EL MICROSCOPIO

Autor: Carlos Giménez, Universidad José Antonio Páez, Valencia- Venezuela

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RESUMEN ultravioleta o visible; dicho de otra forma, es

la capacidad que tiene la molécula para que
Un colorante se define como una sus electrones absorban energía o luz visible,
sustancia capaz de dar color a células, tejidos, se exciten y emitan diversos colores de
fibras, etcétera. De acuerdo con su origen, se acuerdo con la longitud de emitida como
pueden dividir en colorantes naturales, los resultado del cambio en el nivel energético.
cuales son extraídos de plantas o animales, y Cabe mencionar que el presente artículo
colorantes artificiales, que son aquellos de conoceremos los diferentes colorantes
minerales procesados y manipulados en el utilizados en la histología y microbiología
laboratorio. Los colorantes tienen las desde los más comunes a los más específicos.
siguientes funciones: Permiten hacer visibles Las tinciones se pueden clasificar como
a los objetos microscópicos y transparentes, simples cuando toda la muestra se tiñe del
Revelan su forma y tamaño, Muestran la mismo color y se utiliza un sólo colorante
presencia de estructuras internas y externas y (azul de lactofenol o tinta china); tinción
Producen reacciones químicas específicas. Las diferencial, cuando se visualiza más de un
tinciones en microbiología son las primeras color porque se utiliza más de un colorante
herramientas que se utilizan en el laboratorio (Gram o Ziehl-Neelsen); tinción específica,
para el diagnóstico de las enfermedades cuando se utilizan anticuerpos marcados con
infecciosas. Desde hace más de un siglo han una molécula fluorescente para identificar una
ayudado a resolver problemas de etiología estructura celular en particular
microbiana. Hay una gran variedad de (inmunocitoquímico).
tinciones, que se han ido desarrollando para la
detección de los diferentes agentes infecciosos 2. COLORANTES HISTOLÓGICOS
en los que se incluyen bacterias, parásitos y MÁS COMUNES
hongos.
Palabras Claves: Microscopio,
Células, Bacterias, Ocular y Reducción. Los diferentes colorantes reaccionan o
se concentran en diferentes partes de las
1. INTRODUCCIÓN células o tejidos, y estas propiedades son
utilizadas como una ventaja para revelar
Un colorante se define como una partes o áreas específicas. Algunos de los
sustancia capaz de dar color a células, tejidos, colorantes biológicos más comunes se listan
fibras, etcétera. De acuerdo con su origen, se más abajo. A menos que se indique lo
pueden dividir en: colorantes naturales, los contrario la mayoría de estos colorantes se
cuales son extraídos de plantas o animales, y utilizan con células y tejidos fijados. Las
colorantes artificiales, que son aquellos de tinciones vitales (que pueden ser utilizadas
minerales procesados y manipulados en el con organismos vivos) se encuentran
laboratorio. Químicamente, el colorante está destacadas.
constituido de un componente cromóforo y un
auxócromo. El cromóforo es todo grupo  Azul brillante de Coomassie: Coomassie
aislado, covalente e insaturado, que tiene una blue (también conocido como azul
absorción característica en la región brillante) es un colorante que tiñe en
 forma no específica a todas las proteínas aparecen con la distintiva fluorescencia
con un fuerte color azul. Se utiliza rojo-naranja.
frecuentemente para teñir las corridas de
proteínas en las electroforesis en gel.  Carmín: El carmín es un colorante de un
intenso color rojo que puede ser utilizado
 Azul de metileno: Azul de metileno se como sal de litio para teñir glicógeno,
utiliza para teñir células animales, para mientras que las sales de alumbre-carmín
hacer más visibles sus núcleos. Es también son colorantes que se adhieren al núcleo.
utilizado para teñir los extendidos de Las tinciones con carmín requieren del uso
sangre para ser utilizados en citología y de un mordiente, que usualmente es
como colorante vital en el recuento de aluminio o alumbre.
reticulocitos.
 Cristal violeta: El cristal violeta, al ser
 Azul Nilo: El Nile blue (o Nile blue A), es combinado con un mordiente adecuado,
decir azul Nilo, tiñe a los núcleos de color tiñe las paredes celulares de color púrpura.
azul. También puede ser utilizado para El cristal violeta es un componente
teñir células vivas. importante en la coloración de Gram.

