Investigación Documental RACEMI

Tipos de métodos ópticos para
análisis cuantitativo,
fundamentos de
espectrofotometría y leyes de
absorción.
Escuela: Centro de Bachillerato Tecnológico Industrial y de Servicios No. 085
(CBTIS 85)
Lugar: Coatzacoalcos, Veracruz
Número y nombre del submódulo: No. 2 Realiza análisis cuantitativos empleando
métodos instrumentales (RACEMI).
Profesor: Miguel Ángel Viera Coello
Nombre del alumno: Díaz Mora Viridiana del Carmen
Número de equipo: 01
Grado y grupo: 4ALM
Especialidad: Técnico Laboratorista Químico
Competencias profesionales: No. 3 Cuantifica sustancias químicas empleando
métodos ópticos siguiendo instrucciones y procedimientos de manera reflexiva para
contrastar los resultados obtenidos en una investigación con los del experimento
realizado.
Tema: Investigación Documental
Periodo semestral: Febrero-julio del 2022
Fecha de entrega: 10/02/2022

Tipos de métodos ópticos para análisis cuantitativo
Los métodos ópticos de análisis cubren un amplio campo de aplicación,
encontrándose todos aquellos que implican la medida de la radiación
electromagnética emitida por la materia o que interacciona con ella.
Se clasifica en:
Espectroscópicos
Métodos espectroscópicos: Aquellos en los que existe intercambio de energía entre
la radiación electromagnética y la materia. Se basan en procesos de absorción y
emisión.
No espectroscópicos.
Aquellos en los que no tiene lugar intercambio de energía como consecuencia de la
interacción materia–radiación electromagnética. Lo que realmente ocurre son
cambios en la dirección o en las propiedades físicas de la radiación
electromagnética. Se basan en mecanismos de interacción de la REM y la
sustancia, como son la dispersión, difracción, refracción y polarización.
Métodos analíticos ópticos más utilizados:
Métodos espectroscópicos:
Espectrometría de absorción en el infrarrojo (IR)
Se trata de una de las mejores herramientas para resolver problemas de análisis
estructural y de identificación molecular.
La espectrometría infrarroja se basa en el hecho de que los enlaces químicos de las
sustancias tienen frecuencias de vibración específicas, que corresponden a los
niveles de energía de la molécula. Estas frecuencias dependen de la forma de la
superficie de energía potencial de la molécula, la geometría molecular, las masas
atómicas y, posiblemente, el acoplamiento vibracional.
Con transformada de Fourier (IR-FT)
En un instrumento FT-IR generalmente se incluye un interferómetro que permite
trabajar con un espectro en el dominio del tiempo para posteriormente mediante un
algoritmo matemático (Transformación de Fourier) transformarlo en un espectro en
el dominio de la frecuencia que se puede interpretar más fácilmente.
Reflectancia (IR-R)
La espectroscopia de IR de reflectancia también se utiliza en la identificación.
Espectrofotometría de absorción en UV-Visible

