Tesis en Gusano Cogollero
Tesis en Gusano Cogollero
Tesis en Gusano Cogollero
DIVISIÓN DE AGRONOMÍA
DEPARTAMENTO DE BOTÁNICA
Por:
INGENIERO EN AGROBIOLOGÍA
Al creador de todas las cosas, el que me ha dado fortalezas para continuar cuando a
punto de caer he estado; por ello, con toda la humildad que de mi corazón puede
De igual forma, dedico esta tesis a mis padres el Sr. Ángel Martínez Rodríguez y la
Sra. Josefina Rodríguez Olguín que han sabido formarme con buenos sentimientos,
hábitos, valores, Porque hacen que todo sea posible, por su apoyo incondicional, su
gran amor, paciencia y tolerancia, sobre todo por la confianza y libertad que me dieron
para decidir mí camino, por haberme dado el regalo más grande que es la vida, por
me ha ayudado a salir adelante en los momentos más difíciles. Los amo y de verdad
MUCHAS GRACIAS.
A mis hermanos que siempre me orientaron con sus consejos y su apoyo moral para
que yo siguiera por un buen camino con regaños y todo pero salimos adelante siempre
A mis sobrinas e ahijadas que siempre llenan de alegría la casa las quiero mucho
A Dios: porque nunca me abandona, y me dio la oportunidad de venir a esta vida con
A mis padres: por todo su apoyo económico, moral, espiritual y por su entrega como
padres, por sus desvelos, sus sacrificios, consejos y esfuerzos por ser mejor cada día.
A mi familia que siempre me brindó su apoyo moral para que continuara con mis
estudios.
A María Brenda Olivia Baylon Palomino quien ha formado una parte importante en
mi vida y me ha soportado todo este tiempo pero a pesar de todo hemos compartido
realizar mis estudios en ella, por prepararme como un profesional en sus aulas, y
Al CONACYT por haberme brindarme el apoyo con una beca para la realización de
esta investigación.
Al Dr. Fabián Fernández Luqueño por haberme brindarme todo su apoyo, por darme
A TA. Norma Leticia Portos Gaona por apoyarme en el laboratorio con mis
muestras de microscopia.
de felicidad que quedaran en el recuerdo les deseo éxito a cada uno de ellos.
Índice de Contenido
ÍNDICE DE FIGURAS ................................................................................................................................. IV
ÍNDICE DE CUADROS .............................................................................................................................. VII
RESUMEN .............................................................................................................................................. VIII
INTRODUCCIÓN ........................................................................................................................................ 1
OBJETIVO GENERAL .................................................................................................................................. 3
Objetivos específicos ........................................................................................................................ 3
HIPÓTESIS ................................................................................................................................................. 3
REVISION DE LITERATURA ........................................................................................................................ 4
Aplicaciones de la Nanotecnología ...................................................................................................... 4
Nanopartículas ................................................................................................................................... 5
Principales tipos de nanopartículas ................................................................................................ 6
Clasificación de las nanopartículas ................................................................................................ 8
Nanopartículas de origen natural ................................................................................................ 8
Nanopartículas antropogénicas................................................................................................... 8
Nanopartículas de óxidos................................................................................................................. 9
Magnetita. ....................................................................................................................................... 9
Hematita ........................................................................................................................................ 10
Óxido de Zinc. .............................................................................................................................. 10
Dióxido de Titanio ........................................................................................................................ 11
Toxicidad de las nanopartículas.................................................................................................... 12
Efectos químicos ......................................................................................................................... 12
Efectos mecánicos ...................................................................................................................... 13
Efectos catalíticos........................................................................................................................ 13
Nanopartículas y medio ambiente ............................................................................................... 14
Nanopartículas en la atmosfera ................................................................................................ 16
Las nanopartículas en la alimentación y agricultura .................................................................. 16
Riesgos tóxicos a humanos por exposición a nanopartículas.................................................. 17
Principales vías de penetración de las nanopartículas ............................................................. 19
Vía inhalatoria .............................................................................................................................. 19
Vía dérmica .................................................................................................................................. 20
Vía digestiva ................................................................................................................................. 20
I
Riesgos tóxicos a plantas por exposición a nanopartículas .................................................... 21
Vías de absorción de nanopartículas en las plantas ................................................................. 25
Maíz (Zea mays L.) ......................................................................................................................... 28
Importancia del maíz en México ............................................................................................... 28
Frijol (Phaseolus vulgaris L.) ......................................................................................................... 29
Importancia del frijol en México ................................................................................................. 30
MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................................................................. 32
Descripción del sitio ........................................................................................................................ 32
Establecimiento de cultivos............................................................................................................ 32
Riegos y aplicación de nanopartículas......................................................................................... 32
