Metabolismo do RNA

Prof. Cleverson Diniz

Transferência da informação genética: o dogma
central
Como a informação genética é expressa nas células?

transcrição tradução

DNA RNA PROTEÍNA

duplicação

núcleo
citoplasma
 Transcrição

Definição: síntese dos diferentes tipos de RNA a partir de um molde de

DNA, usando as regras da complementaridade

 DNA e RNA são semelhantes, porém RNAs funcionais apresentam-se na

forma de fita simples
As moléculas de RNA tem potencial para assumir uma grande diversidade
de estruturas, e conseqüentemente, uma variedade de funções:

- Transmissão Informação Genética

- Catalítica Ribozimas
- Estrutural Ribossomos
Ribonucleotídeos
RNA : A, C, G e U

DNA : A, C, G e T

• Ribose - OH no C 2’ (instabilidade) G≡C

Pareamento
• Pareamento de bases:
complementaridade; estrutura A=U
secundária (diferentes funções)
 O princípio da transcrição

Gene de interesse (região do DNA)

DNA dupla fita As fitas são separadas num local

determinado (região promotora)

Fita molde Fita simples de RNA

do DNA

A fita de RNA é sintetizada

(utilizando uma das fitas como molde)
 REPLICAÇÃO X TRANSCRIÇÃO

 1 cromossomo inteiro é copiado  Somente 1 gene ou um grupo de genes

de uma vez (regiões específicas do DNA) são copiados
 Requer primer (iniciador)  Não requer primer

 As duas fitas do DNA servem como  Somente uma das fitas serve como molde
molde  Precisa
 Precisa e uniforme  Algumas regiões do DNA genômico nunca
 Precursores: são transcritas
Desoxirribonucleotídeos  Precursores: ribonucleotídeos
 Sequências específicas iniciam a  Seqüências específicas regulam a
replicação (Origem de replicação) expressão (promotor/terminador)
O RNA é sintetizado pelas RNA polimerases
 Transcrição: visão geral

Abertura para Transcrição

~ 17 pb

Fita não-molde ou
codificadora
(sense)
Enrola
Desenrola

Fita molde ou não-codificadora

(anti-sense): 3’→ 5’

Sentido da transcrição

Síntese no sentido 5'-3', (=alongamento de

Bolha de transcrição uma cadeia de DNA)
O estresse topológico é aliviado por
topoisomerases
 Fitas de DNA senso e anti-senso

5´-AATGGCATGCCTA-3´
DNA 3´-TTACCGTACGGAT-5´

Fitas se abrem para transcrição

Uma das fitas é usada como molde

Fita não-molde (+) 5´-AATGGCATGCCTA-3´

Seqüências da fita não-molde e
do RNA são iguais 5´-AAUGGCAUGCCUA-3´ RNA
3´-TTACCGTACGGAT-5´
Fita não-molde contêm o
significado da informação
genética (seq. de um gene): fita Fita molde (-): serve de molde para a
senso (sense) ou codificante síntese do RNA;

Fita não molde: Fita-senso

 RNA polimerase

Catalisa reações fosfodiéster;

Tem atividade dependente da presença de DNA;

 A ordem em que os ribonucleotídeos serão adicionados depende

da seqüência de bases no DNA obedecendo a combinação: A=U e
GC.

Os precursores são os ribonucleosídeos trifosfatados - rNTPs (ATP,

GTP, CTP, UTP);

Esta reação necessita da presença dos ions Mg2+ e Zn2+.

 Unidade de transcrição

É um trecho do DNA que codifica uma molécula de RNA e as seqüências

necessárias para sua transcrição.

+1

Uma unidade de transcrição inclui um promotor,

promotor uma região codificante
de RNA e um finalizador
 Transcrição em procariotos

RNA polimerase procariótica:

• Proteína multimérica constituída por cadeias polipeptídicas diferentes;

Central enzimática - 5 subunidades

(2α, ,’ e ω)

Fator sigma

 Direciona a enzima para região promotora;

 Não participa da fase de extensão (alongamento)
 Apenas uma RNA polimerase sintetiza todos os tipos de RNA
 Existem várias formas  depende da subunidade σ (vários tipos)
 σ70 (MW: 70.000), σ32 (MW: 32.000), ...
 Não apresenta atividade revisora exonucleásica 3’-5’
 1 erro a cada 104-105 de Nucleotídeos incorporados
 Como várias moléculas de RNA são transcritas, as conseqüências dos
erros não são tão graves
A síntese de RNA inicia nos promotores
 Iniciação da transcrição

Holoenzima RNA pol

A RNA polimerase une-se não-

Promotor Gene especificamente ao DNA

A holoenzima procura pelo promotor

Quando o promotor é encontrado, a

holoenzima e o promotor formam um
complexo fechado
Iniciação da transcrição
Uma alteração conformacional produz
uma bolha de iniciação. Um pequeno
RNA é sintetizado (oito ou nove ligações
fosfodiéster)

