Libro Agt Cap 13 Traducido

Capítulo 13
Inestabilidad cromosómica
síndromes
Yassmine akkari
Citogenética, Patología Molecular, FISH y Legacy Health, Portland, OR, EE. UU.
13.1 Introducción
Los síndromes de inestabilidad cromosómica son un grupo de trastornos en su mayoría recesivos caracterizados por una mayor frecuencia de
cambios cromosómicos espontáneos o inducidos que conducen a roturas y neoplasias. En condiciones fisiológicas normales, el ADN se daña
continuamente. Ejemplos de tales daños incluyen la desaminación espontánea de bases, oxidación de nucleótidos y roturas de cadenas por
especies reactivas de oxígeno (ROS) .Estos errores pueden deberse al metabolismo normal, estrés ambiental o errores de replicación resultantes
de nucleótidos no emparejados. El mantenimiento de la estabilidad del genoma es vital para todos los organismos vivos, y sus vías están muy
conservadas desde la levadura hasta los mamíferos (ver Figura 13.1). La integridad genómica sostenida requiere la reparación de estas lesiones
del ADN a través de una multitud de vías de reparación del ADN que están reguladas temporal y espacialmente y requieren respuestas adecuadas
a las alteraciones del ADN. Las lesiones del ADN que causan la rotura de los cromosomas son principalmente roturas de doble hebra, derivadas
principalmente de defectos en la reparación recombinacional. En comparación con las roturas de una sola hebra, las roturas de doble hebra son
una forma problemática de daño del ADN debido a la falta de una plantilla directa para repararlas. Pueden ser causadas por agentes externos,
como radiación ionizante y agentes químicos, o agentes internos, como la recombinación en la meiosis, la recombinación en el receptor de células
T y los genes de inmunoglobulina en las células T y B, o simplemente el mantenimiento de la horquilla de replicación. El acortamiento de los
telómeros también puede considerarse un ejemplo de roturas de doble hebra. La reparación de las roturas de doble hebra la realizan las células a
un nivel bajo en todo momento. Se reparan mediante una reparación de recombinación sin errores denominada recombinación homóloga (HR) o
reparación de unión de extremos no homóloga propensa a errores (NEJR) [1]. Muchas proteínas involucradas en estas vías de reparación (como
BRCA2 y CAJERO AUTOMÁTICO) se ha demostrado que está mutado en síndromes de rotura humana y cáncer [2].
Los síndromes de inestabilidad cromosómica pediátrica raros, como la anemia de Fanconi y la ataxia-telangiectasia (A ‐ T), han proporcionado
información sobre la función de las diversas vías de reparación del ADN. Los niños que nacen con estos trastornos generalmente tienen múltiples
anomalías congénitas, sensibilidad celular a los agentes que dañan el ADN y una predisposición a ciertos cánceres, algunas veces incluso en los
miembros de la familia portadora de los individuos afectados. De hecho, un vínculo genético directo entre los síndromes de inestabilidad
cromosómica y la predisposición al cáncer provino primero del descubrimiento de que una inactivación bialélica de uno de los genes mutados en
el cáncer de mama familiar, BRCA2, causa anemia de Fanconi [3].
Recientemente se han caracterizado dos niveles de inestabilidad genética en cánceres humanos: pequeños cambios de secuencia observados
a nivel de nucleótidos [Inestabilidad de microsatélites (MIN) e Inestabilidad de nucleótidos (NIN)], e inestabilidad que es visible a nivel de
cromosomas [4]. Este último describe una variedad de aberraciones cromosómicas que pueden ser numéricas y estructurales. La desregulación
de genes implicados en la segregación cromosómica normal o controles de puntos de control del ciclo celular puede causar cambios numéricos
como aneuploidía o poliploidía. Las roturas cromosómicas y la disfunción de los telómeros pueden provocar diversos reordenamientos
estructurales, como deleciones, duplicaciones e inversiones. Sin embargo, el deterioro de la reparación, replicación o recombinación del ADN es
responsable de causar intercambios de cromátidas hermanas, sitios frágiles, roturas de cromátidas, asociaciones aberrantes (como radiales) y
sensibilidad al mutágeno. Los trastornos que se asocian con tales deficiencias y son susceptibles de diagnóstico citogenético son el tema de este
capítulo.
El Manual de laboratorio de AGTCytogenetics, Cuarta edición. Editado por Marilyn S. Arsham, Margaret J. Barch y Helen J. Lawce. ©
2017 La Asociación de Tecnólogos Genéticos. Publicado en 2017 por JohnWiley & Sons, Inc.
654 / Capítulo 13: Síndromes de inestabilidad cromosómica
Figura 13.1 Reparación de DNa. una enzima especial rodea la doble hélice para reparar una hebra rota de ADN. Sin moléculas que puedan reparar tales roturas, las
células pueden funcionar mal, morir o volverse cancerosas. Cortesía de tom ellenberger, Facultad de Medicina de la Universidad de Washington. Consulte el inserto
para ver la representación del color de esta figura.
En contraste con la rotura cromosómica, los sitios frágiles cromosómicos aparecen como espacios cromosómicos que no manchan, roturas y
segmentos endorreduplicados en las preparaciones de metafase. Con la excepción de FRAXA y FRAXE ( dos causas bien conocidas de discapacidad
intelectual familiar asociada con el síndrome del X frágil) y posiblemente FRA11B asociados con el síndrome de Jacobsen, no se ha demostrado
que los sitios frágiles predispongan a ninguna anomalía cromosómica hereditaria o malignidad [5]. Debido a sus limitaciones diagnósticas, ya no
se realizan estudios citogenéticos para la detección de sitios frágiles clínicamente relevantes. En cambio, el diagnóstico se basa en metodologías
moleculares y, por lo tanto, no se discutirá en este capítulo.
13.1.1 Citogenética versus diagnóstico molecular

Se han clonado genes mutados en varios síndromes de rotura cromosómica y se han caracterizado sus productos proteicos. Para algunos
síndromes de rotura, el diagnóstico molecular de mutaciones genéticas ha reemplazado al análisis citogenético de rotura de cromosomas
después de la inducción de daño para determinar la presencia o ausencia de enfermedad.
Los citogenéticos conocen desde hace mucho tiempo varios síndromes de rotura de cromosomas humanos, incluida la anemia de Fanconi y el síndrome de Bloom. La
mejor forma de diagnosticar estos síndromes depende de muchos factores. Primero, requiere una comprensión del aspecto clínico de cualquier enfermedad a nivel
celular o molecular, para poder desarrollar una prueba de laboratorio de diagnóstico. En segundo lugar, el costo de dicha prueba debería estar al alcance de la mayoría de
los proveedores de atención médica. En tercer lugar, el momento en el que los resultados de la prueba están disponibles juega un papel importante en la elección del
método de diagnóstico. La mayoría de las veces, la elección está bien establecida y aceptada entre los diferentes proveedores. Por ejemplo, en el momento de escribir este
capítulo, había 13 genes mutados identificados en asociación con la anemia de Fanconi; sin embargo, a nivel celular, todos los grupos de complementación son sensibles a
los agentes reticulantes. Por lo tanto, se podría usar una prueba para desafiar las células con un químico reticulante para cualquiera de las mutaciones. El algoritmo
acordado actualmente para las pruebas de anemia de Fanconi se basa en las pruebas de rotura citogenética de sangre periférica y / o fibroblastos cutáneos para detectar
las características celulares de la enfermedad. Posteriormente, se emplean varios ensayos moleculares para clasificar a los pacientes en los grupos de complementación
apropiados, especialmente para posibles pruebas prenatales. El algoritmo acordado actualmente para las pruebas de anemia de Fanconi se basa en las pruebas de rotura
citogenética de sangre periférica y / o fibroblastos cutáneos para detectar las características celulares de la enfermedad. Posteriormente, se emplean varios ensayos moleculares para clasificar a los
En las siguientes secciones se describen los síndromes de rotura cromosómica relevantes para el laboratorio de citogenética y su diagnóstico
posterior (tabla 13.1). Una descripción detallada del aspecto celular y molecular de cada enfermedad también está fuera del alcance de este
capítulo. Para una mayor investigación, el lector interesado puede consultar las fuentes en la sección de referencia para obtener más información.
Cuadro 13.1 Lista de enfermedades discutidas en este capítulo: sus genes, productos proteicos, ubicaciones cromosómicas y manifestaciones citogenéticas
Condición genética Manifestaciones clínicas Gen (s) clonado Producto (s) de proteína Ubicación (es) cromosómica (s) Diagnóstico citogenético
y función conocida
Anemia de Fanconi Múltiples anomalías congénitas, FANCA, B, C, D1, D2, E, F, FaNCa, B, C, D1 16q24, Xp22, 9q22, 13q12, Análisis de roturas: aumentado
insuficiencia de la médula ósea, mayor G, I, J, L, M, N (BrCa2), D2, e, F, G, 3p25, 6p22, 11p15, 9p13, Incidencia de roturas de cromosomas
susceptibilidad a la neoplasia Yo, J, L, M, N 15q25, 17q22, 2p16, 14q21, y radiales después de la exposición a
16p12 (respectivamente) agentes reticulantes.
ataxia telangiectasia Disfunción cerebelosa CAJERO AUTOMÁTICO ( ataxia telangiectasia atM (quinasa) 11q22 Cambios estructurales de los
inmunodeficiencia, Mutado) cromosomas 7 y 14 y aumento
telangiectasias, aumento rotura cromosómica siguiente
susceptibilidad a la neoplasia irradiación gamma
Rotura de Nijmegen Microcefalia recurrente NBN ( antes NBS1) Nibrin 8q21 Cambios estructurales de los
síndrome infecciones, aumento cromosomas 7 y 14 y aumento
susceptibilidad a la neoplasia rotura cromosómica siguiente
irradiación gamma
Síndrome de Bloom Estatura baja, eritema cutáneo, BLM BLM (DNa helicasa 15q26 Intercambio de cromátidas hermanas
sensibilidad al sol, aumento recQ protein-like-3)
susceptibilidad a la neoplasia
Inmunodeficiencia, Inmunodeficiencia facial DNMT3B DNMt3B (DNa 20q11 Inestabilidad centromérica, especialmente
centromérico dismorfismos metiltransferasa) cromosomas 1 y 16, y con menos
inestabilidad, facial frecuencia 9, 2 y 19
síndrome de anomalías
síndrome de roberts focomelia, craneofacial ESCO2 eSCO2 (hermana 8p21 centrómero prematuro
anomalías, crecimiento severo cohesión de la cromatina separación
restricción proteína)
Síndrome de Werner Cambios en la piel similares a los de la esclerodermia, WRN ( además RECQL2) WrN (reQ2 DNa 8p12 "Translocación abigarrada
calcificaciones subcutáneas, helicasa) mosaicismo "
facies prematuramente envejecida,
mayor susceptibilidad a
neoplasia
rothmund– poiquilodermia, esquelético RECQL4 reCQL4 (DNa 8q24 Mosaicismo para cromosomas
síndrome de thomson anomalías, aumento de la incidencia helicasa) anomalías en fibroblastos y
de neoplasia linfoblastos
13.2 Anemia de Fanconi