Manejo de los cultivo ..................................................................................................................... 34
Análisis de biomasa ........................................................................................................................ 34
Variables evaluadas para biomasa........................................................................................... 34
Peso fresco y peso seco de la parte aérea y raíz .................................................................. 34
Longitud de la parte aérea y la raíz .......................................................................................... 34
Análisis Histológico de tallo y raíz................................................................................................. 35
Variables analizadas en histología ........................................................................................... 35
Toma de muestras .......................................................................................................................... 35
Fijación .............................................................................................................................................. 35
Deshidratación ................................................................................................................................. 35
Inclusión ............................................................................................................................................ 36
Cortes en micrótomo ....................................................................................................................... 37
Montaje de tejidos en portaobjetos ............................................................................................... 37
Coloración......................................................................................................................................... 37
Análisis de imágenes ...................................................................................................................... 38
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.......................................................................................................... 40
Biomasa en raíz de Maíz y Frijol................................................................................................. 40
Peso fresco de la raíz de maíz y frijol ...................................................................................... 41
Peso seco de la raíz de maíz y frijol ......................................................................................... 43
Longitud de raíz de maíz y frijol. ............................................................................................... 44
Parte aérea de plantas de maíz y frijol......................................................................................... 46
Peso fresco de la parte aérea de maíz y frijol......................................................................... 47
II
Peso seco de la parte aérea de maíz y frijol. .......................................................................... 49
Longitud de la parte aérea de la planta de maíz y frijol......................................................... 51
Análisis Histológico de Maíz y Frijol ............................................................................................ 52
Micromorfología en maíz ............................................................................................................ 53
Área del haz vascular de raíz de maíz. ................................................................................... 53
Área de vasos de xilema de raíz de maíz. .............................................................................. 54
Número de vasos de xilema de la raíz de maíz .................................................................... 55
Área de vasos del xilema del tallo del maíz ............................................................................ 56
Número de vasos de xilema en el tallo del maíz .................................................................... 57
Micromorfología en Frijol ............................................................................................................ 60
Área del haz vascular de raíz de frijol. ..................................................................................... 60
Área de vasos de xilema de raíz de frijol ................................................................................. 61
Área de vasos de xilema del tallo del frijol .............................................................................. 62
CONCLUSIONES ................................................................................................................................ 66
LITERATURA CITADA ....................................................................................................................... 67
III
ÍNDICE DE FIGURAS
2 Tipos de nanoestructuras……………………………………….……… 7
IV
Peso fresco de parte aérea de frijol a 23 y 73 días de crecimiento
15 50
acondicionado con tres nanopartículas a dos concentraciones……
V
Área del haz vascular de raíz de frijol a 23 y 73 días de crecimiento
25 61
acondicionado con tres nanopartículas a dos concentraciones……
VI
ÍNDICE DE CUADROS
VII
RESUMEN
Antonio Narro Saltillo Coahuila. Se utilizaron plantas de maíz y frijol a las que se les
aplicó las siguientes nanopartìculas: en maíz (Fe3O4, FeOOH, Fe2O3, ZnO y TiO2), en
raíz y parte aérea) y micromorfologícas (área del has vascular, número de vasos de
del haz vascular, área de vasos de xilema y el número de vasos los cuales se fueron
VIII
INTRODUCCIÓN
por lo menos una de sus dimensiones se encuentra entre 1 y 100 nm (Gutiérrez et al.,
bajas. Los tamaños de las partículas de materiales inorgánicos, tales como sulfato,
para entrar en contacto con los cultivos y plantas silvestres (Fernández-Luqueño et al.,
radicular de cultivos como tomate, repollo, zanahoria y lechuga (Cañas et al., 2008).
1
El maíz y el frijol son cultivos de suma importancia para el país y forman parte
de la dieta básica de cada familia. El frijol en México ocupa el segundo lugar por
Otros resultados con efectos no significativos, como los presentados por Doshi et al.,
17 mg L-1.
ladrillera, cementera, etc.) son fuente de contaminación, el cual podría causar efectos
sectores.
plantas expuestas a los nanomateriales es por eso que con esta investigación se dará
a conocer cuáles son las repuestas morfológicas y fisiológicas de las plantas a las altas
de las plantas.
2
OBJETIVO GENERAL
Objetivos específicos
de nanopartículas.
nanopartículas.
HIPÓTESIS
3
REVISION DE LITERATURA
Aplicaciones de la Nanotecnología
relaciona con nuevos materiales, sistemas y procesos que operan a una escala de 100
estructuras y sistemas a escala de átomos y moléculas, esto es, a nano escala. Las
considerablemente de las partículas más grandes con igual composición química. Las
nanopartículas pueden tener una mayor reactividad química y ser más bioactivas que
las partículas más grandes, por su tamaño, tienen mejor acceso a cualquier cuerpo y
nuevas aplicaciones en casi todas las áreas de la industria (Lugo-Medina et al., 2010).
más potentes. Por ejemplo, compuestos de nanoarcilla (plásticos a los que se les ha
4
La posibilidad que tienen las nanotecnologías de aplicarse a múltiples sectores
Nanopartículas
Las nanopartículas han existido en el planeta por siglos, algunos ejemplos son
tamaño. Lo que puede plantear nuevos riesgos para la salud del hombre y de otras
mecanismos de defensa.
Cuatro son las principales clases en las que en general son clasificados los
nanomateriales
los fullerenos 1 esféricos son a veces denominados buckyballs, mientras que los
2007).
