ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD: CIENCIAS
ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
INFORME DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA.
PRÁCTICA No. CULTIVO DE SECRECIÓN VAGINAL

1. DATOS GENERALES:

NOMBRE: estudiante(s) CODIGO(S): estudiante(s)

Jessica Granizo. 3788.
Tatiana Guashpa. 3811.
Karen Naranjo. 3786.
Katherin Saigua. 3572.
Alejandra Villaroel. 3573.
Johana Rosero 3767.

GRUPO No.: 06.

DOCENTE: Dr. Mónica Concha.

NIVEL: 5to. PARALELO: “B”

LUGAR DE REALIZACIÓN: Microbiología Clínica

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

17-12-2021. 09-01-2022.
2. OBJETIVO(S):

2.1. GENERAL

• Realizar el estudio microbiológico completo de una muestra de exudado vaginal

como método estándar para el diagnóstico de infecciones de transmisión sexual.

2.2. ESPECÍFÍCOS

• Adiestrar al alumno en el procesamiento de cultivos bacterianos, que incluyen:

coloraciones, preparación de medios de cultivo y de pruebas bioquímicas de
identificación bacteriana, preparación de antibiogramas, etc.

• Aislar e identificar los diferentes microorganismos (bacterias, parásitos y

hongos), causantes de infección en el aparato genital femenino.

3. MARCO TEÓRICO:

Las secreciones vaginales normales se caracterizan por ser: inodoras, claras,

viscosas,pH ácido menor que 4,5, no contienen neutrófilos y no fluyen durante el
examen con espéculo, además la flora vaginal está constituida por lactobacillus sp.
como flora comensal. La mucosa vaginal de la niña, a diferencia de la mujer adulta,
es delgada conausencia de glucógeno y lactobacilos acidófilos de Doderlein, pH
neutro (7 a 8), medio que favorece el cultivo de microorganismos. Anatómicamente
la cercanía del ano a la uretra y vagina favorece la contaminación fecal y urinaria.

La infección vaginal o síndrome de flujo vaginal es un proceso infeccioso de la

vagina caracterizado por uno o más de los siguientes síntomas: flujo, prurito vulvar,
ardor, irritación, disuria, dispareunia y fetidez vaginal, determinados por la invasión
y multiplicación de cualquier microorganismo en la vagina y como resultado de un
desbalance ambiental en el ecosistema vaginal. Se presenta en las mujeres cuando
tienen infección en la vagina (también llamada vaginitis) o en el cuello del útero
(cervicitis). En la práctica médica las infecciones vaginales representan un problema
de salud frecuente, cuyas formas de presentación van a depender de los agentes
causales, dentro de los cuales se incluyen: bacterias (Chlamydia trachomatis,
Neisseria gonorrhoeae, Treponema pallidum, Gardnerella vaginalis, etc.), virus (el
herpes genital y el papiloma humano), hongos (Cándida albicans) y parásitos
(Trichomonas vaginalis).

Si existe la presencia de flujo vaginal anormal así como dolor pélvico, muy
probablemente, el médico recomendará la realización de un cultivo vaginal también
conocido como cultivo endocervical para poder hacer un diagnóstico acertado y
buscaruna solución efectiva a la infección.

Si se comprueba la presencia y el crecimiento de estos microorganismos en las

muestras, se realizarán nuevos estudios para identificar al microorganismo concreto
y estudios de sensibilidad de éste a los antibióticos o antifúngicos (en el caso de
hongos) para determinar cuál o cuáles de ellos son los más adecuados para el
tratamiento de lainfección.

4. METODOLOGÍA

4.1. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

- Medio Sólido: AGAR SANGRE, AGAR EMB O MAC CONKEY, AGAR

CHOCOLATE.

• Pesar la cantidad de medio de cultivo óptima y rehidratarlo con agua destilada

en un matraz de erlenmeyer.

• Autoclavar el matraz de erlenmeyer con un tapón de gasa sin cerrarlo totalmente

durante 30 minutos a una presión de 103kPa y una temperatura de 121°C.

• Sacar del autoclave la preparación, esperar que adquiera la temperatura

adecuada, aproximadamente unos 40ºC.

