Proteinas III

Técnicas de Purificación y Análisis
TEMA #3
de Proteínas
Prof. Claudia Reyes

TEMA #3 Técnicas de Purificación y Análisis
de Proteínas
PARTE III
CONTENIDO
1. Técnicas de purificación y análisis.
2. Centrifugación.
3. Fraccionamiento en gradientes de densidad.
Electroforesis uni y bidimensional.
4. Cromatografía de filtración molecular, de intercambio
iónico y de afinidad.
5. Técnicas inmunoquímicas.
6. Expresión heteróloga de proteínas en células procariotas
y eucariotas.
7. Determinación de la secuencia de aminoácidos.
Homología de secuencias. Consideraciones funcionales y
evolutivas. Cristalografía.
TEMA #3 Técnicas de purificación y análisis de Proteínas
Algunas Funciones de las Proteínas

Las proteínas son macromoléculas complejas desde los
puntos de vista físico y funcional, que desempeñan múltiples
funciones de importancia crucial.
Citoesqueleto Mantiene la forma y la integridad física celulares
Filamentos de Actina y Miosina Forman la maquinaria contráctil del

musculo
Hemoglobina Anticuerpos Descubren Invasores

Transporta Oxigeno
Extraños
Catalizan reacciones que generan energía, sintetizan
Enzimas biomoléculas y las degradan, replican genes y los transcriben,
procesan RNAm (acido ribonucleico mensajero)
Permiten a las células detectar hormonas, así como

Receptores mostrar respuesta a los mismos


Una proteína típica nace en el
momento de la traducción
Madura a través de eventos de procesamiento

postraduccional, como proteólisis parcial
Alterna entre estados de trabajo y de reposo por

medio de la intervención de factores reguladores
Envejece por oxidación,

desamidación
Muere cuando se degrada hacia los

aminoácidos que la componen
IMPORTANCIA
Un objetivo importante de la medicina molecular es
la identificación de proteínas y los eventos en su
ciclo de vida cuya presencia, ausencia o
deficiencia se relaciona con estados fisiológicos o
enfermedades específicos
La secuencia primaria de una proteína

proporciona tanto una huella digital molecular
para su identificación, como información que
puede usarse para identificar y clonar el gen o
los genes que la codifican
La proteína muy purificada es esencial para el examen
detallado de sus propiedades físicas y funcionales
Las células contienen miles de proteínas
distintas, cada una en cantidades
ampliamente variables.
El aislamiento de una proteína especifica en
cantidades suficientes para análisis, plantea un
formidable desafío que puede requerir el uso
sucesivo de múltiples técnicas de purificación
Métodos de Purificación
Diferencias de la solubilidad relativa de proteínas individuales
Concentración de sal
En función del pH Polaridad (separación mediante
Precipitación (precipitación con adición de sulfato de
Isoeléctrica etanol o acetona) amonio).
Movimiento de partículas por
CENTRIFUGACIÓN acción de fuerzas centrífugas, que
se realizan en uno o más tiempo
Tendencia de solutos a difundirse a través

FUNDAMENTO
de un gradiente de concentración
Este procedimiento consiste en hacer girar el tubo con la

muestra a gran velocidad, de forma que en su fondo se
produzca la acumulación de las partículas que tienden a
hundirse por tener una densidad menor que la del medio
en que se encuentran
Permite separar los diversos
UTILIDAD componentes celulares
TIPOS
Diferencial Ultracentrifugación
Densidades y coeficientes
de sedimentación de
algunas biomoléculas
Berg, Tymoczko, Styrer Fig. 4.14

Métodos Físicos
ULTRACENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL:
Consisten en ciclos alternativos de bajas y altas velocidades de

centrifugación para depositar primero, grandes partículas
contaminantes y después, los viriones.
Después de la centrifugación, la muestra, homogénea,
se habrá separado en dos fracciones: el sobrenadante o
fracción homogénea que no ha sedimentado, y el
sedimento o pellet adherido al fondo del tubo.
Cuanto mayor sea el número de

