Manual Analítico Bacteriológico (BAM) Capítulo 5 - Salmonella

7/10/2019 Manual analítico bacteriológico (BAM) Capítulo 5: Salmonella
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10/07/2019 Manual analítico bacteriológico (BAM) Capítulo 5: Salmonella | FDA
Manual analítico bacteriológico (BAM) Capítulo 5:

Salmonela
AVISO
Si está buscando BAM Capítulo 5: Salmonella (edición de diciembre de 2007) que está incorporado por
referencia en 21 CFR Partes 16 y 118: Regla Final del Registro Federal (/ food / eggs / egg-safety-nal-rule)
(9 de julio de 2009, 74 FR 33030): Prevención de Salmonella Enteritidis en huevos con cáscara durante la producción,
Almacenamiento y transporte, utilice estas versiones del capítulo BAM Salmonella
(/ media / 79991 / download) (PDF, 189 Kb) y Apéndice 1: Métodos rápidos para detectar alimentos transmitidos
Patógenos (/ media / 79996 / download) (PDF, 195 Kb). Estos 2 documentos también están disponibles como
archivo combinado (/ media / 83330 / download) ( PDF, 382 Kb).
La edición más reciente de BAM Capítulo 5: Salmonella está disponible debajo de este aviso.
Manual analítico bacteriológico

Capítulo 5
Salmonela
Autores : Wallace H. Andrews, Hua Wang, Andrew Jacobson y Thomas Hammack
(mailto: [email protected])
Historial de revisiones :
Julio de 2018: la sección C7 revisada para incluir vegetales no incluidos en C23 o C27.
Marzo de 2018: se agregó PCR cuantitativa en tiempo real para confirmar los aislados de Salmonella
protocolo y cambios de enriquecimiento validados para productos de hoja, hierbas y brotes;
Verduras eliminadas de la Sección C7 revisada; Cambio de caldo de preenriquecimiento validado en
sección C23.
Agosto de 2016: se agregó el Flipbook de Salmonella

(/ archivos / comida / publicado / <i> Salmonella <-i> -Flipbook.pdf) , un reportaje general
guía para ayudar a los analistas en la detección e identificación de Salmonella que crece en el
medios de placas y tubos de cribado utilizados en el método BAM Capítulo 5 de Salmonella . Ver
Sección E. (Preparado por: Matthew J. Forstner, Servicios de laboratorio, Minnesota
Departamento de Agricultura). (PDF, 13Mb)
Diciembre de 2015: se agregó una sección para el Procedimiento del Instituto del Suero de Statens a
Sección E: Identificación de Salmonella.
https://translate.googleusercontent.com/translate_f 1/30
https://www.fda.gov/food/laboratory-methods-food/bacteriological-analytical-manual-bam-chapter-5-salmonella 1/33
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Mayo de 2014: el método VITEK 2 de identificación genérica presunta de Salmonella fue

actualizado.
Febrero de 2014: la sección sobre detección y aislamiento de Salmonella de huevos con cáscara fue
reemplazado, y los datos de validación y referencias adicionales se agregaron en un Apéndice.
Agosto de 2012: disponible en versiones en formato PDF del Capítulo 5: Salmonella y

Apéndice 1 (archivado) de 2009 que se incorporó por referencia en 21 CFR Partes 16
y 118: Regla Final del Registro Federal (9 de julio de 2009, 74 FR 33030): Prevención de
Salmonella enteritidis en huevos con cáscara durante la producción, almacenamiento y transporte.
Noviembre de 2011 - Adición a la Sección C: Preparación de alimentos para el aislamiento de Salmonella :

Vegetales de hoja verde y hierbas.
Febrero de 2011: enlace eliminado al Apéndice 1: Métodos rápidos para detectar alimentos transmitidos
Patógenos (ahora archivados).
Diciembre de 2007: se agregó el método de pulpa Mamey y se revisó la Sección D.
Junio de 2006 - Método de huevos revisado para huevos con cáscara y huevos enteros líquidos.
Abril de 2003 - Método de ancas de rana, caseína láctica, caseína cuajo, caseinato de sodio y conejo
Se revisaron los métodos de la carcasa, se agregaron orejas superiores y otros juguetes para masticar perros. Se eliminó la sección A.25,
Agitador mecánico.
25 de octubre de 2001 - Extensión de la aplicabilidad del método del jugo de naranja en la sección
C.19 a jugo de manzana y sidra de manzana.
Diciembre de 1999, marzo de 2000 y agosto de 2000; Revisión final el 14 de noviembre

2000. (vea la Introducción para un resumen de los cambios).
Para obtener una copia de una versión anterior no publicada actualmente, comuníquese con Thomas Hammack
(mailto: [email protected])
Contenido del capitulo

Introducción
Equipos y materiales
Medios y reactivos
Preparación de alimentos para el aislamiento de Salmonella.
Aislamiento de Salmonella
Identificación de Salmonella
Referencias
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Introducción
Se están introduciendo varios cambios en esta edición de BAM (Edición 8). Elth primer cambio
implica el uso ampliado del medio Rappaport-Vassiliadis (RV) (/ food / laboratorio-
métodos / bam-media-m132-rappaport-vassiliadis-medium) para alimentos con altos y bajos
niveles de microflora competitiva. En la edición anterior, el medio RV solo se recomendaba para
El análisis del camarón. Basado en la finalización de AOAC precollaborative ( 5, 6 ) y
estudios colaborativos (7, 8), ahora se recomienda el medio RV para el análisis de
Alimentos microbianos y de baja carga microbiana. El medio RV reemplaza el caldo de selenita cistina (SC) para el
Análisis de todos los alimentos, excepto la goma guar. Además, el medio RV reemplaza el caldo de lauril triptosa por
utilizar con levadura seca activa. Tetrationato (TT) (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m145-
el caldo de tetrationato-tt-caldo) se sigue utilizando como el segundo caldo de enriquecimiento selectivo.
Sin embargo, el caldo TT debe incubarse a 43 ° C para el análisis de alimentos con alta carga microbiana y a
35 ° C para el análisis de alimentos con baja carga microbiana, incluida la goma guar.
El segundo cambio implica la opción de refrigerar preenriquecimientos incubados y selectivos.

enriquecimiento de alimentos con bajo contenido de humedad por hasta 72 h. Con esta opción, los análisis de muestras pueden ser
iniciado tan tarde como el miércoles o jueves sin trabajo de fin de semana involucrado.
El tercer cambio consiste en reducir el período de incubación del agar lisina y hierro (LIA)
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m89-lisina-hierro-agar-edwards-y-fife) inclinaciones. En el
edición anterior (BAM-7), triple agar de hierro y azúcar (TSI) (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-
m149-triple-azúcar-hierro-agar-tsi) y LIA se incubaron a 35 ° C durante 24 ± 2 hy 48 ± 2
h, respectivamente. Los datos no publicados han demostrado que la lectura de 48 h de los sesgos LIA es
sin valor diagnóstico De 193 inclinaciones LIA examinadas, todas dieron resultados definitivos en 24 ± 2 h.
de incubación. Ningún cambio significativo alteró el resultado final de la prueba cuando se incubaron los sesgos
un adicional de 24 h. Por lo tanto, los sesgos TSI y LIA ahora se incuban durante 24 ± 2 h.
El cuarto cambio implica el procedimiento para la desinfección de la superficie de los huevos con cáscara. En el anterior
edición (BAM-7), las cáscaras de huevo se desinfectaron en superficie sumergiéndolas en cloruro mercúrico al 0,1%
solución durante 1 h seguido de remojo en etanol al 70% durante 30 min. El cloruro mercúrico se clasifica como
un desecho peligroso, y es costoso eliminarlo de acuerdo con la Agencia de Protección Ambiental
pautas En esta edición (BAM-8) las cáscaras de huevo ahora se desinfectan en la superficie remojándolas durante al menos
10 segundos en una solución 3: 1 que consta de 3 partes de alcohol al 70% (etilo o isopropilo) por 1 parte de
solución de yodo / yoduro de potasio.
El quinto cambio implica la preparación de muestras de huevos. Los contenidos de huevo (yema y albúmina) son
completamente mezclado antes del análisis. Después de mezclar el contenido del huevo, se agregan 25 g (ml) a 225 ml
tripticasa (tríptico) caldo de soja suplementado con sulfato ferroso.
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Se ha incluido un método para el análisis de la goma guar. Cuando la goma guar se enriquece previamente en un
Relación 1: 9 muestra / caldo, resulta una mezcla altamente viscosa y no repetitiva. Adición de la enzima.
Sin embargo, la celulasa al medio de enriquecimiento previo da como resultado una mezcla fácilmente pipeteable.
Se ha incluido un método para el jugo de naranja (pasteurizado y no pasteurizado) debido a los recientes
brotes relacionados con el jugo de naranja.
Las instrucciones para recoger colonias de los agars de placas selectivas se han hecho más
explícito para reflejar la intención del método. En ausencia de colonias típicas o sospechosas en el
Enchapados selectivos, se recomienda que las colonias atípicas se seleccionen para inclinaciones de TSI y LIA.
Esta recomendación se basa en el hecho de que hasta el 4% de todos los cultivos de Salmonella aislados por
Los analistas de la FDA de ciertos alimentos, especialmente mariscos, durante los últimos años han sido
atípico.
Finalmente, desde la publicación de BAM-7, se realizó una comparación de 6 vías de la relación

efectividad de los tres agars selectivos de recubrimiento recomendados en el BAM (sulfito de bismuto
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m19-bismuth-sulfite-agar-wilson-and-blair), Hektoen
entérico (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m61-hektoen-enteric-he-agar) y xilosa
lisos desoarsicolatos (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m179-xilosa-lisina-
desoxycholate-xld-agar)) y tres agars relativamente nuevos (EF-18, xilosa lisina Tergitol 4, y
Rambach agars). Nuestros resultados (9) no indicaron ninguna ventaja en reemplazar cualquiera de los BAM-
agars recomendados con uno o más de los agars más nuevos. Por lo tanto, la combinación de selectiva
los agars de recubrimiento recomendados en BAM-7 permanecen sin cambios.
A. Equipos y materiales
1. Licuadora y jarras estériles para licuadora ( vea el Capítulo 1 de BAM (/ food / laboratorio-
métodos / bam-food-samplespreparation-sample-homogenate))
2. Frascos estériles de 500 ml (16 oz) de boca ancha, frascos con tapa de rosca, matraces Erlenmeyer estériles de 500 ml,
vasos de precipitados estériles de 250 ml, embudos de vidrio o papel estériles del tamaño apropiado, y
opcionalmente, contenedores de capacidad adecuada para acomodar muestras compuestas
3. Varillas de plástico estériles, dobladas o de plástico.
4. Equilibrio, con pesas; 2000 g de capacidad, sensibilidad de 0.1 g
5. Equilibrio, con pesas; 120 g de capacidad, sensibilidad de 5 mg
6. Incubadora, 35 ± 2 ° C
7. Incubadora refrigerada o refrigerador de laboratorio, 4 ± 2 ° C
8. Baño de agua, 49 ± 1 ° C
9. Baño de agua, circulante, controlado por termostato, 43 ± 0.2 ° C
10. Baño de agua, circulante, controlado por termostato, 42 ± 0.2 ° C
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11. Cucharas estériles u otros instrumentos apropiados para transferir muestras de alimentos.
12. Platos de cultivo estériles, 15 × 100 mm, vidrio o plástico.
13. Pipetas estériles, 1 ml, con graduaciones de 0,01 ml; 5 y 10 ml, con graduaciones de 0.1 ml
14. Aguja de inoculación y asa de inoculación (aproximadamente 3 mm de diámetro interno o 10 5l), nicromo,
platino-iridio, alambre de cromo o plástico estéril
15. Tubos de ensayo o cultivo estériles, 16 × 150 mm y 20 × 150 mm; tubos serológicos, 10 ×
75 mm o 13 × 100 mm
16. Bastidores de tubos de prueba o cultivo
17. mezclador Vortex
18. Tijeras estériles, tijeras grandes, bisturí y pinzas
19. Lámpara (para observar reacciones serológicas)
20. Quemador Fisher o Bunsen
21. Papel de prueba de pH (rango de pH 6-8) con graduaciones máximas de 0.4 unidades de pH por color
cambio
22. medidor de pH
23. Bolsas de plástico, 28 × 37 cm, estériles, con cinta resellable. (Los elementos 23-24 son necesarios en el
análisis de ancas de rana y cadáveres de conejos.)
24. Vasos de plástico, 4 litros, autoclavables, para sujetar bolsas de plástico durante la agitación y
incubación.
25. Esponjas, no bactericidas (Nasco cat # B01299WA), o equivalente.
26. Hisopos, no bactericidas, con punta de algodón.
B. Medios (/ alimentos / métodos de laboratorio / media-index-bam) y reactivos