• Distribuir el medio en las placas de Petri estériles dentro de una campana de

flujo laminar o en las proximidades del mechero, flameando bien la boca del
matraz de erlenmeyer para evitar contaminaciones.

• Dejar que el medio solidifique.

Para el AGAR SANGRE:

• Obtener de manera aséptica la cantidad precisa de sangre en un tubo

completamente estéril (esto quiere decir la concentración exacta de 5% para el
volumen de agar preparado).

• Mezclar con cuidado el agar con la concentración exacta de sangre evitando que
se formen grumos.
• Distribuir el medio en las placas de Petri estériles dentro de una campana de
flujo laminar o en las proximidades del mechero, flameando bien la boca del
matraz de erlenmeyer para contaminaciones.

• Dejar que el medio solidifique.

NOTA: Si preparó los medios con anterioridad guardarlos en una nevera a 4ºC.

4.2. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO, EMPLEADOS EN LAS

DIFERENTESPRUEBAS BIOQUÍMICAS DE IDENTIFICACIÓN
BACTERIANA.

• Seguir las indicaciones expuestas en cada frasco de medios de cultivo para

pruebas bioquímicas y disponer en tubos de ensayo estériles la cantidad
requerida para cada prueba, cubrir los tubos con un tapón estéril e inclinarlos de
modo que se obtenga la forma de pico de flauta en la superficie del tubo (medio
Urea, Citrato, TSI), para el agar SIM no es necesario obtener la disposición de
pico de flauta.

• Dejar en posición inclinada los medios que requieran la disposición de pico de

flauta hasta que solidifiquen.

• Las pruebas bioquímicas a emplearse en la práctica incluyen métodos que

permitan dar indicios sobre qué tipo de bacteria se ha desarrollado en nuestro
cultivo, que incluyen: Prueba de la catalasa, oxidasa, identificación de hemólisis,
sensibilidad a diferentes antimicrobianos, fermentación y crecimiento en agar
manitol salado, producción de gas, etc.

• INCUBACIÓN: de las pruebas bioquímicas y del Antibiograma de acuerdo

a lasindicaciones expuestas a una temperatura de 35 a 37ºC durante 24 horas.

4.3. EXAMEN EN FRESCO

• Colocar con ayuda de un hisopo estéril, una gota de suero fisiológico o solución
salina impregnada con la muestra del exudado vaginal problema sobre una placa
portaobjetos y cubrirla.

• Visualizar al microscopio, donde se investigará la presencia de: Leucocitos,

células clave tapizadas con pequeños bacilos pleomórficos gram-variables,
indicativos de infección por Gardnerella vaginalis, presencia de Trichomonas
vaginalis (observar su movimiento característico) y/o levaduras, guiando así un
diagnóstico microscópico.

4.4. TINCIONES DIRECTAS

• Para la tinción, preparar el frotis de la muestra, secar y fijar al calor.

• Proceder a la coloración de Gram con las condiciones e indicaciones expuestas

y aprendidas en prácticas anteriores.

• Las bacterias Gram-positivas presentarán una coloración violeta mientras que

las Gram-negativas la presentarán roja o rosa.

• Investigar la presencia de diplococos Gramnegativos de forma arriñonada con

tendencia a disponerse intracelularmente, mismos que pueden ser indicativos de
infección por Neisseria gonorrhoeae.

4.5. TEST DE AMINAS (Para el diagnóstico de Gardnerella vaginalis)

• Colocar una gota de muestra de flujo vaginal con ayuda de un hisopo

estérilsobre una placa portaobjetos.

• Agregar dos gotas de hidróxido de potasio al 10%.

• Distinguir la presencia de un olor desagradable característico a pescado.

4.6. REALIZACIÓN DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS.

• Una vez visualizadas las coloraciones de GRAM de las muestras problema y

observadas las características generales de las colonias desarrolladas, procedera
realizar de acuerdo a sus particularidades, las diferentes pruebas bioquímicas
que nos ayudarán en la identificación presuntiva y definitiva de los
microorganismos, para luego anotar en sus resultados, la familia, género y
especie bacteriana.

• Si visualizó en su cultivo, el crecimiento de levaduras, proceder a realizar la

prueba rápida del tubo germinal, donde se observará la formación de una
 extensión filamentosa de la levadura luego de permanecer por 30 minutos en
suero o plasma humano a una temperatura 37°C.

