W 3 Cocos Gram Positivos 2012
W 3 Cocos Gram Positivos 2012
W 3 Cocos Gram Positivos 2012
FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA
PRACTICAS DE LABORATORIO
COCOS GRAM POSITIVOS
Maye Bernal Rivera
Introduccin
Los cocos gram positivos excluyendo las enterobacterias, son los microorganismos
ms frecuentemente aislados de muestras de pacientes y se han involucrado como
agentes importantes en procesos de enfermedades infecciosas desde el ao 1836.
Se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza y forman parte de la flora
microbiana normal de la piel y las mucosas del hombre y de animales.
Las
infecciones en el hombre se producen por contacto directo con individuos infectados o
portadores sanos, o por penetracin a travs de piel y mucosas mediante objetos
corto punzantes por heridas, trauma o procedimientos quirrgicos o por la accin de
toxinas producidas por cepas de algunas especies.
Staphylococcus
Los estafilococos son clulas esfricas gram positivas dispuestas en grupos
semejantes a racimos de uvas en medios slidos o en pares, cadenas o ttradas, en
medios lquidos. Crecen bien en medios simples y de acuerdo a la especie producen
diferentes pigmentos: blanco, amarillo y dorado y algunas de ellas producen beta
hemlisis. Son catalasa positiva, inmviles, no esporulados, con raras excepciones,
no encapsulados y son aerobios o anaerobios facultativos.
Streptococcus
Los estreptococos son clulas esfricas u ovaladas gram positivas dispuestas en
pares o cadenas cortas o largas. Son ms exigentes que los estafilococos, no crecen
en medios simples, por el contrario requieren de factores de crecimiento como la
sangre y sus derivados. Producen diferentes tipos de hemlisis, caracterstica que
permite clasificarlos en beta hemolticos, alfa hemolticos o no hemolticos. No forman
pigmentos, son catalasa negativa, inmviles, no esporulados, con formacin de
cpsula variable. Son aerobios y anaerobios facultativos.
Enterococcus
Los enterococos clasificados anteriormente como una especie de estreptococos, son
clulas esfricas gram positivas dispuestas en pares o cadenas cortas. Al igual que
los estreptococos, requieren de factores de crecimiento como la sangre y sus
derivados. Son capaces de desarrollarse en medios que contienen altas
concentraciones de NaCl (6.5%) y de bilis (40%). Pueden producir hemlisis de tipo
alfa, beta o ser no hemolticos. No forman pigmentos, son catalasa negativa,
PRACTICA DE LABORATORIO
Objetivo
Proporcionar al estudiante el conocimiento cientfico y las habilidades prcticas de los
mtodos y tcnicas utilizados en Microbiologa Mdica para el aislamiento e
identificacin de las principales especies de cocos gram positivos que afectan al
hombre.
PARTE I. SIEMBRA
Objetivos especficos
-
Materiales
-
Asa curva
Mechero
Casos clnicos
Muestras biolgicas
Caldo BHI
Agar Sangre
Campana con vela (CO2 ) e incubadora a 37C
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
Actividad
1. Investigue 3 caractersticas que diferencien las bacterias gram positivas de las
gram negativas
PARTE II.
LECTURA E INTERPRETACION PARA LA DIFERENCIACION E IDENTIFICACIN
DEL AGENTE ETIOLGICO.
Sthaphylococcus. Diagnstico de Laboratorio
Las colonias de estafilococo son fciles de reconocer, relativamente son grandes
tienen de 2 a 3 mm o ms, dependiendo de la edad del cultivo. Las colonias son
circulares, convexas, de superficie lisa, bordes enteros, cremosas, blancas o
amarillas o doradas. Para iniciar la identificacin adems de las caractersticas de
crecimiento tanto en medio lquido como slido y la coloracin de Gram, se utiliza la
prueba de la catalasa que permite diferenciarlos del gnero estreptococo, el cual
carece de esta enzima. Para identificar especies se utilizan diferentes pruebas dentro
de las cuales estn las siguientes.
Pruebas Bioqumicas
CATALASA
Principio
La catalasa es una enzima que descompone el perxido de hidrgeno (H 2O2) en
agua y oxgeno segn la siguiente reaccin:
2H2O2 2H2O + O2 (burbujas de gas)
La prueba catalasa se usa con frecuencia, para diferenciar miembros de la familia
Micrococcaceae de miembros de la familia Streptococcaceae.
Materiales
- Colonia aislada (Medio de cultivo sembrado e incubado)
- Perxido de hidrgeno al 3%
Procedimiento
1. Con un palillo de madera, transferir parte del centro de una colonia a la
superficie de un portaobjetos.
2. Agregar una gota de perxido de hidrgeno al 3% y observar la formacin de
efervescencia o burbujas.
Resultados
- Positiva: Una prueba positiva esta dada por la aparicin rpida y sostenida de
burbujas o efervescencia.
