El documento describe diferentes tipos de colorantes utilizados en histología y microbiología. Explica que un colorante es una sustancia que puede dar color a células y tejidos. Los colorantes se dividen en naturales y artificiales. También describe varios colorantes comunes como azul de metileno, azul de Coomassie, hematoxilina y eosina, y explica sus usos para teñir diferentes partes de las células y revelar estructuras. Finalmente, explica el proceso de tinción hematoxilina-eosina, uno de los más utilizados
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El documento describe diferentes tipos de colorantes utilizados en histología y microbiología. Explica que un colorante es una sustancia que puede dar color a células y tejidos. Los colorantes se dividen en naturales y artificiales. También describe varios colorantes comunes como azul de metileno, azul de Coomassie, hematoxilina y eosina, y explica sus usos para teñir diferentes partes de las células y revelar estructuras. Finalmente, explica el proceso de tinción hematoxilina-eosina, uno de los más utilizados
El documento describe diferentes tipos de colorantes utilizados en histología y microbiología. Explica que un colorante es una sustancia que puede dar color a células y tejidos. Los colorantes se dividen en naturales y artificiales. También describe varios colorantes comunes como azul de metileno, azul de Coomassie, hematoxilina y eosina, y explica sus usos para teñir diferentes partes de las células y revelar estructuras. Finalmente, explica el proceso de tinción hematoxilina-eosina, uno de los más utilizados
El documento describe diferentes tipos de colorantes utilizados en histología y microbiología. Explica que un colorante es una sustancia que puede dar color a células y tejidos. Los colorantes se dividen en naturales y artificiales. También describe varios colorantes comunes como azul de metileno, azul de Coomassie, hematoxilina y eosina, y explica sus usos para teñir diferentes partes de las células y revelar estructuras. Finalmente, explica el proceso de tinción hematoxilina-eosina, uno de los más utilizados
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EL MICROSCOPIO
Autor: Carlos Giménez, Universidad José Antonio Páez, Valencia- Venezuela
@gmail.com
RESUMEN ultravioleta o visible; dicho de otra forma, es
la capacidad que tiene la molécula para que Un colorante se define como una sus electrones absorban energía o luz visible, sustancia capaz de dar color a células, tejidos, se exciten y emitan diversos colores de fibras, etcétera. De acuerdo con su origen, se acuerdo con la longitud de emitida como pueden dividir en colorantes naturales, los resultado del cambio en el nivel energético. cuales son extraídos de plantas o animales, y Cabe mencionar que el presente artículo colorantes artificiales, que son aquellos de conoceremos los diferentes colorantes minerales procesados y manipulados en el utilizados en la histología y microbiología laboratorio. Los colorantes tienen las desde los más comunes a los más específicos. siguientes funciones: Permiten hacer visibles Las tinciones se pueden clasificar como a los objetos microscópicos y transparentes, simples cuando toda la muestra se tiñe del Revelan su forma y tamaño, Muestran la mismo color y se utiliza un sólo colorante presencia de estructuras internas y externas y (azul de lactofenol o tinta china); tinción Producen reacciones químicas específicas. Las diferencial, cuando se visualiza más de un tinciones en microbiología son las primeras color porque se utiliza más de un colorante herramientas que se utilizan en el laboratorio (Gram o Ziehl-Neelsen); tinción específica, para el diagnóstico de las enfermedades cuando se utilizan anticuerpos marcados con infecciosas. Desde hace más de un siglo han una molécula fluorescente para identificar una ayudado a resolver problemas de etiología estructura celular en particular microbiana. Hay una gran variedad de (inmunocitoquímico). tinciones, que se han ido desarrollando para la detección de los diferentes agentes infecciosos 2. COLORANTES HISTOLÓGICOS en los que se incluyen bacterias, parásitos y MÁS COMUNES hongos. Palabras Claves: Microscopio, Células, Bacterias, Ocular y Reducción. Los diferentes colorantes reaccionan o se concentran en diferentes partes de las 1. INTRODUCCIÓN células o tejidos, y estas propiedades son utilizadas como una ventaja para revelar Un colorante se define como una partes o áreas específicas. Algunos de los sustancia capaz de dar color a células, tejidos, colorantes biológicos más comunes se listan fibras, etcétera. De acuerdo con su origen, se más abajo. A menos que se indique lo pueden dividir en: colorantes naturales, los contrario la mayoría de estos colorantes se cuales son extraídos de plantas o animales, y utilizan con células y tejidos fijados. Las colorantes artificiales, que son aquellos de tinciones vitales (que pueden ser utilizadas minerales procesados y manipulados en el con organismos vivos) se encuentran laboratorio. Químicamente, el colorante está destacadas. constituido de un componente cromóforo y un auxócromo. El cromóforo es todo grupo Azul brillante de Coomassie: Coomassie aislado, covalente e insaturado, que tiene una blue (también conocido como azul absorción característica en la región brillante) es un colorante que tiñe en forma no específica a todas las proteínas aparecen con la distintiva fluorescencia con un fuerte color azul. Se utiliza rojo-naranja. frecuentemente para teñir las corridas de proteínas en las electroforesis en gel. Carmín: El carmín es un colorante de un intenso color rojo que puede ser utilizado Azul de metileno: Azul de metileno se como sal de litio para teñir glicógeno, utiliza para teñir células animales, para mientras que las sales de alumbre-carmín hacer más visibles sus núcleos. Es también son colorantes que se adhieren al núcleo. utilizado para teñir los extendidos de Las tinciones con carmín requieren del uso sangre para ser utilizados en citología y de un mordiente, que usualmente es como colorante vital en el recuento de aluminio o alumbre. reticulocitos. Cristal violeta: El cristal violeta, al ser Azul Nilo: El Nile blue (o Nile blue A), es combinado con un mordiente adecuado, decir azul Nilo, tiñe a los núcleos de color tiñe las paredes celulares de color púrpura. azul. También puede ser utilizado para El cristal violeta es un componente teñir células vivas. importante en la coloración de Gram.