La anemia de Fanconi (AF) es un trastorno recesivo poco común (incidencia estimada en 1 de cada 360 000 nacidos vivos) que pertenece a dos clases: las
enfermedades de reparación del ADN y los síndromes hereditarios de insuficiencia de la médula ósea [6]. La AF se caracteriza por anomalías hematológicas y
del desarrollo y predisposición al cáncer. Las características clínicas suelen ser heterogéneas y pueden verse afectados varios sistemas corporales.
Aproximadamente el 25% no presenta anomalías congénitas. Puede haber un crecimiento alterado, tanto en el útero como en el posparto, y se manifiesta
por un bajo peso al nacer y una mediana de estatura, a menudo en el percentil 5 [7]. Esto puede deberse a una deficiencia de la hormona del crecimiento o al
hipotiroidismo, que pueden afectar aún más el crecimiento. Además, a menudo se presentan microcefalia, microftalmia y retraso global del desarrollo. Los
hallazgos esqueléticos incluyen principalmente defectos de los rayos radiales (hipoplasia de los pulgares e hipoplasia radial) y, con menos frecuencia,
luxación congénita de la cadera, escoliosis y anomalías vertebrales. Los cambios pigmentarios suelen estar presentes e incluyen hiper e hipopigmentación de
la piel y manchas típicas de color café con leche. También puede ocurrir pérdida de audición conductiva, y puede o no estar asociada con una malformación
del oído externo. Los defectos renales están presentes en un tercio de los pacientes con AF y pueden incluir aplasia renal unilateral, hipoplasia renal, riñones
en herradura y uréteres dobles. Las anomalías genitales son comunes en la AF e incluyen hipogenitales, hipospadias, testículos no descendidos e infertilidad
en los hombres. Las mujeres también pueden tener genitales subdesarrollados, anomalías uterinas y menstruaciones irregulares. Sin embargo, la capacidad
de reproducirse se ha documentado en varios pacientes con AF [8]. Se han documentado defectos cardíacos en la AF, aunque en menor medida [9]. Estos
incluyen arteriosis del conducto persistente, defectos del tabique ventricular y estenosis pulmonar. Incluso menos comunes son los defectos
gastrointestinales como la atresia y las anomalías del sistema nervioso central.
La AF es el trastorno hereditario de la médula ósea más común. Los consiguientes problemas hematológicos son, con mucho, las
implicaciones clínicas más graves de la AF. Al nacer, el recuento sanguíneo suele ser normal, seguido inicialmente de macrocitosis. A menudo, el
paciente se presenta con palidez e infecciones recurrentes, momento en el que los hallazgos hematológicos suelen incluir trombocitopenia y
neutropenia, lo que conduce más tarde a pancitopenia [7]. Esto suele ir seguido de anomalías citogenéticas clonales que sugieren síndrome
mielodisplásico (SMD) o leucemia mielógena aguda (LMA) en muestras de médula ósea (véase el capítulo 11, sección
11.3, MDS pediátrico). Aunque algunos pacientes con AF reciben tratamiento con andrógenos para mejorar su anemia, el trasplante de médula
ósea (TMO) de un donante compatible con HLA es el único tratamiento eficaz. Desafortunadamente, los pacientes con AF no toleran bien los
regímenes de acondicionamiento rígidos para preparar al paciente para el BMT y generalmente ocurren complicaciones. Por lo tanto, es
fundamental hacer el diagnóstico de AF antes de emprender los regímenes de trasplante para que se puedan realizar los cambios apropiados en
los protocolos.
El aspecto de susceptibilidad al cáncer de la FA está relacionado con la incapacidad de mantener la integridad del genoma (ver más adelante),
lo que conduce a un alto grado de inestabilidad cromosómica. La neoplasia maligna más común en la AF es MDS, que por lo general conduce a
AML. Las anomalías citogenéticas comunes que se observan en la médula ósea de estos pacientes son la monosomía 7 [10-12], 5q- [13-15], 7q-
[16] 20q- [13], trisomía 8 [13, 17] y translocaciones y reordenamientos que involucran a los cromosomas 1 [18, 19] y 3 [20].
La AF también se ha asociado con tumores no hematológicos, en particular con carcinomas de células escamosas de cabeza y cuello [21]. Los
sitios más comunes de estos tumores son los tractos aerodigestivo y anogenital. Otros tumores en AF incluyen tumores relacionados con el
hígado como carcinomas hepatocelulares, adenomas hepáticos e hiperplasia nodular focal del hígado. La mayoría de estos tumores se han
observado exclusivamente en pacientes con AF en tratamiento con andrógenos, por lo general son dependientes de andrógenos [22-25] y pueden
retroceder después de interrumpir el tratamiento. Además, varios grupos han informado recientemente de la aparición de meduloblastoma y
tumor de Wilms (ver Capítulo 12, secciones 12.3.6, Meduloblastoma y 12.3.12, Tumor de Wilms) en niños pequeños con AF [26, 27].
La FA ha demostrado ser un trastorno heterogéneo tanto clínica como genéticamente (actualmente se han identificado 13 genes de FA:
A, B, C, D1 / BRCA2, D2, E, F, G, I, J, L, M y N / PABL2 [ 28]. Un concepto unificador surgió hace varias décadas que muestra que las células
de los pacientes con AF muestran una hipersensibilidad típica a los agentes alquilantes que causan enlaces cruzados entre cadenas del
ADN (ICL) [29]. Estos agentes incluyen mitomicina C (MMC), diepoxibutano (DEB), cisplatino y psoralenos fotoactivados. Aunque su modo
de acción in vivo puede variar [30-32], todos tienen la capacidad, en diferentes condiciones, de inducir un enlace covalente entre las dos
cadenas de ADN, lo que obstaculiza la replicación del ADN [33].
13.2.1 Diagnóstico citogenético de la anemia de Fanconi
Históricamente, la prueba de rotura de FA se ha basado en el uso de DEB para la inducción de enlaces cruzados entre cadenas de ADN [34]. En
este contexto, se puntúan 50 o 100 metafases teñidas tanto para el número de cromosomas como para el aumento de roturas y reordenamientos
espontáneos e inducidos por DEB. Sin embargo, muchos laboratorios utilizan tanto MMC como DEB para satisfacer la necesidad de confirmar
hallazgos positivos o negativos, especialmente con la escasez de controles positivos [35]. Los resultados consistentes de dos clastógenos
diferentes permiten una mejor confirmación del diagnóstico.
Sin embargo, ambos fármacos tienen varias ventajas y desventajas. El DEB ha sido reconocido como un clastógeno más suave, que produce
suficientes metafases para el análisis, pero tiene una vida útil muy corta y debe prepararse a diario. MMC, por otro lado, puede
Capítulo 13: Síndromes de inestabilidad cromosómica / 657
(a) (B)
Sin roturas de cromosomas

Roturas de cromosomas
(C)
Radial
Radial
Radiales de cromosomas
Figura 13.2 Diagnóstico citogenético de Fa. (a) metafase de sangre periférica de un grupo de control normal en presencia de MMC. (b)
metafase de sangre periférica de un paciente con Fa en presencia de MMC. (c) metafase de sangre periférica de un paciente con Fa en
presencia de DeB. las flechas apuntan a roturas y radiales.
almacenarse hasta seis meses a 4 ° C [36], pero es un clastógeno más fuerte. Por lo tanto, algunos protocolos utilizan DEB y MMC en
todos los pacientes, así como un cultivo de control sin clastógenos. Además, el uso de dos concentraciones de MMC permite recuperar
información sobre las células más sensibles (Figura 13.2).
Muchos síndromes de inestabilidad cromosómica pueden mostrar roturas extensas cuando se enfrentan a clastógenos que inducen roturas de doble hebra y, por lo
tanto, daño cromosómico. Por lo tanto, era necesario distinguir entre estas enfermedades, basándose en variaciones en su fenotipo celular. Para la AF, puede ser más
preciso puntuar tanto el número de roturas como el número de formaciones radiales por celda para llegar al diagnóstico adecuado. El término radial se usa para describir
cualquier figura cromosómica con interacciones entre cromátidas, la mayoría de las veces involucrando dos cromosomas. La unión aberrante resultante de las cromátidas
después de las rupturas ocurre casi exclusivamente entre cromosomas no homólogos [37]. Dado que el aumento de la formación de radiales parece ser bastante
específico de las células FA expuestas a MMC y / o DEB, estas cifras se adoptan como criterio de valoración para el diagnóstico de células FA, además de la frecuencia de
roturas por célula. Sin embargo, con la aparición de datos sobre el aumento de la rotura cromosómica tras el tratamiento de células de otros síndromes de inestabilidad
cromosómica con agentes de reticulación del ADN [38], es fundamental documentar las características clínicas y los antecedentes familiares de todos los pacientes
sometidos a pruebas de AF. También es importante tener en cuenta que algunos laboratorios usan DEB solo en sus pruebas de rotura y documentan el número promedio
de roturas / celda como su punto final. Es fundamental documentar las características clínicas y los antecedentes familiares de todos los pacientes a los que se les realiza
la prueba de AF. También es importante tener en cuenta que algunos laboratorios usan DEB solo en sus pruebas de rotura y documentan el número promedio de roturas
/ celda como su punto final. Es fundamental documentar las características clínicas y los antecedentes familiares de todos los pacientes que se someten a la prueba de AF. También es importan
13.2.2 Mosaicismo somático en la anemia de Fanconi
El aumento de la inestabilidad genómica en la AF permite que las mutaciones de reversión se acumulen en una proporción de la sangre del
paciente, lo que en algunos casos conduce a un fenotipo más leve o una remisión hematológica completa [39]. La clonación de algunos de los
genes FA ha permitido la caracterización molecular del evento de reversión y ha revelado varios mecanismos, que incluyen, entre otros, la
conversión génica, la recombinación intragénica y la acumulación de mutaciones en puntos críticos de CpG [40-42]. Aunque la reversión somática
en las células sanguíneas de los pacientes con AF puede corregir las manifestaciones hematológicas, desafortunadamente no permite que el
paciente escape a la predisposición a las neoplasias malignas. De hecho, en ocasiones, estos pacientes son diagnosticados más tarde en la vida
debido al desarrollo de carcinomas de células escamosas raros de cabeza y cuello. una categoría de neoplasias que es rara en la población general
pero común en la AF, revisada en [43]. En estos casos, si el análisis de rotura de una muestra de sangre es normal, a pesar de una fuerte sospecha
clínica de AF, se recomienda una biopsia de piel para el análisis de rotura de fibroblastos.
El diagnóstico temprano de AF puede permitir un control regular de anemia, MDS / AML y tumores sólidos. Debido a que el diagnóstico de AF basado
únicamente en las características clínicas puede ser difícil, los médicos se han basado en la prueba citogenética de células sanguíneas, de médula ósea o de
piel de pacientes con AF en función de su hipersensibilidad a los agentes de reticulación del ADN. Esta hipersensibilidad se ilustra por la incapacidad de
reparar los enlaces cruzados del ADN, lo que muy probablemente da como resultado roturas de doble hebra. (Se incluye un protocolo detallado para el
análisis de roturas en la sección Métodos aportados al final de este capítulo).
El siguiente es un algoritmo para la prueba de AF: Primero, se documentan las características clínicas del paciente y se establece la sospecha
de AF. En segundo lugar, se envía una muestra de sangre a un laboratorio de citogenética para realizar pruebas de rotura. Si es positivo, se
obtiene una biopsia de piel para establecer una línea celular de fibroblastos que se utilizará para la asignación del grupo de complementación.
También se pueden utilizar otros métodos alternativos, como el análisis de proteínas, para asignar grupos de complementación [44]. Si se ha
clonado el gen del grupo de complementación identificado, se lleva a cabo la secuenciación para identificar las mutaciones deletéreas. Esta
información se utiliza posteriormente para pruebas de portadores y diagnóstico prenatal. En muchos laboratorios se ofrece el diagnóstico
prenatal mediante análisis de rotura de amniocitos o muestreo de vellosidades coriónicas, pero sigue siendo controvertido.
13.3 Síndrome de Bloom

El síndrome de Bloom es un trastorno autosómico recesivo poco común (incidencia estimada en 1 de cada 1.000.000 de nacidos
vivos) que se caracteriza por baja estatura, inmunodeficiencia, sensibilidad al sol, eritema facial y mayor predisposición al
cáncer. Las células de los pacientes con síndrome de Bloom muestran inestabilidad cromosómica ilustrada por roturas
cromosómicas, formación radial y un aumento en la incidencia de intercambio de cromátidas hermanas (SCE) [45]. Esta última
manifestación celular es el rasgo citogenético más característico y consistente del síndrome de Bloom y se utiliza para el
diagnóstico celular. Los SCE aparecen como demarcaciones nítidas en la intensidad de la tinción a lo largo de una cromátida,
con el patrón de tinción opuesto en la cromátida adyacente (consulte el Capítulo 6, Figura 6.24). En un entorno de laboratorio, la
inducción de SCE requiere dos rondas de replicación en presencia de BrdU.
La proteína mutada en el síndrome de Bloom es BLM, un 3 ′ hasta 5 ′ RecQ helicasa, que funciona en recombinación homóloga o recombinación durante
la replicación, y es probable que pueda evitar un aducto de ADN durante la fase S [46, 47]. Aunque se dispone de una prueba de diagnóstico molecular
basada en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), el SCE sigue siendo el marcador más distintivo de esta enfermedad (consulte el Protocolo 12.4,
Política de análisis de rotura cromosómica de la anemia de Fanconi para obtener un protocolo detallado sobre el análisis de intercambio de cromátidas
hermanas). Actualmente, el diagnóstico clínico se basa en diagnósticos genéticos moleculares y citogenéticos. Este último ofrece un análisis de mutación
dirigido para identificar una mutación causante de enfermedad que se encuentra principalmente en la población judía asquenazí (2281 delta 6ins7) [48]. La
prueba de portador se basa en técnicas moleculares, mientras que el diagnóstico prenatal se puede realizar citogenéticamente.
13.4 Ataxia-telangiectasia
La A ‐ T es una enfermedad autosómica recesiva (incidencia estimada en 1 de cada 100.000 nacidos vivos) caracterizada por una degeneración
neurológica progresiva secundaria a disfunción cerebelosa. Los síntomas generalmente se presentan entre uno y cuatro años de edad e incluyen
ataxia de las extremidades superiores e inferiores, apraxia oculomotora, deficiencia en la inmunidad mediada por células que hace que los
pacientes con A ‐ T sean susceptibles a la infección y coreoatetosis. Además, los pacientes A ‐ T también muestran hipoplasia tímica, alta
concentración sérica de alfafetoproteína, restricción del crecimiento y telangiectasias de diferentes partes del cuerpo, particularmente la
conjuntiva bulbar [49]. Otra característica importante de esta enfermedad es la sensibilidad de los pacientes con A ‐ T a la radiación ionizante y su
muy alto riesgo de desarrollar cáncer, principalmente leucemia y tumores linfoides [50, 51].
El diagnóstico de A ‐ T se basa en los hallazgos clínicos, que incluyen dificultad para hablar, ataxia del tronco, apraxia oculomotora,
antecedentes familiares, neuroimagen y presencia de telangiectasias. Las pruebas para respaldar el diagnóstico incluyen alfa-fetoproteína sérica,
encontrado elevado en ~ 95% de los pacientes A ‐ T, identificación de reordenamientos equilibrados que involucran a los cromosomas 7 y 14 en el cariotipo
de rutina y radiosensibilidad in vitro. Las pruebas genéticas moleculares se complican por el gran tamaño de la Cajero automático gen, junto con la amplia
distribución y diversidad de mutaciones encontradas en pacientes A ‐ T. Sin embargo, el análisis de secuencia del Cajero automático
La región de codificación está disponible sobre una base clínica. La secuenciación detecta aproximadamente el 95% de Cajero automático alteraciones de secuencia, pero
omite mutaciones intrónicas y deleciones heterocigotas. Cajero automático funciona como una quinasa que es esencial para el punto de control del ciclo celular G1 a S y
fosforila p53 y otras proteínas en respuesta a la radiación ionizante [52].
13.5 Síndrome de rotura de Nijmegen

El síndrome de rotura de Nijmegen (NBS) es una enfermedad autosómica recesiva rara, con una prevalencia estimada de 1 de cada 100.000
nacidos vivos (más común en los europeos del este / poblaciones eslavas) [53] caracterizada por deficiencia del crecimiento, facies de "pájaro",
microcefalia progresiva y discapacidad intelectual de leve a moderada [54]. Los pacientes con NBS son propensos a infecciones respiratorias,
neoplasias malignas, especialmente linfomas de células B, e insuficiencia ovárica prematura [55]. Anteriormente se pensaba que era una variante
de A ‐ T debido a características citogenéticas y celulares similares, ahora se sabe que el síndrome de rotura de Nijmegen (NBS) es causado por
mutaciones en el Nibrin ( NBN) gen, y ser una entidad clínica distinta de A ‐ T. Aunque los pacientes con NBS no tienen ataxia ni telangiectasias,
ambas enfermedades tienen características citogenéticas y celulares indistinguibles. Además, varias líneas de evidencia han demostrado que NBN y
Cajero automático funcionan en la misma vía en respuesta al daño del ADN inducido por radiación ionizante [56]. NBN, anteriormente conocido como
NBS1, parece estar fosforilado por Cajero automático y forma focos nucleares con Mre11 y Rad50 para revertir el daño por radiación ionizante. Esto
proporcionó una explicación de las características celulares y citogenéticas compartidas de las dos enfermedades. De hecho, de manera similar a la A ‐ T, la
inestabilidad cromosómica se ilustra por la alta incidencia de inversiones y translocaciones que involucran a los cromosomas 7 y 14 (ver Figura 13.3) [57]. Los
puntos de corte más comúnmente involucran los genes receptores de inmunoglobulinas y células T. El diagnóstico definitivo de NBS requiere la
demostración de una mutación causante de enfermedad en ambos alelos del NBN gene. Dichas pruebas están disponibles sobre una base clínica. Se
identificó una deleción truncada homocigótica de 5 pb (657del5) en aproximadamente el 100% de los pacientes eslavos y en aproximadamente el 70% de los
pacientes norteamericanos. Por lo tanto, el diagnóstico genético molecular generalmente se realiza primero mediante pruebas para esta mutación común
[58]. La secuenciación completa de genes se realiza solo después de que pruebas previas hayan revelado que la mutación 657del5 está ausente, la proteína
nibrina está ausente o truncada y las células son radiosensibles. Esta última estrategia de prueba se ofrece únicamente con fines de investigación. El
conocimiento de la mutación deletérea es útil para la prueba de portador y el diagnóstico prenatal.
Figura 13.3 t (7; 14) en el síndrome de rotura de Nijmegen (NBS) y ataxia-telangiectasia (at). La inestabilidad cromosómica se ilustra por una alta
incidencia de inversiones y translocaciones que involucran a los cromosomas 7 y 14. Los puntos de corte más comúnmente involucran los genes del
receptor de células T. e inmunoglobulina.
13.6 Síndrome de inmunodeficiencia, inestabilidad centromérica y anomalías faciales