La utilización del espectro de absorción en las regiones UV y visible puede ser de
utilidad para la detección de ciertos grupos funcionales, aunque siempre deben
confirmarse los datos en combinación con los obtenidos a partir de espectros en el
IR, de resonancia nuclear o cualquier otra información analítica de la que se
disponga.
Métodos no espectroscópicos:
Refractometría
La refractometría se basa en la medición del índice de refracción de sustancias
líquidas o sólidas, definiéndose éste como el cociente entre el seno del ángulo de
incidencia (sen i) y el seno del ángulo de refracción (sen r) de la luz monocromática,
al pasar de un medio menos denso generalmente aire a un medio más denso.
Polarimetría y dicromismo circular
La polarimetría nos permite medir el cambio que sufre el plano de luz polarizada
cuando atraviesa un medio transparente formado por sustancias ópticamente
activas.
Fundamentos de espectrofotometría y leyes de absorción
Fundamentos de espectrofotometría
La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados, y se basa en
la relación que existe entre la absorción de luz por parte de un compuesto y su
concentración. El fundamento de la espectroscopia se debe a la capacidad de las
moléculas para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro
UV-visible.
Mediciones de transmitancia y absorbancia.
Las mediciones de absorbancia o transmitancia se hacen por comparación entre la
muestra problema y un estándar arbitrario o referencia. Como la referencia debe
poseer un porcentaje de transmitancia de 100%, esta es llamada referencia de
100%., o una absorbancia de cero.
Selección de longitud de onda de trabajo.
La longitud de onda de trabajo corresponde, generalmente, a la longitud de onda en
la cual la absorbancia del analito (sustancia a analizar) es máxima, y recibe la
denominación de Lambda máximo (λmax). Para seleccionar el λmax., se hace un
espectro de absorción o curva espectral, y que consiste en una gráfica de la
absorbancia de una solución de la sustancia absorbente de concentración
adecuada, medida a distintas longitudes de onda y en ella se determina el λmax.
Las mediciones de absorbancia se hacen en la zona de longitudes de onda donde
se espera que absorba la sustancia problema.

Curva de Calibración.
Esta curva de calibración es una gráfica que relaciona la concentración de al menos
cinco soluciones de estándar de concentraciones conocidas, con la absorbancia de
cada uno de ellos a la longitud de onda máxima (λ max).
Una vez obtenida la gráfica se determina la función matemática que presenta dicha
recta a través del tratamiento estadístico de regresión de los mínimos cuadrados, la
cual relaciona la absorbancia y la concentración de un analito.
Leyes de absorción
El método espectrofotométrico se rige por dos leyes fundamentales: Ley de Lambert
y Ley de Beer.
Ley de Lambert:
Esta ley establece que cuando pasa luz monocromática por un medio homogéneo,
la disminución de la intensidad del haz de luz incidente es proporcional al espesor
del medio, lo que equivale a decir que la intensidad de la luz transmitida disminuye
exponencialmente al aumentar aritméticamente el espesor del medio absorbente.
Ley de Beer:
La intensidad de un haz de luz monocromática disminuye exponencialmente al
aumentar aritméticamente la concentración de la sustancia absorbente, cuando este
haz pasa a través de un medio homogéneo.
El aparato detecta la cantidad de luz transmitida o absorbida a través de la solución
en la celda y la compara con la que se transmite o absorbe a través de una solución
de referencia denominada “blanco”.
Ambas leyes se combinan en una sola, generando la Ley de Lambert-Beer
Los términos absorbancia y transmitancia son definidos a continuación:
Transmitancia (T):
Es la razón entre la luz monocromática transmitida (P) por una muestra y la energía
o luz incidente (Po) sobre ella. Tanto la energía radiante incidente como la
transmitida deben ser medidas a la misma longitud de onda.
Absorbancia(A):
Se define como la cantidad de energía radiante absorbida por una sustancia pura o
en solución. Matemáticamente, corresponde al logaritmo negativo de la
transmitancia.T, transmitancia expresada como fracción decimal %T, transmitancia
expresada como porcentaje.

Referencias bibliográficas:
 Quirós Viñuales S., Antunes Martins S. (2017) Métodos analíticos aplicados
a la identificación de productos de la real farmacopea española. Consultado
el 11 de febrero del 2022, facultad de farmacia universidad complutense.
Recuperado de:
http://147.96.70.122/Web/TFG/TFG/Memoria/SOFIA%20ANTUNES%20MA
RTINS.pdf
 Díaz A., Ruiz J., Reyes E., Cejudo A., Novo J., Peinado J., Valdés F.,
Fiñana I. (s.f.) 8. Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación
colorimétrica de biomoléculas. Consultado el 11 de febrero del 2022,
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular. Recuperado de:
https://www.uco.es/dptos/bioquimicabiolmol/pdfs/08_ESPECTROFOTOME
TRIA.pdf
 s. n. (s. f.) introducción teórica fundamentos de espectrofotometría.
Consultado el 11 de febrero del 2022, curso de odontología. Recuperado
de:
https://www.ucursos.cl/odontologia/2010/2/OD0903/1/material_docente/baja
r?id=566977

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Lugar: Coatzacoalcos, Veracruz

Número y nombre del submódulo: No. 2 Realiza análisis cuantitativos empleando

métodos instrumentales (RACEMI).