Bismarck Brown: Bismarck brown, DAPI: es un colorante nuclear (tiñe el
Marrón Bismarck, (también conocido núcleo) fluorescente, se excita con luz como Bismarck brown Y o Manchester ultravioleta para producir una fuerte brown) le imparte un color amarillo a las fluorescencia azul cuando se encuentra mucinas ácidas. Se puede utilizar con unido al ADN. El DAPI se une a las células vivas. regiones de alta repetición A=T en los cromosomas. Además, no es visible Bromuro de etidio: El bromuro de etidio cuando se utiliza con un microscopio de (BE) se intercala en el ADN y le otorga un transmisión corriente. Puede ser utilizado color rojo naranja fluorescente. A pesar de en células vivas o fijadas. La técnica de que no es capaz de teñir células vivas ya tinción con DAPI es especialmente que no atraviesa las membranas intactas, adecuada para el recuento celular. puede ser utilizado para identificar células que se encuentran en las etapas finales de Eosina: La eosina se utiliza más la apoptosis, ya que tales células poseen frecuentemente como contracoloración de unas membranas mucho más permeables. la hematoxilina, impartiendo un color que Por el mismo motivo, el bromuro de etidio va del rosado al rojo al material es utilizado como un marcador de citoplasmático, membrana celular, y apoptosis en poblaciones celulares y para algunas estructuras extracelulares. localizar las bandas de ADN en una Además, imparte un fuerte color rojo a los corrida en electroforesis en gel. Este eritrocitos. La eosina puede ser utilizada colorante puede ser utilizado en también en algunas variantes de la combinación con naranja de acridina (NA) coloración de Gram, y en muchos otros en el conteo de células viables. Esta protocolos de tinción. De hecho, existen tinción combinada BE/NA les otorga a las dos compuestos muy estrechamente células vivas un color verde fluorescente relacionados (aunque no iguales) mientras que las células apoptóticas conocidos como eosina. El más frecuentemente utilizado es la eosina Y (también conocida como eosina osmificación que ha de llevarse a cabo amarillenta) ya que posee una tonalidad previamente a la inclusión acarrea el amarillenta muy suave. El otro compuesto oscurecimiento del tejido, con lo que conocido como eosina es la eosina B, dificulta aún más la orientación de la también conocida como eosina azulada o muestra. Por ello es frecuente hacer rojo imperial, la cual posee una suave secciones de 0,5 a 1 µm de grosor con el tonalidad azul. Los dos colorantes son ultramicrotomo, denominadas secciones intercambiables, y la utilización de uno u semifinas, para orientarnos en la muestra y otro es más una cuestión de preferencia y seleccionar la zona a partir de la cual tradición. haremos las secciones ultrafinas. Los semifinos suelen tener áreas más grandes 3. HEMATOXILINA-EOSINA que las que posteriormente vamos a usar para la obtención de las secciones Una de las tinciones más comúnmente ultrafinas. El colorante usado para teñir usada en histología es la hematoxilina- secciones semifinas es normalmente el eosina sobre cortes de parafina. Como azul de toluidina, el cual puede infiltrase vemos se usa un colorante básico en la resina calentada en una plancha y (hematoxilina) y otro ácido (eosina) para llegar hasta el tejido. teñir de diferente color a las estructuras ácidas y básicas de la célula. Antes de proceder a la tinción, si partimos de cortes de parafina, tenemos que llevar a cabo unos tratamientos previos sobre las secciones como es el desparafinado y la hidratación, puesto que estos colorantes son hidrosolubles. Si partimos de cortes de criostato esto no es necesario.