El síndrome de inmunodeficiencia, inestabilidad centromérica y anomalías faciales (ICF) es un trastorno autosómico recesivo poco común con
aproximadamente 50 pacientes notificados en todo el mundo [59]. Las personas afectadas son en su mayoría de ascendencia europea, y solo se
informó de dos familias japonesas no emparentadas. La presentación clínica incluye inmunodeficiencia prolongada debido a la disminución de los
niveles de inmunoglobulina sérica a pesar de la presencia de linfocitos de células B. La agammaglobulinemia es a menudo el resultado de una
reducción de dos o tres clases de inmunoglobulinas a niveles indetectables. La mayoría de los pacientes tienen inmunodeficiencia humoral, pero
un número considerable presenta inmunodeficiencia combinada. La mayoría de las infecciones resultantes afectan los pulmones o el tracto
gastrointestinal. Los pacientes con ICF también pueden presentar anomalías faciales que no son muy notables. Estos incluyen una amplia, puente
nasal plano; hipertelorismo; Pliegues epicánticos; orejas de implantación baja; frente alta; protuberancia de la lengua; y restricción del crecimiento
[60].
Además de los hallazgos clínicos, el diagnóstico de este síndrome se basa principalmente en anomalías cariotípicas
observadas en muestras de sangre periférica estimuladas con fitohemaglutinina (mitógeno de células T) o hierba cariota
(mitógeno de células B). Estas anomalías incluyen reordenamientos en la heterocromatina yuxtacentromérica,
principalmente de los cromosomas 1 y 16, con los cromosomas 2, 9 y 10 afectados en ocasiones [61]. Las anomalías
incluyen descondensación de la región qh de los cromosomas 1 y 16, ramificaciones múltiples de muchas copias de
brazos cromosómicos unidos en la región pericentromérica y deleciones de todo el brazo en los cromosomas antes
mencionados (figura 13.4) [62]. Esta inestabilidad centromérica sólo se ha observado en linfocitos ICF estimulados y muy
raramente en células de médula ósea o fibroblastos [63].
El síndrome de ICF es la única enfermedad humana asociada con la hipometilación del ADN genómico. El gen mutado en esta enfermedad es DNMT3B
( Genes de la ADNmetiltransferasa) ubicados en el brazo largo del cromosoma 20 en q11.2. Las mutaciones bialélicas suelen residir en la porción
C-terminal de la proteína que contiene el dominio catalítico [64]. Se ha demostrado que los pacientes con ICF tienen actividad proteica residual de
al menos uno de sus DNMT3B alelos. DNMT3B es una metiltransferasa de novo que es esencial para el desarrollo. Es una proteína nuclear que se
colocaliza con heterocromatina pericéntrica en algunas, pero no en todas, las células madre embrionarias murinas. Aunque no se ha observado
incidencia de cáncer en el síndrome de ICF, los estudios de investigación han demostrado la relación entre niveles reducidos de metilación
genómica y desarrollo de linfoma, así como hipometilación del ADN satélite 2 y 3 en varios cánceres [65-67].
La propuesta más actual es que la hipometilación de secuencias no codificantes repetidas en tándem en células linfoides ICF tiene un efecto
trans sobre la expresión de uno o más genes implicados en la maduración o activación de linfocitos. Esto puede suceder a través de la
compartimentación nuclear y el secuestro de reguladores transcripcionales.
Figura 13.4 metafase de sangre periférica de un paciente con ICF. Nótese la ramificación múltiple de cuatro copias del brazo largo del cromosoma 1
(flecha).
13.7 síndrome de Roberts

También conocido como síndrome de pseudotalidomida, síndrome de Roberts ‐ SC y síndrome de SC ‐ focomelia, el síndrome de Roberts es un trastorno
autosómico recesivo raro con más de 100 individuos reportados en todo el mundo. No se pueden encontrar estimaciones precisas de la prevalencia de esta
enfermedad, pero se sabe que la consanguinidad de los padres es común. La presentación clínica incluye restricción severa del crecimiento, malformaciones
de extremidades y manos, anomalías craneofaciales y defectos en los sistemas cardíaco, renal y genital (revisado en [68]). La restricción del crecimiento es un
hallazgo constante y se encuentra tanto prenatal como postnatalmente. Los recién nacidos pueden presentar curvas de crecimiento por debajo del percentil
3, y este hallazgo se correlaciona con la gravedad de las malformaciones craneofaciales y de las extremidades. La tetrafocomelia es una característica
destacada, con el fenotipo que varía desde una ausencia total de brazos y piernas con dedos rudimentarios (en mortinatos) hasta una leve reducción en las
extremidades. Las extremidades superiores suelen verse más afectadas que las inferiores. Se han notificado varios casos con malformaciones de las
extremidades superiores, mientras que no se han notificado casos de extremidades inferiores sin anomalías de las extremidades superiores [69]. Las
malformaciones de la mano también son frecuentes, y el pulgar se ve afectado por la posición proximal o la digitalización, la hipoplasia o la agenesia. El
quinto dedo es el siguiente más afectado por la clinodactilia, y los casos graves pueden tener solo un dedo. Las anomalías craneofaciales se presentan con
una marcada variabilidad, que van desde las alas nasales hipoplásicas leves y los hemangiomas hasta el labio y paladar hendido y el encefalocele. El
hipertelorismo es común y resulta de órbitas muy espaciadas (revisado en [68]).
El diagnóstico clínico del síndrome de Roberts se basa en la presentación clínica junto con los hallazgos citogenéticos, a saber, la
separación prematura del centrómero. Este fenómeno consiste en la repulsión de la heterocromatina constitutiva, sobre todo en las
regiones heterocromáticas de los cromosomas 1, 9 y 16, los brazos cortos de los cromosomas acrocéntricos y el brazo largo del
cromosoma Y. Varios otros cromosomas pueden mostrar el aspecto de una vía de ferrocarril [70, 71]. La repulsión de la heterocromatina
se observa en casos leves y graves de la enfermedad y se utiliza como criterio de diagnóstico. No se observa en muestras de sangre de
heterocigotos obligados. Se detecta más fácilmente mediante bandas C y preparaciones teñidas regularmente, y menos con el
tratamiento con tripsina / Giemsa.
El gen del síndrome de Roberts se clonó en 2005, mediante la identificación de siete familias afectadas por la enfermedad en dos pueblos
aislados cerca de Bogotá, Colombia [72]. Una búsqueda en todo el genoma del locus asociado a la enfermedad mediante el mapeo de
homocigosidad de un ancestro común identificó la ESCO2 gen mutado en este síndrome. La caracterización adicional del producto proteico reveló
similitud con la levadura ECO1p, una proteína esencial para el establecimiento de la cohesión de la cromátida hermana. Los defectos en la
cohesión de la cromátida conducen a la activación del punto de control tomitótico y al crecimiento celular deficiente. Durante la embriogénesis, la
pérdida de células progenitoras podría excluir la presencia de un número suficiente de células necesarias para el desarrollo de estructuras
afectadas en este síndrome [72]. Diagnóstico molecular de este síndrome mediante secuenciación de la ESCO2 gen está disponible sólo en base a
investigación.
13.8 síndrome de Werner

El síndrome de Werner (SW) es una enfermedad autosómica recesiva (incidencia estimada en 1 en un millón de nacidos vivos) caracterizada
clínicamente por cambios cutáneos similares a la esclerodermia, cataratas, calcificación subcutánea, arteriosclerosis prematura, diabetes mellitus
y una facies arrugada y envejecida prematuramente [73 ]. Los pacientes con SW tienen una alta incidencia de varios tipos de cáncer, incluidos
sarcomas, meningiomas y carcinomas.
La frecuencia de daño cromosómico espontáneo no es muy llamativa en las células del WS. Sin embargo, se observó una variedad de
reordenamientos cromáticos en los fibroblastos de piel con WS. Este fenómeno, denominado "mosaicismo de translocación abigarrado", describe
el patrón de aberraciones cromosómicas, incluidas las translocaciones, inversiones y deleciones que se observan en fibroblastos y células
linfoblastoides del SW [74]. Además, las células WS tienen una vida útil abreviada en los cultivos, posiblemente debido a la pérdida acelerada de
los telómeros de las cromátidas hermanas individuales, lo que provoca una respuesta al daño del ADN que conduce a la inestabilidad genómica
[75, 76].
El gen mutado en WS se identificó en 1996 mediante clonación posicional [77]. La proteína, WRN, es una helicasa y una exonucleasa que funciona en la
reparación, recombinación, transcripción y replicación del ADN. Todas las mutaciones de WRN encontradas hasta la fecha causan una terminación
prematura, provocando la pérdida de la proteína, lo que a su vez podría promover la inestabilidad genómica y la enfermedad a través de eventos celulares
mediados por recombinación.
El diagnóstico de SW se basa principalmente en los hallazgos clínicos. En 1997, Goto [78] propuso el diagnóstico clínico de SW si estaban
presentes al menos cuatro de los siguientes hallazgos: consanguinidad, apariencia facial y hábito corporal característicos, senescencia prematura,
cambios cutáneos similares a la esclerodermia y trastornos endocrino-metabólicos. el aumento de la concentración urinaria o sérica de ácido
hialurónico [79] o la presencia de mosaicismo de translocación variado no se utilizan para un diagnóstico definitivo de SW. Las pruebas clínicas
para el síndrome de Werner ahora están disponibles como pruebas de un solo gen o mediante la secuenciación de próxima generación de genes
involucrados en los síndromes progeroides.
13.9 Síndrome de Rothmund-Thomson

El síndrome de Rothmund-Thomson (RTS) es una enfermedad autosómica recesiva caracterizada clínicamente por poiquilodermia de inicio
temprano, baja estatura, anomalías esqueléticas, cataratas juveniles y una alta incidencia de neoplasias malignas cutáneas o extracutáneas. Se
desconoce su incidencia, pero se han informado alrededor de 300 personas con esta afección en estudios científicos.
Se han observado varias anomalías cromosómicas en los fibroblastos del SRT, en particular el mosaicismo de la trisomía 8 y los cromosomas
supernumerarios en mosaico [80]. Del mismo modo, otros grupos encontraron una inestabilidad cromosómica similar en las células linfoblásticas
de pacientes con SRT, incluidas aberraciones que afectaban al cromosoma 8, como la duplicación parcial de 8q y la tetrasomía 8q [81]. Esto sugirió
que el RTS puede estar asociado con reordenamientos cromosómicos clonales que causan mosaicismo somático adquirido.
Al igual que el síndrome de Bloom y el WS, el SRT también es causado por una mutación en un gen helicasa. Kitao y col. [82] identificaron
mutaciones en el gen RECQL4 en un subconjunto de pacientes con SRT. Las pruebas genéticas moleculares están disponibles clínicamente e
implican análisis de secuencia, así como análisis de deleción / duplicación de la RECQL4 gene.
13.10 Ensayos de aptitud

Debido a que el College of American Pathologists (CAP) no proporciona pruebas de aptitud para el diagnóstico de estas enfermedades raras, cada
laboratorio clínico debe desarrollar su propio protocolo, generalmente en asociación con otro laboratorio para estudios de intercambio ciego.
Las enfermedades de la vía de reparación por escisión de nucleótidos, como xeroderma pigmentoso, síndrome de Cockayne y
tricotiod ytrofia no se tratan en este capítulo. Estas enfermedades no tienen un componente de diagnóstico citogenético y el lector
interesado puede consultar otras revisiones de la literatura.
GRAMO perdedor
Adenoma: El adenoma es un tumor benigno del tejido epitelial, como la mucosa del estómago, el intestino delgado y el colon, en
qué células tumorales forman glándulas o estructuras similares a glándulas.
Consultado el 26 de agosto de 2011 de http://en.wikipedia.org/wiki/Adenoma
Agammaglobulinemia: Afección de la sangre, ya sea congénita o adquirida, en la que hay una ausencia casi total o completa de gammaglobulina
y una falla del cuerpo para formar anticuerpos, lo que resulta en una ocurrencia frecuente de enfermedades infecciosas. Las gammaglobulinas
son una fracción proteica del plasma sanguíneo que responde a la estimulación de antígenos, como bacterias o virus, formando anticuerpos:
administrados terapéuticamente en el tratamiento de algunas enfermedades virales.
Agammaglobulinemia. (Dakota del Norte). Dictionary.com íntegro. Consultado el 27 de agosto de 2011 en el sitio web Dictionary.com: http: //dictionary.reference. com /
navegar / Agammaglobulinemia
Agenesia: Ausencia o desarrollo incompleto de un órgano o parte del cuerpo.