 Bismarck Brown: Bismarck brown,  DAPI: es un colorante nuclear (tiñe el

Marrón Bismarck, (también conocido núcleo) fluorescente, se excita con luz
como Bismarck brown Y o Manchester ultravioleta para producir una fuerte
brown) le imparte un color amarillo a las fluorescencia azul cuando se encuentra
mucinas ácidas. Se puede utilizar con unido al ADN. El DAPI se une a las
células vivas. regiones de alta repetición A=T en los
cromosomas. Además, no es visible
 Bromuro de etidio: El bromuro de etidio cuando se utiliza con un microscopio de
(BE) se intercala en el ADN y le otorga un transmisión corriente. Puede ser utilizado
color rojo naranja fluorescente. A pesar de en células vivas o fijadas. La técnica de
que no es capaz de teñir células vivas ya tinción con DAPI es especialmente
que no atraviesa las membranas intactas, adecuada para el recuento celular.
puede ser utilizado para identificar células
que se encuentran en las etapas finales de  Eosina: La eosina se utiliza más
la apoptosis, ya que tales células poseen frecuentemente como contracoloración de
unas membranas mucho más permeables. la hematoxilina, impartiendo un color que
Por el mismo motivo, el bromuro de etidio va del rosado al rojo al material
es utilizado como un marcador de citoplasmático, membrana celular, y
apoptosis en poblaciones celulares y para algunas estructuras extracelulares.
localizar las bandas de ADN en una Además, imparte un fuerte color rojo a los
corrida en electroforesis en gel. Este eritrocitos. La eosina puede ser utilizada
colorante puede ser utilizado en también en algunas variantes de la
combinación con naranja de acridina (NA) coloración de Gram, y en muchos otros
en el conteo de células viables. Esta protocolos de tinción. De hecho, existen
tinción combinada BE/NA les otorga a las dos compuestos muy estrechamente
células vivas un color verde fluorescente relacionados (aunque no iguales)
mientras que las células apoptóticas conocidos como eosina. El más
frecuentemente utilizado es la eosina Y
(también conocida como eosina osmificación que ha de llevarse a cabo
amarillenta) ya que posee una tonalidad previamente a la inclusión acarrea el
amarillenta muy suave. El otro compuesto oscurecimiento del tejido, con lo que
conocido como eosina es la eosina B, dificulta aún más la orientación de la
también conocida como eosina azulada o muestra. Por ello es frecuente hacer
rojo imperial, la cual posee una suave secciones de 0,5 a 1 µm de grosor con el
tonalidad azul. Los dos colorantes son ultramicrotomo, denominadas secciones
intercambiables, y la utilización de uno u semifinas, para orientarnos en la muestra y
otro es más una cuestión de preferencia y seleccionar la zona a partir de la cual
tradición. haremos las secciones ultrafinas. Los
semifinos suelen tener áreas más grandes
3. HEMATOXILINA-EOSINA que las que posteriormente vamos a usar
para la obtención de las secciones
Una de las tinciones más comúnmente ultrafinas. El colorante usado para teñir
usada en histología es la hematoxilina- secciones semifinas es normalmente el
eosina sobre cortes de parafina. Como azul de toluidina, el cual puede infiltrase
vemos se usa un colorante básico en la resina calentada en una plancha y
(hematoxilina) y otro ácido (eosina) para llegar hasta el tejido.
teñir de diferente color a las estructuras
ácidas y básicas de la célula. Antes de
proceder a la tinción, si partimos de cortes
de parafina, tenemos que llevar a cabo
unos tratamientos previos sobre las
secciones como es el desparafinado y la
hidratación, puesto que estos colorantes
son hidrosolubles. Si partimos de cortes de
criostato esto no es necesario.

5. TINCIONES ESPECIALES

El término “tinciones especiales” hace

referencia tradicionalmente a cualquier
tinción que no sea una H&E. Abarca una
amplia variedad de métodos que pueden
utilizarse para visualizar estructuras
tisulares particulares, elementos o incluso
microorganismos no identificados
4. SEMIFINOS mediante tinción H&E.