4.7. REALIZACIÓN DEL ANTIBIOGRAMA

• Una vez reconocidas la o las bacterias en las muestras problemas, proceder a

realizar el respectivo antibiograma mediante la técnica de difusión en agar (Kirby
Bauer), incluyendo discos de antibióticos para las especies bacterianas
identificadas.

• Para la colocación de los discos de sensibilidad se usarán pinzas estériles y la

distancia entre disco y disco no deberá ser menor a 1,5 cm.

• De ser necesario, incluir en su antibiograma, los discos de sensibilidad con

concentraciones adecuadas que permitan diferenciar tipos bacterianos.

• Posteriormente se llevarán las placas a incubar por 24 horas.

• Al día siguiente se medirán con una regla los halos de inhibición por la parte
trasera de la placa y se realizará la respectiva interpretación con ayuda de las
tablas, donde se determina si existe Sensibilidad (S) o Resistencia (R) al
antibiótico.

4.8. OBSERVACIÓN DE LOS RESULTADOS.

• En primer lugar, observar a simple vista diversas características como el color,

tamaño y el borde de las colonias desarrolladas en los diferentes agares así.
como el olor y la turbidez del medio, ya que en algunos casos suelen ser
distintivos de un determinado tipo de microorganismo y pueden servir de ayuda
a la hora de su identificación.

• Transcurrido el tiempo necesario (24 horas) para la lectura de las diferentes

pruebas bioquímicas, interpretar los resultados de acuerdo a:

- Crecimiento bacteriano

- Cambio de pH y color

- Presencia de fermentación
 - Producción de gas

- Presencia de actividad enzimática

• De acuerdo a sus conocimientos en cuanto a las pruebas de identificación

bacteriana (presuntivas y definitivas), para microorganismo Gram positivos y
Gram negativos y mediante la utilización de tablas de identificación bacteriana
propuestas, determinar la familia, género y de ser posible la especie bacteriana
a la cual pertenece el microorganismo problema.

5. PROCEDIMIENTO.

Toma de muestra y cultivo (Video 1)

• Muestra 23470 y Muestra 23461.

1. Se toma la muestra al paciente se introduce el hisopo y se mezcla bien en el
tubo.
2. Sacar el hisopo para evitar que se desprenda el algodón.
3. Utilizar solución fisiológica para realizar el examen directo.
4. En el tubo de Stuart donde se puede sembrar directo.Tomar la muestra al paciente
y colocar en el tubo.
5. Para sembrar se debe encender el mechero y destapar el medio de Stuart y con
una asa sacar el hisopo.
6. Tomar los 3 agares
7. Comenzar con el agar sangre y dejar la muestra con el hisopo en uno de los
rincones.
8. Repetir el paso anterior con el agar chocolate siempre haciendo rotar y girar y lo
mismo con el agar macconkey debido a que son dos medios comunes.
9. Esterilizar el asa y el sabouraud se siembra directamente con el hisopo en cambio
estas muestras se asientan con el hisopo y luego con el asa se realiza la siembra.
10. Enfriar el asa y estriar desde el lugar donde se colocó la muestra por lo
general se hacen tres veces la estriada.
11. Repetir el paso anterior con el agar chocolate desde la zona donde se
introdujo luego enfriar la asa y realizar los 3 estriados.
12. Finalmente con el agar macconkey se esteriliza el asa y donde se dejó la
muestra con el hisopo se empieza a estriar y se realiza 3 estriadas en total.
 13. Se esteriliza el asa y las cajas se debe rotular con un marcador colocando
el número de muestra.
14. Finalmente se lleva a la estufa a una temperatura de 35 a 37 º C durante
18 a 24 horas.

EXAMEN DIRECTO
MUESTRA 23470

15. Mezclar bien la solución fisiológica y con la ayuda de una pipeta pasteur sacar.
16. En un portaobjetos colocar una gota y tapar con un cubreobjeto.
17. Observar en el microscopio con el lente de 4x 10x y 40 x.

Pruebas de identificación (Video 2)

• Muestra 23461

Prueba de catalasa

• En un portaobjetos colocar 1 gota de peróxido de hidrogeno H2O2

• Esterilizar el asa.
• Colocar con el asa esterilizada tomar muestra preferiblemente de del agar sangre.
• Colocar la muestra en el peróxido de hidrogeno y posteriormente esterilizar el
asa.
• Observa los resultados.

