Analisis y Sintesis de Peroxinitrito
Analisis y Sintesis de Peroxinitrito
Analisis y Sintesis de Peroxinitrito
UNAS
Universidad Nacional Agraria de la Selva
National Agrarian University of the Jungle
I.
Principio
III.
-
IV.
Materiales
Espectrofotmetro UV/VIS.
Cuvetas de cuarzo 1 ml.
Micropipetas (1000 l, 200 l, 100 l).
Pipetas, tips.
Reactivos
Nitrito de sodio (NaNO2).
Perxido de hidrgeno al 30% (H2O2 30%).
Acido clorhdrico (HCl)
Hidrxido de potasio (KOH)
Oxido de manganeso (MnO2)
Procedimiento
ddH2O
Solucin III:
1.5 M KOH
100 mL
ddH2O
2. Colacar 10 mL de Solucin I en una jeringa de plstico 5x el volumen de la solucin. En
otra jeringa de la misma capacidad agregar Solucin II.
3. De la solucin stock 1.5 KOH, medir 20 mL y llevarlo a un beaker de capacidad 5x del
volumen aadido.
4. Bombear a presin controlada la Solucin I y Solucin II usando una bomba a difusin
constante a 25 mL/min. Ambas soluciones se mezclarn a travs de un Y junction de 2
mm de dimetro. La reaccin mezcla en contacto con la Solucin III (1.5 M KOH) genera
una solucin de color amarillo intenso, el cual indica formacin de peroxinitrito.
5. Una vez sintetizado el peroxinitrito, remover el exceso de H2O2 filtrando la solucin stock
recientemente preparada, a travs de una jeringa de plstico de volumen de 20 mL y papel
filtro (Whatman Qualitative #3) conteniendo 4 g de MnO2.
Se recomienda alicuotar la solucin stock de peroxinitrito en volmenes de 1 mL. Si la
solucin es utilizada para pruebas in vivo filtrar a 0.2 m. Luego almacenar a -20C
durante 1 semana, luego descartar toda solucin despes de la fecha. Mayor tiempo de
almacenamiento se produce una prdida en la concentracin de el peroxinitrito.
V.
Clculos
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Densidad ptica
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
230
253
302
400
420
Longitud de onda, nm
-
VI. Refencias
1. Beckman, JS., Chen, J., Ischiropoulos, H., and Crow, JP. Oxidative chemistry of
peroxynitrite. Methods Enzymol. 233:229-240; 1994.
2. Pryor, WA.., and Squadrito, GL. The chemistry of peroxynitrite: A product from the reaction
of nitric oxide with superoxide. Am. J. Physiol. 268:L699-L722; 1995.
3. Sandoval-Chacn, M., Thompson, JH., Zhang, X-J., Liu, X., Mannick, EE., SadowskaKrowicka, H., Charbonnet, RM., Clark, DA., and Miller, MJ. Antiinflammatory actions of
cats claw: the role of NF-B. Aliment. Pharmacol. Ther. 12:1279-1289; 1998.
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