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    Bacillus Cereus A PARTIR DE ALIMENTOS

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    Carlos Andres Henao Vega
    El documento describe un protocolo para aislar e identificar Bacillus cereus a partir de muestras alimentarias. El procedimiento incluye aislamiento de colonias en placas de agar Mossel y agar selectivo para B. cereus, seguido de pruebas bioquímicas como tinción de Gram, catalasa y oxidasa para confirmar la identificación de colonias como B. cereus. Las pruebas bioquímicas adicionales incluyen crecimiento en anaerobiosis, Voges Proskauer, nitratos y movilidad.

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    Bacillus Cereus A PARTIR DE ALIMENTOS

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    Carlos Andres Henao Vega
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    El documento describe un protocolo para aislar e identificar Bacillus cereus a partir de muestras alimentarias. El procedimiento incluye aislamiento de colonias en placas de agar Mossel y agar selectivo para B. cereus, seguido de pruebas bioquímicas como tinción de Gram, catalasa y oxidasa para confirmar la identificación de colonias como B. cereus. Las pruebas bioquímicas adicionales incluyen crecimiento en anaerobiosis, Voges Proskauer, nitratos y movilidad.

    Descripción original:

    Bacillus cereus

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    Bacillus cereus A PARTIR DE ALIMENTOS

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    Bacillus Cereus A PARTIR DE ALIMENTOS

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    El documento describe un protocolo para aislar e identificar Bacillus cereus a partir de muestras alimentarias. El procedimiento incluye aislamiento de colonias en placas de agar Mossel y agar selectivo para B. cereus, seguido de pruebas bioquímicas como tinción de Gram, catalasa y oxidasa para confirmar la identificación de colonias como B. cereus. Las pruebas bioquímicas adicionales incluyen crecimiento en anaerobiosis, Voges Proskauer, nitratos y movilidad.

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    AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE Bacillus cereus A PARTIR DE ALIMENTOS

    1. OBJETIVOS

    - Identificar el protocolo de aislamiento de Bacillus cereus a partir de muestras de


    alimentos.
    - Realizar la identificación bioquímica tradicional de cepas de Bacillus cereus.

    2. PROCEDIMIENTO:

    2.1. PROTOCOLO DE AISLAMIENTO EN PLACA:

    - A partir de la muestra tomar, en forma aséptica, 10 g y homogenizar en 90 mL de agua


    peptonada 0,1% (dilución 10-1). Preparar diluciones 10-2 y 10-3 tomando 1 mL de la
    dilución respectiva en 9 mL de agua peptonada 0,1%.
    - Depositar, a partir de la serie de diluciones decimales, 0,1 mL de las diluciones 10 -2 y
    10-1 en la superficie bien seca de placas con Agar Mossel.
    - Diseminar el inóculo en asa de vidrio. Dejar secar durante 15 minutos las placas.
    Incubar a 37°C / 24-48 horas.
    - Repetir los dos pasos anteriores empleando el agar selectivo para B.cereus.
    - Analizar la presencia de colonias típicas en Agar Mossel: Aparecen sobre un fondo
    rosado, rodeadas de un halo de precipitación blanco denso. Por ser manitol negativo,
    este microorganismo no hace virar hacia amarillo el indicador de pH, Rojo de fenol. La
    incorporación al medio de emulsión de yema de huevo sirve para detectar la lecitinasa.
    Esta enzima degrada la lecitina de la yema de huevo y hace que se acumulen los
    productos insolubles de la degradación alrededor de las colonias B.cereus.
    - Analizar la presencia de colonias típicas en el agar selectivo B.cereus: En este medio
    de cultivo, la adición de piruvato de sodio y emulsión de yema de huevo mejora el
    aislamiento y esporulación de esta bacteria. Para verificar la utilización del manitol, se
    usa un indicador de pH, azul de bromotimol; Este medio es selectivo, por la presencia
    de Polimixina B; Las colonias típicas de B. cereus son filamentosas de
    aproximadamente 5 mm de diámetro, azul turquesa, rodeadas por un precipitado de
    hidrólisis de yema de huevo. Otros microorganismos que crecen bien en el medio son:
    Staphylococcus aureus, Serratia marcescens y Proteus vulgaris, los cuales se
    diferencian de B. cereus por la forma de la colonia, el color, y porque producen una
    reacción de aclaramiento sobre la yema de huevo, a diferencia del precipitado que
    produce B. cereus.
    - Transferir las colonias típicas aisladas en agar nutritivo, para hacer su confirmación.
    Incubar a 37°C durante 24 horas.
    - Realizar las pruebas de tinción de Gram, oxidasa y catalasa.
    - Confirmar las colonias que sean bacilos Gram positivos esporulados o no, oxidasa
    negativas y catalasa positivas. Realizar estas pruebas, además, con la cepa control
    positivo crecida en Agar Nutritivo.

    2.2. PROTOCOLO IDENTIFICACIÓN BIOQUIMICA TRADICIONAL:

    - Crecimiento en anaerobiosis: Inocular con asa recta tubos con agar nutritivo. Cubrir
    con parafina estéril e incubar a 37°C durante 7 días, con lectura diaria. El crecimiento a
    lo largo de la línea de siembra, indica la capacidad de la bacteria para crecer en
    anaerobiosis.
    - Prueba de Voges Proskauer: Inocular el caldo e incubar a 37°C durante 24 horas.
    Revelar mediante la adición de α-naftol. La reacción positiva se manifiesta por un color
    rojo pasados 10 minutos. B.cereus es VP (+).
    - Prueba de nitratos: Inocular el caldo e incubar a 37°C / 24 horas. Añadir reactivo de
    Griess. Cuando el nitrato se reduce aparece una coloración anaranjada pasados 10
    minutos. B. cereus reduce nitratos a nitritos.
    - Prueba de movilidad: Inocular, a partir del cultivo en agar nutritivo, por picadura en el
    medio movilidad. Incubar a 37°C / 24 horas. B.cereus es móvil debido a la presencia de
    flagelos perítricos.

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