Agenesia de la Asociación Americana de Psicología (APA). (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Consultado el 16 de octubre de
2011, del sitio web Dictionary.com: http://dictionary.reference.com/browse/agenesis
Agentes alquilantes que causan enlaces cruzados entre cadenas de ADN (ICL): Los agentes alquilantes se denominan así debido a su capacidad
para alquilar muchos grupos funcionales nucleofílicos en las condiciones presentes en las células. La alquilación es la
transferencia de un grupo alquilo de una molécula a otra. Altera la función celular al formar enlaces covalentes con los grupos
amino, carboxilo, sulfhidrilo y fosfato en moléculas biológicamente importantes.
Consultado el 26 de agosto de 2011 de http://en.wikipedia.org/wiki/Alkylates_agents
Alfafetoproteína: Un antígeno producido en el hígado fetal que puede aparecer en determinadas enfermedades de los adultos, como el hígado.
cáncer, y cuyo nivel en el líquido amniótico se puede utilizar para detectar determinadas anomalías fetales, como el síndrome de Down y la
espina bífida.
alfafetoproteína. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 16 de octubre de 2011, del sitio web Dictionary.com: http: //
dictionary.reference.com/browse/alpha fetoprotein
Terapia de andrógenos: La terapia de reemplazo de andrógenos es un tratamiento hormonal que a menudo se prescribe para contrarrestar los efectos del
hipogonadismo masculino. También se prescribe para disminuir los efectos o retrasar el inicio del envejecimiento masculino normal. Además, la terapia de reemplazo
de andrógenos se usa para hombres que han perdido su función testicular debido a una enfermedad, cáncer u otras causas.
http://en.wikipedia.org/wiki/Androgen_replacement_therapy
Anemia: Una deficiencia cuantitativa de hemoglobina, a menudo acompañada de un número reducido de glóbulos rojos y que causa
palidez, debilidad y dificultad para respirar.
Consultado el 26 de agosto de 2011 de http://dictionary.reference.com/browse/anemia
Aplasia: Una falla en el desarrollo que resulta en la ausencia de un órgano o tejido.

Diccionario médico de Mosby, octava edición. © 2009, Elsevier. 26/8/2011 http://medical‐dictionary.thefreedictionary.com/aplasia
Apraxia: La apraxia es un trastorno causado por daños en áreas específicas del cerebro. La apraxia se caracteriza por la pérdida de la capacidad
de ejecutar o realizar movimientos intencionados aprendidos, a pesar de tener el deseo y la capacidad física para realizar los movimientos.
Consultado el 16 de octubre de 2011 en http://en.wikipedia.org/wiki/Apraxia
Arteriosclerosis: Cambios degenerativos en las arterias, caracterizados por engrosamiento de las paredes de los vasos y acumulación de calcio con la
consiguiente pérdida de elasticidad y disminución del flujo sanguíneo.
arteriosclerosis. (Dakota del Norte). Dictionary.com íntegro. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com http: //dictionary.reference. com /
navegar / arteriosclerosis
Población judía asquenazí: Descendientes de las comunidades judías medievales a lo largo del Rin en Alemania desde
Alsacia en el sur hasta Renania en el norte.
Ataxia: Pérdida de la capacidad de coordinar el movimiento muscular. También se llama disinergia, falta de coordinación.
ataxia. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com http: //
dictionary.reference.com/browse/ataxia
Atresia: Ausencia o cierre congénito de un orificio corporal normal o un conducto tubular, como el ano, el intestino o el conducto auditivo
externo. La degeneración y reabsorción de uno o más folículos ováricos antes de la maduración.
atresia. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 26 de agosto de 2011 del sitio web Dictionary.com http: //
dictionary.reference.com/browse/atresia
Par de bases (pb): Dos bases de ADN complementarias entre sí (A y T o G y C) que se unen a las hebras complementarias de ADN
para formar la característica de doble hélice del ADN.
Consultado el 27 de agosto de 2011 en http://www.medterms.com/script/main/art.asp?articlekey=2440
Habito corporal: El físico o la estructura corporal. El término "body habitus" es algo redundante, ya que habitus en sí mismo significa
"físico o estructura corporal".
Consultado el 27 de agosto de 2011 en http://www.medterms.com/script/main/art.asp?articlekey=21671
Conjuntiva bulbar: La parte de la conjuntiva (la delicada membrana mucosa que cubre el globo ocular y la superficie inferior del
párpado) que cubre la cara anterior de la esclerótica (la túnica fibrosa resistente que forma la envoltura externa del ojo y cubre todo
el globo ocular excepto la córnea ; el blanco del ojo. También llamado esclerótico) y el epitelio superficial de la córnea (la porción
anterior transparente y convexa de la capa fibrosa externa del globo ocular que cubre el iris y la pupila y es continua con la
esclerótica).
conjuntiva bulbar. (Dakota del Norte). WordNet ® 3.0. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com http://dictionary.reference.com/browse/ bulbar
conjunctiva; conjuntiva. (Dakota del Norte). Collins English Dictionary - 10ª edición completa e íntegra. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com:
http://dictionary.reference.com/browse/conjunctiva; esclerótico. (Dakota del Norte). y córnea. (nd) La herencia americana ®
Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com: http://dictionary.reference.com/browse/sclera
Manchas café con leche: Marcas de nacimiento pigmentadas de color marrón claro. El nombre café au lait en francés significa "café con leche" y se refiere a
su color marrón claro. También se les llama "manchas de jirafa".

http://en.wikipedia.org/wiki/Caf%C3%A9_au_lait_spot. Consultado el 8‐26‐11.
Disfunción cerebelosa: El cerebelo se encuentra en la parte inferior de la espalda del cerebro, justo encima del tronco encefálico.
Es responsable del movimiento, el equilibrio y el tono muscular. La región vestibular del oído interno ayuda al cerebelo al proporcionar
información relacionada con la posición de la cabeza. Los síntomas de la disfunción vestibular cerebelosa se manifiestan principalmente
como dificultad para caminar (ataxia), mareos y movimientos oculares anormales (nistagmo).
Consultado el 27 de agosto de 2011 http://www.ehow.com/facts_5771848_cerebellar‐vestibular‐dysfunction_.html
Coreoatetosis: Una afección caracterizada por movimientos anormales del cuerpo que tienen una combinación coreica (irregular,
espasmódica, movimientos involuntarios de las extremidades o músculos faciales) y atetoide (una afección caracterizada por
movimientos rítmicos incontrolados, especialmente de dedos, manos, cabeza y lengua , causada por patrón de lesión cerebral).
coreoatetosis. (Dakota del Norte). y coreico de The American Heritage ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio
web Dictionary.com http://dictionary.reference.com/browse/choreoathetosis. atetoide (Dakota del Norte). Collins English Dictionary - 10ª edición
completa e íntegra. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com: http://dictionary.reference.com/browse/athetoid
Clastogen: Inducir roturas de doble hebra.
Clinodactilia: Deflexión permanente de uno o más dedos.
clinodactilia. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 21 de agosto de 2011 del sitio web Dictionary.com http: //
dictionary.reference.com/browse/clinodactyly
Pérdida de audición conductiva: Pérdida auditiva debido a problemas con los huesos del oído medio Pérdida auditiva conductiva.
(Dakota del Norte). WordNet ® 3.0. Obtenido el 26 de agosto de 2011 del sitio web Dictionary.com http://dictionary.reference.com/browse/Conductive Hearing loss
Enlace covalente: Un enlace covalente es una forma de enlace químico que se caracteriza por compartir pares de electrones entre
átomos.
Consultado el 26 de agosto de 2011 de http://en.wikipedia.org/wiki/Covalent_bond
Cretinismo: Enfermedad congénita debida a la ausencia o deficiencia de la secreción tiroidea normal, caracterizada por deformidad
física, enanismo y discapacidad intelectual y, a menudo, por bocio.
Hipotiroidismo. (Dakota del Norte). Dictionary.com íntegro. Consultado el 25 de agosto de 2011 del sitio web Dictionary.com: http://dictionary.reference.com/
browse / Hypothyroidism
Criptorquidia: La criptorquidia es la ausencia de uno o ambos testículos del escroto. Es el nacimiento más común
defecto con respecto a los genitales masculinos.
Consultado el 26 de agosto de 2011 en http://en.wikipedia.org/wiki/Cryptorchidism
Diepoxibutano DEB: El diepoxibutano (DEB) es un agente alquilante bifuncional que induce una alta incidencia de cromo
algunas roturas en cultivos de linfocitos de pacientes con AF. Es un carcinógeno conocido, que puede inactivarse rápidamente con ácido
clorhídrico concentrado (HCl); Los frascos y pipetas de cultivo desechables deben enjuagarse con HCl antes de desecharlos. 1 DEB tiene una
clasificación T (advertencia de peligro biológico tóxico) y, por lo tanto, se recomiendan los siguientes PPE (equipo de protección personal):
mascarillas, respirador de cara completa (EE. UU.), Guantes, gafas, cartucho de respirador de combinación multipropósito (EE. UU.) Y tipo ABEK
(EN14387) ) filtro de respirador. 2
1 Porto B, Chiecchio L, Gaspar J, Faber A, Pinho L, Rueff J, Malheiro I. Papel de la hemoglobina en la protección de linfocitos cultivados
contra diepoxibutano (DEB), evaluado por rotura cromosómica inducida in vitro. Investigación de mutaciones 2003; 536: 61–67.
2 Sigma Aldrich http://www.sigmaaldrich.com/ghs‐hazard

DNMT3B: Una metiltransferasa de novo que es esencial para el desarrollo. Es una proteína nuclear que se colocaliza con heterocromatina
pericéntrica en algunas, pero no en todas, las células madre embrionarias murinas.
Uréteres dobles: Existencia de un segundo uréter en un lado que puede ser una conexión completa del riñón al
vejiga o un tubo parcial que forma una bolsa ciega. La mayoría son asintomáticos, pero algunos se acompañan de cele uretero ectópico.
También se llama duplicación ureteral.
Diccionario médico de Mosby, octava edición. © 2009, Elsevier. 26/8/2011 http://medical‐dictionary.thefreedictionary.com/double+ureters
Encefalocele: Un espacio congénito en el cráneo que generalmente resulta en una protuberancia de material cerebral. También se llama cráneo
bífido, cefalocele, craneocele.
encefalocele. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com: http: //
dictionary.reference.com/browse/encephalocele
Endorreduplicación: Forma de poliploidía o polisomía caracterizada por el redoblamiento de los cromosomas sin separación del
centrómero, lo que da lugar a cromosomas de cuatro hebras en profase y metafase.
Pliegues epicánticos: Un pliegue epicántico, pliegue epicanto o epicanto es un pliegue cutáneo del párpado superior que cubre la esquina
interna (canto medial) del ojo.
http://en.wikipedia.org/wiki/Epicanthic_fold
Eritema: Enrojecimiento de la piel, causado por hiperemia (aumento del flujo sanguíneo) de los capilares en las capas inferiores de la piel.
Ocurre con cualquier lesión, infección o inflamación de la piel.
Consultado el 16 de octubre de 2011 en http://en.wikipedia.org/wiki/Erythema
Exonucleasa: Cualquiera de un grupo de enzimas que catalizan la hidrólisis de nucleótidos individuales desde el final de una cadena de ADN o ARN.
exonucleasa. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com: http: //
dictionary.reference.com/browse/exonuclease
Fibroblasto: Célula estrellada o fusiforme con procesos citoplásmicos presentes en el tejido conectivo, capaz de formar fibras de
colágeno.
fibroblasto. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com: http: //
dictionary.reference.com/browse/fibroblast
Hiperplasia nodular focal: La hiperplasia nodular focal (FNH) es un tumor benigno del hígado (tumor hepático), que es el
segundo tumor de hígado más prevalente (el primero es el hemangioma hepático).
Consultado el 8‐26‐2011 http://en.wikipedia.org/wiki/Focal_nodular_hyperplasia
Helicasa: Cualquiera de las diversas enzimas que catalizan el desenrollamiento y la separación del ADN o ARN de doble hebra durante su
replicación helicasa.
(Dakota del Norte). Diccionario médico de Merriam ‐ Webster. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com: http://dictionary.reference.com/browse/ helicase
Hemangiomata: El angioma es un tumor benigno que consiste principalmente en vasos sanguíneos dilatados o recién formados (hemangioma)
o vasos linfáticos (linfangioma).
hemangiomata. (Dakota del Norte). Dictionary.com íntegro. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com: http://dictionary.reference.com/
browse / hemangiomata
Carcinomas hepatocelulares: El carcinoma hepatocelular (HCC, también llamado hepatoma maligno) es el tipo más común de cáncer
de hígado. La mayoría de los casos de CHC son secundarios a una infección viral por hepatitis (hepatitis B o C) o cirrosis (el
alcoholismo es la causa más común de cirrosis hepática).
Kumar V, Fausto N, Abbas A (eds). R base patológica de la enfermedad obbins & Cotran ( 7ª ed.) 2003; Saunders: 914–917.
Recombinación homóloga: La recombinación homóloga es un tipo de recombinación genética en la que las secuencias de nucleótidos se
intercambian entre dos moléculas de ADN similares o idénticas. Es más ampliamente utilizado por las células para reparar con precisión las
roturas dañinas que ocurren en ambas hebras de ADN, conocidas como roturas de doble hebra. La recombinación homóloga también
produce nuevas combinaciones de secuencias de ADN durante la meiosis.
Obtenido el 16 de octubre de 2011 de http://en.wikipedia.org/wiki/Homologous_recombination
Riñones en herradura: Anomalía en la que los riñones derecho e izquierdo están unidos en un extremo por tejido.
http://medical‐dictionary.thefreedictionary.com/horseshoe+kidneys
Hipertelorismo: Distancia anormal entre dos órganos emparejados.

hipertelorismo. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 16 de octubre de 2011, del sitio web Dictionary.com: http:
// dictionary.reference.com/browse/hypertelorism
Hipogenitales: Fallo parcial o completo de los genitales en el desarrollo, a menudo como consecuencia del hipogonadismo
(funcionamiento inadecuado de los testículos o los ovarios, manifestado por deficiencias en la gametogénesis o la secreción de
hormonas gonadales).
hipogenitales / hipogonadia. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Consultado el 26 de agosto de 2011 del sitio web
Dictionary.com: http://dictionary.reference.com/browse/hypogonadia
Hipopigmentación: Pigmentación disminuida en una parte del cuerpo o tejido (como la piel) hipopigmentación.
(Dakota del Norte). Diccionario médico de Merriam ‐ Webster. Consultado el 26 de agosto de 2011, del sitio web Dictionary.com: http://dictionary.reference.com/browse/
hypopigmentation
Hipoplasia: Afección de desarrollo detenido en la que un órgano o una parte permanece por debajo del tamaño normal o en un estado
inmaduro.
hipoplasia. (Dakota del Norte). Diccionario médico de Merriam ‐ Webster. Consultado el 25 de agosto de 2011 del sitio web Dictionary.com: http://dictionary.reference.com/ browse /
hypoplasia
Hipospadias: Anomalía del desarrollo de la uretra en la que una parte del canal uretral está abierta en la superficie inferior
del pene o en el perineo. Una anomalía similar en la que la uretra se abre hacia la vagina.
hipospadias. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 26 de agosto de 2011 del sitio web Dictionary.com: http: //
dictionary.reference.com/browse/hypospadias
Hipotiroidismo: Anomalía de la glándula tiroides caracterizada por una producción insuficiente de hormona tiroidea, que puede
resultar en una disminución de la tasa metabólica basal, provocando aumento de peso y fatiga. 1 Afección producida por una
deficiencia de la secreción tiroidea, que produce bocio, mixedema (ver más adelante) y, en los niños, cretinismo (ver antes). 2
1 Hipotiroidismo. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario de Ciencias. Obtenido el 25 de agosto de 2011 del sitio web Dictionary.com. 2
http://dictionary.reference.com/browse/Hypothyroidism
Mutaciones intrónicas: Una mutación (generalmente una sustitución de bases) dentro de un intrón que crea un sitio de empalme alternativo que compite con los
sitios de empalme normales durante el procesamiento del ARN. Tal mutación da como resultado una proporción de ARN mensajero maduro con secuencias de
intrones empalmadas incorrectamente.