revoluciones por minuto, mayor será
la fuerza centrífuga ejercida.
Las separaciones cromatografías
CROMATOGRAFÍIA dividen las moléculas entre dos fases,
una móvil y la otra estacionaria.
TIPOS
1. Cromatografía en columna
2. Cromatografía de partición
3. Cromatografía de exclusión de
tamaño
4. Cromatografía de absorción
5. Cromatografía de intercambio iónico
6. Cromatografía de interacción
hidrofóbica
7. Cromatografía de afinidad
8. Cromatografía de alta presión de
fase reversa HPLC
Fase 9. papel filtro (cromatografía en
Puede ser una hoja de
Estacionaria
ó Matriz papel) o una capa delgada de celulosa, silice o alumina
(cromatografia en capa delgada [TLC]).
CROMATOGRAFÍA
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
Se emplean como la fase estacionaria pequeñas cuentas esféricas de

celulosa modificada, acrilamida o sílice, cuya superficie típicamente es
cubierta con grupos funcionales químicos. Las cuentas están
contenidas en un recipiente cilíndrico, o columna, hecho de vidrio,
plástico o metal.
Las matrices de fase estacionaria

interactúan con las proteínas con
base en su carga, hidrofobicidad
y propiedades de unión a ligando
Pequeñas porciones de la fase

móvil o de elución se recolectan a
medida que salen
CROMATOGRAFÍA CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
Las separaciones en columna dependen de la afinidad relativa de

diferentes proteínas por una fase estacionaria dada y por la fase móvil.
CROMATOGRAFÍA
CROMATOGRAFÍA DE PARTICIÓN
Técnica de separación de moléculas

basada en su diferente solubilidad
entre dos fases inmiscibles. La fase
estacionaria es revestida o
impregnada con una fase solvente y
la mezcla a separar se pasa en la
fase móvil.
CROMATOGRAFÍA
CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN DE TAMAÑO Ó FILTRACIÓN EN GEL

Se separan las proteínas con base en su radio de Stokes, el radio
de la esfera que ocupan a medida que entran en solución
El radio de Stokes es una función de la masa y la forma
Radio De Stokes moleculares. Una proteína alargada que cae ocupa un
mayor volumen que una proteína esférica de la misma
masa
• Las proteínas con radios de stokes
demasiado grandes como para entrar
en los poros (proteínas excluidas)
permanecen en la fase móvil que esta
fluyendo y salen antes que las que
pueden entrar en los poros (proteínas
incluidas).
• Las proteínas surgen a partir de una
columna de filtración en gel en orden
descendente de sus radios de stokes
CROMATOGRAFÍA
CROMATOGRAFÍA

CROMATOGRAFÍA CROMATOGRAFÍA DE ABSORCIÓN

La mezcla de proteína es aplicada a una columna bajo condiciones
donde la proteína de interés se asocia con la fase estacionaria de
manera tan estrecha que su coeficiente de partición es, en esencia,
la unidad.
Las moléculas que no se

adhieren son objeto de elución
primero y se desechan.
Las proteínas después se liberan de

manera secuencial al romper las
fuerzas que estabilizan el complejo
de proteína-fase estacionaria, mas a
menudo al usar un gradiente de
concentración creciente de sal
CROMATOGRAFÍA CROMATOGRAFÍA DE ABSORCIÓN
La composición de la
fase móvil se altera
de manera gradual,
de modo que las
moléculas son
liberadas de manera
selectiva en orden
descendente de su
afinidad por la fase
estacionaria
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

Las proteínas interactúan con la fase estacionaria
mediante interacciones entre una carga y otra.
Las proteínas que tienen una carga positiva neta a un pH dado se

adhieren a cuentas que tienen grupos funcionales con carga negativa,
como carboxilatos o sulfatos (intercambiadores de cationes).
Las proteínas con una carga

negativa neta se adhieren a cuentas
que tienen grupos funcionales con
carga positiva, por lo general
aminas terciarias o cuaternarias
(intercambiadores de aniones).
Las proteínas, que son polianiones,

compiten contra iones monovalentes
por unión al soporte —de ahí el
termino “intercambio iónico”—.
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
Puesto que la carga neta sobre una proteína esta determinada

por el pH, es factible lograr la elución secuencial de proteínas
mediante cambiar el pH de la fase móvil
De manera alternativa, una proteína

puede quedar sujeta a rondas
consecutivas de cromatografía de
intercambio iónico, cada una a un
pH diferente, de modo que las
proteínas que muestran coelución a
un pH presentan elución a distintas
concentraciones de sal a otro pH
CROMATOGRAFÍA
CROMATOGRAFÍA DE INTERACCIÓN HIDROFÓBICA

Separa a proteínas con base en su tendencia a asociarse
con una matriz de fase estacionaria cubierta con grupos
hidrofóbicos (p. ej., fenil u octil sefarosa [Sepharose]).
Las proteínas con superficies

hidrofóbicas expuestas se
adhieren a la matriz por medio
de interacciones hidrofóbicas
que son incrementadas
mediante una fase móvil de
fuerza iónica alta.
CROMATOGRAFÍA

Separa a proteínas con base en su tendencia a asociarse
con una matriz de fase estacionaria cubierta con grupos
hidrofóbicos (p. ej., fenil u octil sefarosa [Sepharose]).
Las proteínas con superficies

hidrofóbicas expuestas se
adhieren a la matriz por medio
de interacciones hidrofóbicas
que son incrementadas
mediante una fase móvil de
fuerza iónica alta.