Complexo
fechado

Complexo
aberto

A subunidade  se dissocia do
núcleo enzimático e a RNA pol sai
do promotor (alongamento)
(desenrola a dupla hélice de DNA)
Depende de :
• Estruturas secundárias (grampos) do RNA recém
sintetizado
• Proteínas auxiliares
• Término após ser transcrito o a sequência finalizadora

Rho-independente - não depende de

proteínas auxiliares
2 tipos de
terminadores ou
finalizadores
Rho-dependente - depende de
proteínas auxiliares (fator rô)
 Término da transcrição
Características do terminal Rho-independente

Sequência rica e A

Sequências complementares grampo

Pareamento com A é fraco e facilita

liberação da fita quando a RNA
polimerase parar
Término da transcrição: Rho-independente
 Término da transcrição
Características do terminal Rho-dependente

• Região de simetria dupla no terminal com baixa complementaridade entre as bases 

grampo "fraco" no RNA recém sintetizado
• Não existe uma seqüência rica em A e sim rica em CA (reconhecida pela proteína Rho)
• Término da transcrição precisa de uma proteína auxiliar  Rho(ρ), atividade de helicase
(rompe o híbrido RNA-DNA)

RNA polimerase

rô
rô

Ribossomo
 Transcrição em Eucariotos X Procariotos

EUCARIOTOS PROCARIOTOS

Eucariotos x Procariotos
Núcleo Citoplasma
Três RNA pol Uma RNA pol
RNA é modificado RNA não é modificado
Fatores de transcrição Sem fatores
Tradução não é simultânea Tradução simultânea
Processamento do RNA
 Colinearidade

O conceito de colinearidade sugere que uma sequência

contínua de nucleotídeos no DNA codifica uma sequência
contínua de aminoácidos em uma proteína
 Estrutura do gene dos Eucariotos

Década de 70: evidências de que a sequência do mRNA eucariótico não

corresponde à sequência do gene – gene contêm sequências que não
aparecem no mRNA
Experimentos de hibridação DNA-RNA (microscópio eletrônico)
Gene da ovoalbumina A estrutura do mRNA maduro não
corresponde exatamente ao que é
copiado do DNA inicialmente

Exons : sequências expressas Introns : sequências intercalantes

 Processamento do RNA

Conjunto de reações pós-transcricionais que modificam o RNA

 Adição e/ou remocão de nucleotídeos

 “Splicing” – retirada dos íntrons
 Edição – modificação química das bases
 Clivagem de precursores

 mRNA
 rRNA
 tRNA
 mRNA Eucarioto maduro

Cap 5´ (Quepe)
Cauda poli A

5´ 7mG Região codificando proteína AAAAAAA 3´

Região 5´não traduzida Região 3´não traduzida

(5´UTR-untranslated region) (3´UTR-untranslated region)
1 – ADIÇÃO DO CAP 5´- 7 metil Guanosina

5’
• ocorre no início da transcrição: RNA
com 30 nt

• Complexo sintetizador do capacete

1 – ADIÇÃO DO CAP 5´- 7 metil Guanosina

Funções :
5’
mRNA
•Protege o mRNA
(estabilidade) contra 7-metilguanosina Outros
degradação de nucleotídeos
ribonucleases; podem ser
metilados
•Conduz mRNA do
núcleo para se ligar ao
ribossomo no ligação 5’-5’ trifosfato 3’

citoplasma;

•Direciona o início da síntese de proteínas.

2 – ADIÇÃO DA CAUDA DE POLI ADENOSINAS (POLI A)

Sinal para
poliadenilação:
AAUAAA

Funções :

• Relacionado com
estabilidade do mRNA
(maior tempo intacto e
Sequência
disponível para tradução); sinalizadora é
ligada por um
• Perda de adenosinas na complexo de
clivagem
cauda poli A: (endonuclease,
renovação/degradação. poliadenilato)
 Remoção dos Íntrons

Ribozimas
Visão geral do processamento do RNA eucariótico
 Para que servem os Íntrons?

O processamento diferencial dos íntrons pode produzir

diferentes RNAs maduros e conseqüentemente diferentes
proteínas a partir de apenas um RNA primário
 Gene da calcitonina (em ratos)

Peptídeo
Calcitonina relacionado a
(reduz absorção de cálcio
pelos osteoclastos) calcitonina
(vasodilatador)
Peptídeo relacionado ao gene da calcitonina
 Processamento do rRNA
Em bactérias
RNAs pré-ribossomais

RNase III
Processamento do tRNA
Extremidade na qual se liga o
Aminoácido
tRNA nucleotidiltransferase

Bases
modificadas

(eucariotos)
RNase D e P: edonucleases protéicas
RNase P : RNA + proteína
endorribonuclease
Síntese de RNA e DNA dependentes de RNA
EX: Causadores de câncer e da
AIDS.

OBS: As transcriptases reversas

não possuem uma atividade
revisora 3’5’, como as DNA
polimerases.
Inibidores da Transcriptase reversa

OBS: As DNA polimerases possuem baixa afinidade pelo

AZT.
A telomerase é uma transcriptase reversa