UNIVERSIDAD NACIONAL DE

JAÉN

CARRERA PROFESIONAL EN INGENIERIA DE

INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

TEMAS:
MÉTODOS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS.

DOCENTE:
ROLANDO EDMUNDO CHERO COSTA.

CATEDRA:
MICROBIOLÓGIA.

ESTUDIANTE:
SÁNCHEZ MARTÍNEZ TATIANA JHANDESY.

Jaén, 12 de junio de 2017

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ÍNDICE

I. OBJETIVOS 3
II. INTRODUCCIÓN 3
III. MARCO TEÓRICO 4
1. AGAR NUTRITIVO 4
a) Forma de actuación Error! Bookmark not defined.
b) Procedimiento Error! Bookmark not defined.
 Siembra Error! Bookmark not defined.
 Incubación Error! Bookmark not defined.
2. AGAR MCCONKEY 4
a) Forma de actuación Error! Bookmark not defined.
b) Empleo e interpretación Error! Bookmark not defined.
c) Procedimiento Error! Bookmark not defined.
 Técnicas de siembra 6
1. Estría 6
2. Tubo de ensayo inclinado 6
3. Medios semisólidos 6
4. Caldo de cultivo 6
3. CARACTERISTICAS CULTURALES DE LAS COLONIAS 7
IV. ATERIALES, EQUIPOS 5
1. Materiales 5
2. Equipos 5
V. RESULTADOS 7
1. Agar nutritivo (23 g / 1l H2O) 7
2. Agar Mac Conkey (50.03 g / 1l H2O) 8
VI. DISCUSIÓN 9
VII. CUESTIONARIO 9
VIII. LINCOGRAFÍA 10

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I. OBJETIVOS

 Explicar el fundamento de medios de cultivo y condiciones de

incubación para el aislamiento de microorganismos.
 Aplicar una de diferentes técnicas para el aislamiento de
microorganismos.
 Preparar medios de cultivo de uso general, diferencial y selectivo
para el cultivo de diferentes especies de bacterias.

II. INTRODUCCIÓN
El cultivo de microorganismos es una actividad que requiere del
conocimiento de técnicas de siembra o inoculación y de aislamiento para
transferirlos de un medio a otro, o mantener su crecimiento y actividad. Es
indispensable para realizar diversos estudios morfológicos, de
identificación, bioquímicos, de patogenicidad y ecológicos, entre otros.

Los medios de cultivo contienen los nutrientes necesarios para

cultivar microorganismos, tales como bacterias, hongos y otros. Los
microorganismos no pueden estudiarse individualmente debido a su
tamaño tan pequeño, por lo que sólo pueden ser estudiados en
poblaciones.
En la naturaleza, los microorganismos generalmente se encuentran
en poblaciones, formando parte de comunidades de gran complejidad, por
lo que uno de los objetivos de estudio más importantes en microbiología
es aislarlos. El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se
realiza, en la mayoría de los casos, mediante la técnica de estría cruzada
para producir colonias aisladas en cultivos sólidos y así, obtener un cultivo
puro o axénico, también conocido como cepa, que contiene un solo tipo
de microorganismo con la misma composición genética.
El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como
rutina para todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece sólido
incluso a relativamente altas temperaturas. Además, el crecimiento
bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen
mejor las colonias pequeñas.
El agar MAC CONKEY es un medio de cultivo selectivo y diferencial
para bacterias diseñado para aislar selectivamente bacilos Gram
negativos y entéricos (encontrados normalmente en el tracto intestinal) y
diferenciarlos sobre la base de la fermentación de la lactosa

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III. MARCO TEÓRICO

1. AGAR NUTRITIVO
Es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo
de bacteria. Es muy útil por que permanece sólido incluso a relativamente
altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo
hace en la superficie, por lo general se distinguen mejor las colonias
pequeñas. Preparado y contenido en una placa Petri es claro e incoloro o
con tonalidad amarillenta. El tiempo, la temperatura y la atmosfera de
incubación, dependerán del microorganismo.
1. Usos
Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de
alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.
 Siembra
En superficie: Inocular directamente la muestra por estría.
En profundidad: Inocular una alícuota de la muestra directa o de su
dilución. Verter un volumen del medio de cultivo fundido y enfriado a 40 –
45 °C. Homogenizar mediante movimientos de vaivén y rotación. Dejar
solidificar.