6
(b) Materiales de base metálica: pueden ser quantum dots (puntos cuánticos o
las ramas crecen a partir de otras y así sucesivamente; las terminaciones de cada
cadena de ramas pueden diseñarse para ejecutar funciones químicas específicas -una
propiedad útil para los procesos catalíticos-; además, dado que tienen cavidades
internas, su uso médico para la “entrega de droga” es factible (lo mismo sucede con el
7
Clasificación de las nanopartículas
forestales, erupciones volcánicas etc. Algunas son de origen biológico, como virus y
bacterias y otras son de origen mineral o medioambiental como las que contiene el
polvo de arena del desierto, o las nieblas y humos derivados de la actividad volcánica
Nanopartículas antropogénicas
Frejo et al., (2011) mencionan que son aquellas que se producen en procesos
o en procesos domésticos.
8
Nanopartículas de óxidos.
aplicaciones en la industria
Magnetita.
9
componente principal de sensores y su interacción con polímeros de impresión
ambiental.
Hematita
Estudios de laboratorio han comprobado que las partículas de hematita (Fe 2O3)
forman una capa de óxido protector y detienen el avance de ataques corrosivos sobre
2009).
Óxido de Zinc.
10
El ZnO es un metal de transición y un semimetal que puede reaccionar con
barato y presenta una baja toxicidad, siendo muy efectivo en la protección contra los
Dióxido de Titanio
11
clorantes, oxidación de compuestos orgánicos volátiles y degradación de compuestos
a los que se depositan las nanopartículas. Las nanopartículas pueden ser tóxicas para
los tejidos de la planta, debido a los efectos químicos o físicos. Por lo tanto, NPs actúan
Las nanopartículas interactuar con los sistemas biológicos por cinco modos
disolución, y debido a efectos mecánicos esferas duras y definidas las interfaces (Karl-
Efectos químicos
Los metales tóxicos, tales como Cu, Cd, mercurio (Hg), Ni y Zn, se unen a
carboxilo o imidazol, y modificar sus actividades. Esta interferencia con los procesos
metal expuestas (Schützendübel y Polle 2002). Algunos metales, tales como Cu y Fe,
12
la transferencia de electrones a O2 como aceptores para formar O2-o a H2O2 para
en solución con muy diferentes tipos y por lo tanto pueden ejercer su acción tóxica en
y la mayoría se asocian con las superficies de las plantas. Por lo tanto, el efecto de
Efectos mecánicos
química de las partículas. Ellos incluyen el relleno de los poros, que son entonces
Efectos catalíticos
Muchos metales, incluyendo Ag, Pt, Pd, oro (Au), Fe y Co, catalizan reacciones
13
concentraciones compatibles con las células están por lo general obligados a
persistentes, ya sea a través del uso de recubrimiento o por agentes fijadores, además
cuya interacción con los seres vivos puede ser diferente a la que se conoce para otras
14
La producción y usos cada vez más amplios y difundidos de nanomateriales
nanopartículas sobre.
del aire mediante su uso en procesos industriales, al agua a través de las aguas
15
residuales por derrames o lavados, y en el suelo donde se pueden acumular por su
Nanopartículas en la atmosfera
Una de las principales interacciones del ser humano con el medio ambiente se
da con el aire, de donde este toma el oxígeno necesario para todas las funciones
debido a su peso y tamaño, por lo que puede viajar grandes distancias e interactuar
2005).
cadena alimentaria revela que los alimentos que contienen nano ingredientes y nano
16
aditivos manufacturados no son algo salido de la ciencia ficción, sino que ya están a
actuales por nanopartículas, debido a que están diseñadas para tener un efecto
exterminador más potente contra malezas y plagas. Sin embargo, los nanoplaguicidas
pueden resultar más tóxicos que los agroquímicos convencionales para la flora y fauna
una vez que hayan liberado al plaguicida puedan biodegradarse, implica un avance
normativo que indique con qué tipo de materiales están operando. Los nano
Uno de los factores que demuestran los riesgos de las nanopartículas a la salud
es mínima, su pequeño tamaño puede ser suficiente para atravesar la piel o la barrera
Europa, en las ciudades de Asia los valores diarios pueden exceder los 200 mg m -3.
17
salud, mientras que algunas normas oficiales mencionan un umbral entre 20 y 25 mg
m-3. Datos estadísticos de más de 100 ciudades en los EE.UU. y Europa sugieren un
Las nanopartículas de plata (AgNPs) son las que tienen un mayor grado de
alimentaria. Algunos estudios han mostrado que la toxicidad intrínseca de las AgNPs
depende de una serie de factores como son el tamaño, la forma, el área superficial, la
investigaciones in vitro indican que las AgNPs son tóxicas para las células de
La exposición a nanopartículas puede tener lugar a través del agua, el aire y los
alimentos, por lo que las vías respiratoria, oral y dérmica son las más relevantes.
18
Principales vías de penetración de las nanopartículas
Vía inhalatoria
tracto respiratorio ya que son demasiado gruesas para que los fenómenos de difusión
les puedan influir y, por otro lado, son demasiado pequeñas para que los fenómenos
(Erro-Urrutia, 2011).