Consultado el 16 de octubre de 2011 en http://ghr.nlm.nih.gov/glossary=intronicmutation
Quinasa: Enzima que cataliza la conversión de una proenzima en una enzima activa. Enzima que cataliza la transferencia
de un grupo fosfato de un donante, como ADP o ATP, a un aceptor. quinasa.
(Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com: http: // dictionary.
reference.com/browse/kinase
Macrocitemia: Cantidad inusualmente grande de macrocitos en la sangre. También se llama macrocitosis.

macrocitemia. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 26 de agosto de 2011 del sitio web Dictionary.com:
http://dictionary.reference.com/browse/macrocythemia
Macrocitosis: ver macrocitemia

Meduloblastoma: El meduloblastoma es un tumor cerebral primario altamente maligno que se origina en el cerebelo o
fosa posterior.
Consultado el 26 de agosto de 2011 de http://en.wikipedia.org/wiki/Medulloblastoma
Metilación: La adición de un grupo metilo a los residuos de citosina y adenina en el ADN que conduce a la modificación
epigenética del ADN y la reducción de la expresión génica y la producción de proteínas.
Consultado el 16 de octubre de 2011 en http://en.wiktionary.org/wiki/methylation
Metiltransferasa: Cualquiera de varias enzimas que catalizan la transferencia de grupos metilo de un compuesto a otro. También
se llama transmetilasa. metiltransferasa.
(Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com http: //
dictionary. reference.com/browse/methyltransferase
Microcefalia: Pequeñez anormal de la cabeza. También se llama nanocefalia.

microcefalia. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 25 de agosto de 2011 del sitio web Dictionary.com: http: //
dictionary.reference.com/browse/microcephaly
Microftalmia: Pequeñez anormal del ojo. También se llama microftalmos, nanoftalmía, nanoftalmos.
Microftalmia. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 25 de agosto de 2011 del sitio web Dictionary.com:
http://dictionary.reference.com/browse/Microphthalmia
Mixedema: Afección caracterizada por engrosamiento de la piel, embotamiento de los sentidos e intelecto y dificultad para hablar.
asociado con hipotiroidismo.
mixedema. (Dakota del Norte). Dictionary.com íntegro. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com: http://dictionary.reference.com/ browse /
myxedema
Neutropenia: La presencia de cantidades anormalmente pequeñas de neutrófilos (ver más adelante) en la sangre. También se llama neutrófilo.
leucopenia.
neutropenia. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Consultado el 26 de agosto de 2011 del sitio web Dictionary.com: http: //
dictionary.reference.com/browse/neutropenia
Neutrófilos: Un glóbulo blanco fagocítico que tiene un núcleo lobulado y gránulos de neutrófilos en el citoplasma.
neutrófilos. (Dakota del Norte). Dictionary.com íntegro. Consultado el 26 de agosto de 2011, del sitio web Dictionary.com: http://dictionary.reference.com/browse/
neutrophils
Heterocigotos obligados: Un individuo de una familia que se ha demostrado que porta una copia de un alelo recesivo por haber tenido
una progenie afectada que heredó dos.
www.answers.com/topic/obligate‐heterozygote
Oculomotor: Relacionado con o provocando movimientos del globo ocular. Perteneciente o relativo al nervio motor ocular común.
oculomotor. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Consultado el 16 de octubre de 2011, del sitio web Dictionary.com:
http: // dictionary.reference.com/browse/oculomotor
p53: Un gen supresor de tumores que, en una forma defectuosa, tiende a asociarse con un alto riesgo de ciertos cánceres (a partir del
colon, pulmón y mama).
p53. (Dakota del Norte). Diccionario médico de Merriam ‐ Webster. Obtenido el 16 de octubre de 2011 del sitio web Dictionary.com: http: //dictionary.reference.
com / navegar / p53
Palidez: Palidez, como de la piel.

palidez. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 26 de agosto de 2011 del sitio web Dictionary.com: http: //
dictionary.reference.com/browse/pallor
Pancitopenia: Una reducción anormal del número de glóbulos rojos (RBS), glóbulos blancos (WBC) y sangre.
plaquetas en la sangre; también: un trastorno (como anemia aplásica) caracterizado por tal reducción.
pancitopenia. (Dakota del Norte). Diccionario médico de Merriam ‐ Webster. Consultado el 26 de agosto de 2011, del sitio web Dictionary.com: http: //dictionary.reference. com /
navegar / pancitopenia
Arteriosis del conducto persistente: El conducto arterioso persistente (CAP) es un trastorno congénito del corazón en el que el conducto arterioso del
recién nacido no se cierra después del nacimiento. Los primeros síntomas son poco comunes, pero en el primer año de vida incluyen un mayor trabajo
respiratorio y un escaso aumento de peso. Con la edad, el CAP puede provocar insuficiencia cardíaca congestiva si no se corrige. Un conducto arterioso
persistente puede ser idiopático (es decir, sin una causa identificable) o secundario a otra afección.
http://en.wikipedia.org/wiki/Patent_ductus_arteriosus 26/8/2011 Consultado el
Fosforilatos: Para agregar un grupo fosfato a (una molécula orgánica).
16/10/11 en http://www.thefreedictionary.com/phosphorylates
Poiquilodermia: Una hiperpigmentación y telangiectasia abigarrada de la piel, seguida de atrofia.
poiquilodermia. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 16 de octubre de 2011, del sitio web Dictionary.com:
http: // dictionary.reference.com/browse/poikiloderma
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR): Una técnica in vitro para sintetizar rápidamente grandes cantidades de un ADN dado.
segmento que implica separar el ADN en sus dos hebras complementarias, unir un cebador a cada hebra única al final del
segmento de ADN dado donde comenzará la síntesis, usar la ADN polimerasa para sintetizar el ADN de dos hebras de cada
hebra simple y repetir el proceso - abreviatura PCR.
reacción en cadena de la polimerasa. (Dakota del Norte). Diccionario médico de Merriam ‐ Webster. Obtenido el 16 de octubre de 2011, del sitio web Dictionary.com: http: //
dictionary.reference.com/browse/polymerase chainreaction
Clonación posicional: La clonación posicional es una técnica de laboratorio que se utiliza para localizar la posición de un gen asociado a una enfermedad.
a lo largo del cromosoma. Este enfoque funciona incluso cuando hay poca o ninguna información disponible sobre la base bioquímica de la
enfermedad. La clonación posicional se utiliza junto con el análisis de ligamiento. Implica el aislamiento de segmentos de ADN de ping
parcialmente superpuestos que progresan a lo largo del cromosoma hacia un gen candidato.
Obtenido el 16 de octubre de 2011 de http://www.genome.gov/glossary/?id=162
Células progenitoras: Una célula progenitora es una célula biológica que, como una célula madre, tiene una tendencia a diferenciarse en un tipo específico
de célula, pero ya es más específica que una célula madre y es empujada a diferenciarse en su célula "objetivo". La diferencia más importante entre las
células madre y las células progenitoras es que las células madre pueden replicarse indefinidamente, mientras que las células progenitoras solo pueden
dividirse un número limitado de veces. La controversia sobre la definición exacta permanece y el concepto aún está evolucionando.
Consultado el 16 de octubre de 2011 en http://en.wikipedia.org/wiki/Progenitor_cell
Estenosis pulmonar: Estrechamiento anormal del orificio entre la arteria pulmonar y el ventrículo derecho también llamado estenosis
pulmonar.
estenosis pulmonar. (Dakota del Norte). Diccionario médico de Merriam ‐ Webster. Consultado el 26 de agosto de 2011, del sitio web Dictionary.com: http: // dictionary.
reference.com/browse/estenosis pulmonar
Defectos de los rayos radiales: La anomalía de Duane es el resultado del desarrollo inadecuado de ciertos nervios que controlan el movimiento de los
ojos. Esta afección limita el movimiento ocular hacia afuera (hacia el oído) y, en algunos casos, puede limitar el movimiento ocular hacia adentro (hacia
la nariz). A medida que el ojo se mueve hacia adentro, la abertura del ojo se vuelve más estrecha y el globo ocular puede retroceder (retraerse) en su
cuenca. Las anomalías óseas en las manos incluyen pulgares malformados o ausentes, un pulgar adicional o un pulgar que parece un dedo. También es
común la ausencia parcial o total de huesos en el antebrazo. En conjunto, estas anomalías de la mano y el brazo se denominan malformaciones de los
rayos radiales.
http://en.wikipedia.org/wiki/Duane‐radial_ray_syndrome 26/8/11
Hipoplasia renal: Riñón anormalmente pequeño que es morfológicamente normal pero que tiene un número reducido de nefronas o
nefronas más pequeñas.
La herencia americana ® Diccionario médico © 2007, 2004 de Houghton Mifflin Company. Publicado por Houghton Mifflin Company. Reservados todos
los derechos. http://medical‐dictionary.thefreedictionary.com/renal+hypoplasia
Esclerodermia: Engrosamiento patológico y endurecimiento de la piel causado por hinchazón y engrosamiento del tejido fibroso. También
se llama dermatoesclerosis.
esclerodermia. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Obtenido el 16 de octubre de 2011, del sitio web Dictionary.com http: //
dictionary.reference.com/browse/scleroderma
Escoliosis: Afección de curvatura lateral de la columna, que puede tener una sola curva o curvas compensatorias primarias y
secundarias y ser fija o móvil.
escoliosis. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Consultado el 26 de agosto de 2011, del sitio web Dictionary.com: http: // dictionary.
reference.com/browse/scoliosis
Tetrafocomelia: Síndrome de tetrafocomelia-labio-paladar hendido: defectos simétricos de las extremidades similares a focomelia similares a los
observados en la embriopatía por talidomida (de ahí el sinónimo síndrome de SC-pseudotalidomida), contracturas en flexión de las
articulaciones, anomalías faciales, micrognatia, cabello rubio escaso, córnea turbia, retraso El crecimiento y la discapacidad intelectual
ocasional, la focomelia SC y el síndrome de Roberts son considerados por algunos como la misma entidad denominada síndrome de la
focomelia SC de Roberts-SC. El síndrome se observó por primera vez en una familia con apellido que comienza con S y otra con apellido que
comienza con C.
http://www.rightdiagnosis.com/medical/tetraphocomelia_cleft_lip_palate_syndrome.htm
Trombocitopenia: Disminución anormal del número de plaquetas en sangre. También se llama trombopenia.
trombocitopenia. (Dakota del Norte). La herencia americana ® Diccionario médico de Stedman. Consultado el 26 de agosto de 2011, del sitio web Dictionary.com http:
// dictionary.reference.com/browse/thrombocytopenia
Testículos no descendidos: ver criptorquidia

Mosaicismo de translocación abigarrado: Ocurrencia repetida, dentro de cultivos de fibroblastos de piel humana, de una multiplicidad de
reordenamientos cromosómicos.
Obtenido el 16 de octubre de 2011 de http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1222585
Defecto septal ventricular: Un defecto del tabique ventricular (VSD) es un defecto en el tabique ventricular, la pared que divide los ventrículos
izquierdo y derecho del corazón.
http://en.wikipedia.org/wiki/Ventricular_septal_defect
Tumor de Wilms: El tumor de Wilms o nefroblastoma es un cáncer de riñón que se presenta típicamente en niños, rara vez en adultos. Su
nombre común es un epónimo, en referencia al Dr. Max Wilms, el cirujano alemán (1867-1918) que describió por primera vez este tipo de
tumor.
http://www.whonamedit.com/doctor.cfm/2109.html consultado el 26 de agosto de 2011 http://en.wikipedia.org/wiki/Wilms_tumor#cite_note‐1
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síndrome de Werner. Proc Natl Acad Sci EE. UU. 2007; 104 (7): 2205-2210.
77. Yu CE, Oshima J, Fu YH, Wijsman EM, Hisama F, Alisch R, Matthews S, Nakura J, Miki T, Ouais S, Martin GM, Mulligan J,
Schellenberg GD. Clonación posicional del gen del síndrome de Werner. Ciencia 1996; 272 (5259): 258–262.
78. Goto M. Deterioro jerárquico de los sistemas corporales en el síndrome de Werner: implicaciones para el envejecimiento normal. Envejecimiento mecánico
Dev 1997; 98 (3): 239-254.