(/ alimentos / métodos de laboratorio / reactivos-índice-bam)
Para la preparación de medios y reactivos, consulte los Métodos 967.25-967.28 en Oficial

Métodos de análisis ( 1 ).
1. Caldo de lactosa (M74 (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m74-lactosa-caldo) )
2. Leche en polvo sin grasa (reconstituida) (M111 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m111-

sin grasa, leche en polvo reconstituida))
3. Caldo de selenita cistina (SC) (M134 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m134-

caldo de selenita-cistina))
4. Caldo de tetrationato (TT) (M145 (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m145-

tetrationato-tt-caldo))
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5. Medio Rappaport-Vassiliadis (RV) (M132 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-

m132-rappaport-vassiliadis-medium)). NOTA: El medio RV debe estar hecho de su
ingredientes individuales Las formulaciones comerciales no son aceptables.
6. Agar xilosa lisina desoxicolato (XLD) (M179 (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-
media-m179-xilosa-lisina-desoxicolato-xld-agar))
7. Agar entérico Hektoen (HE) (M61 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m61-

hektoen-entérico-he-agar))
8. Agar de sulfito de bismuto (BS) (M19 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m19-

bismuto-sulfito-agar-wilson-and-blair))
9. Triple agar de hierro y azúcar (TSI) (M149 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m149-

triple-azúcar-hierro-agar-tsi))
10. Caldo de triptona (triptófano) (M164 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m164-

triptona-triptófano-caldo-1))
11. Caldo de soja tripticasa (tríptico) (M154 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m154-
trypticase-tryptic-soy-caldo))
12. Caldo de tripticasa soja-triptosa (M160 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m160-

trypticase-soy-tryptose-caldo))
13. Caldo MR-VP (M104 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m104-mr-vp-broth) )
14. Agar citrato de Simmons (M138 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m138-

simmons-citrato-agar))
15. Caldo de urea (M171 (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m171-urea-caldo) )
16. Caldo de urea (rápido) (M172 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m172-urea-caldo-

rápido))
17. Caldo de malonato (M92 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m92-malonate-

caldo))
18. Agar lisina de hierro (LIA) (Edwards y Fife) (M89 (/ food / laboratorio-métodos / bam-
media-m89-lisina-hierro-agar-edwards-y-fife))
19. Caldo de lisina descarboxilasa (M87) (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m87-

lisina-descarboxilasa-caldo-falkow-salmonella)
20. Medio de prueba de motilidad (semisólido) (M103 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-

m103-motility-test-medium-semisolid))
21. Caldo de cianuro de potasio (KCN) (M126 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-

m126-cianuro de potasio-kcn-caldo))
22. Caldo de carbohidrato rojo de fenol (M121 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m121-

caldo de fenol-rojo-carbohidrato))
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23. Caldo de carbohidratos púrpura (M130 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m130-

púrpura-carbohidrato-fermentación-caldo-base))
24. Agar MacConkey (M91 (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m91-macconkey-

agar))
25. Caldo de nutrientes (M114 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m114-nutrient-

caldo))
26. Caldo de infusión de cerebro y corazón (BHI) (M24 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-
m24-brain-heart-infusion-bhi-broth-and-agar))
27. Solución de papaína, 5% (M56a (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m56a-papain-

solución-5))
28. Solución de celulasa, 1% (M187 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m187-

solución de celulasa))
29. Base de agar sangre de triptosa (M166 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m166-

triptosa-sangre-agar-base))
30. Caldo de enriquecimiento universal (M188 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-

m188-caldo-preenriquecimiento universal))
31. Caldo de enriquecimiento universal (sin citrato de amonio férrico) (M188a
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m188a-universal-preenrichment-broth-
sin citrato de amonio férrico))
32. Agua de peptona tamponada (M192 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m192-

tamponado-peptona-agua-bpw))
33. Caldo Dey-Engley (M193 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m193-dey-engley-

caldo))
34. Polvo de sulfito de potasio, anhidro
35. Solución de cloro, 200 ppm, que contiene 0,1% de dodecil sulfato de sodio (R12a
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-r12a-solución de cloro))
36. Etanol, 70% (R23 (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-r23-etanol-solución-70) )
37. Reactivo de Kovacs (R38 (/ food / laboratorio-métodos / bam-r38-kovacs-reagent) )
38. Reactivos de prueba Voges-Proskauer (VP) (R89 (/ food / laboratorio-métodos / bam-r89-

voges-proskauer-vp-test-reagents))
39. Cristales de fosfato de creatina
40. Solución de hidróxido de potasio, 40% (R65 (/ food / laboratorio-métodos / bam-r65-

solución de hidróxido de potasio-40))
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41. Solución de hidróxido de sodio 1 N (R73 (/ food / laboratorio-métodos / bam-r73-1-n-

solución de hidróxido de sodio))
42. Ácido clorhídrico 1 N (R36 (/ food / laboratorio-métodos / bam-r36-1-n-hydrochloric-

ácido))
43. Solución de tinte verde brillante, 1% (R8 (/ food / laboratorio-métodos / bam-r8-brilliant-

solución de tinte verde-1))
44. Solución de colorante púrpura de bromcresol, 0.2% (R9 (/ food / laboratorio-métodos / bam-r9-
bromcresol-purple-dye-solution-02))
45. Indicador de rojo de metilo (R44 (/ food / laboratorio-métodos / bam-r44-methyl-red-

indicador))
46. Agua destilada estéril
47. Tergitol Anionic 7 (R78 (/ food / laboratorio-métodos / bam-r78-tergitol-anionic-7) )
48. Triton X-100 (R86 (/ food / laboratorio-métodos / bam-r86-triton-x-100) )
49. Solución salina fisiológica, 0.85% (estéril) (R63 (/ food / laboratorio-métodos / bam-
r63-fisiológica-solución salina-085-estéril))
50. Solución salina fisiológica formalizada (R27 (/ food / laboratorio-métodos / bam-

solución salina fisiológica formalizada con r27)))
51. Antisuero somático polivalente de Salmonella (O)
52. Antisuero flagelar (H) polivalente de Salmonella
53. Antisueros del grupo somático de Salmonella (O): A, B, C,1 C, C,

2 D,3 D, E,
1 E,2E, E,
1 F, 2G, 3 44
H, I, Vi y otros grupos, según corresponda

54. Antisuero flagelar (H) de Salmonella Spicer-Edwards
55. Agua de peptona tamponada modificada (M192b (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-

m192b-modificado-tamponado-peptona-agua-mbpw))
C. Preparación de alimentos para el aislamiento de Salmonella.
AVISO
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regla) (9 de julio de 2009, 74 FR 33030): Prevención de Salmonella Enteritidis en huevos con cáscara durante
Producción, almacenamiento y transporte, utilice estas versiones de BAM Salmonella
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Patógenos transmitidos por los alimentos (/ media / 79996 / download) (PDF, 195 Kb). Estos 2 documentos también son
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Los siguientes métodos se basan en el análisis de una unidad analítica de 25 g a 1: 9

relación muestra / caldo. Dependiendo de la extensión de la composición, agregue suficiente caldo para
mantenga esta proporción 1: 9 a menos que se indique lo contrario. Para muestras no analizadas en un exacto
base de peso, por ejemplo, ancas de rana, consulte el método específico para obtener instrucciones.
1. Yema de huevo seca, claras de huevo secas, huevos enteros secos, leche líquida (descremada
leche, leche con 2% de grasa, entera y suero de leche) y mezclas preparadas en polvo
(pastel, galleta, donut, bizcocho y pan), fórmula infantil y oral o
alimentación por sonda que contiene huevo. Preferiblemente, no descongele las muestras congeladas antes
análisis. Si la muestra congelada debe templarse para obtener una porción analítica, descongele
porción adecuada lo más rápido posible para minimizar el aumento en el número de competidores
organismos o para reducir el potencial de dañar a los organismos de Salmonella . Descongelar abajo
45 ° C durante 15 min con agitación continua en baño de agua con control termostático
o descongelar dentro de las 18 ha 2-5 ° C. Pese asépticamente 25 g de muestra en boca estéril, boca ancha,
tarro con tapa de rosca (500 ml) u otro recipiente apropiado. Para muestras sin polvo,
añadir 225 ml de caldo de lactosa estéril (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m74-
caldo de lactosa). Si el producto está en polvo, agregue aproximadamente 15 ml de caldo de lactosa estéril y revuelva
con varilla de vidrio estéril, cuchara o depresor de lengua para suavizar la suspensión. Añadir 3
porciones adicionales de caldo de lactosa, 10, 10 y 190 ml, para un total de 225 ml. Remover
completamente hasta que la muestra se suspenda sin grumos. Tapa el frasco de forma segura y déjalo reposar
60 ± 5 min a temperatura ambiente. Mezcle bien girando y determine el pH con la prueba
papel. Ajuste el pH, si es necesario, a 6.8 ± 0.2 con NaOH estéril 1 N o HCl 1 N. Tapa jarra
de forma segura y mezcle bien antes de determinar el pH final. Afloje la tapa del vaso aproximadamente 1/4 de vuelta
e incubar 24 ± 2 ha 35 ° C. Continúe como en D , 1-11 , a continuación.
2. huevos
a. Huevos con cáscara [ 14,15 ]. Los huevos con cáscaras astilladas, rotas o rotas no son
incluido en la muestra. Retire cualquier material adherente de la cáscara del huevo.
superficie. Desinfecte la superficie del huevo con una solución que consta de 3 partes de 70%
alcohol (etilo o isopropilo) a 1 parte de solución de yodo / yoduro de potasio. Preparar
Solución de alcohol al 70% diluyendo 700 ml de alcohol al 100% con esteril
agua destilada para un volumen final de 1,000 ml o diluyendo 700 ml de alcohol al 95%
con agua destilada estéril para un volumen final de 950 ml. Preparar
solución de yodo / yoduro de potasio disolviendo 100 g de yoduro de potasio en 200-
300 ml de agua destilada estéril. Añadir 50 g de yodo y calentar suavemente con constante
mezclar hasta que el yodo se disuelva. Diluir el yodo / yoduro de potasio
solución a 1,000 ml con agua destilada estéril. Almacenar yodo / yoduro de potasio
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solución en una botella con tapón de vidrio ámbar en la oscuridad si no se usa

inmediatamente. Prepare la solución de desinfección agregando 250 ml.
solución de yodo / yoduro de potasio a 750 ml de solución de alcohol al 70% y mezclar bien.
Sumerja los huevos en la solución de desinfección durante 10 segundos (asegúrese de que no menos de
10 segundos). Retire los huevos de la solución y deje secar al aire. Cada muestra
consistirá en veinte (20) huevos, para un total de cincuenta (50) muestras por ave
casa. Los huevos se rompen asépticamente en un vaso de precipitados estéril de 4 litros u otro
recipiente con manos enguantadas, con cambio de guantes entre muestras. Mezcla
muestree bien con una herramienta estéril con las manos enguantadas hasta que las yemas estén
completamente mezclado con la albúmina, con un cambio de guantes entre muestras.
Enriquezca la muestra de 20 huevos agregando 2 L de caldo de soja Trypticase estéril (TSB;
temperatura ambiente) y mezclar bien con una herramienta estéril. Cubrir de forma segura y
incubar 24 ± 2 ha 35 ° C. Continúe como en D, 1-11 , a continuación.
Vea el Apéndice de Salmonella (/ food / laboratorio-métodos / bam-appendix-

salmonella) para datos de validación
si. Huevos enteros líquidos (homogeneizados). Combine quince (15) prueba de 25 ml

porciones en un compuesto de 375 ml contenido en un matraz Erlenmeyer de 6 litros.
Los compuestos se mantienen a temperatura ambiente (20-24 ° C) durante 96 ± 2 h. Después de 96 ± 2
h, agregue 3,375 ml de TSB estéril suplementado con sulfato ferroso
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m186-trypicase-tryptic-soy-caldo-
sulfato ferroso), como se describió anteriormente, y mezclar bien girando. Dejar reposar 60 ± 5
min a temperatura ambiente. Mezcle bien girando y determine el pH con la prueba
papel. Ajuste el pH, si es necesario, a 6.8 ± 0.2. Incubar 24 ± 2 ha 35 ° C.
Continúe como en D, 1-11 , a continuación.
C. Huevos duros (pollo, pato y otros). Si las cáscaras de huevo todavía están
intacto, desinfecte las conchas como se describió anteriormente y separe asépticamente las conchas
de los huevos Pulverizar los huevos (sólidos de yema de huevo y sólidos de clara de huevo)
asépticamente y pese 25 g en un matraz Erlenmeyer estéril de 500 ml u otro
Contenedor apropiado. Añadir 225 ml de TSB (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-
media-m154-trypticase-tryptic-soy-caldo) (sin sulfato ferroso) y mezclar
bien girando. Continúe como se describe arriba.
3. Leche descremada en polvo
a. Instantánea . Pese asépticamente 25 g de muestra en un vaso de precipitados estéril (250 ml) u otro
Contenedor apropiado. Usando vidrio estéril o embudo de papel (hecho con cinta para
soportar autoclave), vierta 25 g de unidad analítica suave y lentamente sobre la superficie
de 225 ml de agua verde brillante contenida en un matraz Erlenmeyer estéril de 500 ml o
otro contenedor apropiado Alternativamente, 25 g de unidades analíticas pueden ser
compuesto y vertido sobre la superficie de volúmenes proporcionalmente más grandes de
agua verde brillante Prepare agua verde brillante agregando 2 ml de 1% de brillante
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solución de tinte verde (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-r8-brilliant-green-dye-