- Negativa: Unas pocas burbujas pequeas despus de 20 a 30 segundos se
considera un resultado negativo.
Falsas Positivas: Los eritrocitos poseen catalasa, por lo cual debe tenerse
cuidado de no tomar eritrocitos del agar sangre junto con el material de la
colonia.
COAGULASA
Principio
La coagulasa es una protena de composicin qumica desconocida, que tiene
actividad similar a la protombina, capaz de convertir el fibringeno en fibrina, lo que
da como resultado la formacin de un cogulo visible en los sistemas apropiados. Se
utiliza para identificar Staphylococcus aureus de otras especies. La coagulasa se
presenta en dos formas, ligada y libre y para determinarlas se utiliza dos
procedimientos: en lmina y en tubo; si la prueba en lmina da positiva, no hay
necesidad de hacer la prueba en tubo.
Prueba en lmina (Coagulasa ligada)
Materiales
- Cepa en estudio
- Lmina
- Plasma de conejo
Procedimiento
- Colocar 1 gota de plasma sobre la lmina
- Agregar la colonia en estudio
- Mezclar
Resultados
- Positivo: La presencia de aglutinacin o formacin de grumos
- Negativo: No se observa aglutinacin, permanece emulsionada la colonia
Prueba en tubo (Coagulasa libre)
Materiales
- Cepa en estudio
- Tubo de ensayo con 0.5 ml de plasma de conejo
Procedimiento
- Agregar la colonia en estudio al tubo de ensayo
- Incubar a 35C por 4 horas; si no se ha formado el cogulo, reincubar por 24
horas a temperatura ambiente
Resultados
- Positivo: La formacin de un cogulo
- Negativo: No se observa formacin de coagulo, permanece lquido el plasma
MANITOL
Principio
Al utilizar el microorganismo al manitol como sustrato e incorporarlo al sistema
Embden-Meyerhoff-Parnas, que tiene como productos finales cidos que provocan la
disminucin del pH en el medio de cultivo, que se detecta mediante el viraje del
indicador rojo de fenol a amarillo.
Materiales
- Cepa en estudio
- Caldo de Manitol
Procedimiento
- Sembrar la colonia en el caldo
- Incubar a 35C por 24 horas
Resultados
- Positivo: cuando el indicador del medio vira a amarillo
- Negativo: cuando conserva su color rojo
DNAsa
Principio
Se basa en la presencia de la enzima termoestable DNAsa que es capaz de clivar los
enlaces fosfodiester internos de la molcula de DNA. Para evidenciar la presencia de
la enzima, se inunda el medio con cido clorhdrico normal, el cual precipita la
molcula del cido pero no sus polmeros.
Materiales
- Cepa en estudio
- Agar DNA
- Acido clorhdrico 1 Normal
Procedimiento
- Sembrar por estra gruesa la colonia en estudio, en el agar DNA
- Incubar a 35C por 24 horas
-
A las 24 horas: Inundar la superficie del medio con HCL 1N, esperar 2 minutos
Resultados
- Positivo: La formacin de un halo transparente alrededor de la siembra indica
presencia de DNAsa.
- Negativo: La formacin de un precipitado alrededor de la siembra indica
ausencia de la enzima
NOVOBIOCINA
Principio
S. epidermidis
S. saprophyticus
Coagulasa
DNAsa
Manitol
Prueba
Novobiocina
Agar sangre
Discos de Optoquina 5 ug.
Procedimiento:
- Sembrar la colonia masivamente en cuadrcula sobre una placa de agar sangre
- Colocar un disco de Optoquina y presionar suavemente
- Incubar a 35C por 24 horas
Resultados
- Sensible: La aparicin de un halo de inhibicin mayor a 16 mm de dimetro
- Resistente: Crecimiento alrededor del disco o halos menores a 16 mm
KF
Principio
Determinar la capacidad de un microorganismo de crecer en un medio inhibidor y
fermentar un carbohidrato produciendo un cambio de color.
Materiales
- Cepa en estudio
- Agar KF
Procedimiento:
- Sembrar por doble picadura y estra en la superficie
- Incubar a 35C por 24 horas
Resultados
- Positivo: El medio vira a amarillo
- Negativo: el medio permanece del color original
PRACTICA DE LABORATORIO
PARTE II.
Objetivos especficos
-
Materiales
-
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Actividad
4. Dibuje las diferentes caractersticas microscpicas de los hallazgos.
5. Defina los diferentes tipos de hemlisis.
6. Realice un flujograma para la identificacin del agente etiolgico de la muestra
asignada,
7. Escriba 5 enfermedades infecciosas que produzca cada uno de los agentes
etiolgicos aislados en el grupo y otras especies de microorganismos Gram
positivos importantes en patologa humana.
8. Para cada una de las entidades descritas en clase, escriba el examen
microbiolgico de laboratorio, til para su diagnstico.