Las proteínas no adherentes
primero se eliminan mediante
lavado.
A continuación se disminuye la
polaridad de la fase móvil al
reducir de manera gradual la
concentración de sal.
Si la interacción entre proteína y fase

estacionaria es en particular fuerte,
puede añadirse etanol o glicerol a la
fase móvil para disminuir su polaridad
y debilitar mas las interacciones
hidrofóbicas.
CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD
La cromatografía de afinidad explota la alta selectividad de
casi todas las proteínas por sus ligandos.
Solo se adhieren las proteínas

que interactúan con el
ligando inmovilizado
Las enzimas pueden purificarse

mediante cromatografía de afinidad
usando sustratos, productos,
coenzimas o inhibidores inmovilizados.
CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD
A continuación se efectúa
elución de las proteínas unidas
mediante competencia con
ligando soluble o, de manera
menos selectiva, al alterar las
interacciones entre proteína y
ligando usando urea,
clorhidrato de guanidina, pH
levemente acidico o altas
concentraciones de sal.
CROMATOGRAFÍA
CROMATOGRAFÍA DE ALTA PRESIÓN DE FASE REVERSA (HPLC)

La HPLC puede resolver mezclas complejas de lípidos o
péptidos cuyas propiedades difieren solo un poco
En la HPLC de fase reversa se explota una fase
estacionaria hidrofóbica de polímeros alifaticos
de 3 a 18 átomos de carbono de longitud.
Se efectúa elución
de las mezclas de
péptido usando un
gradiente de un
solvente orgánico
miscible en agua,
como acetonitrilo o
metano
CROMATOGRAFÍA
CROMATOGRAFÍA DE ALTA PRESIÓN DE FASE REVERSA (HPLC)
Se utiliza para purificar péptidos

ELECTROFORESIS UNI Y BIDIMENSIONAL

Se denomina electroforesis al método
de separación de moléculas basado en
su desplazamiento en un campo
eléctrico
Por este método se pueden separar proteínas que presenten cargas

eléctricas diferentes, pues realizan sus movimientos migratorios a
polos opuestos o que presenten la misma carga, pero
cuantitativamente diferente.
Los geles contienen cientos de manchas teñidas diferentes, cada una

de las cuales comprende una sola proteína, o cuando mucho, unas
cuantas proteínas que tienen propiedades físicas muy similares y por
tanto son difíciles de separar.
Los geles contienen cientos de manchas teñidas diferentes, cada una

de las cuales comprende una sola proteína, o cuando mucho, unas
cuantas proteínas que tienen propiedades físicas muy similares y por
tanto son difíciles de separar.
Electroforética de HbA (normal) y HbS presente en los
pacientes con anemia drepanocítica).
La HbS presenta en el sexto

residuo de la cadena β,
valina en vez de glutámico,
esto ocasiona que la HbA
(α2-β2) posea dos cargas
negativas más
Cuando se realiza una

corrida electroforética
ambas se comportan
como anión, siendo la
HbA la que se acerca
más al ánodo.
LOS ANTICUERPOS
MONOCLONALES
Ensayos con anticuerpos marcados (ELISA, RIA)
ANTICUERPOS MONOCLONALES COMO DIAGNÓSTICO ELISA RIA
ELISA ENSAYO INMUNOSORBENTE LIGADO A ENZIMA
Se basa en el uso de antígenos o anticuerpos marcados con

una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan
actividad tanto inmunológica como enzimática
ENZI S Cuantificación
ENZI MA
S
MA
Sustrato
Cromógeno
Reacción
Colorimétrica
Soporte Anticuerpo marcado
Espectrofotómetro o
(inmunoadsorbente) con una enzima
Colorímetro
ELISA Ensayos con anticuerpos marcados (ELISA, RIA)
ELISA ENSAYO DE INMUNOSORBENTE LIGADO A ENZIMA
ENZIMAS
ELISA TIPO
SANDWICH
 Fosfatasa alcalina
 Peroxidasa de rábano picante
 Galactosidasa
ELISA
VENTAJAS TIPOS INDIRECTO
 Sensibilidad comparable a los RIA