5. TINCIONES ESPECIALES
El término “tinciones especiales” hace
referencia tradicionalmente a cualquier tinción que no sea una H&E. Abarca una amplia variedad de métodos que pueden utilizarse para visualizar estructuras tisulares particulares, elementos o incluso microorganismos no identificados 4. SEMIFINOS mediante tinción H&E.
Cuando se procesa material para Otros métodos de tinción utilizan
microscopía electrónica es necesario a inmunohistoquímica o hibridación in situ veces hacerse una idea de qué zona del para dirigirse a proteínas específicas o tejido vamos a cortar. Téngase en cuenta secuencias de DNA/RNA. Estos métodos que el área de una sección para observar a veces también se han incluido en la con el microscopio electrónico es muy familia de “tinciones especiales”. Sin pequeña. Además, el proceso de embargo, son bastante diferentes en cuanto al método y la finalidad, y ahora se carinii en muestras de tejido. Tinción separan normalmente en una tercera argéntica GMS modificada (izquierda: categoría conocida como “tinciones Pneumocystis, pulmón) (derecha: avanzadas”. infección por Aspergillus, pulmón). La finalidad de uso de la tinción argéntica Aunque, literalmente, hay cientos de GMS modificada es la observación tinciones especiales para todo tipo de histológica de hongos, la membrana basal fines, solo unos pocos se utilizan con y algunos organismos oportunistas tales regularidad en histología clínica. La como el Pneumocystis carinii en muestras variedad de tinciones también hace que la de tejido. Tinción argéntica GMS tinción especial no esté tan automatizada modificada (izquierda: Pneumocystis, como la tinción H&E. Aunque muchos pulmón) (derecha: infección por laboratorios de gran tamaño utilizan Aspergillus, pulmón). La finalidad de uso instrumentos automatizados para las de la tinción argéntica GMS modificada es tinciones más comunes, siguen teniendo la observación histológica de hongos, la un área para la tinción manual. La membrana basal y algunos organismos complejidad de algunas tinciones también oportunistas tales como el Pneumocystis impide el uso de la automatización. carinii en muestras de tejido.
Tinción tricrómica de Masson (piel).
Esta tinción está indicada en la observación histológica de fibras de tejido conjuntivo de colágeno en muestras de tejido. Se utiliza para ayudar a diferenciar el colágeno y el músculo liso en los tumores y a detectar enfermedades o cambios en el tejido conjuntivo/muscular.
Hierro con azul Prusia de Perls
(hígado). Este colorante se utiliza para detectar e identificar el ión férrico (Fe3+) en preparaciones de tejidos, frotis de sangre o frotis de médula ósea. Habitualmente se encuentran cantidades minúsculas de hierro férrico Tinción argéntica GMS modificada (hemosiderina) en la médula ósea y el (izquierda: Pneumocystis, pulmón) bazo. Las cantidades anómalas de hierro (derecha: infección por Aspergillus, pueden indicar hemocromatosis y pulmón). La finalidad de uso de la tinción hemosiderosis. argéntica GMS modificada es la observación histológica de hongos, la membrana basal y algunos organismos oportunistas tales como el Pneumocystis Sensagent (S/F). Tinción. http://diccionario.sensagent.com/Tinci %C3%B3n/es-es/#Colorantes_histol.C 3.B3gicos_m.C3.A1s_comunes
6. CONCLUSIÓN
Las tinciones en microbiología como en
histología son utilizadas en el laboratorio para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas, así́ como en la identificación de microorganismos habitantes de diferentes ecosistemas. La observación microscópica, puede efectuarse mediante el examen en fresco de una suspensión microbiana, lo que permite visualizar microorganismos vivos y reconocer sus movimientos, apreciar sus distintas formas, tamaño y agrupaciones; También, mediante un extendido o frotis.
En conclusión, con la tinción, es posible
mejorar la definición de grupos de células o de fragmentos de tejido. Esto permite observar reacciones químicas o características morfológicas de tejidos vivos mientras las células cumplen su función natural.
7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
James A. y Geoffrey R. (S/F). Una
introducción a la tinción rutinaria y especial. https://www.leicabiosystems.com/es/k nowledge-pathway/an-introduction-to- routine-and-special-staining/
Megías M, Molist P, Pombal MA. (2019).
Atlas de histología vegetal y animal. Técnicas histológicas. http://mmegias.webs.uvigo.es/6- tecnicas/1-introduccion.php