solución-1) por 1000 ml de agua destilada estéril. Deje reposar contenedor undisturbe d
por 60 ± 5 min. Incubar el recipiente con tapa suelta, sin mezclar ni pH
ajuste, durante 24 ± 2 ha 35 ° C. Continúe como en D, 1-11 , a continuación.
si. No instantánea . Examine como se describe para la leche en polvo instantánea sin grasa, excepto que
las unidades analíticas de 25 g no pueden estar compuestas.
4. Leche entera seca . Examine como se describe para la leche en polvo instantánea sin grasa, excepto que el
No se pueden componer unidades analíticas de 25 g.
5. Caseína
a. Caseína láctica. Pese asépticamente 25 g de muestra en un vaso de precipitados estéril (250 ml) o
otro contenedor apropiado Usando vidrio estéril o embudo de papel (hecho con
cinta para soportar la esterilización en autoclave), vierta 25 g de la unidad analítica suavemente y lentamente sobre
la superficie de 225 ml de caldo de enriquecimiento universal contenido en 500 estériles
ml matraz Erlenmeyer u otro recipiente apropiado. Las unidades analíticas (25 g) pueden
ser compuesto Deje que el recipiente permanezca intacto 60 ± 5 min. Incubar libremente
recipiente con tapa, sin mezclar ni ajustar el pH, durante 24 ± 2 ha 35 ° C.
si. Caseína cuajo. Pese asépticamente 25 g de muestra en un vaso de precipitados estéril (250 ml) o
otro contenedor apropiado Usando vidrio estéril o embudo de papel (hecho con
cinta para soportar la esterilización en autoclave), vierta 25 g de la unidad analítica suavemente y lentamente sobre
la superficie de 225 ml de caldo de lactosa contenida en 500 ml de Erlenmeyer estéril
matraz u otro recipiente apropiado. Las unidades analíticas (25 g) pueden ser
compuesto Deje que el recipiente permanezca intacto 60 ± 5 min. Incubar libremente
recipiente con tapa, sin mezclar ni ajustar el pH, durante 24 ± 2 ha 35 ° C.
C. Caseinato de sodio . Pese asépticamente 25 g de muestra en boca estéril, boca ancha,

tarro con tapa de rosca (500 ml) u otro recipiente apropiado. Añadir 225 ml estéril
caldo de lactosa y mezclar bien. Las unidades analíticas pueden estar compuestas. Deja reposar 60
min a temperatura ambiente con la jarra bien tapada. Mezclar bien girando y
determine el pH con papel de prueba. Ajuste el pH, si es necesario, a 6.8 ± 0.2. Aflojar la jarra
aproximadamente 1/4 de vuelta e incubar 24 ± 2 ha 35 ° C. Continúe como en D , 1-11 , a continuación.
6. Harina de soja . Examine como se describe para la caseína de cuajo, excepto 25 g de unidades analíticas (25
g) no puede ser compuesto.
7. Productos frescos, congelados o secos . Preferiblemente, no descongele las muestras congeladas antes
análisis. Si la muestra congelada debe templarse para obtener una porción analítica, descongele a continuación
45 ° C durante <15 min con agitación continua en baño de agua con control termostático
o descongelar dentro de las 18 ha 2-5ºC.
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a. Productos que contienen huevo (fideos, rollitos de huevo, macarrones, espagueti),

queso, masa, ensaladas preparadas (jamón, huevo, pollo, atún, pavo),
frutas, carnes de nueces, crustáceos (camarones, cangrejos, cangrejos de río, langostinos,
langosta) y pescado. Pese asépticamente 25 g de muestra en una mezcla estéril
envase. Añadir 225 ml de caldo de lactosa estéril (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-
media-m74-lactosa-caldo) y mezclar 2 min. Asépticamente transferir homogeneizar d
mezcla a frasco estéril, de boca ancha, con tapón de rosca (500 ml) u otro apropiado
recipiente y déjelo reposar 60 ± 5 min a temperatura ambiente con el frasco de forma segura
tapado Mezcle bien girando y determine el pH con papel de prueba. Ajuste el pH, si
necesario, a 6.8 ± 0.2. Mezcle bien y afloje la tapa del frasco aproximadamente 1/4 de vuelta. Incubar 24
± 2 ha 35 ° C. Continúe como en D, 1-11 , a continuación.
si. Vegetales. Pese asépticamente 25 g de muestra en una boca ancha estéril

Matraz Erlenmeyer u otro recipiente apropiado. Añadir 225 ml Universal
Preenriquecimiento (UP) caldo (M188) y mezclar bien por remolino. Incubar a 35º ±
2.0º C por 24 ± 2.0 horas y continúe como en D, 1-11 , abajo.
8. Levadura seca (levadura activa e inactiva) . Pese asépticamente 25 g de muestra en

frasco estéril de boca ancha con tapón de rosca (500 ml) u otro recipiente apropiado. Agregar 225
ml de caldo de soja de tripticasa estéril (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m154-
Trypticase-tryptic-soy-caldo). Mezclar bien para formar una suspensión suave. Dejar reposar 60 ± 5
min a temperatura ambiente con la jarra bien tapada. Mezclar bien girando y
determine el pH con papel de prueba. Ajuste el pH, si es necesario, a 6.8 ± 0.2, mezclando bien
antes de determinar el pH final. Afloje la tapa del vaso 1/4 de vuelta e incube 24 ± 2 ha 35 ° C.
9. Mezclas de glaseado y cobertura . Pese asépticamente 25 g de muestra en estéril, ancho

boca, tarro con tapa de rosca (500 ml) u otro recipiente apropiado. Añadir 225 ml de nutriente
caldo (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m114-nutrient-caldo) y mezclar bien.
Tape el frasco de forma segura y déjelo reposar 60 ± 5 min a temperatura ambiente. Mezclar bien girando
y determine el pH con papel de prueba. Ajuste el pH, si es necesario, a 6.8 ± 0.2. Aflojar la jarra
tapa aproximadamente 1/4 de vuelta e incuba 24 ± 2 ha 35 ° C. Continúe como en D, 1-11 , a continuación.
10. especias
a. Pimienta negra, pimienta blanca, semillas o hojuelas de apio, chile en polvo,

comino, pimentón, hojuelas de perejil, romero, ajonjolí, tomillo y
hojuelas de vegetales . Pese asépticamente 25 g de muestra en boca estéril, boca ancha,
tarro con tapa de rosca (500 ml) u otro recipiente apropiado. Añadir 225 ml estéril
caldo de tripticasa de soja (TSB) (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m154-
trypticase-tryptic-soy-caldo) y mezclar bien. Tape el frasco de forma segura y déjelo reposar 60 ±
5 min a temperatura ambiente. Mezcle bien girando y determine el pH con la prueba
papel. Ajuste el pH, si es necesario, a 6.8 ± 0.2. Afloje la tapa de la jarra aproximadamente 1/4 de vuelta y
incubar 24 ± 2 ha 35 ° C. Continúe como en D, 1-11 , a continuación.
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si. Hojuelas de cebolla, cebolla en polvo, hojuelas de ajo . Pesar asépticamente 25 g de muestra
en un frasco estéril de boca ancha con tapón de rosca (500 ml) u otro
envase. Muestra de Preenrich en TSB (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-
m154-trypticase-tryptic-soy-caldo) con K SO añadido (5 g K2 SO 3por 1000 2m l 3
TSB, resultando en una concentración

2 final
3 de 0.5% K SO). Agregue K2 SO 3al caldo antes
esterilizar en autoclave volúmenes de 225 ml en matraces Erlenmeyer de 500 ml a 121 ° C durante 15 min.
Después del autoclave, determine asépticamente y, si es necesario, ajuste el volumen final.
a 225 ml. Agregue 225 ml de TSB estéril con K SO agregado
2 a 3la muestra y mezcle bien.
Continuar como en C-10a.
C. Pimienta de Jamaica, canela, clavo y orégano . En este momento no hay

Métodos conocidos para neutralizar la toxicidad de estas 4 especias. Diluirlos
más allá de sus niveles tóxicos para examinarlos. Examine la pimienta de Jamaica, la canela y
orégano a una proporción de muestra / caldo de 1: 100, y clavos a una proporción de muestra / caldo de 1: 100.
Examine los condimentos frondosos con una relación muestra / caldo mayor que 1:10 debido a
dificultades físicas encontradas por la absorción del caldo por producto deshidratado.
Examine estas especias como se describe en C-10a, arriba, manteniendo recomendado
relación muestra / caldo.
11. Dulces y revestimiento de dulces (incluido el chocolate) . Asépticamente pesa 25 g

muestra en recipiente de mezcla estéril. Añadir 225 ml estéril, reconstituido, sin grasa, seco
leche (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m111-non-fat-dry-milk-reconstituted)
y mezclar 2 min. Transfiera asépticamente la mezcla homogeneizada a estéril, boca ancha,
tarro con tapa de rosca (500 ml) u otro recipiente apropiado y dejar reposar 60 ± 5 min a
temperatura ambiente con la jarra bien tapada. Mezcle bien girando y determine el pH
con papel de prueba. Ajuste el pH, si es necesario, a 6.8 ± 0.2. Añadir 0,45 ml 1% acuoso
Solución de tinte verde brillante y mezclar bien. Afloje las tapas de las jarras 1/4 de vuelta e incube 24 ±
2 ha 35 ° C. Continúe como en D, 1-11 , a continuación.
12. Coco . Pese asépticamente 25 g de muestra en un frasco estéril de boca ancha con tapón de rosca
(500 ml) u otro recipiente apropiado. Añadir 225 ml de caldo de lactosa estéril
(/ alimentos / métodos de laboratorio / caldo bam-media-m74-lactosa), agite bien y deje
dejar reposar 60 ± 5 minutos a temperatura ambiente con la jarra bien tapada. Mezclar bien girando
y determine el pH con papel de prueba. Ajuste el pH, si es necesario, a 6.8 ± 0.2. Sumar
2,25 ml al vapor (15 min) Tergitol Anionic 7 (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-r78-
tergitol-anionic-7) y mezclar bien. Alternativamente, use Triton X-100 al vapor (15 min)
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-r86-triton-x-100). Limite el uso de estos tensioactivos a
Cantidad mínima necesaria para iniciar la formación de espuma. Para Triton X-100, esta cantidad puede ser
tan poco como 2 o 3 gotas. Afloje la tapa del vaso aproximadamente 1/4 de vuelta e incube 24 ± 2 ha 35 ° C.
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13. Colorantes alimentarios y sustancias colorantes alimentarias . Para tintes con pH 6.0 o superior (10%
suspensión acuosa), utilice el método descrito para huevos enteros secos ( Cl, arriba). por
colorantes sin colorantes o colorantes con un pH inferior a 6.0, pesen asépticamente 25 g de muestra en forma estéril,
frasco de boca ancha, tapón de rosca (500 ml) u otro recipiente apropiado. Añadir 225 ml
caldo de tetrationato (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m145-tetrathionate-tt-
caldo) sin tinte verde brillante. Mezclar bien y dejar reposar 60 ± 5 minutos a temperatura ambiente.
temperatura con la jarra bien tapada. Con el medidor de pH, ajuste el pH a 6.8 ± 0.2. Añadir
2,25 ml de solución de colorante verde brillante al 0,1% (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-r8-
brillante-verde-tinte-solución-1) y mezclar bien girando. Aflojar jarra tapa sobre
1/4 de vuelta e incubar 24 ± 2 ha 35 ° C. Continúe como en D, 3-11 , a continuación.
14. Gelatina . Pese asépticamente 25 g de muestra en un frasco estéril de boca ancha y tapón de rosca (500
ml) u otro recipiente apropiado. Añadir 225 ml de caldo de lactosa estéril
(/ alimentos / métodos de laboratorio / caldo bam-media-m74-lactosa) y 5 ml de solución acuosa al 5%
solución de papaína (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m56a-papain-solution-5)
y mezclar bien Tape el frasco de forma segura e incube a 35 ° C durante 60 ± 5 min. Mezclar bien por
agitar y determinar el pH con papel de prueba. Ajuste el pH, si es necesario, a 6.8 ± 0.2.
Afloje la tapa del recipiente aproximadamente 1/4 de vuelta e incube 24 ± 2 ha 35 ° C. Continuar como en D , 1-11 ,
abajo.
15. Carnes, sustitutos de la carne, subproductos cárnicos, sustancias animales, glandulares.