19
En estudios realizados con ratas se ha observado que pueden depositarse
Vía dérmica
exposición dérmica a partículas ultra finas, aunque hay estudios que sugieren que este
tipo de partículas pueden penetrar a través de los folículos pilosos, donde los
a través de la piel. Por otro lado, hay que tener en cuenta que, dado que la penetración
directa a través de la piel ha estado descrita para partículas con un diámetro de 1.000
nm, es razonable pensar que las nanopartículas penetraran con mayor facilidad (Erro-
Urrutia, 2011).
Vía digestiva
ingestión de nanopartículas, que puede tener lugar debido a malas prácticas higiénicas
20
Figura 3. Principales vías de exposición de las AgNPs (Avalos et al., 2013).
de las nanopartículas, así como del lugar donde se deposita. Pueden ser tóxicos para
los tejidos de las plantas debido a los efectos físicos o químicos (Mae-Wan, 2012).
especies en la cadena alimenticia, ya que son consumida por menor trófico los
organismos de nivel, los animales, y personas. Aunque hay una amplia variedad de
especies de plantas dentro del ecosistema, la mayoría del trabajo nanotoxicidad hasta
soja, tabaco y muchas plantas de frutas o vegetales, tales como calabaza y pepino
21
(Mae-Wan, 2012).Rico et al., (2011) menciona que la captación, la bioacumulación,
crecimiento de las plantas. La mayoría de los estudios, excepto uno con nanotubos de
y otro con nanopartículas de ZnO (NPS) sobre ballico, informaron el efecto de NMS en
alimentos, tal que un cultivo de tanta importancia como la soja. En el caso de las
Wan, 2012).
22
La fitotoxicidad de las nanopartículas de ingeniería (ENPs) para plantar
pocos efectos en el incremento del uso de agua y transpiración (Seeger et al., 2009).
radicular de cultivos como tomate, repollo, zanahoria y lechuga (Cañas et al., 2008).
de cobre, son tóxicos para dos especies de plantas, el trigo (Triticum aestivum L.) y
puesto que la raíz del trigo está compuesta por numerosas raíces pequeñas y carece
23
numerosas raíces secundarias en desarrollo. Otros estudios demostraron que
Arabidopsis thaliana L. que presenta una raíz semejante a Phaseolus radiatus L. (Lee
et al., 2008).
puede resultar de las interacciones físicas entre las nanopartículas y las vías de
transporte de células de las plantas, es decir, mediante la inhibición del tráfico vía
interacción con los organismos vivos. Las células de plantas, algas, y hongos poseer
paredes celulares que constituyen un sitio principal para la interacción y una barrera
para la entrada de las NP. Mecanismos que permiten a los parlamentos nacionales
pasan por las paredes celulares y las membranas son aún mal entendidas. Sin
24
físicas y pueden incluir restricciones físicas (efectos de obstrucción), la solubilización
su nano o micro aberturas. Existen varias rutas por las que se puede absorber o
minutos a 400 mg de aerosol con nanopartículas de CeO2 (37 nm). Con el trabajo se
tamaño y superficie. Las superficies de las hojas, las frutas y células epidérmicas están
cubiertas por una cutícula. Esta puede permitir la entrada de nanopartículas muy
cutícula, las células epidérmicas y tricomas o estomas son diferentes. Las propiedades
estigma de las flores y estomas. Algunas aperturas de estomas pueden llegar a tener
25
10 µm de diámetro en plantas mesófilas, como por ejemplo Vicia faba L. (haba)
las estomas por exposición vía aérea a nanopartículas (Birbaum, et al., 2010).
desarrollan capas de suberina como una interface con el medio del suelo. La suberina
se deposita como una sola capa o una lámina con muchas capas en el interior de la
pared celular. Muchas raíces principales cuentan con una exodermis suberinizada, así
y agua al cilindro central. Sin embargo la formación de las raíces secundarias puede
permitir el paso de las nanopartículas y ser conducidas a la planta a través del xilema.
o por daños mecánicos en las raíces, vías por las cuales permiten la entrada de
importancia de las vías. El esquema incluye la parte aérea y las raíces, el movimiento
o transporte dentro de la planta son representados por la parte azul. Las líneas
26
Figura 4. Vías de asociación, absorción y translocación de nanopartículas en la planta. Fuente:
Karl-Josef y Herth, 2011.
las nanopartículas que están en contacto con la parte aérea de la planta una parte
27
Figura 5. Absorción, translocación y distribución de nanopartículas en la parte aérea de las
plantas. Fuente: Karl-Josef y Herth, 2011.
para consumo humano en una amplia variedad de platillos; sin embargo, su principal
2013).
28
En el 2012 el maíz alcanzo una superficie sembrada de 7, 372,218.2 Ha, con
069,254.4 toneladas, esto nos indican que el promedio nacional de rendimiento por
hectárea es de 3.19 Ton Ha-1. El precio por tonelada de frijol oscila en los 4,009.00
(SIAP-SAGARPA, 2013). Esto nos da una idea de la importancia del cultivo de maíz
en el país.