2. AGAR MAC-CONKEY

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial, es un medio de cultivo

selectivo para bacterias Gram negativas, este medio contiene el azúcar
lactosa y un indicador de PH (rojo neutro), entre otros componentes. Si la
bacteria fermenta el azúcar las colonias se tornan rosadas, si no la
fermentan las colonias se observan transparentes. Es selectivo para el
aislamiento de salmonellas, shigellos y bacterias coliformes, a partir de
heces, orina, alimentos, aguas residuales, etc.

a. Ingredientes

Sales biliares (medio inhóspito para el crecimiento de bacterias Gram

negativas, excepto Enterococcus y algunas especies de staphylococcus),
colorante cristal violeta (inhóspito para cierto tipo de bacterias Gram
positivo), indicador rojo neutro (el cual marca microorganismos que
fermenten la lactosa), lactosa, peptona y cloruro sódico.
b. Usos
Sirve como un indicador visual de pH, distinguiendo así las bacterias gran
negativas que pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden
(Lac-).

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IV. MATERIALES, EQUIPOS

1. Materiales
 Agar Mac-Conkey
 Probeta (100 ml)

 Agar nutritivo

 Tubos de ensayo estéril

 Agua destilada  Placas Petri estéril

2. Equipos
 Autoclave

 Asas bacteriológicas

 Espátulas
 Balanza analítica

 Matraz (50 ml)

 Horno (180 °C) e incubadora

(37°C).

 Varillas de vidrio

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3. PROCEDIMIENTO

a. Técnicas de siembra

1. Estría
 En superficie, inocular directamente muestra por estría.
 Colocar agar (10 ml aprox) a cada placa.
 Dejar solidificar.
 Flamee el asa y se toma muestra del material a estudiar. Extienda
de un extremo a otro formando líneas en zigzag hasta cubrir toda
el área de la caja.

2. Tubo de ensayo inclinado

 Rotular el tubo con el nombre el del gar usado y número de mesa
de trabajo.
 Con la mano derecha tome la aguja de inoculación y flaméela. Sin
soltarla, déjela enfriar.
 Sostenga el tubo con el cultivo en la mano izquierda, remueva el
tapón con el meñique de la otra mano y sosténgalo de tal manera
que no toque ninguna superficie.
 Flamee la boca del tubo.
 Retire con el agua de inoculación una porción de la colonia. Flamee
nuevamente la boca del tubo y Tápelo.
 Toma el tubo a inocular, destápelo, flaméelo e inocúlelo, haciendo
una estría en su superficie.
 Flamee de nuevo la boca del tubo, tápelo y colóquelo en la gradilla.
Antes de descartar la aguja de inoculación, esterilícela.
 Incube a 37 grados centígrados por 24 horas.

3. Medios semisólidos
Se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias. Tienen un menor
porcentaje de agar, por lo que no solidifican totalmente a la temperatura
ambiente. - Ejemplo: Agar MIO, Agar SIM.

4. Caldo de cultivo
Se utilizan preferentemente para favorecer el desarrollo bacteriano de
células estresadas. En determinadas ocasiones no se pueden sustituir por
los medios sólidos, por ejemplo en la síntesis de exotoxinas, pigmentos,
enzimas, etc. - Ejemplo: Agua peptonada, Caldo común, Caldo Cerebro
Corazón, Caldo Saboureaud, etc.
Es a 24 horas por 37 °C según el requerimiento del microorganismo.

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 5. CARACTERISTICAS CULTURALES DE LAS COLONIAS
 Aspecto de colonia: Húmeda, seca.
 Borde: Entero, lobulado, aserrado.
 Consistencia: Dura, blanda, mucoide, pastosa.
 Elevación: Convexa, plana, hundida.
 Forma: Circular, irregular, filamentosa, rizoide.
 Superficie: Lisa, rugosa.
V. RESULTADOS
1. Preparación De Medios De Cultivo

a. Agar nutritivo (23 g / 1L de agua destilada)

 Pesar 23 g de agar.
 Calentar el agua destilada.
 Disolver 23 g / 1 l de H2O.

 Cubrir la boca del matraz con papel y amarrarlo con un hilo.

 Meterlo dentro de la autoclave y llenar esta con agua destilada.
 Esterilizar en autoclave (12 °C/ 15 lb/ 30 min).

 Verter en placas.
 Esperar a que sea gelatinoso.
 Sembrar la muestra clínica.
 Observar

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b. Agar Mac Conkey (50.03 g / 1L de agua destilada)

 Pesar 5 g de agar.
 Calentar el agua destilada.
 Disolver 5 g / 1 l de agua destilada.