79. Tanabe M, Goto M. Elevación del nivel de hialuronano sérico en el síndrome de Werner. Gerontología 2001; 47 (2): 77–81.
80. Ying KL, Oizumi J, Curry CJ. Síndrome de Rothmund ‐ Thomson asociado con mosaicismo por trisomía 8. J Med Genet 1990;
27 (4): 258–260.
81. Lindor NM, Devries EM, Michels W, Schad CR, Jalal SM, Donovan KM, Smithson WA, Kvols LK, Thibodeau SN, Dewald GW.
Síndrome de Rothmund ‐ Thomson en hermanos: evidencia de mosaicismo adquirido in vivo. Clin Genet 1996; 49 (3):
124-129.
82. Kitao S, Shimamoto A, Goto M, Miller RW, Smithson WA, Lindor NM, Furuichi Y. Las mutaciones en RECQL4 causan un
subconjunto de casos de síndrome de Rothmund-Thomson. Nat Genet 1999; 22 (1): 82–84.
Sección de protocolo contribuido

IMPORTANTE: Ningún protocolo incluido en este manual debe usarse para pruebas clínicas a menos que el laboratorio que realiza el procedimiento haya validado
adecuadamente que la prueba funciona según lo esperado y proporciona resultados precisos y adecuados. Cada laboratorio también debe consultar la SDS del fabricante
para conocer las instrucciones de manipulación, advertencias de seguridad, eliminación y requisitos de etiquetado de todos los productos químicos utilizados en el
laboratorio.
Protocolo 13.1 Procedimiento de rotura cromosómica de la anemia de Fanconi para sangre total
Contribuido por la Universidad de Salud y Ciencias de Oregon (OHSU) Knight Diagnostic Laboratories, Portland, OR
Principio
Para el diagnóstico del trastorno genético recesivo de la anemia de Fanconi mediante la detección del aumento de la rotura cromosómica causada por
clastógenos cromosómicos específicos. La mitomicina C (MMC) y el diepoxibutano (DEB) son clastógenos cromosómicos conocidos. Los individuos con un
mecanismo de reparación cromosómico normal cuando se exponen a niveles bajos de MMC durante 96 horas o DEB durante 48 horas muestran un nivel bajo
de rotura (<6% de células con radiales como regla) mientras que las células de sujetos con anemia de Fanconi expuestas a concentraciones comparables de
los clastógenos muestran formas radiales marcadamente aumentadas y múltiples.
Advertencias de seguridad
Todas las muestras de tejido deben manipularse como biopeligrosas, siguiendo las precauciones universales. Utilice la campana de flujo laminar para todos los pasos
hasta el centrifugado de la cosecha. Use una bata de laboratorio y guantes protectores para todos los pasos a través de la preparación de diapositivas. Evite los derrames
y el contacto de cualquier material biológico con la piel o las membranas mucosas. Limpie los derrames inmediatamente con Sanimaster 4 fresco (preparado
semanalmente). Cubra los cortes con vendas protectoras incluso cuando use guantes. Deseche las pipetas Pasteur en un recipiente para objetos punzantes. Lávese bien
las manos después de quitarse los guantes.
La mitomicina C, el colcemid y el diepoxibutano son sustancias químicas tóxicas y deben manipularse en consecuencia. Evite el contacto con la piel. El
diepoxibutano (DEB) es un CARCINÓGENO, tóxico, mutagénico, irritante. Enjuague durante 15 minutos en caso de contacto. Se absorbe fácilmente a través
de la piel, use guantes y bata de laboratorio en todo momento.
La mitomicina C (MMC) es un CARCINÓGENO, tóxico, mutagénico, irritante; puede ser fatal si se ingiere o se absorbe a través de la piel. La
sobreexposición puede causar trastornos reproductivos. Enjuague la piel o los ojos durante 15 minutos en caso de contacto. Busque atención médica en caso
de ingestión. Use guantes y bata de laboratorio en todo momento durante la manipulación.
Colcemid ® es mutagénico, tumorigénico, embriotóxico y teratogénico con sobreexposición aguda. Use guantes y bata de laboratorio en todo momento
durante la manipulación. Evite el contacto con la piel o la inhalación, enjuague durante 15 minutos en caso de contacto accidental.
Muestra
Los linfocitos se obtienen mediante la obtención de sangre periférica anticoagulada. Se requieren de tres a cinco ml de sangre entera
heparinizada con sodio para obtener resultados óptimos. Sin embargo, se pueden aceptar otros anticoagulantes, aunque no se recomiendan. Las
muestras deben mantenerse a temperatura ambiente y enviarse al laboratorio lo antes posible para una viabilidad óptima. Las muestras enviadas
por correo urgente generalmente dan resultados adecuados.
II. Materiales
Suministros
1. Micropipetas, 200 μ L, 20 μ L
2. Puntas de pipeta ART 200 con tapones
3. Tubo de polipropileno Corning, 15 mL (Tiendas de laboratorio # 64.2005) Pipetas
4. Pasteur, 5¾ pulgadas (Tiendas de laboratorio # 63.1614) Bulbos de pipeta, 2 mL
5. (Tiendas de laboratorio # 63.0202)
6. Pipetas estériles, 5 ml (Falcon n. ° 7543)
Medios de cultivo y reactivos madre
10. RPMI 1640 (Gibco ® # 11875‐051) Suero fetal bovino

11. (Irvine # 3000) Glutamina, 200 mM (Gibco ® # 250030‐016)
12. Gentamicina 50 mg / ml (BioWhittaker # 17‐5282)
13. Medio incompleto
14.
50 ml de suero fetal bovino

10 ml de glutamina
0,5 ml de gentamicina
439,5 ml RPMI 1640
Total = 500 mL; coloque una alícuota en un frasco de 250 ml y etiquete como medio incompleto (también conocido como medio de médula ósea).
15. Forma M de fitohemaglutinina (Gibco ® # 10576‐023)

Según sea necesario, agregue 0,5 ml de PHA ‐ M a 5 ml de medio incompleto. Este es ahora un medio completo que se utiliza para cultivar linfocitos de
sangre periférica.
KCl
dieciséis. (Mallinckpost (MCB) # 6838)
KCl hipotónico = 5,59 g / L de H desionizado 2 O
Distribuya en alícuotas en botellas de 100 mL y refrigere. Caliente a 37 ° C antes de usar.
17. Metanol, absoluto (Mallinckpost # 3016)
El metanol es EXTREMADAMENTE inflamable, puede provocar incendios repentinos. Puede ser fatal o causar ceguera si se ingiere. Nocivo si se inhala o se
absorbe a través de la piel. No se puede convertir en no venenoso. En caso de contacto, enjuagar la piel o los ojos durante 15 minutos, trasladar al aire libre en caso
de inhalación. Busque atención médica en caso de ingestión. Use guantes, bata de laboratorio y gafas protectoras en todo momento.
18. Ácido acético glacial (EM Science # AX0073‐9)
El ácido acético es inflamable como líquido y vapor. Evite el contacto con la piel, inhalación o ingestión. Puede ser fatal si es ingerido.
Provoca quemaduras graves en los ojos y la piel. En caso de contacto, enjuagar la piel o los ojos durante 15 minutos, trasladar al aire libre en caso de inhalación. No
induzca el vómito si se ingiere. Use guantes, bata de laboratorio y gafas protectoras en todo momento.
Fijador = 3 partes de metanol por 1 parte de ácido acético glacial. Hazlo fresco antes de cada uso.
19. El 10 de Hanks × (Gibco ® # 14180‐020)

Hanks '(1 ×) = 9 partes de agua estéril bidestilada por 1 parte de Hanks' (10 ×)
20. Colcemid ® 10 µg / ml (Gibco ® # 15210‐016)
21. Mitomicina C (MMC) - Sigma C # M ‐ 0503
Solución de reserva
Agregue 5 ml de agua destilada estéril al vial que contiene 2 mg de mitomicina C.
Solución de trabajo
Agregue 0.05 mL (50 μ L) de caldo a 9.95 mL de RPMI 1640. Cuando 0.1 mL (100 μ L) de solución de trabajo se agrega a 5 ml de
medio completo, la concentración final será
40 ng / ml.
Prepare una solución madre y de trabajo de mitomicina cada 6 meses.
22. Diepoxibutano (DEB) - Diepóxido de 1,3-butadieno (Sigma # 20,253-3, 5 g)
Solución de reserva
Suma 10 μ L stock DEB a 10mL RPMI 1640.
Solución de trabajo
Suma 50 μ L de diluido a 10 ml de RPMI 1640.

Cuando 0,1 ml (100 μ L) de solución de trabajo se agrega a 5 ml de medio completo, la concentración final será
100 ng / ml.
Prepare diluciones de DEB y solución de trabajo frescas cada vez (vida media de 4 días).
23. Tinción de Wright (MCB # WX005‐3)

La solución de trabajo se prepara añadiendo 0,3 g de polvo de Wright a 200 ml de metanol. Agite durante 1 minuto y luego deje reposar
otros 9 minutos. Filtre a través de papel de filtro Whatman n. ° 1 en una botella marrón.
III. Procedimiento de preparación y cultivo de sangre
1. Deje que la sangre en el vacutainer se asiente durante 1 hora. Si el hematocrito es aproximadamente del 50%, continúe con el n. ° 2. Si es menos del 50%,
retire la parte superior y pipetee el suero hasta que tenga una proporción de 50:50 de células a suero. Mezclar bien invirtiendo el vacutainer.
2. Determine la cantidad de sangre que se agregará a cada tubo de cultivo, de acuerdo con el recuento de glóbulos blancos y el hematocrito del
paciente.
■ ssl Para pacientes con recuentos normales y hematocritos normales, agregue de 0,35 a 0,4 ml de sangre completa heparinizada por cultivo con
una pipeta de 1 ml.
■ En el caso de pacientes anémicos, agregue 0,45 a 0,5 ml de la mezcla 50:50 de células y suero.
■ Para pacientes con anemia grave, se recomienda la capa leucocitaria. Es posible que se necesite toda la capa leucocitaria de 5 ml de
sangre total por cultivo en pacientes con anemia grave.
3. Agregue la sangre a cada uno de los cuatro tubos de centrífuga de polipropileno de 15 ml que contienen 5 ml de medio de cultivo RPMI 1640
complementado con suero bovino fetal al 10%, glutamina al 2% y Gibco al 1%. ® forma de fitohemaglutinina ‐ M (PHA) y gentamicina al 0,1%
(50 mg / ml).
4. Etiquete y trate cada cultivo de la siguiente manera (ver Nota 1, Uso de dos clastógenos):
Cultura B = sin clastógeno (control interno) (use cinta blanca)

Cultivo MMC1 = 40 ng / mL MMC, concentración final (use cinta naranja)
Cultivo MMC2 = 20 ng / mL MMC, concentración final (use cinta naranja)
Cultivo DEB3 = 100 ng / mL DEB, concentración final (use cinta azul)
Cultivo MMC3 = 40 ng / mL MMC, concentración final (configurado para NB o niños) [use cinta naranja]
Debe establecerse un grupo de control normal para cada nuevo lote de clastógenos. Configure tres culturas de la siguiente manera:
Cultura B = sin clastógeno [use cinta blanca]

Cultivo MMC1 = 40 ng / mL MMC, concentración final [use cinta naranja]
Cultivo DEB3 = 100 ng / mL DEB, concentración final [use cinta azul]
Siempre que sea posible, deben probarse controles positivos de AF. Si no hay ninguno disponible, sería aconsejable probar una línea celular de
linfoblastos FA positiva.
5. Envuelva todos los cultivos, excepto el B, con papel de aluminio para protegerlos contra la degradación por luz de los clastógenos, especialmente el
6. MMC. Incubar cultivos de MMC durante 96 horas, añadiendo MMC a T = 0; Los cultivos de DEB se hacen crecer durante 72 horas, añadiendo DEB a T =
24 h.
7. Cosecha por procedimiento estándar.
8. Teñir los portaobjetos con tinción de Wright durante 2 minutos sin tratamiento previo (sin bandas).
9. Califique de 50 a 100 células de cultivos de MMC1 y DEB3 en busca de formaciones RADIAL y rotura. Si no se obtiene un número
adecuado de metafases de los cultivos de MMC1, utilice cultivos de MMC2. Califique el cultivo B para rotura espontánea solo si
MMC es positivo.
10. Documentar fotográficamente los RADIALES y el aumento de roturas en todos los cultivos puntuados. Prepare la
11. cuadrícula como se muestra. Utilice datos de controles y pacientes con AF.
Número de celdas con: 3
Nombre del paciente Clastogen Conc 0 1 2 4 5 6 7 >8 Radiales% de celdas No total

(ng / mL) brk brk brk brk brk brk brk brk brk 1
> 1 con radiales de celdas
MMC 40 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 50
Debutante 100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 50
Control normal MMC 40 33 11 1 4 0 0 0 0 0 1 2 50
promedio ( N = 10) rango: 0–4 1
Control normal Debutante 100 46 3 1 0 0 0 0 0 0 0 0 50
promedio ( N = 10) rango: 0-1 1
Control fanconi MMC 40 2 2 1 1 1 1 0 0 0 42 84 50

promedio ( N = 11) distancia:
30-100 2
Control Fanconi DeB 100 15 10 8 5 2 1 1 1 1 6 12 50

promedio ( N = 11) distancia:
0–32 2
1 Ni los cultivos tratados con mitomicina C (MMC) ni con diepoxibutano (DeB) mostraron un aumento de roturas o formas radiales. no hay evidencia para el diagnóstico de anemia de
Fanconi (Fa). Si Fa tiene una fuerte sospecha clínica, un estudio de rotura de fibroblastos puede ser útil para abordar el potencial mosaicismo somático.
2Tanto los cultivos tratados con mitomicina C (MMC) como con diepoxibutano (DeB) mostraron un exceso de rotura y formas radiales. esto es consistente con el diagnóstico
clínico de anemia de Fanconi.
IV. Notas
1. Uso de dos clastógenos: El fundamento del sistema de doble clastógeno es proporcionar controles internos, MMC para DEB y viceversa, ya que
se agregan en diferentes momentos. El uso de dos concentraciones de MMC asegura aún más la adición de clastógeno. Además, las células
demasiado sensibles pueden funcionar mejor con la concentración más baja.
V. Lecturas adicionales
1. Cervenka J, Hirsch BA. Diferenciación citogenética de la anemia de Fanconi, la anemia aplásica "idiopática" y la anemia de
Fanconi heterocigotos. Soy J Med Genet 1983; 15: 211‐223.
2. Auerbach A, Rogatko A, Schroeder ‐ Kurth TM. Registro internacional de anemia de Fanconi: relación de los síntomas clínicos con la sensibilidad
al diepoxibutano. Sangre 1989 (febrero); 73 (2): 391‐396.
Protocolo 13.2 Procedimiento suplementario; Separación Ficoll de sangre entera