Profesor: Miguel Ángel Viera Coello

Nombre del alumno: Díaz Mora Viridiana del Carmen

Grado y grupo: 4ALM

Especialidad: Técnico Laboratorista Químico

Competencias profesionales: No. 3 Cuantifica sustancias químicas empleando

métodos ópticos siguiendo instrucciones y procedimientos de manera reflexiva para

Tema: Investigación Documental

Periodo semestral: Febrero-julio del 2022

Fecha de entrega: 10/02/2022

Los métodos ópticos de análisis cubren un amplio campo de aplicación,

encontrándose todos aquellos que implican la medida de la radiación

electromagnética emitida por la materia o que interacciona con ella.

Métodos espectroscópicos: Aquellos en los que existe intercambio de energía entre

la radiación electromagnética y la materia. Se basan en procesos de absorción y

Aquellos en los que no tiene lugar intercambio de energía como consecuencia de la

interacción materia–radiación electromagnética. Lo que realmente ocurre son

cambios en la dirección o en las propiedades físicas de la radiación

electromagnética. Se basan en mecanismos de interacción de la REM y la

sustancia, como son la dispersión, difracción, refracción y polarización.

Métodos analíticos ópticos más utilizados:

Se trata de una de las mejores herramientas para resolver problemas de análisis

estructural y de identificación molecular.

La espectrometría infrarroja se basa en el hecho de que los enlaces químicos de las

sustancias tienen frecuencias de vibración específicas, que corresponden a los

niveles de energía de la molécula. Estas frecuencias dependen de la forma de la

superficie de energía potencial de la molécula, la geometría molecular, las masas

atómicas y, posiblemente, el acoplamiento vibracional.

Con transformada de Fourier (IR-FT)

En un instrumento FT-IR generalmente se incluye un interferómetro que permite

trabajar con un espectro en el dominio del tiempo para posteriormente mediante un

algoritmo matemático (Transformación de Fourier) transformarlo en un espectro en

el dominio de la frecuencia que se puede interpretar más fácilmente.

La espectroscopia de IR de reflectancia también se utiliza en la identificación.

Espectrofotometría de absorción en UV-Visible

utilidad para la detección de ciertos grupos funcionales, aunque siempre deben

confirmarse los datos en combinación con los obtenidos a partir de espectros en el

IR, de resonancia nuclear o cualquier otra información analítica de la que se

La refractometría se basa en la medición del índice de refracción de sustancias

incidencia (sen i) y el seno del ángulo de refracción (sen r) de la luz monocromática,

al pasar de un medio menos denso generalmente aire a un medio más denso.

Polarimetría y dicromismo circular

cuando atraviesa un medio transparente formado por sustancias ópticamente

Fundamentos de espectrofotometría y leyes de absorción

la relación que existe entre la absorción de luz por parte de un compuesto y su

concentración. El fundamento de la espectroscopia se debe a la capacidad de las

Mediciones de transmitancia y absorbancia.

Las mediciones de absorbancia o transmitancia se hacen por comparación entre la

muestra problema y un estándar arbitrario o referencia. Como la referencia debe

poseer un porcentaje de transmitancia de 100%, esta es llamada referencia de

100%., o una absorbancia de cero.

Selección de longitud de onda de trabajo.

La longitud de onda de trabajo corresponde, generalmente, a la longitud de onda en

la cual la absorbancia del analito (sustancia a analizar) es máxima, y recibe la

denominación de Lambda máximo (λmax). Para seleccionar el λmax., se hace un

espectro de absorción o curva espectral, y que consiste en una gráfica de la