productos y comidas (pescado, carne, huesos) . Pese asépticamente 25 g de muestra en
recipiente de mezcla estéril Añadir 225 ml de caldo de lactosa estéril (/ comida / laboratorio-
métodos / bam-media-m74-lactosa-caldo) y mezclar 2 min. Asépticamente transfe r
mezcla homogeneizada a frasco estéril de boca ancha, tapón de rosca (500 ml) u otro
recipiente apropiado y dejar reposar 60 ± 5 min a temperatura ambiente con un frasco
tapado de forma segura. Si la mezcla es polvo o está molida o triturada, la mezcla puede ser
omitido Para muestras que no requieren mezcla, agregue el caldo de lactosa y mezcle
a fondo; déjelo reposar durante 60 ± 5 minutos a temperatura ambiente con la jarra bien tapada.
Mezcle bien girando y determine el pH con papel de prueba. Ajuste el pH, si es necesario, a
6.8 ± 0.2. Agregue hasta 2.25 ml de Tergitol Anionic 7 al vapor (15 min) y mezcle bien.
Alternativamente, use Triton X-100 al vapor (15 min). Limite el uso de estos tensioactivos a
Cantidad mínima necesaria para iniciar la formación de espuma. La cantidad real dependerá de
composición del material de prueba. No se necesitarán tensioactivos en el análisis de polvo
Productos glandulares. Afloje las tapas de las jarras 1/4 de vuelta e incube las mezclas de muestra 24 ± 2 h
a 35 ° C. Continúe como en D, 1-11 , a continuación.
16. Ancas de rana. (Este método se utiliza para todas las ancas de rana nacionales e importadas). Lugar 15
pares de ancas de rana en una bolsa de plástico estéril y cubra con caldo de lactosa estéril a una proporción de 1: 9
relación muestra-caldo (g / ml) ( ver A, 23-24, arriba). Si se estima que las piernas individuales
promedio de 25 go más, examine solo una pierna de cada uno de los 15 pares. Coloque la bolsa en grande
vaso de precipitados de plástico u otro recipiente adecuado. Mezclar bien y dejar reposar 60 ± 5 minutos a temperatura ambiente.
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temperatura. Mezcle bien girando y determine el pH con papel de prueba. Ajuste el pH, si
necesario, a 6.8 ± 0.2. Coloque una bolsa de plástico con las ancas de rana y el caldo de lactosa.
en vaso de precipitados de plástico u otro recipiente adecuado. Incubar 24 ± 2 ha 35 ° C. Hacer continuación
examen como en D, 1-11 , a continuación.
17. Cuerpos de conejo. (Este método se utiliza para todos los conejos nacionales e importados
cadáveres.) Coloque el cadáver de conejo en una bolsa de plástico estéril. Coloque la bolsa en el vaso u otro
Contenedor adecuado. Agregue caldo de lactosa estéril en una proporción 1: 9 de muestra a caldo (g / ml) a
cubrir la carcasa (ver A, 23-24, arriba). Mezcle bien girando y deje reposar 60 ± 5 min a
temperatura ambiente. Mezcle bien girando y determine el pH con papel de prueba. Ajustar
pH, si es necesario, a 6.8 ± 0.2. Incubar 24 ± 2 ha 35 ° C. Continuar el examen como
en D, 1-11 , abajo.
18. Goma guar . Pese asépticamente 25 g de muestra en un vaso de precipitados estéril (250 ml) u otro
Contenedor apropiado. Prepare una solución de celulasa al 1.0% (agregue 1 g de celulasa a 99 ml
agua destilada estéril). Dispensar en botellas de 150 ml. (La solución de celulasa puede ser
almacenado a 2-5 ° C por hasta 2 semanas). Añadir 225 ml de caldo de lactosa estéril
(/ alimentos / métodos de laboratorio / caldo bam-media-m74-lactosa) y 2.25 ml estéril al 1%
solución de celulasa para frasco estéril, de boca ancha, con tapón de rosca (500 ml) u otro apropiado
envase. Mientras agita vigorosamente el caldo de celulasa / lactosa con agitador magnético,
vierta 25 g de unidad analítica rápidamente a través del embudo de vidrio estéril en el
celulasa / caldo de lactosa. Tape el frasco de forma segura y déjelo reposar 60 ± 5 minutos a temperatura ambiente.
temperatura. Incubar el recipiente con tapa suelta sin ajuste de pH, durante 24 ± 2 h.
a 35 ° C. Continúe como en D, 1-11 , a continuación.
19. Zumo de naranja (pasteurizado y sin pasteurizar), sidra de manzana (pasteurizada

y sin pasteurizar), y jugo de manzana (pasteurizado) . Agregue asépticamente 25 ml
muestra a 225 ml de caldo de enriquecimiento universal (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-
media-m188-universal-preenrichment-caldo) en una boca estéril, amplia, tapa de rosca d
frasco (500 ml) u otro recipiente apropiado. Agite bien el contenido del matraz. Gorra
agite bien y deje reposar 60 ± 5 min a temperatura ambiente. No ajuste el pH.
Incubar el recipiente con tapa suelta durante 24 ± 2 ha 35 ° C. Continúe como en D, 1-11 , abajo
(tratar como un alimento con baja carga microbiana).
20. Orejas de cerdo y otros tipos de piezas para masticar perros. Coloque 1 pieza (o 2-3 piezas si
tamaños más pequeños) de cada unidad de muestra en una bolsa de plástico estéril. Coloque la bolsa en grande
vaso de precipitados u otro recipiente adecuado. Agregue caldo de lactosa estéril en una muestra de caldo 1: 9
(g / ml) para cubrir las piezas (ver A, 23-24, arriba). Mezclar bien girando y dejar reposar
60 ± 5 min a temperatura ambiente. Mezcle bien girando y determine el pH con la prueba
papel. Ajuste el pH, si es necesario, a 6.8 ± 0.2. Agregue ya sea Tergitol al vapor (15 min)
Aniónico 7 o Triton X-100 al vapor (15 min) hasta una concentración del 1%. Por ejemplo,
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Si se agregan 225 ml de caldo de lactosa, el volumen máximo de surfactante agregado es 2.25

ml. Limite el uso de estos tensioactivos a la cantidad mínima para iniciar la formación de espuma. Incubar
24 ± 2 ha 35 ° C. Continúe el examen como en D , 1-11 , a continuación.
21. Melones . Preferiblemente, no descongele las muestras congeladas antes del análisis. Si está congelado
la muestra debe templarse para obtener una porción analítica, descongelar a menos de 45 ° C durante <15 min
con agitación continua en baño de agua con control termostático o descongelar dentro de 18
h a 2-5 ° C.
Para frutas trituradas o cortadas, pese asépticamente 25 g de muestra en una mezcla estéril
envase. Añadir 225 ml de caldo de enriquecimiento universal estéril (/ comida / laboratorio-
métodos / bam-media-m188-universal-preenrichment-caldo) (UP) y mezclar 2 min.
Transfiera asépticamente la mezcla homogeneizada a un frasco estéril de boca ancha y tapón de rosca (500
ml) u otro recipiente apropiado y dejar reposar 60 ± 5 min a temperatura ambiente
con frasco bien tapado. No ajuste el pH. Mezcle bien y afloje la tapa del frasco aproximadamente 1/4
giro. Incubar 24 ± 2 ha 35 ° C. Continúe como en D, 1-11 , a continuación.
Para melones enteros, no enjuague incluso si hay suciedad visible. Examina el

melones "tal cual".
Coloque el melón en una bolsa de plástico estéril. Agregue suficiente UP (/ comida / laboratorio-
métodos / caldo bam-media-m188-universal-preenrichment-caldo) para permitir la
melón para flotar. El volumen de UP (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-
El caldo m188-universal-preenrichment-caldo) puede ser 1,5 veces el peso del
melones Por ejemplo, los melones que pesen 1500 g probablemente necesitarán un volumen
de aproximadamente 2250 ml de UP (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m188-
caldo de enriquecimiento universal) caldo para flotar. Agregue más caldo, si es necesario. Sitio
la bolsa de plástico, con melones y UP (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-
caldo m188-universal-preenrichment-caldo), en un vaso de precipitados de 5 litros u otro
contenedor apropiado, para soporte durante la incubación. Permita la aleta abierta del
bolsa de plástico para "doblar" para formar un cierre seguro, pero no hermético, durante
incubación.
Dejar reposar durante 60 ± 5 min a temperatura ambiente. No ajuste el pH. Incubar ligeramente
bolsa abierta, que contiene melón, durante 24 ± 2 ha 35 ° C. Continuar como en D , 1-11 ,
abajo.
22. Mangos . Preferiblemente, no descongele las muestras congeladas antes del análisis. Si muestra congelada
debe templarse para obtener una porción analítica, descongelar a menos de 45 ° C durante <15 min con
agitación continua en baño de agua con control termostático o descongelar dentro de las 18 h
a 2-5 ° C.
Para frutas trituradas o cortadas, pese asépticamente 25 g de muestra en una mezcla estéril
envase. Añadir 225 ml de agua de peptona tamponada estéril (BPW) (/ comida / laboratorio-
métodos / bam-media-m192-tamponado-peptona-agua-bpw) y mezclar 2 min.
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Transfiera asépticamente la mezcla homogeneizada a un frasco estéril de boca ancha y tapón de rosca (500
ml) u otro recipiente apropiado y dejar reposar 60 ± 5 min a temperatura ambiente
con frasco bien tapado. Mezcle bien girando y determine el pH con papel de prueba.
Ajuste el pH, si es necesario, a 6.8 ± 0.2. Mezcle bien y afloje la tapa del frasco aproximadamente 1/4 de vuelta.
Incubar 24 ± 2 ha 35 ° C. Continúe como en D, 1-11 , a continuación.
Para mangos enteros, no enjuague incluso si hay suciedad visible. Examina los mangos
"como es".
Coloque el mango en una bolsa de plástico estéril. Agregue suficiente BPW (/ comida / laboratorio-
métodos / Bam-media-M192-tamponada con peptona-agua-BPW) para permitir que el mango t o
flotador. El volumen de BPW (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m192-buffered-
peptona-agua-bpw) puede ser 1.0 veces el peso de los mangos. Por ejemplo,
los mangos que pesen 500 g probablemente necesitarán un volumen de aproximadamente 500 ml de BPW
(/ alimentos / métodos de laboratorio / caldo bam-media-m192-tamponado-peptona-agua-bpw)
flotar. Agregue más caldo, si es necesario. Coloque la bolsa de plástico, con mangos y BPW.
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m192-tamponado-peptona-agua-bpw) caldo,
en un vaso de precipitados de 5 litros u otro recipiente apropiado, para soporte durante la incubación.
Dejar reposar durante 60 ± 5 min a temperatura ambiente. Ajuste el pH a 6.8 ± 0.2, si es necesario.
Incubar la bolsa ligeramente abierta durante 24 ± 2 ha 35 ° C. Continúe como en D, 1-11 , a continuación.
23. tomates . Para fruta triturada o cortada, pese asépticamente 25 g de muestra en estéril
recipiente de mezcla Agregue 225 ml de caldo de enriquecimiento universal (UP) y mezcle 2
min. Transfiera asépticamente la mezcla homogeneizada a un frasco estéril de boca ancha con tapón de rosca
(500 ml) u otro recipiente apropiado y dejar reposar 60 ± 5 minutos a temperatura ambiente
temperatura con la jarra bien tapada. Mezcle bien girando y determine el pH con
papel de prueba. Ajuste el pH, si es necesario, a 6.8 ± 0.2. Mezcle bien y afloje la tapa del frasco
1/4 de vuelta Incubar 24 ± 2 ha 35 ° C. Continúe como en D, 1-11 , a continuación.
Para tomates enteros, no enjuague incluso si hay suciedad visible. Examinar los tomates
"como es".
Coloque el tomate en una bolsa de plástico estéril u otro recipiente adecuado (papel de aluminio estéril
se puede usar un vaso de precipitados cubierto). Agregue suficiente UP (/ food / laboratorio-métodos / bam-
media-m188-universal-preenrichment-caldo) para permitir que el tomate flote . los
volumen de UP (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m188-universal-
caldo de preenriquecimiento) puede ser 1.0 veces el peso del tomate. Por ejemplo,
los tomates que pesen 300 g probablemente necesitarán un volumen de aproximadamente 300 ml UP
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m188-universal-preenrichment-broth)
caldo para flotar. Agregue más, si es necesario. Coloque la bolsa de plástico (si se usa), con tomate y
UP (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m188-universal-preenrichment-broth)
caldo, en un vaso de precipitados estéril (el tamaño del vaso de precipitados depende del tamaño del tomate), o
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otro contenedor apropiado, para soporte durante la incubación. Permitir la aleta abierta
de la bolsa de plástico para "doblar" y formar un cierre seguro, pero no hermético
durante la incubación
Dejar reposar durante 60 ± 5 min a temperatura ambiente. No ajuste el pH. Incubar ligeramente
bolsa abierta durante 24 ± 2 ha 35 ° C. Continúe como en D, 1-11 , a continuación.
24. Pruebas ambientales . Muestra de superficies ambientales con hisopos estériles o