El ciclo biológico puede variar desde 85 a 270 d, en función del hábito de crecimiento,
hasta Canadá y desde el nivel del mar hasta los 3200 m de altura, es una planta
predominan las flores de color morado; las vainas son pequeñas y delgadas,
con baja población de árboles, con preferencia en sitios con arbustos espinosos y
maleza; éstos se pueden encontrar en las riberas de los ríos, hábitat con
29
perturbaciones por efectos de vulcanismos, incendios naturales o por modificaciones
Entre algunas propiedades con las que cuenta el frijol esta su alto contenido de
hierro, elemento vital para el buen desarrollo cerebral en los pequeños, ayuda a
tipos de cáncer. Por cada 100 gramos, hay 20 de proteínas, 5.8 de grasa y más de 3
El frijol en México ocupa el segundo lugar por superficie cultivada y el sexto por
080,856.7 toneladas, esto nos indican que el promedio nacional de rendimiento por
hectárea es de 0.69 Ton Ha-1. El precio por tonelada de frijol oscila entre los 12,753.00
platillos. Es además una importante fuente de proteínas, que se cultiva en casi todo el
30
territorio nacional. La planta de frijol es una enredadera que alcanza entre cincuenta y
setenta centímetros de altura. Sus raíces están bien desarrolladas, con una principal
o pivotante y muchas otras secundarias; pero tiene tallos delgados y débiles. Sus hojas
son trifoliadas, es decir, dispuestas de tres en tres, con bordes ovales y estandarte
que se abre naturalmente cuando está madura. Esta vaina puede medir de diez a 12
que el precio fuera determinado por la oferta y la demanda. Hay poco más de 550 mil
productores que generan más de 1.2 millones de toneladas anuales y más de 100
et al., 2008).
31
MATERIALES Y MÉTODOS
Establecimiento de cultivos
Antonio Narro (UAAAN). Se sembraron dos semillas por bolsa de dichos cultivos en
para Frijol.
32
agua desionizada para obtener las concentraciones de 6 g/l y 3 g/l respectivamente
Los riegos en frijol fueron cada dos días, para el maíz los riegos fueron diarios, de
T3 Magnetita 6 T3 Magnetita 6
T5 Hematita 6 T5 Hematita 6
T6 Ferrihidrita 3 T6 Ferrihidrita 3
T7 Ferrihidrita 6 T7 Ferrihidrita 6
T8 Óxido de zinc 3
T9 Óxido de zinc 6
T10 Dióxido de 3
titanio
T11 Dióxido de 6
titanio
33
Manejo de los cultivo
Análisis de biomasa
peso seco y longitud de raíz y peso fresco, peso seco y longitud de parte aérea.
posteriormente fueron colocadas en una estufa marca Felissa 2000 por tres días a 75°C
y se volvió a pesar para obtener el peso seco, esto con la finalidad de conocer la
tomando como base el inicio del tallo, y el final de esta en el caso de la parte aérea, y
para la longitud de la raíz se tomó como referencia el inicio del tallo hasta la parte final
de las raíces.
34
Análisis Histológico de tallo y raíz
Se evaluó para raíz de maíz el área del haz vascular, el área de vasos del xilema
de vasos, en frijol se analizó para raíz el área del haz vascular y el área de vasos de
Toma de muestras
5 cm después del inicio de la raíz y a 5 cm del inicio del tallo, Para el estudio histológico
Fijación
fijación, colocando los tallos y las raíces de maíz y frijol, en frasco de vidrio con
Deshidratación
Después de la fijación hay que quitar el agua de los tejidos para esto se pasarán
los tejidos por diferentes agentes deshidratantes y aclarantes, con intervalos tiempos
35
Cuadro2. Proceso de deshidratación
Preparación Tiempo
Alcohol 96 + eosina 2 Hrs
Alcohol 96 + eosina 2 Hrs
Alcohol absoluto I 2 Hrs
Alcohol absoluto II 2 Hrs
Alcohol absoluto + xilol 2 Hrs
Alcohol absoluto (3) + xilol (1) 2 Hrs
Alcohol absoluto (1) + xilol (1) 2 Hrs
Alcohol absoluto (1) + xilol (3) 2 Hrs
Xilol puro 2 Hrs
Xilol puro + parafina + estufa a 35°C 24 Hrs
Xilol puro + parafina + estufa a 45°C 24 Hrs
Parafina pura 1er cambio a 55°C 24 Hrs
Parafina pura 2do cambio 24 Hrs
Inclusión
vacía a moldes de aluminio grueso de 9 x 11 cm, en donde con una aguja de disección
dejan solidificar para sacar los cuadros de parafina con los tejidos, terminada la
inclusión se dejó secar las muestras por un día, para todo el proceso se utilizó una
36
Cortes en micrótomo
se cortaron en cuadros que contenían una muestra, dándole forma con ayuda de una
grosor y se giró la manivela para obtener una tira larga de parafina con los cortes.
por cada 100 ml de agua destilada) y unas gotas de agua destilada, se le dio calor en
una lámpara de alcohol tratando de que quedara bien adherido y extendido el tejido.
correspondientes.
