Bacteriología Informe 3
Bacteriología Informe 3
Bacteriología Informe 3
ESCUELA DE BIOLOGÍA
PRÀCTICA 3
ALUMNOS:
Casas Villalobos Diana Elizabeth
García Damián Javier Aldair
Goicochea Rojas Keysi Yajahira
Terrones Cruzado Deisy Arely
CURSO:
BACTERIOLOGIA
PROFESOR:
Dra. Olga V. Francia Arana
GRUPO PRÁCTICO:
4
CICLO:
2021-I LAMBAYEQUE, 2021
INTRODUCCIÒN
OBJETIVOS
1. Conoce las técnicas de aislamiento in vitro del hábitat de las diferentes especies bacterianas
2. Aplica correctamente las técnicas de aislamiento secundario para obtener un cultivo puro.
3. Aísla e identifica S. aureus de muestras clínicas, haciendo uso correcto de las técnicas de
aislamiento e identificación.
4. Aísla e Identifica la especie M. luteus haciendo uso correcto de las técnicas de aislamiento e
identificación.
MATERIALES
METODOLOGÍA
• Incubar las placas invertidas a temperatura de 37 O C por 24 horas. Las placas de agar sangre deben
incubarse dentro de la Jarra de Brewer.
• Observar las colonias características y anotar:
• Para aislar M. luteus, se requiere una muestra de tierra. Se prepara una suspensión con agua destilada
estéril o SSF. Se toma una asada de la muestra diluida y se procede a sembrar en la placa con agar
nutritivo. Incubar a 35°C por 24 horas y luego a temperatura ambiente por 24 horas más, en ambiente
aeróbico. Observar colonias pigmentadas características y anotar su forma, elevación, bordes, aspecto,
consistencia, etc.
• Seleccionar las colonias características y transferirlas a tubos o viales con agar cepa o A.N Sembrar por
estría en la superficie inclinada del medio para obtener un cultivo puro y conservar las cepas en
refrigeración.
Identificación
• Prueba de hidrólisis de la gelatina
Esta prueba es para ambas cepas. Sembrar la cepa en medio gelatina. Incubar a 37 O C por 48 horas y
en refrigeración por 3 horas. Observar la reacción. Si actúa la enzima gelatinasa, se observa licuefacción
de la gelatina, el medio no solidifica a temperatura de refrigeración. La ausencia de enzima se pone de
manifiesto porque la gelatina solidifica a temperatura de refrigeración.
Esta prueba es para ambas cepas Sembrar la cepa en un tubo con caldo nitrato. Incubar a 35 O C
durante 24 horas en jarra de Brewer. Evaluar crecimiento y adicionar los reactivos A y B para nitratos.
Observar el cambio de color a rojo intenso si la prueba es positiva
Toma de Muestra:
Con hisopo estéril tomar muestra de secreción nasofaríngea. La muestra de leche, recogerla en frasco estéril
con tapa de rosca y los productos lácteos sólidos recogerlos en frascos estériles o bolsas de plástico con cierre
hermético.
Aislamiento Primario
• Con el hisopo estéril embebido de la muestra de secreción nasofaríngea y leche, sembrar directamente
en la superficie de los medios sólidos agar sangre y agar Packer, agotando la muestra en un extremo de
la placa y continuando la siembra con el asa bacteriológica (técnica de agotamiento y estría).
• Las placas se colocan invertidas dentro de la Jarra de Brewer y se incuban a 37C durante 24 horas en la
estufa bacteriológica.
• Transcurrido el tiempo de incubación, se evalúa el crecimiento bacteriano y se observa la morfología
de las colonias (forma, tamaño, color, aspecto, borde, constancia) de cada placa y la actividad
hemolítica.
Imagen 7: Streptococcus pyogenes (Microbiología clínica, 2018) Imagen 6: Lactococcus lactis (ATLAS, 2011)
Imagen 8: Enterococcus faecalis
(Aspiroz & Díez Manglano, 2013)
• Realizar la tinción de Gram de las colonias características para observar la morfología de las células y su
reacción tintorial.
• Transferir 3 a 5 colonias características a tubos con caldo extracto de levadura triptosa. Incubar a 37C
por 24 horas. Sembrar una asada del cultivo líquido característico en tubos o viales con agar tripticasa
soya para obtener el cultivo puro.
• Del cultivo puro, realizar tinción de Gram, para observar las características morfológicas de las células y
su reacción tintorial.
• Conservar las cepas.
Identificación
• Prueba de catalasa.
• Crecimiento a 10C y 45C. Se realiza esta prueba en caldo extracto de levadura triptosa a pH 7. Si hay
crecimiento se observa turbidez del caldo después del período de incubación.
• Crecimiento a pH 9,6. Si hay crecimiento se observa turbidez del caldo después del período de
incubación.
• Crecimiento en bilis al 40%.
• Prueba de resistencia térmica a 63C por 30 minutos.
• Fermentación de inulina, trehalosa, sorbitol.
• Prueba de Hidrólisis de la arginina e hipurato de sodio.
• Prueba de Voges Proskawer. Comparar resultados con las tablas de identificación (Manual
Determinativo de Bergey) Los resultados de las pruebas para identificar las especies deben compararse
con las tablas de identificación (Manual Determinativo de Bergey).
RESULTADOS:
Staphylococcus aureus
Observamos la formación de un
coagulo de fibrina en el primer tubo,
lo que indica que la enzima
coagulasa actúa sobre el fibrinógeno
y lo ha convertido en fibrina.
Micrococcus luteus
Se observa el burbujeo
generalmente intenso, entonces
significa que hay producción de
oxígeno por lo tanto se entiende
que hay presencia de la enzima
catalasa.