 Seguras
 Menos costosas.
ELISA
COMPETITIVO
ELISA INDIRECTO
Detección y/o cuantificación de ANTICUERPO
Muestra Ac secundario Adición del Cuantificación

Placa
conjugado Sustrato
Anticuerpo
Ag Anticuerpo
Secundario
sensibilizado primario
La cantidad de producto de la
Método de elección para detectar la reacción de color que se forma
APLICACIÓN presencia de anticuerpos séricos se mide con lectores
contra el (VIH) espectrofotométricos de placa
especializados
ELISA INDIRECTO
Detección y/o cuantificación de ANTICUERPO

ELISA TIPO SANDWICH
Detección y/o cuantificación del ANTÍGENO
Muestra Ac secundario Adición del Cuantificación

Placa
conjugado Sustrato
Anticuerpo
Anticuerpo Antígeno Anticuerpo

sensibilizado primario Secundario
Anticuerpo ligado a enzima específico para un

epítopo distinto del antígeno
ELISA TIPO SANDWICH

ELISA COMPETITIVO
Es otra variante para medir cantidades de antígeno

Incubación con Pozo recubierto Adición del Ac
Cuantificación
Mx de Ag secundario conjugado
AC se incuban con AG
Cuanto más alta es la
presenten en la MX Cuanto más antígeno se encuentra en concentración de
la muestra, menos anticuerpo libre Antígeno en la mx, más
está disponible para unirse al foso baja es la absorción
recubierto con antígeno
ELISA COMPETITIVO
La adición de un
anticuerpo secundario
(Ab2) conjugado con la
enzima específico para
el isotipo de un
anticuerpo primario
puede utilizarse para
determinar la cantidad
de anticuerpo primario
unido al foso como en
un ELISA indirecto.
VARIANTES
DEL ELISA
ELISA VARIANTES QUIMIOLUMINISCENCIA ELISPOT
ELISA
VARIANTES QUIMIOLUMINISCENCIA
La luz que se produce por quimioluminiscencia durante

determinadas reacciones químicas constituye una
alternativa conveniente y muy sensible para las
mediciones de absorbancia en ELISA
ELISA
QUIMIOLUMINISCENCIA
CONVENCIONAL
Sustrato Sustrato luxógeno

cromógeno (que genera luz)
VARIANTES
DEL ELISA
ELISA
VARIANTES QUIMIOLUMINISCENCIA
La oxidación del compuesto luminol por H2O2 y la

enzima peroxidasa de rábano picante (HRP) produce luz:
CUANTIFICACIÓN
Luminómetro
RIA Ensayos con anticuerpos marcados (ELISA, RIA)
RIA RADIOINMUNOENSAYO
Implica la unión competitiva de un antígeno
radiomarcado y un antígeno no marcado a un
anticuerpo de alta afinidad.
Rosalyn Yalow,
Sensibilidad
RIA
0.001 microgramos por
mililitro o menos.
Para medir hormonas,

APLICACIONES proteínas séricas, fármacos
y vitaminas
S. A. Berson
RIA RADIOINMUNOENSAYO 4
1
El antígeno con la marca
El Ag marcado se mezcla con Ac radiactiva es desplazado de los
a una concentración que satura sitios de unión
los sitios de unión a Ag del Ac
2 5
Se añaden en cantidades crecientes las El decremento de la

muestras de antígeno no marcado de cantidad de antígeno
concentración desconocida radiomarcado que se une al
anticuerpo específico se
3 mide para determinar la
cantidad de antígeno que
esta última contiene.
Los dos tipos de antígeno compiten
por los sitios de unión disponibles
en el anticuerpo.
Con objeto de determinar la cantidad de Ag*
unido a Ab, el complejo Ag-Ab se PRECIPITA
para separarlo del antígeno libre
Se mide la radiactividad en el precipitado
Precipitación del
complejo Ag-Ab con un
antisuero anti-isotipo
secundario
Es posible medir la cantidad de Ag*
libre que queda en el sobrenadante con
un contador de radiación
La sustracción de este valor de la

cantidad total de Ag* añadido
proporciona la cantidad de
antígeno marcado unido
El RIA de la sangre del