Coloración
que el tejido quedara hacia la izquierda, esto para poder identificar la muestra; con la
ayuda de unas pinzas las preparaciones se pasaron por el primer frasco que contiene
enjuagaron con alcohol etílico absoluto al 96%,85%,70%, 60% y 50% y enjuague con
37
agua destilada y después colocadas en una solución de safranina al 1% (1 g de
safranina por cada 100 ml de agua destilada) durante 15 minutos; concluido este
tiempo las preparaciones se pasaron por una serie de enjuagues: agua normal, agua
posteriormente los tejidos se pasaron al colorante verde rápido al 0.5% ( 0.5 g en 100
alcohol etílico de 96%, alcohol absoluto y alcohol absoluto II, posteriormente pasaron
a solución carbol-xilol por 5 minutos para fijar los colores, por último se colocaron en
Después con ayuda de pinzas se sacaron las preparaciones del xilol y se colocó
Se dejaron secar las preparaciones en las gradillas que se marcaron con los
Análisis de imágenes
muestras fueron observadas con los objetivos a 5X, 10X y 40X en cada observación
se tomó una fotografía la cual sirvió para identificar las variables de micromorfología
como son para raíz de maíz el área del haz vascular, el área de vasos del xilema y el
38
de vasos, en frijol se analizó para raíz el área del haz vascular y el área de vasos de
desarrollo del tallo y de la raíz a nivel histológico de plantas de maíz y frijol. Se utilizó
un microscopio Vista Visión con cámara digital Pixera Winder Pro y un software de
Los datos de cada uno de los tratamientos de maíz y frijol obtenidos a los 23 y
39
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
que para la mayoría de las nanopartículas son necesarias concentraciones altas para
presencia de nanopartículas, pero los efectos son más notorios cuando estas
40
Cuadro 4. Cuadro comparativo de variables de biomasa de raíz en el cultivo de frijol a 23 y
73 días de crecimiento.
planta genera 223.30% mayor peso fresco que el (Figura 7). Las condiciones de la
celulares (Adriano, 2001). Se encontró que los metales el zinc, níquel y plomo afectan
41
a bajas concentraciones y a concentraciones mayores afectando el desarrollo del
0.8 120
0.7
100
0.6
80
0.5
0.4 60 Peso
fresco (g)
0.3 23 días
40
Peso
0.2 fresco (g)
20 73 días
0.1
0 0
0g Ma3gMa6gHe3g He6g Fe3g Fe6g Zn3g Zn6g Ti3g Ti6g
Figura 6. Peso fresco de raíz de maíz a 23 y 73 días de crecimiento acondicionado con cinco
nanopartículas a dos concentraciones
1.4 5
4.5
1.2
4
Peso fresco ( grs ).
1
Peso fresco ( grs ).
3.5
3
0.8 Peso
2.5 fresco (g)
0.6 23 días
2
Peso
0.4 1.5 fresco (g)
73 días
1
0.2
0.5
0 0
0g Ma3g Ma6g He3g He6g Fe3g Fe6g
Figura7. Peso fresco de raíz de frijol a 23 y 73 días de crecimiento con tres nanopartículas
a dos concentraciones
42
Peso seco de la raíz de maíz y frijol
que los iones alcanzan la zona de absorción de la raíz por difusión a través de la
solución del suelo, son arrastrados por el movimiento del agua hacia la raíz o entran
en contacto con la zona de absorción a medida que la raíz crece. Brooks, (1998)
0.4 25
0.35
20
0.3
Peso seco (grs)
0.25 15
Peso seco (grs)
Peso
0.2 seco (g)
0.15 10 23 días
peso
0.1 seco (g)
5
73 días
0.05
0 0
0g Ma3gMa6gHe3gHe6g Fe3g Fe6g Zn3g Zn6g Ti3g Ti6g
Figura 8. Peso seco de raíz de maíz a 23 y 73 días de crecimiento acondicionado con cinco
nanopartículas a dos concentraciones 43
0.4 0.9
0.35 0.8
0.7
0.3
Peso seco (grs)
0 0
0g Ma3g Ma6g He3g He6g Fe3g Fe6g
Figura 9. Peso seco de raíz de frijol a 23 y 73 días de crecimiento acondicionado con tres
nanopartículas a dos concentraciones
coinciden con los de Lin y Xing (2008) quienes encontraron que nanopartículas de
44
daño severo en la raíz, causando gran inhibición del crecimiento de la planta. La
mayoría de los estudios realizados en plantas demuestran que existe una fitotoxicidad
hacia las nanopartículas, sobre todo en altas concentraciones. Nanotubos mono capa
de cultivos como tomate, repollo, zanahoria y lechuga (Cañas et al., 2008). Otros
30 80
70
25
60
Longitud (cm)
Longitud (cm)
20
50
longitud
15 40 (cm) 23
días
30
10 longitud
20 (cm) 73
5 días
10
0 0
0g Ma3gMa6gHe3gHe6g Fe3g Fe6g Zn3g Zn6g Ti3g Ti6g
Figura 10. Longitud de raíz de maíz a 23 y 73 días de crecimiento acondicionado con cinco
nanopartículas a dos concentraciones
45
18 20
16 18
14 16
14
Longitud (cm)
Longitud (cm)
12
12
10 longitud
10 (cm) 23
8 días
8
6 longitud
6 (cm) 73
4 4 días
2 2
0 0
0g Ma3g Ma6g He3g He6g Fe3g Fe6g
Figura 11. Longitud de raíz de frijol a 23 y 73 días de crecimiento acondicionado con tres
nanopartículas a dos concentraciones
Existen varias rutas por las que se puede absorber o asociar las nanopartículas
la parte aérea de la planta, y que presenten un rápido crecimiento, así como una gran
46
Cuadro 5. Cuadro comparativo de variables de biomasa de parte aérea en el cultivo de maíz
a 23 y 73 días de crecimiento.