 Cubrir la boca del matraz con papel y amarrarlo con hilo pabilo
 Meterlo dentro de autoclave y llenar esta con agua destilada.
 Esterilizar en autoclave (12 °C/ 15 lb/ 30 min).

 Verter en placas.
 Esperar a que sea gelatinoso.
 Observar.

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 CARACTERÍSTICAS Agar Nutritivo Agar MAC-CONKEY
CULTURALES
Aspecto de colonia Húmeda Húmeda
Borde Entero Entero
Consistencia Pastosa Pastosa
Elevación Convexa Convexa
Forma Circular Circular
Siembra Estriado Estriado
Superficie Lisa Lisa

a. Agar Nutritivo: Ya que su uso es para todo tipo de bacterias, hubo

muchas colonias transparentes, sin saber que bacteria hemos sembrado
para esto tendríamos que realizar una tinción.
b. Agar MAC-CONKEY: En este medio de cultivo se observaron colonias
rosadas lo que significa que hubo bacterias Lac+, para saber que bacteria
hemos sembrado tendríamos que haber hecho una tinción de Gram.
VI. DISCUSIÓN

Al transcurrir el tiempo en cada cultivo la morfología de las colonias

tienden a cambiar. En el agar nutritivo las colonias toman un color amarillento
y hay colonias fuera del estriado. En el agar Mac-Conkey las bacterias que
fueron Lac+ pasan a ser Lac-, esto hace que cambie su color en las colonias
de rosadas pasan a ser lechosas o amarillentas. Todo esto ocurre mientras
esta en incubadora, pero si los cultivos son puestos en refrigeración sus
características culturales no cambian.
VII. CUESTIONARIO

1. ¿Qué es el agar y de donde se obtiene? ¿Cuáles son los nutrientes

que proporciona a los microorganismos?

Es una goma o mucílago originario del Japón, aunque el nombre corresponde

a una palabra malaya que significa "alga marina”. es una mezcla de
polisacáridos complejos (glúcidos o carbohidratos) principalmente agarosa,
agaropectina , galactosa y ácido urónico: la pared celular de estas algas está
diferenciada en una capa interna de celulosa y una externa amorfa de
naturaleza péptica, rica en coloides geliflcados. Estas sustancias son
indigeribles y constituyen fibra de tipo soluble. Es una gelatina vegetal de
origen marino que se obtiene a partir de diversas especies de algas rojas
(división Rhodophyceae) de los siguientes géneros: Geltdium, Gracllarla,
Pterocleda, Ceramium, GIgartína.
Los nutrientes que llevan son: fuentes de carbono, nitrógeno, sales que
suplan iones (P, K, Mg, Fe, Ca, etc.), otros elementos como estimuladores de
crecimiento pero siempre a concentraciones conocidas.

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 2. ¿Cuál es la consistencia química del agar Mc Conkey y cuáles son
los componentes o propiedades responsables de su función como
medios selectivos y diferenciales?

Medio selectivo por contener sales biliares y violeta cristal que inhiben el
crecimiento de bacterias no entéricas. También es un medio diferencial porque
contiene lactosa y un indicador de pH (rojo neutro). Las bacterias capaces de
fermentar lactosa producirán un cambio en el pH del medio por liberación de
productos ácidos. Como consecuencia sus colonias aparecerán de color fucsia o
rosadas, contrastando con la coloración amarillenta de las colonias incapaces de
fermentar la lactosa.

3. ¿Porque el agar nutritivo es de uso general para el cultivo de

bacterias?

Pueden proliferar en ella colonias bacterianas que normalmente se

cultivan a 37 grados centígrados y que requieren medios sólidos. Hace
que crezcan más bacterias de crecimiento rápido y no se recuperen
miembros que crecen lentamente o son inhibidos por concentraciones
altas de nutrientes.

4. ¿Cuál es la información que se obtiene de la siembra de cultivos

bacterianos en tubos con agar inclinado y en tubos con agar
solidificados en forma recta?

En el tubo de agar inclinado podemos observar la motividad de los

microorganismos y en forma recta podemos observar la morfología de sus
microorganismos.

VIII. LINCOGRAFÍA

Microkit. (10 del 06 de 2017). Obtenido de Medios de cultivo:

http://www.medioscultivo.com/mac-conkey-agar/
Wikipedia. (07 del 06 de 2017). Obtenido de Agar McCONKEY:
https://es.wikipedia.org/wiki/Agar_MacConkey
Wikipedia. (07 del 06 de 2017). Obtenido de Agar Nutritivo:
https://es.wikipedia.org/wiki/Agar_nutritivo

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