazer muitas cópias de uma região específica do DNA, in vitro (em um tubo
de ensaio, ao invés de um organismo).-A PCR depende de uma DNA polimerase
termoestável, a Taq polimerase, e requer primers de DNA projetados
especificamente para a região de interesse do DNA .-Na PCR, a reação é
repetida ciclicamente através de uma série de alterações de temperatura, o que
possibilita a produção de muitas cópias da região de interesse.-A PCR tem
muitas aplicações práticas e em pesquisa. Ela é rotineiramente usada em
clonagens de DNA, diagnósticos médicos e análises forenses de DNA.
2.Método do Western Blot
O Western blot pode ser dividido em várias etapas, que incluem a
preparação da amostra, sua separação por eletroforese em gel,
transferência para uma membrana de nitrocelulose ou polivinilideno
difluoreto (PVDF), bloqueio da membrana para evitar associação não
específica de anticorpos, incubação com um anticorpo primário
específico para a proteína-alvo, lavagem para remover anticorpos não
ligados, incubação com um anticorpo secundário conjugado com um
marcador (como enzima ou fluorescência), e a deteção final usando
substratos químicos ou sistemas de imagem.
Aplicações do Western blot
O Western blot tem uma ampla gama de aplicações na pesquisa
biomédica e clínica. Algumas das principais aplicações incluem:
- Deteção de proteínas específicas.
- Determinação da expressão diferencial de proteínas
- Monitoramento de vias de sinalização
- Diagnóstico de doenças
3- MOUTHERN
Teste de Mouthern blot é baseado na transferência de DNA de uma

amostra para uma membrana de nitrocelulose ou nylon, onde o DNA é
fixado e pode ser detectado por sondas de DNA complementares
marcadas. Essas sondas são moléculas de DNA ou RNA que são
complementares à sequência de interesse e podem ser marcadas com
radioisótopos, enzimas ou corantes fluorescentes.
O teste de Mouthern blot tem várias aplicações em pesquisas genéticas

e diagnósticos médicos. Ele pode ser usado para identificar genes
específicos em um organismo, estudar a expressão gênica em
diferentes tecidos ou condições, detectar mutações genéticas
associadas a doenças hereditárias, realizar testes de paternidade e
identificar organismos geneticamente modificados.
4-Método do Southern Blot
O Southern blot envolve várias etapas, incluindo a extração de DNA da
amostra, digestão com enzimas de restrição para clivar o DNA em
fragmentos, eletroforese em gel de agarose para separar os fragmentos
de DNA de acordo com o tamanho, transferência dos fragmentos de
DNA para uma membrana de nitrocelulose ou nylon, fixação dos
fragmentos de DNA na membrana por tratamento com calor ou UV, e
hibridização com sondas de DNA complementares marcadas para
detectar sequências específicas de DNA.
Aplicações do Southern Blot
O Southern blot é uma técnica versátil e tem várias aplicações na
pesquisa biomédica e genética. Algumas das principais aplicações
incluem:
1-Mapeamento de genes e estudos de ligação genética
2-Diagnóstico molecular
3-Análise de rearranjos genómicos
4-Identificação de clones em bibliotecas genômicas
5- teste de Genexpert
O teste de Genexpert utiliza a tecnologia de reação em cadeia da
polimerase (PCR) em tempo real para amplificar e detectar sequências
específicas de DNA ou RNA do patógeno de interesse. A principal
vantagem do Genexpert é a sua rapidez e facilidade de uso, permitindo
resultados em tempo real em cerca de uma hora.
1. Tuberculose
2. Infecções respiratórias
3. Infecções sexualmente transmissíveis (ISTs)
4. Hepatite C
5. HIV
Conclusão
Portanto, estes testes laboratoriais são ferramentas valiosas na prática
da medicina, fornecendo informações cruciais para o diagnóstico,
monitoramento e pesquisa de doenças. A contínua evolução desses
testes é fundamental para melhorar a saúde da população, promovendo
diagnósticos precisos e tratamentos eficazes.

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