esponjas Coloque el hisopo / esponja en una bolsa estéril Whirl-pak, o equivalente, que
contiene suficiente caldo Dey-Engley (DE) (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-
m193-dey-engley-broth) para cubrir el hisopo / esponja.
Esponjas / esponjas de transporte en un contenedor de transporte aislado con paquetes de gel congelados
para mantener las muestras frías, pero no congeladas. Si las muestras no pueden procesarse
inmediatamente, refrigerar a 4 ± 2 ° C. Inicie el análisis de la muestra dentro de las 48 ± 2 h de
colección.
Agregue un hisopo / esponja a 225 ml de caldo de lactosa en un frasco estéril, de boca ancha y tapa de rosca
(500 ml) u otro recipiente apropiado. Agite bien el contenido del matraz. Tapa jarra
de forma segura y deje reposar 60 ± 5 min a temperatura ambiente. Mezclar bien girando y
determine el pH con papel de prueba. Ajuste el pH, si es necesario, a 6.8 ± 0.2. Incubar 24 ± 2
ha 35 ° C. Continúe el examen como en D , 1-11 , a continuación.
25. Semillas de alfalfa y frijol mungo . Pese asépticamente 25 g de semillas de alfalfa o mung
frijoles en un matraz Erlenmeyer estéril de 500 ml. Agregue asépticamente 225 ml de caldo de lactosa
a la porción de prueba y agite el matraz Erlenmeyer. Cubra la boca de la
Matraz Erlenmeyer con papel de aluminio estéril y permitir que el contenido permanezca en la habitación.
temperatura durante 60 ± 5 min. Ajuste el pH del cultivo a 6.8 ± 0.2, si es necesario.
Incubar durante 24 ± 2h a 35 ± 2 ° C. Continuar como en D , 1-11 , a continuación (tratar como alto
carga microbiana de alimentos).
26. Pulpa de mamey . Si se congela, la muestra debe templarse para obtener una porción analítica.
Descongele por debajo de 45 ° C durante <15 min con agitación continua en termostato
baño de agua controlado o descongelar dentro de las 18 ha 2-5 ° C.
Para la pulpa de mamey, sospechoso de estar contaminado con S . Typhi, asépticamente pesa 25 g
muestra en un frasco estéril de boca ancha con tapón de rosca (500 ml) u otro
envase. Añadir 225 ml de caldo de enriquecimiento universal estéril sin férrico
citrato de amonio (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m188a-universal-
preenriquecimiento-caldo-sin-férrico-citrato de amonio), mezclar por remolino, y dejar
dejar reposar 60 ± 5 minutos a temperatura ambiente con la jarra bien tapada. No ajuste el pH.
Mezcle bien y afloje la tapa del frasco aproximadamente 1/4 de vuelta. Incubar 24 ± 2 ha 35 ° C. Continuar como en
D, 1-11 , abajo. Trátelo como un alimento con baja carga microbiana.
Página 19
Para la pulpa de mamey, NO se sospecha que está contaminado con S . Typhi, pesa asépticamente
Muestra de 25 g en un frasco estéril de boca ancha con tapón de rosca (500 ml) u otro
envase. Agregue 225 ml de caldo de enriquecimiento universal estéril, mezcle girando y
Deje reposar 60 ± 5 minutos a temperatura ambiente con la jarra bien tapada. No ajustar
pH Mezcle bien y afloje la tapa del frasco aproximadamente 1/4 de vuelta. Incubar 24 ± 2 ha 35 ° C. Hacer continuación
como en D, 1-11 , abajo.
27. Verduras de hoja verde frescas, hierbas y brotes (espinacas baby, repollo,
lechuga iceberg, lechuga romana, mezcla de primavera, cilantro, perejil rizado,
culantro, perejil italiano, alfalfa, frijol mungo, trébol, rábano y brócoli
coles). Pese asépticamente 25 g en un matraz Erlenmeyer estéril de boca ancha u otro
Contenedor apropiado. Agregue 225 ml de caldo de enriquecimiento universal (UP) (M188) (para
repollo, agregando 225 ml de agua de peptona tamponada modificada (M192b)) y manualmente
mezcle el contenido agitando vigorosamente el matraz 25 veces en sentido horario y 25 veces
en sentido contrario de las manecillas del reloj. Incubar a 35º ± 2.0º C durante 24 ± 2.0 horas y continuar como en D,
1-11, abajo.
D. Aislamiento de Salmonella
1. Apriete la tapa y agite suavemente la muestra incubada.
Goma de guar y alimentos que puedan estar contaminados con S . Typhi . Transferir
1 ml de mezcla a 10 ml de caldo de selenita cistina (SC) (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-
media-m134-selenite-cystine-caldo) y otra mezcla de 1 ml a 10 ml de caldo TT
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m145-tetrathionate-tt-broth). Vórtice.
Todos los demás alimentos . Transfiera 0.1 ml de mezcla a 10 ml de Rappaport-Vassiliadis (RV)

medio (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m132-rappaport-vassiliadis-
medio) y otra mezcla de 1 ml a 10 ml de caldo de tetrationato (TT)
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m145-tetrathionate-tt-broth). Vórtice.
2. Incubar los medios de enriquecimiento selectivo de la siguiente manera:

Alimentos con alta carga microbiana . Incubar medio RV 24 ± 2 ha 42 ± 0.2 ° C

(circulante, termostáticamente controlado, baño de agua). Incubar el caldo TT 24 ± 2 h a
43 ± 0.2 ° C (circulante, termostáticamente controlado, baño de agua).
Alimentos con baja carga microbiana (excepto goma guar y alimentos sospechosos de
estar contaminados con S . Typhi) . Incubar medio RV 24 ± 2 ha 42 ± 0.2 ° C
(circulante, termostáticamente controlado, baño de agua). Incubar el caldo TT 24 ± 2 h a
35 ± 2.0 ° C.
Goma de guar y alimentos que puedan estar contaminados con S . Typhi . Incubar
Caldos SC y TT 24 ± 2 ha 35 ° C.
Página 20
3. Mezcle (vórtice, si el tubo) y mezcle el caldo TT incubado en bucle de 3 mm (10 µl) sobre bismuto
agar sulfito (BS) (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m19-bismuth-sulfite-agar-
wilson-and-blair), agar de xilosa lisina desoxicolato (XLD) (/ comida / laboratorio-
métodos / bam-media-m179-xylose-lisys-desoxycholate-xld-agar), y Hekt oen
agar entérico (HE) (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m61-hektoen-enteric-he-
agar). Prepare las placas BS el día antes de las rayas y guárdelas en la oscuridad a
temperatura ambiente hasta rayado.
4. Repita con 3 mm en bucle (10 µl) de medio RV (para muestras de alto y bajo
alimentos de carga microbiana) y de caldo SC (para goma guar).
5. Consulte 994.04 en Métodos oficiales de análisis ( 1 ) para la opción de refrigeración

enriquecimiento selectivo de muestras incubadas y enriquecimientos selectivos de muestras incubadas (SC
y caldos TT solamente) de alimentos con bajo contenido de humedad. Esta opción permite que los análisis de muestras sean
iniciado tan tarde como el jueves mientras se evita el trabajo de fin de semana.
6. Incubar las placas 24 ± 2 ha 35 ° C.
7. Examine las placas para detectar la presencia de colonias que pueden ser Salmonella .
MORFOLOGÍA TÍPICA DE LA COLONIA Salmonella
Elija 2 o más colonias de Salmonella de cada placa de agar selectiva después de 24 ± 2 h

incubación. Las colonias típicas de Salmonella son las siguientes:
Si las colonias típicas están presentes en el agar BS después de 24 ± 2 h de incubación, seleccione 2 o

Más colonias. Independientemente de si las placas de agar BS se recogen o no a las 24 ± 2 h,
vuelva a incubar las placas de agar BS durante 24 ± 2 h adicionales. Después de 48 ± 2 h de incubación, elija 2 o
colonias más típicas, si están presentes, de las placas de agar BS, solo si se seleccionaron colonias
de las placas de agar BS incubadas durante 24 ± 2 h dan reacciones atípicas en azúcar triple
agar de hierro (TSI) y lisina agar de hierro (LIA) que dan como resultado que el cultivo se descarte como
no siendo Salmonella . Consulte las secciones D.9 y D.10, a continuación, para obtener detalles sobre la interpretación.
Reacciones de TSI y LIA.
ATÍPICO Salmonella COLONIA MORFOLOGÍA
En ausencia de colonias de Salmonella típicas o sospechosas , busque atípicos

Colonias de Salmonella de la siguiente manera:
CULTURAS DE CONTROL SUGERIDAS
Además de los cultivos de control positivo ( Salmonella típica ), 3 adicionales

Se recomiendan cultivos de Salmonella para ayudar en la selección de atípicos.
Morfología de la colonia de Salmonella en los agares selectivos. Estas culturas son una lactosa
S. diarizonae 2positiva para H S-positiva (ATCC 12325) y una negativa para lactosa, H S- 2
S. abortus equi negativo (ATCC 9842); O una lactosa positiva, H S negativa S. 2

diarizonae (ATCC 29934). Estas culturas se pueden obtener del tipo americano
Página 21
Colección Cultural (http://www.atcc.org) (http://www.fda.gov/about-

fda / website-policy / website-exención de responsabilidad), 10801 University Boulevard, Manassas,
VA 20110-2209.
a. Agar entérico Hektoen (HE) . Colonias azul-verde a azul con o sin

centros negros Muchos cultivos de Salmonella pueden producir colonias con grandes
centros negros brillantes o pueden aparecer como colonias casi completamente negras.
si. Agar xilosa lisina desoxicolato (XLD) . Colonias rosadas con o sin
centros negros Muchos cultivos de Salmonella pueden producir colonias con grandes
centros negros brillantes o pueden aparecer como colonias casi completamente negras.
C. Agar sulfito de bismuto (BS) . Colonias marrones, grises o negras; a veces ellos
Tener un brillo metálico. El medio circundante suele ser marrón al principio, pero puede
se vuelve negro a tiempo con una mayor incubación, produciendo el llamado halo
efecto.
re. HE y XLD agars . Atípicamente, algunos cultivos de Salmonella producen amarillo

colonias con o sin centros negros en hembras HE y XLD. En ausencia de
colonias típicas de Salmonella en hembras HE o XLD después de 24 ± 2 h de incubación, luego
elija 2 o más colonias atípicas de Salmonella .
mi. BS agar. Atípicamente, algunas cepas producen colonias verdes con poca o ninguna
oscurecimiento del medio circundante. Si las colonias típicas o sospechosas no son
presente en el agar BS después de 24 ± 2 h, luego no recoja colonias sino que vuelva a incubar
un adicional de 24 ± 2 h. Si no hay colonias típicas o sospechosas después de 48
± 2 h de incubación, luego elija 2 o más colonias atípicas.
8. Toque ligeramente el centro de la colonia que se va a recoger con una inoculación estéril
aguja e inocula la inclinación de TSI al rayar la inclinación y apuñalar el trasero. Sin llamas
Inocular la inclinación de LIA apuñalando el trasero dos veces y luego rayando la inclinación. Desde lisina
La reacción de descarboxilación es estrictamente anaeróbica, los sesgos LIA deben tener un trasero profundo (4).
cm). Almacene las placas de agar selectivas recogidas a 5-8 ° C.
9. Incubar los sesgos TSI y LIA a 35 ° C durante 24 ± 2 h. Tapar los tubos sin apretar para mantener
condiciones aeróbicas mientras se incuba la inclinación para evitar la producción2 excesiva de HS.
La Salmonella en cultivo típicamente produce una inclinación alcalina (roja) y una culata ácida (amarilla),
con o sin producción de HS (ennegrecimiento
2 de agar) en TSI. En LIA, Salmonella
Típicamente produce una reacción alcalina (púrpura) en el extremo del tubo. Considere solo distintas
amarillo en el extremo del tubo como reacción ácida (negativa). No elimines las culturas que
producir decoloración en la culata del tubo únicamente sobre esta base. La mayoría de los cultivos de Salmonella
producir HS en
2 LIA. Algunos cultivos que no son de Salmonella producen una reacción rojo ladrillo en
Sesgos de LIA.
Página 22
10. Todos los cultivos que dan un extremo alcalino en LIA, independientemente de la reacción de TSI, deben ser
retenido como aislados potenciales de Salmonella y enviado para bioquímica y
pruebas serológicas Cultivos que dan una culata ácida en LIA y una inclinación alcalina y ácida
el trasero en TSI también debe considerarse posibles aislamientos de Salmonella y debe ser
sometido a pruebas bioquímicas y serológicas. Culturas que dan un trasero ácido en
LIA y una inclinación ácida y culata ácida en TSI pueden descartarse por no ser Salmonella
. Pruebe los cultivos de TSI presumiblemente positivos retenidos como se indica en D-11, a continuación, para
determinar si son especies de Salmonella , incluida S. arizonae . Si las culturas TSI no logran
dar reacciones típicas para Salmonella (inclinación alcalina y ácido a tope) recoger adicional
colonias sospechosas de placa media selectiva que no dan presunto positivo
cultivar e inocular las inclinaciones de TSI y LIA como se describe en D-8 , arriba.
11. Aplicar pruebas de identificación bioquímica y serológica a:
a. Tres cultivos de TSI presuntivos recuperados de un conjunto de placas veteadas de RV