donante reduce mucho la
incidencia de infecciones por
hepatitis B en receptores de
transfusiones sanguíneas.
El antígeno se marca con un
isótopo emisor de partículas
125 I,
pero también suelen
emplearse tritio (3H).
RIA VARIANTES
RIA de fase sólida
• Cuentas de sepharose
• Inmovilización del Ac en fosos de poliestireno
o policloruro de vinilo
• RIA de microtítulo→ inmovilización del
anticuerpo en las paredes de los fosos de
microtítulo
La primera etapa
para llevar a cabo un
RIA es determinar la
cantidad de
anticuerpo necesario
para unir 50 a 70% de
la cantidad fija de
antígeno radiactivo
(Ag*) en la mezcla
por valorar
MUESTRA DESCONOCIDA
La diferencia entre las

radioactividades de
una muestra control y
la muestra es
proporcional a la
cantidad de Ag no
marcado en la muestra
desconocida
Muestra conocida La adición de

El Ag no
del Ag marcado Anti-Ac precipita
marcado
con Ag no el Ac-Ag* y el
compite con el
marcado de Ac-Ag
Ag marcado
concentración por el Ac
desconocida
(muestra)
Suero u otros líquidos corporales, que

MUESTRA
contiene el antígeno no marcado
Western Blotting Ensayos con anticuerpos marcados
Permite la identificación de una

proteína específica en una mezcla
compleja de proteínas
Northern blotting Southern blotting Western blotting
Detecta ARNm Detecta fragmentos de ADN Detecta Proteínas
En el Western blot, una mezcla de proteínas

se separa por medios electroforéticos en un
gel de SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE)
Gel en placa con infusión de

SDS-PAGE dodecilsulfato sódico (SDS) + un agente
de disociación
Western Blotting Detección de Ag Ensayos con anticuerpos marcados
Separación electroforética de las

1 proteínas en gel (SDS-PAGE)
Las bandas de proteínas se transfieren

2 a una membrana de nitrocelulosa
mediante electroforesis
Las bandas de proteínas individuales

3 se identifican al inundar la membrana
con Ac* o Ag* o unido a enzimas
Visualización de loa complejos Ag-Ac

4 formados
Ag*-Ac* AgE-AcE
Producto de color intenso e

Rayos X insoluble (banda de color en
Autorradiografía el sitio del Ag blanco)
Western
Quimioluminiscencia
Blot
Puede lograrse una sensibilidad mucho más
alta si se usa un compuesto
quimioluminiscente aunado a agentes de
realce adecuados para producir luz en el sitio
del antígeno
Revelado con Ac
Detección de Ag marcados
(radioactivos)
Detección de Identifican un anticuerpo específico en una mezcla.

Anticuerpos
Los antígenos conocidos de peso Transferencia a una membrana de
1 molecular bien definido se separan
2 nitrocelulosa.
mediante SDS-PAGE
Las bandas separadas de Ag
Los antígenos conocidos de peso 4 conocidos se prueban luego con la
3 molecular definido se separan mx que se sospecha contiene el Ac
mediante SDS-PAGE específico
Adición del Ac secundario

radiomarcado o ligado a enzima
5 específico para el Ac en la
muestra en estudio.
Aplicaciones Permite la detección de Ag ó de Ac de una

muestra desconocida
La aplicación más
amplia de este
procedimiento es
como PRUEBA DE
CONFIRMACIÓN DE
VIH, se utiliza para
determinar si el
paciente tiene
anticuerpos que
reaccionan con una
o más proteínas
víricas.
VIH- Resultados
VIH- Resultados
VIH- Resultados
VIH- Resultados
ACTUALIDAD:
TÉCNICAS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE LA
INFECCIÓN POR VIH 1.
MÉTODOS INDIRECTOS
a. Pruebas de screening serológicas.
Técnicas inmunoenzimáticas (EIA) •
1. EIA indirecto con antígeno obtenido de lisado vírico (primera generación)
2. EIA indirecto o competitivo con antígeno obtenido de proteínas recombinantes y/o
péptidos sintéticos (segunda generación)
3. EIA de tipo sándwich o de inmunocaptura, con antígeno obtenido de proteínas
recombinantes y/o péptidos sintéticos y detección conjunta de anticuerpos
específicos de clase IgG, IgM e IgA (tercera generación)
4. Detección combinada de anticuerpos específicos y antígeno de VIH (cuarta
generación)
II. Otras técnicas IV.Inmunoensayo lineal (LIA)
• Aglutinación
MÉTODOS DIRECTOS
• Dot blot
a. Cultivo vírico b. Detección de antigenemia
• Inmunocromatografía
(antígeno p24) c. Detección molecular de ADN
b. Pruebas confirmatorias provírico y ARN vírico I. Reacción en cadena
I. Western blot de la polimerasa (PCR) II. ADN ramificado
II. Inmunofluorescencia indirecta (IFI) (bDNA) III. Amplificación basada en la
III. Radioinmunoprecipitación (RIPA) transcripción o TMA (NASBA)
Durante el embarazo los anticuerpos IgG
de la madre atraviesan de forma pasiva
la placenta y pasan al feto,
desapareciendo en unos 12-18 meses
después del nacimiento.
Por ello, la serología no nos sirve para
efectuar el diagnóstico de la infección
por VIH en el recién nacido, pues no
distingue entre los anticuerpos
maternos frente al VIH transferidos por
vía placentaria de los generados por la
infección en el niño.
Debemos recurrir a métodos directos