Imagen 16: Prueba de Catalasa en M. luteus (Gil, 2019)
Tabla 1: Tabla de identificación de S. aureus y M. luteus
Interpretación: Ambas bacterias son GRAM + y producen un aenzima catalas que se identifica por el
burbujeo, solo S. aureus es positivo para coagulasa, ambas bacterias fermentan el manitol y contienen
gelatinasas, S. aureus se diferencia también porque puede reducir nitratos a nitritos, mientras que M. luteus
sale negativo en estas pruebas, en el caso de Óxido Fermentación, S. aureus es una bacteria aeróbica y
oxida la glucosa.
Tabla 2: Tabla de identificación de S. pyogenes, E. faecales y L. lactis
Interpretación: Las 3 bacterias son GRAM +, L. lactis es la única que presenta catalasa, generando así un
burbujeo, las 3 son resistentes a un pH de 7, la única que puede resistir un ambiente altamente salino es E.
faecalis, S. aureus y E. faecalis pueden resistir un pH mayor a 9, las 3 bacterias soportan una temperatura de
10°C, L. lactis solo puede soportar hasta 30°C, y ninguna soporta temperaturas mayores a 60°C, todas dan
positivo frente al caldo Arginina, L. lactis y E. faecalis dieron positivo en la prueba de Voges Proskauer, y
solo E. faecalis es resistente a la bilis.
CONCLUSIONES:
Los medios de cultivo específicos para cada especie le otorgan un medio enriquecido para
desarrollarse y formar colonias, favoreciendo así su estudio e identificación.
REFERENCIAS:
Casillas Vega, N. (s.f.). Infecciones del tracto urinario. Obtenido de Acces medcina:
https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?bookid=2973§ionid=249056517
https://cepariounicach.wordpress.com/2015/01/20/streptococcus-pyogenes-sp04/
https://seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/seimc-
procedimientomicrobiologia37.pdf
sal-y-manitol/
https://www.lifeder.com/prueba-de-la-coagulasa/
GLI. (2016). Guía clínica del Xpert MTB/RIF: paho.org. Obtenido de www. paho.org:
https://paho.org/hq/dmdocuments/2016/2016-cha-genexpert-mod-11.pdf
González, M., Orden, B. (2009). Pruebas de detección rápida para el diagnóstico. Infecciones
https://fapap.es/files/639-582-RUTA/f5ceda99e806542edbac6accbe38e1b8.pdf
http://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/52389/Documento_completo.pdf?sequence
=1&isAllowed=y
INNST. (18 de Diciembre de 2018). Streptococcus spp. Instituto nacional de seguridad y salud en el
+A%C3%B1o+2019.pdf/0d0f069d-e46c-4596-a5ab-
79a4221bcb30?version=1.0&t=1601421347597#:~:text=Se%20trata%20de%20bacterias%2
0Gram,por%20m%C3%A9todos%20convencionales%20es%20dif%C3%ADcil.
https://www.blog.formacionalcala.es/2018/11/15/diagnostico-microbiologico-en-la-
deteccion-identificacion-de-staphylococcus/
https://www.medigraphic.com/pdfs/revbio/bio-2014/bio143d.pdf
CUESTIONARIO
1. ¿Cree usted que las pruebas realizadas para identificar S. aureus son suficientes? ¿Por qué?
No, existen pruebas mucho más rapidas y pueden recuperan celulas que sufrieron daños subletales
o para identificar estafilococis pontencialmente patogenos como lo son el Agar estafilococos N°
110. Que es un medio selectivo para aislar estafilococos patógenos a partir de muestras clínicas y
no clínicas, basado en la fermentación de manitol, la formación de pigmento y la actividad
gelatinasa. Este medio también se utiliza para el aislamiento de estafilococos que contaminan una
amplia variedad de alimentos y producen una intoxicación alimentaria, otra prueba para identificar
es el Agar DNAsa. Es utilizado para identificar estafilococos potencialmente patógenos;
manifiesta la actividad de la desoxirribonucleasa, la cual es indicadora de su patogenicidad
(Socorro et al 2014).
3. ¿Por qué vira el indicador rojo de fenol del caldo manitol cuando desarrolla S. aureus en
anaerobiosis? Fundamente su respuesta bioquímicamente.
Debido a la presencia del carbohidrato manitol y al indicador de pH rojo de fenol. A partir de este,
las bacterias capaces de fermentar el manitol producen ácidos, acidificando el medio, tornándose
las colonias y el medio de color amarillo.
Este fenómeno se basa en que el metabolismo de la fermentación produce ácidos medianamente
fuertes como el ácido acético, ácido fórmico, ácido láctico, ácido málico, entre otros, esto depende
del tipo de carbohidrato que se ponga en el caldo. El rango de ph del indicador rojo de fenol es: 6.8
- 8.4, esto nos dice que a Ph de 6.8 o menos el medio esta ácido y el indicador cambia a color
amarillo y si el ph es de 8.4 o más el medio esta básico y el color se mantiene naranja-rojizo (Gil,
2019).
Se pueden utilizar:
• Agar estafilococos N° 110. Porque es un medio selectivo para aislar estafilococos patógenos a partir
de muestras clínicas y no clínicas, basado en la fermentación de manitol, la formación de pigmento
y la actividad gelatinasa. Este medio también se utiliza para el aislamiento de estafilococos que
contaminan una amplia variedad de alimentos y producen una intoxicación alimentaria. Los SCP
patógenos crecen en altas concentraciones de NaCl y forman colonias amarillas y doradas (Muñoz,
2018).
✓ Enterococcus, en agar sangre, se observan colonias pequeñas, lisas de borde uniforme, de color
crema o blanco y en agar telurito, se observan colonias de color negro. (ATLAS, 2011)