medio (o caldo SC para goma guar), si está presente, y 3 agar TSI presuntivo
cultivos recuperados de placas veteadas de caldo TT, si están presentes.
si. Si 3 cultivos de TSI presuntamente positivos no están aislados de un conjunto de agar

placas, pruebe otros cultivos de agar TSI presuntamente positivos, si están aislados, por bioche
Pruebas médicas y serológicas. Examine un mínimo de 6 cultivos TSI por cada 25 g.
unidad analítica o cada compuesto de 375 g.
E. Identificación de Salmonella
1. Culturas mixtas . Cultivos de agar TSI Streak que parecen estar mezclados en MacConkey
agar (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m91-macconkey-agar), agar HE
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m61-hektoen-enteric-he-agar), o agar XLD
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m179-xilosa-lisina-desoxicolato-xld-
agar). Incubar las placas 24 ± 2 ha 35 ° C. Examinar las placas para detectar la presencia de colonias.
sospechoso de ser Salmonella .
a. Agar MacConkey . Las colonias típicas aparecen transparentes e incoloras,

a veces con centro oscuro. Las colonias de Salmonella despejarán áreas de
bilis precipitada causada por otros organismos a veces presentes.
si. Agar entérico Hektoen (HE) . Ver D-7a, arriba.
C. Agar xilosa lisina desoxicolato (XLD) . Ver D-7b, arriba. Transferencia a

al menos 2 colonias sospechosas de ser Salmonella a TSI y LIA como se describe
en D-7 , arriba, y continúe como en D-9, arriba.
2. Culturas puras
a. Prueba de ureasa (convencional) . Con aguja estéril, inocular el crecimiento de

cada cultivo inclinado TSI presumiblemente positivo en tubos de caldo de urea
(/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m171-urea-caldo). Desde ocasionales,
Página 23
tubos inoculados de caldo de urea se vuelven rojo púrpura (prueba positiva) al pararse,
incluya un tubo no inoculado de este caldo como control. Incubar 24 ± 2 ha 35 ° C.
si. Prueba de ureasa opcional (rápida) . Transfiera dos bucles de crecimiento de 3 mm de

cada cultivo inclinado TSI presumiblemente positivo en tubos de caldo de urea rápido
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m172-urea-caldo-rápido). Incubar 2 h
en baño de agua a 37 ± 0.5 ° C. Deseche todas las culturas dando una prueba positiva. Retener para
Estudiar más a fondo todas las culturas que dan una prueba negativa (sin cambios en el color de
medio).
3. Prueba serológica de flagelar polivalente (H)
a. Realice la prueba de flagelar polivalente (H) en este punto, o más tarde, como se describe en
E-5 , abajo. Inocular el crecimiento de cada agar de TSI negativo en ureasa inclinado en
1) caldo BHI (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m24-brain-heart-
infusión-bhi-caldo-y-agar) e incubar 4-6 h a 35 ° C hasta un crecimiento visible
ocurre (para probar el mismo día); o 2) caldo de tripticasa soja-triptosa
(/ alimentos / métodos de laboratorio / caldo bam-media-m160-trypticase-soy-tryptose-caldo)
e incubar 24 ± 2 ha 35 ° C (para probar el día siguiente). Agregar 2.5 ml
solución salina fisiológica formalizada a 5 ml de cualquier cultivo de caldo.
si. Procedimiento BD DIFCO ™. Seleccione 2 cultivos de caldo formalizados y pruebe con

Antisera flagelar (H) polivalente de Salmonella según las instrucciones del fabricante.
Coloque 0,5 ml de flagelar polivalente Salmonella adecuadamente diluido (H)
antisuero en tubo de ensayo serológico de 10 × 75 mm o 13 × 100 mm. Añadir 0,5 ml
antígeno para ser probado. Prepare el control salino mezclando 0,5 ml de formalina
solución salina fisiológica con 0,5 ml de antígeno formalizado. Incubar
mezclas en baño de agua a 48-50 ° C. Observar a intervalos de 15 minutos y leer el final
resultados en 1 h.
Positivo : aglutinación en la mezcla de prueba y sin aglutinación en el control.
Negativo : sin aglutinación en la mezcla de prueba y sin aglutinación en el control.
No específico : aglutinación tanto en la mezcla de prueba como en el control. Prueba el

cultivos que dan tales resultados con antisueros de Spicer-Edwards.
C. Procedimiento del Instituto del Suero Statens. Realizar la prueba de flagelar polivalente (H)
utilizando Statens Serum Institute Antisera flagelar polivalente (H) de Salmonella . los
Salmonella se cultiva durante la noche en un medio de agar no selectivo. Agar enjambre es
el medio más adecuado para cultivos en crecimiento para la tipificación de H, pero los antígenos H pueden
ser serotipo de un medio de agar no selectivo si los antígenos H están bien
expresado Agregue una pequeña gota de antisuero (aprox. 20 µL) en un portaobjetos de vidrio o
placa de Petri de plástico (15 × 100 mm). Transfiera el cultivo utilizando un asa de inoculación.
desde varias colonias hasta la gota de antisuero y mezclar bien. La cantidad de
El cultivo debe ser suficiente para dar una turbidez lechosa distinta. Incline la diapositiva o
Página 24
placa de Petri durante 5-10 segundos. Una reacción positiva se ve como aglutinación visible,
mientras que una reacción negativa se ve como turbidez lechosa homogénea. Un retraso o
La aglutinación débil debe considerarse negativa. Solución salina fisiológica (0,85%,
pH 7.4) se usa como control negativo y debe ser negativo.
4. Prueba serológica de Spicer-Edwards . Use esta prueba como alternativa al polivalente

prueba flagelar (H). También se puede usar con cultivos que dan aglutinación inespecífica
en prueba de flagelar polivalente (H). Realice la prueba de antisueros flagelares (H) de Spicer-Edwards como
descrito en E, 3b , arriba. Realice pruebas bioquímicas adicionales (E, 5a-c, a continuación) en
cultivos que dan resultados positivos de la prueba flagelar. Si ambos cultivos de caldo formalizado son
negativo, realizar pruebas serológicas en 4 cultivos de caldo adicionales (E , 3a, arriba). Si
posible, obtenga 2 cultivos positivos para pruebas bioquímicas adicionales E, 5a-c , a continuación).
Si todos los cultivos de TSI con ureasa negativa de la muestra dan un flagelar serológico negativo (H)
resultados de la prueba, realice pruebas bioquímicas adicionales E, 5a-c, a continuación).
5. Pruebas de cultivos de ureasa negativa.
a. Caldo de lisina descarboxilasa (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m87-

lisina-descarboxilasa-caldo-falkow-salmonella). Si la prueba de LIA fue satisfactoria,
No es necesario que se repita. Use caldo de lisina descarboxilasa para la determinación final de
lisina descarboxilasa si el cultivo produce una reacción dudosa de LIA. Caldo de inoculación
con una pequeña cantidad de crecimiento de TSI sesgada sospechosa de Salmonella .
Vuelva a colocar la tapa herméticamente e incube 48 ± 2 ha 35 ° C, pero examine a las 24 h
intervalos. Las especies de Salmonella causan una reacción alcalina indicada por el color púrpura.
a lo largo del medio. La prueba negativa está indicada por un color amarillo en todo
medio. Si el medio aparece descolorido (ni morado ni amarillo) agregue algunos
gotas de 0,2% de colorante púrpura de bromcresol y volver a leer las reacciones del tubo.
si. Caldo de dulcitol rojo fenol (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m121-

fenol-caldo de carbohidratos rojos) o base de caldo morado (/ comida / laboratorio -
métodos / bam-media-m130-purple-carbohydrate-fermentation-
base de caldo) con 0,5% de dulcitol . Inocular el caldo con una pequeña cantidad de
crecimiento de la cultura TSI. Vuelva a colocar la tapa sin apretar e incube 48 ± 2 ha 35 ° C,
pero examinar después de 24 h. La mayoría de las especies de Salmonella dan un resultado positivo, indicado por
Formación de gas en el vial de fermentación interna y pH ácido (amarillo) del medio.
La producción de ácido debe interpretarse como una reacción positiva. Prueba negativa es
indicado por la ausencia de formación de gas en el vial de fermentación interna y rojo (con fenol
rojo como indicador) o púrpura (con bromcresol púrpura como indicador) color
a lo largo del medio.
C. Caldo de triptona (o triptófano) (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-

m164-triptona-triptófano-caldo-1). Inocular el caldo con un pequeño crecimiento de
TSI cultivo de agar. Incubar 24 ± 2 ha 35 ° C y proceder de la siguiente manera:
Página 25
1. Caldo de cianuro de potasio (KCN). (/ comida / laboratorio-

métodos / bam-media-m126-cianuro de potasio-kcn-
caldo) Transfiera 3 mm en bucle de cultivo de caldo de triptófano de 24 h a KCN
caldo. Caliente el borde del tubo para que se forme un buen sello cuando el tubo esté
tapado con corcho recubierto de cera. Incubar 48 ± 2 ha 35 ° C pero examinar
después de 24 h. Interprete el crecimiento (indicado por la turbidez) como positivo. Más
Las especies de Salmonella no crecen en este medio, como lo indica la falta de
turbiedad.
2. Caldo de malonato (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m92-
caldo de malonato) . Transferencia de 3 mm asa de siembra de 24 h caldo de triptona Cultu re
maldar el caldo. Desde ocasionales tubos de malonato no inoculados
el caldo se vuelve azul (prueba positiva) al pararse, incluye un tubo no inoculado de
Este caldo como control. Incubar 48 ± 2 ha 35 ° C, pero examinar después de 24 h.
La mayoría de los cultivos de especies de Salmonella dan una prueba negativa (verde o sin cambios
color) en este caldo.
3. Prueba de indol. Transfiera 5 ml de cultivo de caldo de triptófano de 24 h para vaciar

tubo de ensayo. Agregue 0.2-0.3 ml de reactivo de Kovacs (/ comida / laboratorio-
métodos / reactivo bam-r38-kovacs). La mayoría de los cultivos de Salmonella dan
prueba negativa (falta de color rojo intenso en la superficie del caldo). Grabar
tonos intermedios de naranja y rosa como ±.
4. Pruebas serológicas de flagelar (H) para Salmonella . Si es polivalente

prueba de flagelar (H) (E- 3, arriba) o prueba de flagelar de Spicer-Edwards (H)
prueba de tubo (E-4 , arriba) aún no se ha realizado, cualquiera de las pruebas puede ser
realizado aquí.
5. Deseche como no Salmonella cualquier cultivo que muestre indol positivo

prueba y prueba flagelar serológica negativa (H), o prueba positiva de KCN y
prueba de lisina descarboxilasa negativa.
6. Pruebas serológicas somáticas (O) para Salmonella .