0g: Testigo, Ma: Magnetita, He: Hematita, Fe: Ferrihidrita, Zn: Óxido de Zinc Ti: Dióxido de Titanio. 6g: 6 gr/l, 3g: 3 gr/L
47
testigo al suministrar nanopartícula de dióxido de titanio a concentración de 3 g/l
(Figura 12).
g/l aumenta su peso fresco en un 73.94% comparado con el testigo. A 73 días las
nanopartículas de óxidos metálicos como por ejemplo de cobre, son tóxicos para dos
1.4 200
180
1.2
160
Peso fresco (grs)
1 140
Peso fresco (grs)
0.8 120
Peso fresco
100
(g) 23 días
0.6 80
0.4 60 Peso fresco
(g) 73 días
40
0.2
20
0 0
Figura 12. Peso fresco de parte aérea de maíz a 23 y 73 días de crecimiento acondicionado
con cinco nanopartículas a dos concentraciones
48
3 20
18
2.5
16
Peso fresco (grs)
Figura 13. Peso fresco de parte aérea de frijol a 23 y 73 días de crecimiento acondicionado
con tres nanopartículas a dos concentraciones
(figura 14).
50.57 % comparado con el testigo (figura 15). En cualquier etapa del crecimiento, el
10% durante el llenado y tal vez un 15% en la etapa posterior a la floración (Loomis y
49
Connor, 1992). En plántulas de maíz se reportó mayor contenido de humedad con
y Dubey 2013).
0.3 35
0.25 30
Peso seco (grs)
25
0 0
0g Ma3gMa6gHe3gHe6g Fe3g Fe6g Zn3g Zn6g Ti3g Ti6g
Figura 14. Peso seco de parte aérea de maíz a 23 y 73 días de crecimiento acondicionado
con cinco nanopartículas a dos concentraciones
0.4 3
0.35
2.5
0.3
Peso seco (grs)
2
0.25 peso
0.2 1.5 seco (g)
23 días
0.15 peso
1
0.1 seco (g)
0.5 73 días
0.05
0 0
0g Ma3g Ma6g He3g He6g Fe3g Fe6g
Figura 15. Peso fresco de parte aérea de frijol a 23 y 73 días de crecimiento acondicionado
50
con tres nanopartículas a dos concentraciones.
Longitud de la parte aérea de la planta de maíz y frijol
el que presenta mayor tamaño con 11 cm de longitud.A 73 días las plantas aumentan
favorezca la altura de la planta. Existen varias rutas por las que se puede absorber o
51
12 120
10 100
Longitud (cm)
Longitud (cm)
8 80
longitud
6 60 (cm) 23
días
4 40 longitud
(cm) 73
2 20 días
0 0
0g Ma3gMa6gHe3gHe6g Fe3g Fe6g Zn3g Zn6g Ti3g Ti6g
Figura 16. Peso seco de parte aérea de maíz a 23 y 73 días de crecimiento acondicionado
con cinco nanopartículas a dos concentraciones.
10 30
9
25
8
Longitud (cm)
7
20
6 Longitud (cm) longitud
5 15 (cm) 23
días
4
10 longitud
3 (cm) 73
2 días
5
1
0 0
0g Ma3g Ma6g He3g He6g Fe3g Fe6g
Figura 17. Peso fresco de parte aérea de frijol a 23 y 73 días de crecimiento acondicionado
con tres nanopartículas a dos concentraciones.
52
afectaron principalmente el haz vascular del xilema afectando el área, ancho de la
epidermis y el número de vasos del maíz y frijol. Estudios sobre la toxicidad de las
la planta el CuO (100 mg/l) no tuvo efecto sobre la germinación, pero inhibieron el
partículas a granel CuO no tuvieron ningún efecto evidente en el crecimiento del maíz.
Las nanopartículas estaban presentes en la savia del xilema como examinadas por
(EDS), mostrando que CuO PN fueron transportados desde la raíz hasta a través del
Micromorfología en maíz
el tamaño del haz vascular en un 79.37% comparado con el testigo (Figura 18). En un
trabajo realizado por Sory et al.,(2010) se encontró que fue significativamente mayor
el tamaño de los vasos del xilema al injertarlos con el porta injertó ‘Criollo de Honduras’,
lo que significa que fue mejor realizar los injertos en ‘Charleston F1’ y ‘Sun 7705’, no
así para ‘Reseva F1’. Esto nos muestra cómo se puede incrementar el área del haz
53
160000 1200000
140000
1000000
120000
800000
100000
Área del haz
80000 600000 vascular 23
días
60000
400000 Área del haz
40000 vascular 73
200000 días
20000
0 0
Figura 18. Área del haz vascular de la raíz de maíz a 23 y 73 días de crecimiento
acondicionado con cinco nanopartículas a dos concentraciones.