Prueba Bilis Esculina.

1. Identificar el tubo con agar bilis esculina inclinado.

2. Esterilizar el asa en hilo.
3. Tomar una cantidad de muestra con el asa en hilo.
4. Sembrar en el tubo con agar pinchando con el asa y estriar al final el pico.
5. Posteriormente llevar a la estufa durante 18 a24 horas a una temperatura de 35 a
37°C.
6. Observar los resultados.
• Muestra 23470

Prueba de catalasa
1. En un portaobjetos colocar 1 gota de peróxido de hidrogeno H2O2
2. Esterilizar el asa.
3. Colocar con el asa esterilizada tomar muestra preferiblemente de del agar sangre.
4. Colocar la muestra en el peróxido de hidrogeno y posteriormente esterilizar el
asa.
5. Observa los resultados.

Prueba coagulasa

1. Identificar un tubo de hemolisis.

2. Es necesario tener plasma que se ha mantenido en un tubo
sin anticoagulante citrato de sodio de preferencia tapa celeste. Con un tiempo de
protombina normal.
3. Tomar 0,5 ml de plasma y colocar en el tubo de hemolisis.
4. Esterilizar el asa redonda
5. Tomar muestra del Agar sangre o chocolate que es donde crecieron las muestras
6. Colocar la muestra en el tubo, primero tocando las paredes para que las colonias
se desprendan del asa.
7. Se incuba a 35º y se procede a su lectura a las 18 horas.

Prueba manitol

1. Usamos una caja Petri o tubo que tenga manitol

2. Identificamos
3. Sembrar en toda la superficie
4. Esterilizar el asa redonda.

Prueba de la novobiocina

1. Identificamos.
2. Esterilizamos el asa redonda.
3. Sembramos en frío y tomamos la muestra del agar sangre o chocolate.
4. Sembramos en 3 direcciones lo más seguido posible horizontal, transversal o
vertical.
5. Con la ayuda de una pinza tomamos un disco de Novobiocina.
6. Colocamos un disco de Novobiocina en el centro de la siembra.
7. Posteriormente colocar en la estufa por 24 h
8. Medir el halo con una regla, si mide mayor o igual a 16 es sensible y si mide
menos de 16 es resistente.

Prueba de DNASA

1. Tomamos un poco de muestra con el asa.

2. Colocar en el agar DNASA, haciendo una línea con la batería que tomamos.
3. Esterilizamos el asa.
4. Llevar a la estufa.
5. Al día siguiente colocar 1 gota de HCL encima de la línea que va a crecer, si se
forma un canal se considera positivo y si no se forma el canal se considera negativo.

Prueba del tubo germinativo

1. Identificamos el tubo.
2. Necesitamos suero que se encuentra en un tubo tapa amarilla sin anticoagulantes
una cantidad de 0,5.
3. Esterilizar el asa.
4. colocar en el tubo muestra de agar Sabouraud y tomar colonias.
5. Posteriormente colocar en el tubo por las paredes.
6. Mezclar bien y esterilizamos el asa.
7. Finalmente se lleva a la estufa.

6. EQUIPOS Y MATERIALES:

• Mechero bunsen o similar.

• Asas para siembra.

• Placas de Petri con Agar sangre, agar EMB o MacConkey, agar chocolate.

• Portaobjetos.

• Cubetas de tinción o similar.

• Colorantes para tinción Gram.

• Microscopio.
• Hisopos estériles.

• Aceite de inmersión.

• Discos de sensibilidad antimicrobiana.

• Material de bioseguridad: mandil, guantes, mascarilla, gorro.

• Peróxido de Hidrógeno.

• Medios de cultivo para pruebas bioquímicas.

• Tubos de ensayo con solución salina estéril.

• Escala Mac Farland.

• Regla.

7. RESULTADOS Y DISCUSIÓN:

VIDEO 1.

Examen directo observado en el microscopio:

Se observaron:

• Células epiteliales.

• Bacterias.

• Levaduras.

Tinción de Gram.

Se observaron:

• 23470: Levaduras.