(Haga una prueba previa de todos los antisueros contra Salmonella con cultivos conocidos).
a. Prueba somática polivalente (O) . Con un lápiz de cera, marque 2 secciones aproximadamente 1
× 2 cm cada uno en el interior de la placa de Petri de vidrio o plástico (15 × 100 mm).
Se pueden usar portaobjetos seccionados disponibles comercialmente. Emulsionar 3 mm de bucle de
cultivo de 24-48 h TSI inclinado o, preferiblemente, base de agar sangre de triptosa (sin
sangre) con 2 ml de solución salina al 0,85%. Agregue 1 gota de suspensión de cultivo a la parte superior
porción de cada sección rectangular marcada con crayón. Añadir 1 gota de solución salina
solución para bajar parte de una sola sección. Añadir 1 gota de Salmonella polivalente
antisuero somático (O) a otra sección solamente. Con bucle de transferencia estéril limpio o
aguja, mezcle la suspensión de cultivo con solución salina para una sección y repita
Page10/07/2019
26 Manual analítico bacteriológico (BAM) Capítulo 5: Salmonella | FDA
para otra sección que contiene antisuero. Mezclas de inclinación en movimiento de ida y vuelta
durante 1 minuto y observe contra el fondo oscuro con buena iluminación. Considerar
Cualquier grado de aglutinación es una reacción positiva. Clasificar el somático polivalente (O)
resultados de la prueba de la siguiente manera:
Positivo : aglutinación en la mezcla de prueba; sin aglutinación en el control salino.
Negativo : sin aglutinación en la mezcla de prueba; sin aglutinación en solución salina

controlar.
No específico : aglutinación en mezclas de prueba y control. Realizar más

pruebas bioquímicas y serológicas como se describe en Edwards y Ewing
Identificación de Enterobacteriaceae ( 2 ).
si. Pruebas de grupo somático (O) . Pruebe como en E-6a, arriba, usando un grupo individual
antisueros somáticos (O) que incluyen Vi, si está disponible, en lugar de Salmonella
antisuero polivalente somático (O). Para el tratamiento especial de culturas dando
reacción de aglutinación Vi positiva, consulte la sec. 967.28B en Métodos oficiales de
Análisis ( 1 ). Registre cultivos que den aglutinación positiva con individuos
antisuero somático (O) como positivo para ese grupo. Registrar culturas que no
reaccionar con el antisuero somático (O) individual como negativo para ese grupo.
7. Pruebas bioquímicas adicionales . Clasificar como Salmonella aquellas culturas que

exhiben reacciones típicas de Salmonella para las pruebas 1-11, que se muestran en la Tabla 1 . Si una ETI
El cultivo de 25 g de unidad analítica se clasifica como Salmonella , otras pruebas de otros
Los cultivos TSI de la misma unidad analítica de 25 g son innecesarios. Culturas que contienen
antígenos demostrables de Salmonella como se muestra en la prueba positiva de Salmonella flagellar (H)
pero no tienen características bioquímicas de Salmonella deben purificarse ( El ,
arriba) y probado nuevamente, comenzando con E-2, arriba.
Realice las siguientes pruebas adicionales en cultivos que no dan Salmonella típica
reacciones para las pruebas 1-11 en la Tabla 1 y que, en consecuencia, no se clasifican como Salmonella .
a. Caldo de lactosa roja de fenol (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-

caldo de m121-fenol-rojo-carbohidrato) o caldo de lactosa púrpura
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m130-purple-
base de caldo de fermentación de carbohidratos) .
1. Inocular el caldo con una pequeña cantidad de crecimiento de 24-48 h sin clasificar
ETI inclinada. Incubar 48 ± 2 ha 35 ° C, pero examinar después de 24 h.
Positivo - producción de ácido (amarillo) y producción de gas en el interior

vial de fermentación Considere la producción de ácido solo como reacción positiva.
La mayoría de los cultivos de Salmonella dan resultados negativos, indicados por falta de gas.
Página 27
formación en vial de fermentación interna y rojo (con rojo fenol como

indicador) o púrpura (con bromcresol púrpura como indicador) en todo
medio.
2. Deseche como no Salmonella , cultivos que dan pruebas positivas de lactosa, excepto
cultivos que dan sesgos ácidos en TSI y reacciones positivas en LIA, o
cultivos que dan reacciones positivas al caldo de malonato. Realizar más pruebas
en estas culturas para determinar si son S. arizonae.
si. Caldo de sacarosa roja de fenol (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m121-

caldo de fenol-rojo-carbohidrato) o caldo de sacarosa púrpura
(/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m130-purple-
base de caldo de fermentación de carbohidratos) . Siga el procedimiento descrito en
E, 7a-1 , arriba. Deseche como no Salmonella , cultivos que dan sacarosa positiva
pruebas, excepto aquellas que dan sesgos ácidos en TSI y reacciones positivas en LIA.
C. Caldo MR-VP (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m104-mr-vp-broth) .

Inocular medio con una pequeña cantidad de crecimiento de cada ETI no clasificada
sesgo sospechoso de contener Salmonella . Incubar 48 ± 2 ha 35 ° C.
1. Realice la prueba Voges-Proskauer (VP) a temperatura ambiente de la siguiente manera:

Transfiera 1 ml de cultivo de 48 h al tubo de ensayo e incube el resto de MR-VP
caldo 48 h adicionales a 35 ° C. Agregue 0.6 ml de α-naftol y agite bien.
Añadir 0,2 ml de solución de KOH al 40% y agitar. Intensificar y acelerar
reacción, agregue algunos cristales de creatina. Lea los resultados después de 4 h;
el desarrollo del color rojo rosado a rubí en todo el medio es positivo
prueba. La mayoría de los cultivos de Salmonella son VP negativos, indicados por ausencia
de desarrollo de color rosa a rojo en todo el caldo.
2. Realice la prueba de rojo de metilo de la siguiente manera: a 5 ml de caldo MR-VP de 96 h, agregue 5-6
Indicador de gotas de rojo metilo. Lea los resultados de inmediato. Más
Los cultivos de Salmonella dan una prueba positiva, indicada por un color rojo difuso en
medio. Un color amarillo distintivo es prueba negativa. Descartar, como no
Salmonella , cultivos que dan pruebas positivas de KCN y VP y negativas
prueba de rojo de metilo.
re. Agar citrato de Simmons . Inocular este agar usando una aguja que contenga crecimiento
de TSI sin clasificar inclinado de agar. Inocular con rayas inclinadas y punzantes
extremo. Incubar 96 ± 2 ha 35 ° C. Lea los resultados de la siguiente manera:
Positivo : presencia de crecimiento, generalmente acompañado de un cambio de color de

verde a azul La mayoría de los cultivos de Salmonella son citrato positivos.
Negativo : sin crecimiento o muy poco crecimiento y sin cambio de color.
Página 28
mi. Clasificación de las culturas . Clasificar, como Salmonella , cultivos que tienen
patrones de reacción de la Tabla l . Deseche, como no Salmonella , los cultivos que dan
resultados enumerados en cualquier subdivisión de la Tabla 2. Realice las pruebas adicionales descritas
en Edwards y Ewing's Identification of Enterobacteriaceae ( 2 ) para clasificar
cualquier cultivo que no esté claramente identificado como Salmonella por esquema de clasificación
en la Tabla 1 o no eliminados por no ser Salmonella por las reacciones de prueba en la Tabla
2. Si ninguno de los 2 cultivos de TSI realizados a través de pruebas bioquímicas confirma la
aislar como Salmonella , realizar pruebas bioquímicas, comenzando con E-5 , en
restantes cultivos de TSI negativos a ureasa de la misma unidad analítica de 25 g.
8. Recursos adicionales:
Flipbook de Salmonella (/ archivos / comida / publicado / <i> Salmonella <-i> -Flipbook.pdf),a

guía general pictoral para ayudar a los analistas en la detección e identificación de
Salmonella que crece en los medios de recubrimiento y tubos de cribado utilizados en el BAM
Capítulo 5 Método de Salmonella . (Preparado por: Matthew J. Forstner, Laboratorio
Servicios, Departamento de Agricultura de Minnesota). (PDF, 13Mb)
Tabla 1. Reacciones bioquímicas y serológicas de Salmonella
## Resultado Salmonela
especies
(una)
Prueba o sustrato Positivo Negativo reacción
1. Glucosa (TSI) trasero amarillo trasero rojo +
2. Lisina descarboxilasa (LIA) trasero morado trasero amarillo +
3. HS (ETI
2 y LIA) ennegrecimiento sin ennegrecimiento +
4. Urease color rojo púrpura sin cambio de color -
5. Caldo de lisina descarboxilasa color púrpura color amarillo +
6. Caldo de dulcitol rojo fenol color amarillo y / o gas no hay gasolina; sin cambio de color+ (si)
7. Caldo KCN crecimiento sin crecimiento -
8. Caldo de malonato color azul sin cambio de color - (C)
9. Prueba de indol color rojo en la superficie color amarillo en la superficie -
10. Prueba agevalar polivalente aglutinación sin aglutinación +
11. Prueba somática polivalente aglutinación sin aglutinación +
12. Caldo de fenol lactosa rojo color amarillo y / o gas no hay gasolina; sin cambio de color- (C)
Página 29
Tabla 1. Reacciones bioquímicas y serológicas de Salmonella
## Resultado Salmonela
especies
(una)
Prueba o sustrato Positivo Negativo reacción
13. Caldo de sacarosa roja de fenol color amarillo y / o gas no hay gasolina; sin cambio de color-
14. Prueba de Voges-Proskauer color rosa a rojo sin cambio de color -
15. Prueba de rojo de metilo color rojo difuso color amarillo difuso +
16. citrato de Simmons crecimiento; color azul sin crecimiento; sin cambio de colorv
una
+: 90% o más positivo en 1 o 2 días; -: 90% o más negativo en 1 o 2 días;
v: variable.
si
La mayoría de los cultivos de S. arizonae son negativos.
C
La mayoría de los cultivos de S. arizonae son positivos.
Tabla 2. Criterios para descartar cultivos que no sean de Salmonella
## Prueba o sustrato Resultados
1. Urease positivo (color rojo púrpura)
2. Prueba de indol y positivo (color rojo en la superficie)

Prueba agellar polivalente (H); negativo (sin aglutinación)
o
Prueba de indol y positivo (color rojo en la superficie)
Prueba agellar de Spicer-Edwards negativo (sin aglutinación)
3. Lisina descarboxilasa y negativo (color amarillo)
Caldo KCN positivo (crecimiento)
(a), (b)
4. Caldo de fenol lactosa rojo positivo (color amarillo y / o gas)
(si)
5. Caldo de sacarosa roja de fenol positivo (color amarillo y / o gas)
6. Caldo KCN, positivo (crecimiento)

Prueba de Voges-Proskauer, y positivo (color rosa a rojo)
Prueba de rojo de metilo negativo (color amarillo difuso)
una
Pruebe los cultivos positivos del caldo de malonato para determinar si son S. arizonae .
si
No deseche los cultivos de caldo positivos si los cultivos de LIA correspondientes proporcionan
Reacciones de Salmonella ; prueba más para determinar si son especies de Salmonella .
Página 30
9. Identificación genérica presunta de Salmonella . Como alternativa a

sistema de tubo bioquímico convencional, use cualquiera de los 5 sistemas bioquímicos comerciales
(API 20E, Enterotube II, Enterobacteriaceae II, MICRO-ID o Vitek 2 GN) o el
Método de PCR cuantitativa en tiempo real para la confirmación de aislados de Salmonella para
identificación genérica presunta de Salmonella transmitida por alimentos . Elige un comercial
sistema basado en una demostración en el laboratorio del analista de correlación adecuada
entre el sistema comercial y el sistema de tubo bioquímico delineado en este
sección de identificación. Los kits bioquímicos comerciales no deben usarse como
sustituto de las pruebas serológicas (l). Reúna los suministros y prepare los reactivos necesarios.
para el kit Inocular cada unidad de acuerdo con el Método 978.24 (API 20E, Enterotube II,
y Enterobacteriaceae II), sec. 989.12 (MICRO-ID) y Método 2011.17 (Vitek 2
GN) en Métodos oficiales de análisis (1), incubando por tiempo y temperatura
especificada, confirmación de aislamientos de Salmonella por qPCR en tiempo real
(/ media / 112101 / download) (PDF, 540 Kb). Agregue reactivos, observe y registre
resultados. Para la identificación presunta, clasifique los cultivos, de acuerdo con la ref. 1, arriba, como
Salmonella o no Salmonella .
Para la confirmación de cultivos presuntamente identificados como Salmonella , realice el