Principio
Las densidades específicas para los tipos de células individuales que se encuentran dentro de la sangre total no son uniformes. Los linfocitos de
sangre de una muestra de sangre completa con recuentos bajos de glóbulos blancos (WBC) y / o porcentajes de linfocitos bajos (% L) pueden
requerir concentración para cultivo y eventual análisis citogenético. La centrifugación de sangre total contra un líquido de alta densidad
(Ficoll-Paque) tiene éxito en la separación de los linfocitos de los otros componentes que se encuentran dentro de la mezcla de sangre (es decir,
suero, glóbulos rojos, plaquetas, etc.). Con este procedimiento, se pueden extraer linfocitos de volúmenes relativamente grandes de sangre total
(5 a 25 ml) que, de otro modo, resultarían insuficientes en el recuento de linfocitos para un cultivo exitoso.
Todas las muestras de tejido deben considerarse peligrosas. Utilice procedimientos de manipulación de riesgo biológico y siga las precauciones universales.
1. Utilice la campana de flujo laminar para todos los pasos hasta el centrifugado de la cosecha.
2. Use una bata de laboratorio y guantes protectores para todos los pasos de la preparación de diapositivas. Cubra los cortes con vendas protectoras incluso
cuando use guantes. Lávese bien las manos después de quitarse los guantes.
3. Evite los derrames y el contacto de cualquier material biológico con la piel o las membranas mucosas. Limpie los derrames inmediatamente con
Sanimaster 4 fresco (recién hecho semanalmente).
4. Las pipetas Pasteur, las agujas y las jeringas deben desecharse en el recipiente para objetos punzantes. No doble, vuelva a tapar, rompa ni retire las agujas de la jeringa
desechable. Deseche todas las agujas en un recipiente rojo para objetos punzantes etiquetado.
5. Ficoll-Paque es un irritante potencial para los ojos, el sistema respiratorio y la piel. Este producto también puede ser dañino si se ingiere. Aún no
se han determinado las propiedades toxicológicas completas.
Muestra
Los linfocitos se obtienen mediante la obtención de sangre periférica anticoagulada. Para obtener resultados óptimos, se requieren de 5 a 25 ml de sangre
completa heparinizada con sodio. Las muestras deben mantenerse a temperatura ambiente y enviarse al laboratorio lo antes posible para una viabilidad
óptima. Las muestras enviadas por correo urgente generalmente dan resultados adecuados.
II. Materiales
1. Tubo de polipropileno Corning, 15 ml (tiendas de laboratorio n. ° 64.2005)

2. Pipetas estériles: 1 ml (Falcon n. ° 7521), 5 ml (Falcon n. ° 7543), 10 ml (Falcon n. ° 7551), 25 ml (Falcon n. ° 7525)
3. RPMI 1640 “Medios completos” (consulte el Protocolo 3.1, Procedimiento de cultivo y recolección de sangre para obtener recetas e instrucciones)
4. Ficoll ‐ Paque PLUS (Amerisham GE Health # 171440002)
5. Solución hipotónica: 0.075 M KCl (Mallinckrodt # 6838)
Agregue 5.59 g de KCl a 1 litro de H desionizado 2 O. Distribuir en alícuotas en frascos de 100 ml y almacenar a 4 ° C. La vida útil es de 4 semanas. Caliente
a 37 ° C antes de usar.
6. Fijador: Agregue 3 partes de metanol absoluto (Mallinckrodt # 3016) a 1 parte de ácido acético glacial (EM Science # AX0073‐9). Hazlo fresco antes de
cada uso. ADVERTENCIA: El metanol es EXTREMADAMENTE inflamable y puede provocar incendios repentinos. Puede ser fatal o causar ceguera si se
ingiere. Nocivo si se inhala o se absorbe a través de la piel. No se puede convertir en no venenoso. En caso de contacto, enjuagar la piel o los ojos
durante 15 minutos, trasladar al aire libre en caso de inhalación. Busque atención médica en caso de ingestión. Use guantes, bata de laboratorio y gafas
protectoras en todo momento. El ácido acético es inflamable como líquido y vapor. Evite el contacto con la piel, inhalación o ingestión. Puede ser fatal si
es ingerido. Provoca quemaduras graves en los ojos y la piel. En caso de contacto, enjuagar la piel o los ojos durante 15 minutos, trasladar al aire libre en
caso de inhalación. No induzca el vómito si se ingiere. Use guantes, bata de laboratorio y gafas protectoras en todo momento.
III. Método
A. Procedimiento de separación de Ficoll
1. Evalúe el volumen total de sangre que ha llegado para cultivo. Necesitará por lo menos un volumen igual de Ficoll para realizar
la separación.
2. Calcule cuántos tubos de polipropileno Corning de 15 ml necesitará para realizar la separación en función del requisito de que cada tubo a
centrifugar necesitará entre 2 y 6 ml de sangre. Tenga en cuenta: Cada tubo utilizado debe destinarse a un solo cultivo. Sin embargo, si los
recuentos son extremadamente bajos, es posible que se necesiten varios tubos para que funcione un solo cultivo. No divida un tubo en
varios cultivos.
3. Para cada tubo, agregue el jarabe de Ficoll en al menos un volumen igual al volumen de sangre que se utilizará.
4. SUAVEMENTE, agregue toda la sangre al tubo para que quede encima del jarabe de Ficoll. Tenga cuidado de no invertir, agitar o golpear los tubos de
ninguna manera que haga que el Ficoll y las capas de sangre se mezclen. ¡MANTENIDO EN CAPAS! Notará que en poco tiempo los efectos de la
gravedad comenzarán a atraer pequeñas cantidades de glóbulos rojos hacia la capa de Ficoll. Eso es lo esperado. Centrifugue los tubos a 3000 RPM
5. durante 30 minutos. Utilice una centrífuga con control de clima interno, si está disponible. Las centrifugadoras más antiguas pueden calentarse.
6. Después de la centrifugación, las muestras deben colocarse en capas de la siguiente manera: glóbulos rojos en la parte inferior, jarabe de Ficoll encima, una
pequeña y a veces imperceptible capa de glóbulos blancos (capa leucocitaria) a continuación, y luego el suero sanguíneo en la parte superior.
7. Utilizando una técnica estéril, aspire un poco del suero hasta cerca de la capa leucocitaria. Tenga cuidado de no alterar la capa leucocitaria. A
continuación, aspire el suero restante y la capa leucocitaria. Está bien aspirar también un poco de Ficoll debajo de la capa leucocitaria, pero
trate de mantenerlo al mínimo.
8. Agregue esta capa de capa leucocitaria a 5 ml de RPMI completo en un nuevo tubo de centrífuga de polipropileno de 15 ml. Mezcle bien el contenido
del tubo para diluir y enjuague cualquier Ficoll restante de la capa leucocitaria.
9. Gire el tubo a 1000 RPM durante 10 minutos.
10. Una vez que se completa el centrifugado, debe haber una bolita de linfocitos en la parte inferior del tubo. Utilice este sedimento para cultivar según
sea necesario en lugar de sangre completa, siguiendo el Protocolo 3.1, Procedimiento de cultivo y recolección de sangre en el Capítulo 3, o el Protocolo
13.1, Procedimiento de rotura cromosómica de la anemia de Fanconi.
* * TENGA EN CUENTA **: Se ha observado que los cultivos tratados con Ficoll tienen un número ligeramente mayor de roturas / formaciones radiales
en los cultivos de MMC de pacientes normales que los cultivos de sangre completa típicos. Se recomienda encarecidamente media dosis de MMC (20
ng / ml)). Estos cultivos se pueden tratar de la misma manera que cualquier cultivo no frotado hasta el primer paso de centrifugación en el
procedimiento de recolección. Los cultivos de Ficolled no tienen glóbulos rojos, por lo que se reducen los pasos hipotónicos y fijadores.
B. Cosecha de cultura Ficolled

1. Después del primer centrifugado en el procedimiento de recolección, elimine el sobrenadante. Añada 4 ml de KCl 0,075 M caliente (37 ° C) a cada tubo y resuspenda
el sedimento celular.
2. Tape la muestra y déjela reposar durante 10 a 15 minutos sin centrifugación. Por lo general, puede continuar con los otros tubos no
enrollados en la cosecha y hacerlos girar mientras esta muestra reposa.
3. Después de la espera, agregue 5 gotas de fijador nuevo a cada tubo y mezcle bien. Centrifugue durante 10 minutos a 1000 RPM. Esto se
puede hacer junto con los otros tubos no Ficolled en la cosecha después de que reciben su segundo "hipo".
4. Cada tubo debe tratarse individualmente para este paso. Eliminar el sobrenadante y resuspender el sedimento celular. Agregue 2 ml de
fijador nuevo y mezcle bien. Agregue 2 ml adicionales de fijador y mezcle bien. Repita para cada tubo individual. Centrifugue durante 10
minutos a 1000 RPM.
5. La cosecha del material separado de Ficoll ahora está completa y lista para la fabricación de portaobjetos.
IV. Referencia
1. Ficoll ‐ Paque PLUS. Para in vitro aislamiento de linfocitos. Amerisham Biosciences (manual); 2008. http: // fachschaft.
biochemtech.uni‐halle.de/downloads/chromatography/ficoll.pdf
Protocolo 13.3 Preparación, cultivo, subcultivo y procedimiento de recolección de fibroblastos para anemia
de Fanconi
Principio
Para el diagnóstico del trastorno genético recesivo Anemia de Fanconi mediante la detección del aumento de la rotura cromosómica causada por
clastógenos cromosómicos específicos. La mitomicina C (MMC) y el diepoxibutano (DEB) son clastógenos cromosómicos conocidos. Fibroblastos
de individuos con un mecanismo de reparación cromosómico normal cuando se exponen durante 48 horas a MMC o DEB
muestran roturas de bajo nivel (<6% de células con radiales como guía), mientras que los sujetos con anemia de Fanconi muestran roturas
marcadamente aumentadas y múltiples formas radiales en cultivos tratados con DEB y MMC.
Todas las muestras de tejido deben manipularse como biopeligrosas, siguiendo las precauciones universales. Utilice la campana de flujo laminar para todos los pasos
hasta el centrifugado de la cosecha. Use una bata de laboratorio y guantes protectores para todos los pasos a través de la preparación de diapositivas. Evite los derrames
y el contacto de cualquier material biológico con la piel o las membranas mucosas. Limpie los derrames inmediatamente con Sanimaster 4 fresco (preparado
semanalmente). Cubra los cortes con vendas protectoras incluso cuando use guantes. Deseche las pipetas Pasteur en un recipiente para objetos punzantes. Lávese bien
las manos después de quitarse los guantes.
Mitomicina C, Colcemid ®, y el diepoxibutano son sustancias químicas tóxicas y deben manipularse en consecuencia. Evite el contacto con la piel. El
diepoxibutano (DEB) es un CARCINÓGENO, tóxico, mutagénico, irritante. Enjuague durante 15 minutos en caso de contacto. Se absorbe fácilmente a través
de la piel, use guantes y bata de laboratorio en todo momento.
La mitomicina C (MMC) es un CARCINÓGENO, tóxico, mutagénico, irritante; puede ser fatal si se ingiere o se absorbe a través de la piel. La
sobreexposición puede causar trastornos reproductivos. Enjuague la piel o los ojos durante 15 minutos en caso de contacto. Busque atención médica en caso
de ingestión. Use guantes y bata de laboratorio en todo momento durante la manipulación.
Colcemid ® es mutagénico, tumorigénico, embriotóxico y teratogénico con sobreexposición aguda. Use guantes y bata de laboratorio en todo momento
durante la manipulación. Evite el contacto con la piel o la inhalación, enjuague durante 15 minutos, en caso de contacto accidental.
Muestra
Idealmente, muestras de tejido de al menos 0,5-1 cm 3 se recogen con métodos estériles en recipientes que se pueden cerrar con medio de cultivo estéril
suplementado con suero y antibióticos (medio de transporte). Si el medio de transporte no está disponible, la solución de Ringer estéril (lactada o no lactada)
o la solución salina isotónica estéril son aceptables. Las muestras deben entregarse al laboratorio lo antes posible (hasta 2 días después de la recolección) y
deben estar bien protegidas de las temperaturas extremas. Las muestras enviadas por correo urgente generalmente dan resultados adecuados. Las
muestras de piel deben ser lo suficientemente profundas para incluir la capa de la dermis.
Las muestras inaceptables incluyen muestras secas, congeladas, fijadas con formalina y sobrecalentadas, cada una de las cuales causa la
muerte celular y, por lo tanto, impide el cultivo. En caso de recibir muestras inaceptables, notifique al médico remitente inmediatamente.
II. Materiales
Suministros
1. Placas de Petri de plástico Corning estériles, 35 cm 2

2. Pinzas esterilizadas
3. Tijeras esterilizadas
4. Mangos de bisturí estériles con cuchillas desechables estériles

5. Frascos de cultivo de tejidos Corning T ‐ 25 estériles (n.o 25100)
6. Pipetas Pasteur estériles con tapón de algodón
7. Bombillas de pipeta, 2 ml (tiendas de laboratorio n. ° 63.0202)
8. Pipetas graduadas estériles, 1 mL, 5 mL y 10 mL

9. Microscopio invertido
10. CO 2 incubadora controlada a 37 ° C
Reactivos
1. Colagenasa Worthington tipo I, (# LS004196), 210 unidades / mg
Diluir colagenasa con medio incompleto hasta una concentración final de aproximadamente 1 unidad por ml, redondeando al múltiplo más cercano de
10 (por ejemplo, para 142 U / mg, use 150 ml de medio). Filtrar a través de una unidad de filtración al vacío con 0,2 μ tamaño de poro. Distribuir en
alícuotas en tubos estériles con tapón a presión de 4 ml y congelar. La vida útil es de un año.
2. MEM Alpha completo
una. MEM Alpha (Gibco # 12561)
Suero bovino fetal al 20% (Irvine # 3000)
0.1% de gentamicina (BioWhittaker # 17‐5282)
L ‐ glutamina al 1%. (Gibco # 250030‐016) (Periodo de validez 14 días. Conservar a 4 ° C.)
3. Solución hipotónica (calentar a 37 ° C antes de usar). Preparar:

una. 9 ml de KCl hipotónico 0,075 M
■ 5,59 g de KCl (Mallinckpost # 6838)
■ 1 L de H desionizado 2 O
■ Distribuya en alícuotas en botellas de 100 mL y refrigere.
B. 2,4 ml de H estéril 2 O
C. 0,6 mL de suero fetal bovino
4. Fijador = 3 partes de metanol por 1 parte de ácido acético glacial. Hazlo fresco antes de cada uso.
Metanol, absoluto (Mallinckpost # 3016)