mediante técnicas de amplificación
molecular.
La técnica de elección para el diagnóstico perinatal es la determinación cualitativa del ADN

proviral del VIH integrado en células mononucleares de sangre periférica por PCR
(sensibilidad muy alta, superior al 95% en niños de un mes)

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Algunas Funciones de las Proteínas

Citoesqueleto Mantiene la forma y la integridad física celulares

Filamentos de Actina y Miosina Forman la maquinaria contráctil del

Hemoglobina Anticuerpos Descubren Invasores

Permiten a las células detectar hormonas, así como

Algunas Funciones de las Proteínas

Algunas Funciones de las Proteínas

Madura a través de eventos de procesamiento

Alterna entre estados de trabajo y de reposo por

Envejece por oxidación,

Muere cuando se degrada hacia los

La secuencia primaria de una proteína

Diferencias de la solubilidad relativa de proteínas individuales

Tendencia de solutos a difundirse a través

Este procedimiento consiste en hacer girar el tubo con la

Berg, Tymoczko, Styrer Fig. 4.14

Consisten en ciclos alternativos de bajas y altas velocidades de

Cuanto mayor sea el número de

Se emplean como la fase estacionaria pequeñas cuentas esféricas de

Las matrices de fase estacionaria

Pequeñas porciones de la fase

Las separaciones en columna dependen de la afinidad relativa de

Técnica de separación de moléculas

CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN DE TAMAÑO Ó FILTRACIÓN EN GEL

CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN DE TAMAÑO Ó FILTRACIÓN EN GEL

CROMATOGRAFÍA CROMATOGRAFÍA DE ABSORCIÓN

Las moléculas que no se

Las proteínas después se liberan de

CROMATOGRAFÍA CROMATOGRAFÍA DE ABSORCIÓN

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

Las proteínas que tienen una carga positiva neta a un pH dado se

Las proteínas con una carga

Las proteínas, que son polianiones,

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

Puesto que la carga neta sobre una proteína esta determinada

De manera alternativa, una proteína

CROMATOGRAFÍA DE INTERACCIÓN HIDROFÓBICA

Las proteínas con superficies

CROMATOGRAFÍA DE INTERACCIÓN HIDROFÓBICA

Las proteínas con superficies

CROMATOGRAFÍA DE INTERACCIÓN HIDROFÓBICA

Si la interacción entre proteína y fase

Solo se adhieren las proteínas

Las enzimas pueden purificarse

CROMATOGRAFÍA DE ALTA PRESIÓN DE FASE REVERSA (HPLC)

CROMATOGRAFÍA DE ALTA PRESIÓN DE FASE REVERSA (HPLC)

Se utiliza para purificar péptidos

ELECTROFORESIS UNI Y BIDIMENSIONAL

ELECTROFORESIS UNI Y BIDIMENSIONAL

Por este método se pueden separar proteínas que presenten cargas

ELECTROFORESIS UNI Y BIDIMENSIONAL

Los geles contienen cientos de manchas teñidas diferentes, cada una

ELECTROFORESIS UNI Y BIDIMENSIONAL

Los geles contienen cientos de manchas teñidas diferentes, cada una

La HbS presenta en el sexto

Cuando se realiza una

ANTICUERPOS MONOCLONALES COMO DIAGNÓSTICO ELISA RIA

ELISA ENSAYO INMUNOSORBENTE LIGADO A ENZIMA