Cuando se procesa material para Otros métodos de tinción utilizan

microscopía electrónica es necesario a inmunohistoquímica o hibridación in situ
veces hacerse una idea de qué zona del para dirigirse a proteínas específicas o
tejido vamos a cortar. Téngase en cuenta secuencias de DNA/RNA. Estos métodos
que el área de una sección para observar a veces también se han incluido en la
con el microscopio electrónico es muy familia de “tinciones especiales”. Sin
pequeña. Además, el proceso de embargo, son bastante diferentes en
 cuanto al método y la finalidad, y ahora se carinii en muestras de tejido. Tinción
separan normalmente en una tercera argéntica GMS modificada (izquierda:
categoría conocida como “tinciones Pneumocystis, pulmón) (derecha:
avanzadas”. infección por Aspergillus, pulmón). La
finalidad de uso de la tinción argéntica
Aunque, literalmente, hay cientos de GMS modificada es la observación
tinciones especiales para todo tipo de histológica de hongos, la membrana basal
fines, solo unos pocos se utilizan con y algunos organismos oportunistas tales
regularidad en histología clínica. La como el Pneumocystis carinii en muestras
variedad de tinciones también hace que la de tejido. Tinción argéntica GMS
tinción especial no esté tan automatizada modificada (izquierda: Pneumocystis,
como la tinción H&E. Aunque muchos pulmón) (derecha: infección por
laboratorios de gran tamaño utilizan Aspergillus, pulmón). La finalidad de uso
instrumentos automatizados para las de la tinción argéntica GMS modificada es
tinciones más comunes, siguen teniendo la observación histológica de hongos, la
un área para la tinción manual. La membrana basal y algunos organismos
complejidad de algunas tinciones también oportunistas tales como el Pneumocystis
impide el uso de la automatización. carinii en muestras de tejido.

 Tinción tricrómica de Masson (piel).

Esta tinción está indicada en la
observación histológica de fibras de tejido
conjuntivo de colágeno en muestras de
tejido. Se utiliza para ayudar a diferenciar
el colágeno y el músculo liso en los
tumores y a detectar enfermedades o
cambios en el tejido conjuntivo/muscular.

 Hierro con azul Prusia de Perls

(hígado). Este colorante se utiliza para
detectar e identificar el ión férrico (Fe3+)
en preparaciones de tejidos, frotis de
sangre o frotis de médula ósea.
Habitualmente se encuentran cantidades
minúsculas de hierro férrico
 Tinción argéntica GMS modificada (hemosiderina) en la médula ósea y el
(izquierda: Pneumocystis, pulmón) bazo. Las cantidades anómalas de hierro
(derecha: infección por Aspergillus, pueden indicar hemocromatosis y
pulmón). La finalidad de uso de la tinción hemosiderosis.
argéntica GMS modificada es la
observación histológica de hongos, la
membrana basal y algunos organismos
oportunistas tales como el Pneumocystis
 Sensagent (S/F). Tinción.
http://diccionario.sensagent.com/Tinci
%C3%B3n/es-es/#Colorantes_histol.C
3.B3gicos_m.C3.A1s_comunes

6. CONCLUSIÓN

Las tinciones en microbiología como en

histología son utilizadas en el laboratorio para
el diagnóstico de las enfermedades
infecciosas, así́ como en la identificación de
microorganismos habitantes de diferentes
ecosistemas. La observación microscópica,
puede efectuarse mediante el examen en
fresco de una suspensión microbiana, lo que
permite visualizar microorganismos vivos y
reconocer sus movimientos, apreciar sus
distintas formas, tamaño y agrupaciones;
También, mediante un extendido o frotis.

En conclusión, con la tinción, es posible

mejorar la definición de grupos de células o
de fragmentos de tejido. Esto permite observar
reacciones químicas o características
morfológicas de tejidos vivos mientras las
células cumplen su función natural.

7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

James A. y Geoffrey R. (S/F). Una

introducción a la tinción rutinaria y
especial.
https://www.leicabiosystems.com/es/k
nowledge-pathway/an-introduction-to-
routine-and-special-staining/

Megías M, Molist P, Pombal MA. (2019).

Atlas de histología vegetal y animal.
Técnicas histológicas.
http://mmegias.webs.uvigo.es/6-
tecnicas/1-introduccion.php