g/l aumento un 389% más área de vasos de xilema que el testigo. A 73 días al aplicar
178.09% más área del xilema que el testigo (Figura 19). Raggio y Moro (2004)
internos de los elementos conductores del xilema. El 46,32% de los vasos en las
Esta distribución cambió para las plantas C18 puesto que se diferencian dos grupos
54
9000
8000
7000
6000 Área de
5000 Vasos de
Xilema 23
4000
días
3000 Área de
Vasos de
2000
Xilema 73
1000 días
0
0g Ma3gMa6gHe3g He6g Fe3g Fe6g Zn3g Zn6g TI3g TI6g
todas las demás nanopartículas esto quiere decir que se retiene el crecimiento de los
testigo (figura 20). La toxicidad de los metales puede ser estudiada mediante una
evaluación de sus efectos sobre el crecimiento de las plantas, entre las que se
55
25
20
15 Número de
Vasos de
Xilema 23 días
10
Número de
Vasos de
5
Xilema 73 días
0
0g Ma3gMa6gHe3gHe6g Fe3g Fe6g Zn3g Zn6g TI3g TI6g
planta produjo 68.56% mayor área comparado con el (figura 21) Las partículas
56
4000
3500
3000
Área de Vasos
2500 de Xilema a 23
días
2000 Área de Vasos
de Xilema a 73
1500 días
1000
500
0
0g Ma3gMa6gHe3gHe6g Fe3g Fe6g Zn3g Zn6g TI3g TI6g
Figura 21. Área de vasos del xilema del tallo del maíz a 23 y 73 días de crecimiento
acondicionado con cinco nanopartículas a dos concentraciones.
testigo (Figura 22). Maqueda (2003) menciona que los metales se transportan a la
parte aérea vía el xilema ya sea como iones hidratados o principalmente como
57
14
12
10
Número de Vasos
8 de Xilema a23 días
6
Número de Vasos
4 de Xilema a 73
días
2
0
0g Ma3gMa6gHe3g He6g Fe3g Fe6g Zn3g Zn6g TI3g TI6g
Figura 22. Área de vasos del xilema del tallo del maíz a 23 y 73 días de crecimiento
acondicionado con cinco nanopartículas a dos concentraciones.
58
a b c
d e f
0g 766.43 5 2220.45 8
Ma3g 643.74 3 2653.47 6
Ma6g 866.56 6 2931.75 9
He3g 745.64 6 1170.07 8
He6g 823.46 4 776.13 10
Fe3g 935.48 4 3250.83 8
Fe6g 611.34 4 2889 9
Zn3g 648.3 5 3742.81 7
Zn6g 755.42 3 3062.08 10
TI3g 469.07 3 2718.76 10
TI6g 468.21 4 3078.78 12
0g: Testigo, Ma: Magnetita, He: Hematita, Fe: Ferrihidrita, Zn: Óxido de Zinc Ti: Dióxido de Titanio. 6g: 6 gr/l, 3g: 3 gr/L
59
a b c
d e f
Micromorfología en Frijol
área del has vascular, el área de vasos de xilema, y el ancho de la epidermis. Faiyue
et al. (2010), mencionan que la formación de las raíces secundarias puede permitir el
g/l aumenta el área del haz vascular en un 320.50% más comparado con el testigo. A
73 días el frijol sigue aumentando su área del haz vascular con la nanopartícula de
60
ferrihidrita a concentración de 6 g/l superando al testigo en un 258.19 % (figura 25). La
exodermis evita el flujo apoplástico de solutos y agua al cilindro central. Sin embargo
ser conducidas a la planta a través del xilema. Resultados muestran que es posible
crear y medir presiones negativas en el xilema de raíces cortadas con la ayuda de una
sonda de presión de la raíz. Sin embargo, sólo las presiones de hasta - 0,3 MPa podría
350000
300000
250000
Área del haz
200000 vascular a 23
días
150000
Área del haz
100000
vascular a 73
50000 días
0
Testigo Ma3g Ma6g He3g He6g Fe3g Fe6g
0g
Figura 25. Área del haz vascular de raíz de frijol a 23 y 73 días de crecimiento
acondicionado con tres nanopartículas a dos concentraciones.
61
9704' y evaluadas ocho días después de realizar la injertación por el método de
3500
3000
2500
2000
Área de vasos a
1500
23 días
1000
Área de vasos a
500 73 días
0
Testigo Ma3g Ma6g He3g He6g Fe3g Fe6g
0g
Figura 26. Área de vasos del xilema de raíz del frijol a 23 y 73 días de crecimiento
acondicionado con tres nanopartículas a dos concentraciones.
11.06 % (Figura 27). Las nanopartículas estaban presentes en la savia del xilema
62
3000
2500
2000
0
Testigo Ma3g Ma6g He3g He6g Fe3g Fe6g
0g
Figura 27. Área de vasos del xilema de tallo del frijol a 23 y 73 días de crecimiento
acondicionado con tres nanopartículas a dos concentraciones.
0g: Testigo, Ma: Magnetita, He: Hematita, Fe: Ferrihidrita. 6g: 6 gr/l, 3g: 3 gr/L
63
a b c
d e f
64
a b c
d e f
65
CONCLUSIONES
en cuanto al área del haz vascular, área de vasos de xilema y el número de vasos los
66
LITERATURA CITADA
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