• 23461: Células guía. (Células epiteliales con cocobacilos gram negativos, o

Gadnerella vaginalis).
 INFECCIONES DEL TRACTO GENITAL.
VIDEO 2.
MUESTRA 1.
1.1. Número de muestra: 23470.
1.2. Espécimen: Secreción vaginal.
1.3. Lectura de cultivos.
Agar Características morfológicas
MacConkey Sin desarrollo de colonias.
Sangre Desarrollo de colonias con presencia de un color blanquecino.
Chocolate Desarrollo de colonias con presencia de color blanquecino.
Sabouraud Desarrollo de colonias blancas, pueden ser levaduras o bacilos.
Fuente: Grupo 6. Laboratorio de microbiología clínica. Espoch, 2022

1.4. Pruebas primarias requeridas para la confirmación a nivel de género.

(Prueba-interpretación).

Prueba Catalasa

Interpretación: Catalasa positiva, presenta burbujas y Catalasa negativa, no se

forman burbujas.

Resultado Video 3: Catalasas positiva ya que presenta la formación de burbujas. Al

ser catalasa positiva se trata de Staphylococcus.

Ya que la prueba de la catalasa es un método rápido y fácil para la

diferenciación de Streptococcus y Staphylococcus. Todas las especies
de Streptococcus son catalasa negativa y Staphylococcus son catalasa positiva.

La enzima catalasa descompone el peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y

oxígeno bajo la fórmula 2 H2O2----2 H2O + O2. De esta manera las bacterias se
protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del metabolismo
aerobio de los azúcares.

1.5. Pruebas requeridas para la identificación a nivel de especie. (Prueba-

interpretación).
Prueba Bilis Esculina
 Los Estreptococos presentan hemolisis, mientras que Enterococos no presentan
hemolisis, debido a que la muestra no tenía hemolisis se realiza la prueba de Bilis
Esculina para detectar si hay o no la presencia de Enterococos.

Interpretación: Positivo presenta oscurecimiento (color negro) del

cultivo y presencia de Enterococo. Mientras que negativo es ausencia del
obscurecimiento (color mostaza) no hay presencia de Enterococos. Ya que el Agar
Bilis Esculina es ideal para el aislamiento y diferenciación
de Enterococos intestinales, basado en la hidrólisis de la esculina en presencia de
bilis.

Resultado: Positivo presenta oscurecimiento (color negro) por la presencia de Fe3+

del cultivo y presencia de Enterococo.

Negativo es ausencia del obscurecimiento (color mostaza) no hay presencia

de Enterococos

Reporte de resultados:

Como se puede observar estos microorganismos crecen rápidamente en el agar bilis

esculina ya que hidrolizan la esculina, y este en presencia de iones hierro forman un
compuesto de color verde oliva hasta negro. La bilis de buey inhibe el desarrollo de
la flora acompañante. El agar es el agente solidificante
MUESTRA 2.
2.1. Número de muestra: 23470.
2.2. Espécimen: Secreción vaginal.
2.3. Lectura de cultivos.
Agar Características morfológicas
MacConkey Sin desarrollo de colonias.
Sangre Desarrollo de colonias pequeñas y transparentes.
Chocolate Desarrollo de colonias pequeñas y transparentes.
Fuente: Grupo 6. Laboratorio de microbiología clínica. Espoch, 2022

2.4. Pruebas primarias requeridas para la confirmación a nivel de género.

(Prueba-interpretación).
Prueba Coagulasa
Debido a que la prueba de la catalasa fue positiva lo cual es indicativo
de Staphylococcus se realiza una prueba de coagulasa.
La enzima coagulasa es una enzima producida por un determinado microorganismo
capaz de coagular el plasma sanguíneo. Su aplicación clínica más importante es la
ayuda a la diferenciación del Staphylococcus Aureus de otros Staphylococcus.
Interpretación: Si no se ha formado el coágulo a las cuatro horas, consideraremos
que el microorganismo es coagulasa negativa. En caso de que sí se haya formado el
coágulo se considerará al microorganismo como coagulasa positiva.
Resultado Video 3: Formación de coagulo, siendo este positivo para Staphylococcus
aureus.

Prueba Agar Manitol.