Prueba serológica somática de Salmonella (O) (E-6, arriba) y la prueba serológica de Salmonella
flagelar de prueba (H) (E- 3, arriba) o la prueba de la flagelar Spicer-Edwards (H) (E-4, más arriba),
y clasificar las culturas de acuerdo con las siguientes pautas:
a. Informe como Salmonella aquellos cultivos clasificados como presunta Salmonella con
kits bioquímicos comerciales cuando el cultivo demuestra positivo
Prueba de Salmonella somática (O) y prueba de Salmonella (H) positiva .
si. Deseche los cultivos presuntamente clasificados como no Salmonella con comerciales
kits bioquímicos cuando los cultivos se ajustan a los criterios AOAC (1) para clasificar
cultivos como no Salmonella .
C. Para cultivos que no se ajustan a a o b, clasifíquelos según pruebas adicionales

especificado en E, 2-7 , arriba, o pruebas adicionales según lo especificado por Ewing (2), o enviar
al laboratorio de mecanografía de referencia para serotipos definitivos e identificación.
10. Tratamiento de cultivos con prueba flagelar negativa (H) . Si bioquímica
Las reacciones de ciertos cultivos negativos para flagelar (H) sugieren fuertemente que es
Salmonella , la aglutinación flagelar negativa puede ser el resultado de la no movilidad
organismos o desarrollo insuficiente de antígeno flagelar. Proceder de la siguiente:
Inocular medio de prueba de motilidad en placa de Petri, utilizando una pequeña cantidad de crecimiento de TSI
inclinación. Inocular apuñalando el medio una vez aproximadamente 10 mm desde el borde de la placa hasta la profundidad
de 2-3 mm. No apuñalar al fondo de la placa ni inocular ninguna otra porción. Incubar
24 ha 35 ° C. Si los organismos han migrado 40 mm o más, vuelva a realizar la prueba de la siguiente manera: Transferencia
Bucle de crecimiento de 3 mm que migró más lejos al caldo de tripticasa soja-triptosa.
Repita el flagelar polivalente (H) (E- 3, arriba) o Spicer-Edwards (E-4, arriba)
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pruebas serológicas Si los cultivos no son móviles después de las primeras 24 h, incube una cantidad adicional
24 ha 35 ° C; Si todavía no es móvil, incube hasta 5 días a 25 ° C. Clasificar la cultura como
no móvil si las pruebas anteriores siguen siendo negativas. Si el cultivo flagelar (H) negativo
sospechoso de ser una especie de Salmonella debido a sus reacciones bioquímicas,
Los laboratorios de la FDA deben enviar el cultivo a
Laboratorio de Denver de la FDA

Atención custodio de muestra
Centro Federal de Denver, Edificio 20
6th Avenue y Kipling Streets
Denver, CO 80225-0087
(Dirección anterior a partir del 1 de octubre de 2004)
para su posterior identificación y / o serotipado. Los laboratorios que no sean FDA deberían
hacer arreglos con un laboratorio de referencia para la serotipificación de Salmonella
culturas
11. Presentación de cultivos para serotipos . Presentar 1 aislado de cada grupo somático
recuperado de cada unidad analítica, a menos que se indique lo contrario. Enviar culturas en
Inclinación de agar BHI en tubos con tapón de rosca (13 × 100 mm o 16 × 125 mm) con tapas aseguradas
herméticamente. Etiquete cada tubo con el número de muestra, el número de submuestra (unidad analítica),
y código, si corresponde. Envíe una copia del Informe de recopilación, FD-464 o Importar
Informe de muestra, FD-784 para cada muestra. Coloque los cultivos en un recipiente de cultivo con
sello oficial de la FDA. Coloque los registros adjuntos ( E-11 , arriba) dentro de la caja de envío
pero no dentro del contenedor de cultivo sellado oficialmente. Enviar nota o carta de presentación para
cada número de muestra para acelerar el informe de resultados. Preparar cultivos para el envío.
según los requisitos para el envío de agentes etiológicos ( 3 ). Etiqueta secundaria
Contenedor de envío según la ref. 4 . Enviar contenedor por el servicio de correo más rápido
disponible. Mantener cultivos duplicados de aquellos enviados para serotipos solo en
aquellas muestras bajo consideración para acciones legales.
Los laboratorios de campo de microbiología deben seguir la siguiente guía al enviar

Aislamientos de Salmonella para serotipos:
Los aislamientos de NRL, WEAC, SRL y ARL serán serotipados en ARL:
Laboratorio regional de Arkansas

3900 NCTR Road Building 26
Jefferson, AR 72079
Atención: Gwendolyn Anderson
Tel. 870-543-4621
Fax # 870-543-4041
Los aislamientos de SAN, PRL-NW, PRL-SW y DEN serán serotipados en DEN:
Página 32
Laboratorio del distrito de Denver

6th Avenue y Kipling Street
DFC Building 20
Denver, CO 80225-0087
Atención: Shauna Madson
Tel. # 303-236-9631
Fax # 303-236-9675
Referencias
1. AOAC INTERNACIONAL. 2000. Métodos oficiales de análisis, 17ª edición, Métodos 967.25-
967.28, 978.24, 989.12, 991.13, 994.04 y 995.20. AOAC INTERNACIONAL,
Gaithersburg, MD.
2. Ewing, WH 1986. Edwards y Ewing's Identification of Enterobacteriacae, 4th ed.

Elsevier, Nueva York.
3. Registro federal. 1971. 36 (93): 8815 (secs d, e, yf).
4. Registro Federal. 1972. 37 (191): 20556 (sec. 173.388 (a)).
5. Jacobson, AP, Hammack, TS y WH Andrews. 2008. Evaluación de muestra

Métodos de preparación para el aislamiento de Salmonella de semillas de alfalfa y frijol mungo
con el método de cultivo BAM Salmonella. J. AOAC Int . 91 : 1083-1089.
6. Jacobson, AP, Gill, VS, Irvin, KA, Wang, H. y TS Hammack. 2012. Evaluación de
métodos para preparar muestras de vegetales de hojas verdes para enriquecer previamente con el
Manual analítico bacteriológico Método de cultivo de Salmonella. J. Food Prot . 75 : 400-404.
7. Junio, GA, PS Sherrod, TS Hammack, RM Amaguana y WH Andrews. 1995

Efectividad relativa del caldo de selenita cistina, caldo de tetrationato y Rappaport-
Medio Vassiliadis para la recuperación de Salmonella de carne cruda y otros productos altamente
alimentos contaminados: estudio precolaboratorio. J. AOAC Int. 78 : 375-380.
8. Hammack, TS, RM Amaguana, GA June, PS Sherrod y WH Andrews. 1999

Medio Vassiliadis para la recuperación de Salmonella de alimentos con baja carga microbiana. J.
Food Prot. 62 : 16-21.
9. Junio, GA, PS Sherrod, TS Hammack, RM Amaguana y WH Andrews. 1996.

Medio Vassiliadis para la recuperación de Salmonella de carne cruda, altamente contaminada
alimentos y piensos para aves: estudio colaborativo. J. AOAC Int. 79 : 1307-1323.
10. Hammack, TS, RM Amaguana y WH Andrews. 2001. Rappaport-Vassiliadis

Medio para la recuperación de Salmonella de alimentos con baja carga microbiana:
Estudio colaborativo. J. AOAC Int. 84 : (1) 65-83.
Page10/07/2019
11. Hammack, TS, Valentin-Bon, IE, Jacobson, AP y WH Andrews. 2004. Relativo

efectividad del método del Manual analítico bacteriológico para la recuperación de
Salmonella de melones enteros y enjuagues de melones con enriquecimiento seleccionado
medios y métodos rápidos. J. Food Prot . 67 : 870-877.
12. Hammack, TS, Johnson, ML, Jacobson, AP y WH Andrews. 2006. Efecto de

muestra de medios de enriquecimiento y enriquecimiento previo en la recuperación de Salmonella de
Melones, mangos y tomates. J. AOAC Int . 89 : 180-184.
13. Sherrod, PS, RM Amaguana, WH Andrews, GA June y TS Hammack. 1995

Efectividad relativa de los agars selectivos para la recuperación de especies de Salmonella de
alimentos seleccionados con alto contenido de humedad. J. AOAC Int. 78 : 679-690.
14. Zhang, G., E. Thau, E. Brown y T. Hammack. 2013. Comparación de una nueva estrategia para
La detección y aislamiento de Salmonella en huevos con cáscara con la FDA bacteriológica
Método analítico manual. Ciencia avícola . 92 : 3266-3274.
15. Zhang, G., E. Brown y T. Hammack. 2013. Comparación de diferentes preenriquecimientos

caldos, proporciones de huevo: caldo de enriquecimiento previo y desinfección de la superficie para la detección de
Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis en huevos con cáscara. Ciencia avícola . 92 :
3010-3016.
16. Wang, H., Gill, VS, Irvin, KA, Bolger, CM, Zheng, J., Dickey, EE, Duvall, RE,
Jacobson, AP y TS Hammack. 2012. Recuperación de Salmonella de forma interna y
tomates enteros contaminados externamente usando varias preparaciones de muestra diferentes
procedimientos J. AOAC Int . 95 : 1452-1456.
Fuente de hipertexto: Manual analítico bacteriológico, 8ª edición, Revisión A, 1998. Capítulo 4.

Manual Analítico Bacteriológico (BAM) Capítulo 5 - Salmonella

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10/07/2019 Manual analítico bacteriológico (BAM) Capítulo 5: Salmonella | FDA

Manual analítico bacteriológico (BAM) Capítulo 5:

Manual analítico bacteriológico

Agosto de 2016: se agregó el Flipbook de Salmonella

Mayo de 2014: el método VITEK 2 de identificación genérica presunta de Salmonella fue

Agosto de 2012: disponible en versiones en formato PDF del Capítulo 5: Salmonella y

Noviembre de 2011 - Adición a la Sección C: Preparación de alimentos para el aislamiento de Salmonella :

Diciembre de 2007: se agregó el método de pulpa Mamey y se revisó la Sección D.

Diciembre de 1999, marzo de 2000 y agosto de 2000; Revisión final el 14 de noviembre

Contenido del capitulo

Preparación de alimentos para el aislamiento de Salmonella.

El segundo cambio implica la opción de refrigerar preenriquecimientos incubados y selectivos.

Finalmente, desde la publicación de BAM-7, se realizó una comparación de 6 vías de la relación

3. Varillas de plástico estériles, dobladas o de plástico.

4. Equilibrio, con pesas; 2000 g de capacidad, sensibilidad de 0.1 g

5. Equilibrio, con pesas; 120 g de capacidad, sensibilidad de 5 mg

7. Incubadora refrigerada o refrigerador de laboratorio, 4 ± 2 ° C

9. Baño de agua, circulante, controlado por termostato, 43 ± 0.2 ° C

10. Baño de agua, circulante, controlado por termostato, 42 ± 0.2 ° C

12. Platos de cultivo estériles, 15 × 100 mm, vidrio o plástico.

16. Bastidores de tubos de prueba o cultivo

19. Lámpara (para observar reacciones serológicas)

20. Quemador Fisher o Bunsen

25. Esponjas, no bactericidas (Nasco cat # B01299WA), o equivalente.

26. Hisopos, no bactericidas, con punta de algodón.

B. Medios (/ alimentos / métodos de laboratorio / media-index-bam) y reactivos

Para la preparación de medios y reactivos, consulte los Métodos 967.25-967.28 en Oficial

1. Caldo de lactosa (M74 (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m74-lactosa-caldo) )

2. Leche en polvo sin grasa (reconstituida) (M111 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m111-

3. Caldo de selenita cistina (SC) (M134 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m134-

4. Caldo de tetrationato (TT) (M145 (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m145-

5. Medio Rappaport-Vassiliadis (RV) (M132 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-

7. Agar entérico Hektoen (HE) (M61 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m61-

8. Agar de sulfito de bismuto (BS) (M19 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m19-

9. Triple agar de hierro y azúcar (TSI) (M149 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m149-

10. Caldo de triptona (triptófano) (M164 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m164-

12. Caldo de tripticasa soja-triptosa (M160 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m160-

13. Caldo MR-VP (M104 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m104-mr-vp-broth) )

14. Agar citrato de Simmons (M138 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m138-

15. Caldo de urea (M171 (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m171-urea-caldo) )

16. Caldo de urea (rápido) (M172 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m172-urea-caldo-

17. Caldo de malonato (M92 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m92-malonate-

19. Caldo de lisina descarboxilasa (M87) (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m87-

20. Medio de prueba de motilidad (semisólido) (M103 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-

21. Caldo de cianuro de potasio (KCN) (M126 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-

22. Caldo de carbohidrato rojo de fenol (M121 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m121-

23. Caldo de carbohidratos púrpura (M130 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m130-

24. Agar MacConkey (M91 (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-media-m91-macconkey-

25. Caldo de nutrientes (M114 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m114-nutrient-

27. Solución de papaína, 5% (M56a (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m56a-papain-

28. Solución de celulasa, 1% (M187 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m187-

29. Base de agar sangre de triptosa (M166 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m166-

30. Caldo de enriquecimiento universal (M188 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-

31. Caldo de enriquecimiento universal (sin citrato de amonio férrico) (M188a

32. Agua de peptona tamponada (M192 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m192-

33. Caldo Dey-Engley (M193 (/ food / laboratorio-métodos / bam-media-m193-dey-engley-

34. Polvo de sulfito de potasio, anhidro

36. Etanol, 70% (R23 (/ alimentos / métodos de laboratorio / bam-r23-etanol-solución-70) )