Utilizamos debido a que sirve para el aislamiento selectivo de Estafilococos y para

la detección de Staphylococcus aureus a partir de muestras clínicas, este el agar sal
manitol contiene peptonas y extractos de carne bovina, que suministran los nutrientes
esenciales para el microorganismo. Una concentración de cloruro sódico de 7,5%
tiene como resultado una inhibición parcial o completa de los organismos bacterianos
diferentes de los estafilococos.

Interpretación: La fermentación de manitol, indicada por el cambio del indicador

de rojo fenol, facilita la diferenciación de la especie de estafilococos.

Resultados Video 3: Positivo para Staphylococcus coagulasa ya que hidrolizan el

manitol acidificando el medio, las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla
brillante.

Los estafilococos positivos a la coagulasa, por

ejemplo, Staphylococcus aureus producen colonias de color amarillo y un medio
circundante de color amarillo, mientras que los estafilococos negativos a la coagulasa
producen colonias de color rojo o rosado y no producen cambio de color en el
indicador de rojo fenol.

Prueba Novobiocina.

Realizamos la prueba del disco de novobiocina ya que es de mucha utilidad para

la identificación de los S. saprophyticus de otras especies de importancia clínica.
Interpretación: S. saprophyticus y S. cohnii son generalmente resistentes a
la novobiocina, mientras que los otros staphylococco coagulasa negativos no lo son.

Resultado Video 3: Sensible al antibiótico ya que su diámetro el mayor a 16 mm.

Exactamente mide 17mm.

La resistencia al antibiótico se define como un diámetro de inhibición menor a 16

Mm, mientras que la sensibilidad al antibiótico se define como un diámetro de
inhibición mayor o igual a 16 mm. (• Harvey, 2008)
2.5. Pruebas requeridas para la identificación a nivel de especie. (Prueba-
interpretación).

PruebaDNasa.
Realizamos la prueba de DNasa para así poder diferenciar distintas especies
de Staphylococcus Aureus, que normalmente produce desoxirribonucleasas, de
otros Staphylococcus.

Interpretación: Al poner en contacto un microorganismo con un medio que lleva

ADN, si es DNasa positivo el S. aureus despolimerizará el ADN cambiando la
estructura del medio. En cambio, si es DNasa negativo, no lo hará. Si el método no
se observa a simple vista, se debe revelar con HCl 1N. Si el microorganismo
produce desoxirribonucleasa, se apreciará un cambio en el agar.

Resultado Video 3: Positivo (+) Staphylococcus Aureus ya que las colonias están
rodeadas por una zona clara donde el ADN ha sido despolimerizada e hidrolizado.
(Struthers, 2018)

Tubo Germinativo para las colonias del agar Sabouraud.

Realizamos esta prueba para la detección del tipo de levadura que creó en el agar
Sabouraud.

Interpretación: Sólo C. albicans es capaz de producir verdaderos tubos germinales.

Mientras que Candida spp. Se ven levaduras normales redondas.

Resultado Video 3: Según la muestra realizada se trata de una Candida spp por la
formación de sus levaduras.
 Reporte de resultados:

En PruebaDNasa : Al dar resultado positivo para Staphylococcus Aureus este se

despolimerizará su ADN cambiando la estructura ,la cual se ve la salida de un halo
claro alrededor del crecimiento bacteriano , lo que no pasa cuando el resultado sale
negativo, no se observa ninguna zona clara.

En el caso del Agar Sabouraud

El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH ácido, inhiben el desarrollo

bacteriano y favorecen el crecimiento de hongos y levaduras como es el claro ejemplo de
C. albicans. (Cornelissen, 2015)

3. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:

• Se adiestró al alumno en el procesamiento de cultivos bacterianos, tales como

siembra bacteriana, tinción gram, aislamiento del microorganismo, pruebas de
identificación, utilización de discos de sensibilidad, entre otros.

• Se aisló e identificó que la bacteria causante de infección en el aparato genital

femenino fue la Gadnerella vaginales, la misma que provoca prurito y una
secreción blanquecina mal oliente.

RECOMENDACIONES.

• No dejar el hisopo dentro del tubo que contiene la solución fisiológica ya que
puede desprenderse el algodón.

• Utilizar de manera correcta los reactivos para obtener resultados correctos.

• Tener los conocimientos necesarios para la identificación de microorganismos

del exudado vaginal.

• Realizar una siembra adecuada para el crecimiento del microrganismo.

4. BIBLIOGRAFÍA

• Arnold Rodríguez Mónica, González Lorenzo Ariadna, Carbonell Hernández

Teresa. Diagnóstico de la vaginosis bacteriana. Aspectos clínicos y estudios
 microbiológicos. Rdo. Medicina. Electrón. [Internet]. junio de 2014 [citado el 9
de enero de 2022]; 36 (3): 325-338. Disponible en:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1684-
18242014000300009&lng=en.

• Laboratorios Britania S.A. Agar Manitol Salado. (2015). Rev. 01. [Online].
Disponible en: http://www.britanialab.com/productos/B02118%20REV%2001-
MANITOL%20SALADO%20AGAR.pdf

• Laboratorios Britania S.A. T.S.I Agar (Triple Sugar Iron Agar). (2015). Rev. 01.
[Online]. Disponible en:
http://www.britanialab.com/productos/B02134%20REV%2001-
TSI%20AGAR.pdf

• Struthers K. Microbiología clínica [En Línea]. Ciudad de México: Editorial El

Manual Moderno, 2018 [consultado 10 Jan 2022]. Disponible en:
https://elibro.net/es/lc/espoch/titulos/39793

• Cornelissen, C. N. y Suárez Martínez, S. E. (Trad.) (2015). Memorama:

Microbiología. L'Hospitalet de Llobregat, Wolters Kluwer Health. Recuperado de
https://elibro.net/es/lc/espoch/titulos/125906.

• Harvey, R. A. Champe, P. C. y Fisher, B. D. (2008). Microbiología (2a. ed.).

Barcelona, Wolters Kluwer Health. Recuperado de
https://elibro.net/es/lc/espoch/titulos/125446.

• Banegas Y. (2020). Cultivo de Secreción Vaginal día 3. Disponible en:

https://www.youtube.com/watch?v=Zlk8DA95U3I

ANEXOS.

ANEXO – 1.

DIAGRAMAS DEL PROCEDIMIENTO.

 Toma de muestra y cultivo (Video 1)

• Muestra 23470 y Muestra 23461.

Introducir el hisopo que

Sacar el hisopo para evitar que Usar solución fisiológica para
contiene la muestra en el tubo
se desprende el algodón. realizar el examen directo.
de ensayo.

Para la siembra: Encender el Colocar la muestra en el tubo Usar solución fisiológica para
mechero, destapar el medio Stuart Stuart. (Como medio de realizar el examen directo.
y sacar el hisopo con el asa. transporte).

Agar sangre: Usar el hisopo para Esterilizar el asa, enfriar y estriar

Sabouraud: Sembrar
dejar la muestra en uno de los desde el lugar donde se colocó la
directamente con el hisopo.
rincones. (Hacer lo mismo con el muestra.
agar chocolate, y Macconkey).

Llevar a la estufa a una

temperatura de 35 a 37 º C durante Rotular las cajas colocando el
18-24 horas. número de la muestra.
 EXAMEN DIRECTO
MUESTRA 23470

Mezclar bien la solución fisiológica que

contiene la muestra y extraer con una Colocar una gota en una placa porta Observar en el microscopio con el lente de
pipeta pasteur. objetos y tapar con un cubreobjetos. 4x, 10x y 40x.

DIAGRAMA PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN.

 Prueba manitol 1.- Usamos una caja Petri o tubo que tenga
manitol.

3.- Sembrar en toda la

superficie
2.- Identificamos
4.- Esterilizar el asa redonda.

Prueba de la Novobiocina
1.- Identificamos.
2.- Esterilizamos el asa
redonda.

4.-Sembramos en 3
direcciones lo más seguido
posible horizontal, transversal 7.- Posteriormente colocar en la
o vertical. estufa por 24 h
3.-Sembramos en frío y
tomamos la muestra del agar
5.- Con la ayuda de una sangre o chocolate.
pinza tomamos un disco de 8.- Medir el halo con una regla, si
Novobiocina. mide mayor o igual a 16 es sensible
y si mide menos de 16 es resistente.
6.- Colocamos un disco de
Novobiocina en el centro de la
siembra.
 3.-Esterilizamos el asa.

Prueba de DNASA
1.- Tomamos un poco de 4.-Lllevar a la estufa.
muestra con el asa.

5.-Al día siguiente colocar 1 gota de HCL encima de

la línea que va a crecer, si se forma un canal se
2.- Colocar en el agar DNASA, haciendo una línea con la
considera positivo y si no se forma el canal se
batería que tomamos.
considera negativo.

3.-Esterilizar el asa.
Prueba del
1.-Identificamos el tubo. tubo
germinativo 4.- colocar en el tubo muestra de agar Sabouraud y tomar
colonias.

5.- Posteriormente colocar en el tubo por las paredes.

6.- Mezclar bien y esterilizamos el asa.

2.- Necesitamos suero que se encuentra en un 7.- Finalmente se lleva a la estufa.

tubo tapa amarilla sin anticoagulantes una
cantidad de 0,5.

Fin
 ANEXO – 2.
a) b) c) d) e)

f) g) h) i) j)

NOTAS:
a) Tubo con suero fisiológico.
b) Tubo STUART.
ESCUELA SUPERIOR
c) Siembra en agar sangre 23461 y Cultivo de secreción vaginal día 1-
POLITECNICA DE
23470.
CHIMBORAZO
d) Siembra en agar chocolate 23461 CATEGORIA DEL DIAGRAMA:
FACULTAD DE CIENCIAS
y 23470. O Aprobado o Preliminar
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y
e) Siembra en agar Macconkey o Certificado o Por aprobar LÁMINA. ESCALA FECHA
FARMACIA
23461 y 23470. o Información o Por calificar
ELABORADO POR:
f) Identificar las muestras.
Granizo, J; Rosero, J; Guashpa, K.;
g) Cultivos en la estufa.
Naranjo, K.; Saigua K.;Villaroel A. 1 1:1 2022/01/10.
h) Examen directo muestra 23470.
i) Tinción gram muestra 23470.
j) Tinción gramm muestra 23461.
 ANEXO – 3.
a) b) c) d) e)

f) g) h) i) j)

k) l) m)

NOTAS:
a) Resultado en agar chocolate 23461
b) Resultados agar chocolate 23461 ESCUELA SUPERIOR
c) Prueba catalasa POLITECNICA DE Pruebas de identificación día 2-
d) Resultado sin hemolisis 23461. CHIMBORAZO
e) Realización de la Prueba bilis esculina CATEGORIA DEL DIAGRAMA: FACULTAD DE CIENCIAS
f) Resultados en agar sangre 23470 O Aprobado o Preliminar
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y
g) Resultados en agar chocolate 23470 o Certificado o Por aprobar
h) Prueba coagulasa
FARMACIA LÁMINA. ESCALA FECHA
o Información o Por calificar
i) Prueba agar manitol ELABORADO POR:
j) Prueba novobiocina Granizo, J; Rosero, J; Guashpa, K.;
k) Prueba DNasa Naranjo, K.; Saigua K.;Villaroel A. 2 1:1 2022/01/10.
l) Resultado agar Sabouraud
m) Prueba tubo germinativo
 ANEXO – 4.
a) b) c) d) e)

f) g) h) i) j)

k) l)

NOTAS:
a) Agar Sangre Hemólisis Beta 23461
b) Agar Mac Conkey 23461
ESCUELA SUPERIOR
POLITECNICA DE Pruebas requeridas para la
c) Agar Chocolate 23461 identificación a nivel de especie.
d) Bilis esculina CHIMBORAZO
CATEGORIA DEL DIAGRAMA: día 3-
e) Agar Sangre 23470 FACULTAD DE CIENCIAS
O Aprobado o Preliminar
f) Agar Mac Conkey 23470 CARRERA DE BIOQUÍMICA Y
o Certificado o Por aprobar
g) Agar Chocolate 23470 FARMACIA
h) Prueba Coagulasa 23470 o Información o Por calificar LÁMINA. ESCALA FECHA
ELABORADO POR:
i) Manitol Granizo, J; Rosero, J; Guashpa, K.;
j) Novobiocina Naranjo, K.; Saigua K.;Villaroel A. 3 1:1 2022/01/10.
k) DNASA
l) Tubo germinativo