El metanol es EXTREMADAMENTE inflamable, puede provocar incendios repentinos. Puede ser fatal o causar ceguera si se ingiere. Nocivo si se inhala o
se absorbe a través de la piel. No se puede convertir en no venenoso. En caso de contacto, enjuagar la piel o los ojos durante 15 minutos, trasladar al
aire libre en caso de inhalación. Busque atención médica en caso de ingestión. Use guantes, bata de laboratorio y gafas protectoras en todo momento.
Ácido acético glacial (EM Science # AX0073‐9)

El ácido acético es inflamable como líquido y vapor. Evite el contacto con la piel, inhalación o ingestión. Puede ser fatal si es ingerido. Provoca
quemaduras graves en los ojos y la piel. En caso de contacto, enjuagar la piel o los ojos durante 15 minutos, trasladar al aire libre en caso de
inhalación. No induzca el vómito si se ingiere. Use guantes, bata de laboratorio y gafas protectoras en todo momento.
5. HBSS 1 × (solución salina tamponada de

Hanks) 50 ml 10 × HBSS (Irvine Scientific #
9230) 450 ml de agua destilada estéril
6. Colcemid ® 10 µg / mL (Gibco # 15210‐016)
7. Mitomicina C (MMC) (Sigma # M ‐ 0503)
Solución de stock de MMC: Añada 5 ml de agua destilada estéril al vial que contiene 2 mg de mitomicina C.
Solución MMC de trabajo: Agregue 0.05 mL (50 μ L) solución madre de MMC a 9,95 ml de MEM Alpha. Cuando 38 μ Se agrega L de
solución de trabajo a 5 mL de medio completo, la concentración final será de 15 ng / mL. Prepare la solución madre y de trabajo de
mitomicina cada 6 meses.
8. Diepoxibutano (DEB) (Sigma # 20,253-3, 5 g de diepóxido de 1,3-butadieno)
Solución de reserva de DEB: Agregue 10 μ L de DEB a 10 ml de MEM Alpha.
Solución de trabajo DEB: agregue 50 μ L de stock DEB a 10 ml de MEM Alpha.
Cuando se agregan 150 L de solución de trabajo de DEB a 5 ml de medio completo, la concentración final será de 100 ng / ml. Prepare
diluciones de DEB y solución de trabajo frescas cada vez (vida media de 4 días).
9. Tinción de Wright (MCB # WX005‐3)
La solución de trabajo se prepara añadiendo 0,3 g de polvo de Wright a 200 ml de metanol. Agite durante 1 minuto y luego deje reposar
otros 9 minutos. Filtre a través de papel de filtro Whatman n. ° 1 en una botella marrón.
10. Tripsina ‐ EDTA 1 ×
2 ml de tripsina ‐ EDTA 10 × (Gibco # 610‐5400AG) 18
ml de HBSS 1 ×.
11. Gas: 5% CO 2, 5% O 2, 90% N 2
III. Métodos
Procedimiento de preparación y cultivo de fibroblastos FA
Hay dos métodos para establecer cultivos de tejido sólido: el método de colagenasa que disuelve la matriz de fibras de colágeno
y elastina de la muestra, liberando así las células del tejido; y el método de explante en el que se permite que fragmentos de
tejido muy pequeños y triturados se adhieran al matraz y crezcan desde los bordes. Siempre se prefiere el método de la
colagenasa.
A. Preparación de tejidos
1. Enjuague el tejido en HBSS 1 ×. Elimina el exceso de tejido adiposo.

2. Vaya a la B. Método de colagenasa o C. Método de explante.
B. Método de colagenasa
1. Coloque el tejido en un esterilizado de 35 mm. 2 Placa de Petri. Utilice unos 5 mm 2 de tejido por plato. Agregue 4 mL de colagenasa al plato. Pique el tejido
tanto como sea posible para aumentar la superficie total del tejido que está siendo digerido por la colagenasa. Anote el tiempo.
2. Incubar a 37 ° C con 5% de CO 2; comprobar la muestra cada media hora. Cuanto más pequeñas sean las piezas, menos tiempo se necesitará. Compruebe la
disociación del tejido en un microscopio de barrido invertido. Los tejidos deben tener un aspecto translúcido y celular. Si no es así, incube más.
3. Agregue la suspensión de medio celular a un tubo de centrífuga estéril y pipetee vigorosamente para disociar los grumos. Tape los tubos y centrifugue a 1000 RPM
durante 10 minutos a temperatura ambiente.
4. Etiquete los matraces con GL #, matraz #, fecha, tipo de tejido y nombre del paciente.
5. Decantar el sobrenadante y resuspender el sedimento celular en 1‐2 ml de medio completo MEM Alpha, según el tamaño del sedimento.
Siembre 2 ml de suspensión en un matraz T-25. Gas con 5% CO 2, 5% O 2, y 90% N 2 durante 5 a 10 segundos, cerrar herméticamente e incubar a
37 ° C. Compruebe el crecimiento y alimente con 2 ml de medio a los 3-5 días.
6. Vaya al paso D. Subcultivo de cultivos de fibroblastos FA de tejidos sólidos.
C. Método de explante
1. Transfiera el tejido limpio y apropiado a una placa de Petri. Humedezca con 1 ml de medio y pique cada tejido con tijeras y / o bisturí
en fragmentos lo más pequeños posible.
2. Transfiera los fragmentos con el medio de 1 ml a matraces T-25 y gire el matraz para permitir que la suspensión celular cubra la superficie del área de
crecimiento. Si hay más de 1 ml de medio, las células no estarán en contacto con la superficie de crecimiento y es posible que no se adhieran. Retire el
exceso de medio, si es necesario.
3. Etiquete los matraces con GL #, matraz #, fecha, tipo de tejido y nombre del paciente.
4. Gas con 5% CO 2, 5% O 2, 90% N 2 durante 5-10 segundos; apriete la tapa.

5. Déjelo reposar en la incubadora durante 3-5 días. Luego, verifique el crecimiento de los cultivos y alimente de la siguiente manera: si el crecimiento es bueno
observado, verter el medio y alimentar con 3 mL de medio fresco. Si no se observa crecimiento, retire el medio con una pipeta y reemplácelo
suavemente con 1 ml de medio fresco. Re-gas de cultivos que no están creciendo.
6. Los cultivos producirán mejores cosechas si se subcultivan primero. Subcultivo cuando se observan tres o más colonias por matraz que llenan el campo
de menor aumento durante la microscopía y parecen mitóticas.
D. Subcultivo de cultivos de fibroblastos FA de tejidos sólidos
Los cultivos de fibroblastos se subcultivan cuando el crecimiento es tal que, cuando se transfieren, el matraz subcultivado alcanza la confluencia en 3-5 días.
1. Vierta el medio en un contenedor de desechos de riesgo biológico.
2. Enjuague las células en el matraz dos veces con 2 ml de solución de HBSS 1x y pipetee en un recipiente de desechos. Agregue 1 ml de solución de tripsina ‐
EDTA 1x e incube en la placa de calentamiento o en la incubadora a 37 ° C durante 1 a 5 minutos, hasta que las células se redondeen y floten. Golpee el
frasco con fuerza sobre la encimera para estimular el desprendimiento de la celda.
3. Dependiendo de la actividad mitótica de los cultivos, seleccione un matraz T-25 para las células que se dividen rápidamente.
4. Pipetee las células varias veces contra el matraz de cultivo para estimular la suspensión de células individuales. Pipetee un volumen apropiado de células
en el nuevo matraz T-25. El volumen que se va a transferir depende de la densidad y la actividad celular y varía de aproximadamente 0,1 ml a 0,9 ml.
5. Etiquete el matraz con la designación del cultivo (A, B, C, etc.), GL #, nombre del paciente, fecha, tejido de origen. Alimente ambos matraces con medio
fresco para llevar el volumen a un total de 5 ml en los matraces T-25. Cultivos de gas e incubar a 37 ° C. Registre las subculturas en el libro de registro de
6. FA.
7. Una vez que se haya informado del estudio y no sea necesario ningún trabajo clínico adicional, congele las células cultivadas (en MEM Alpha
completo con DMSO al 10%) para almacenarlas a largo plazo en nitrógeno líquido (consulte el Capítulo 4, Protocolo 4.28, Congelación de
cultivos de tejidos ( Criopreservación).
Tratamiento y recolección de fibroblastos FA
1. Se necesitan tres cultivos de fibroblastos (5 ml de MEM Alpha completo en matraz T-25), cada uno con una confluencia del 25% al 40%, para realizar la
gama completa de pruebas:
una. Cultivo C = sin clastógeno (control interno)
B. Cultivo M15 = MMC @ 15 ng / mL (38 μ L de solución de trabajo por 5 ml de cultivo)
C. Cultivo D150 = DEB @ 150 ng / mL (150 μ L de solución de trabajo por 5 ml de cultivo)
2. Todos los cultivos tratados se envuelven en papel de aluminio para protegerlos de la degradación de los clastógenos inducida por la luz. Todos los
3. cultivos se hacen crecer durante 48 horas a 37 ° C.
4. Colcemid ® ( 15 μ L por cultivo) se agrega ~ 6 horas antes de la cosecha. Continúe incubando a 37 ° C.

5. Después de redondear y flotar un número suficiente de células (visibles con un microscopio invertido), comience la recolección.
6. Etiquete una centrífuga de 15 ml por cultivo: C, M15, D150.
7. Decante el medio de cada cultivo en su propio tubo de centrífuga de 15 ml etiquetado.
8. Enjuague cada matraz de cultivo con 2 ml de HBSS 1 × dos veces. Decante cada enjuague en su correspondiente tubo de centrífuga de 15 ml.
9. Agregue 1 ml de solución de tripsina-EDTA a cada matraz de cultivo. Incube de 3 a 5 minutos a 37 ° C. Golpee los matraces de cultivo para ayudar a aflojar las
células, si es necesario.
10. Aspirar la suspensión de células tripsinizadas con una pipeta y transferir al tubo de centrífuga correspondiente de 15 ml.
11. Enjuague cada matraz de cultivo con 2 ml de HBSS 1 × y transfiéralo al tubo de centrífuga de 15 ml correspondiente. Centrifugue
12. los tubos a 1000 RPM durante 10 minutos a temperatura ambiente.
13. Aspirar el sobrenadante hasta aproximadamente 0,1 ml por encima del sedimento
14. celular. Resuspenda las células moviendo el fondo del tubo con el dedo.
15. Agregue lentamente 10 gotas de solución hipotónica y mezcle, moviendo el fondo del tubo con el dedo. Lleve lentamente el volumen de la solución
hipotónica a 2-4 ml (dependiendo del tamaño original del sedimento celular), mezcle como antes y deje reposar a temperatura ambiente durante 15
minutos.
Agregue 1 ml de fijador nuevo gota a gota y mezcle como antes.
dieciséis.
17. Centrifugue como antes.

18. Aspirar el sobrenadante hasta aproximadamente 0,1 ml por encima del sedimento celular.
19. Resuspenda las células como antes teniendo cuidado de no dejar grumos. Añada lentamente gota a gota 1 ml de fijador nuevo y mezcle. Lleve el volumen a 2-4 ml
(dependiendo del tamaño del sedimento) y déjelo reposar a temperatura ambiente durante 20 minutos.
20. Centrifugue como antes.

21. Aspirar el sobrenadante evitando el sedimento. Agregue un arreglo nuevo y haga diapositivas para el análisis de roturas.
22. Obtenga 50 metafases por cultura para radiales / rupturas.
23. Registre los resultados utilizando el siguiente formato de gráfico.

NOTA: El fundamento del sistema de clastogen dual es proporcionar controles internos, MMC para DEB y viceversa, ya que se agregan en
diferentes momentos. Dos concentraciones de MMC aseguran además la adición de clastógeno. Además, las células demasiado sensibles
pueden funcionar mejor con la concentración más baja.
Número de celdas con:
Paciente Clastogen Conc 0 1 2 3 4 5 6 7 >8 Radiales% de celdas con número total

Nombre (ng / mL) brk brk brk brk brk brk brk brk brk radiales de celdas
1 >1
MMC 15 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 50
Debutante 150 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 50
Normal MMC 15 45 3 1 0 0 0 0 0 0 1 2 1 distancia: 50

control S 0–4
Normal Debutante 150 44 4 1 0 0 0 0 0 0 1 21 50
control S rango: 0–6
Fanconi MMC 15 11 4 3 2 1 1 0 0 1 27 54 2 50
Fanconi DeB 150 14 5 1 2 1 1 1 0 1 24 48 2 50

1 Ni los cultivos tratados con mitomicina C (MMC) ni con diepoxibutano (DeB) mostraron un aumento de roturas o formas radiales. no hay evidencia para el diagnóstico de anemia de
Fanconi (Fa).
2 Los cultivos tratados con mitomicina C (MMC) y diepoxibutano (DeB) mostraron un exceso de rotura y formas radiales. esto es consistente con el diagnóstico
IV. Lecturas adicionales
1. Cervenka J, Hirsch BA. Diferenciación citogenética de la anemia de Fanconi, la anemia aplásica "idiopática" y la anemia de
Fanconi heterocigotos, Soy J Med Genet 1983; 15: 211-223.
2. Auerbach A, Rogatko A, Schroeder ‐ Kurth TM. Registro internacional de anemia de Fanconi: relación de los síntomas clínicos con la
sensibilidad al diepoxibutano. Sangre 1989 ( Feb); 73 (2): 391–396.
Protocolo 13.4 Política de análisis de rotura de cromosomas en anemia de Fanconi
Principio
Las pruebas de análisis de rotura de cromosomas se utilizan en el diagnóstico del trastorno genético recesivo anemia de Fanconi. Los cultivos de un individuo
sospechoso de este síndrome se tratan con clastógenos cromosómicos específicos para inducir la rotura de los cromosomas y las formaciones radiales. Las
células de estos cultivos se analizan y puntúan para detectar la presencia de estas roturas y radiales. Las personas con anemia de Fanconi muestran niveles
marcadamente aumentados de rotura y formaciones radiales en comparación con las personas normales con mecanismos de reparación cromosómica que
funcionan correctamente. Este protocolo establece pautas para el análisis de rotura de cromosomas en pacientes con sospecha de síndrome de Fanconi.
Un análisis de rotura de cromosomas estándar (consulte la Nota 1, Análisis estándar) derivado de una muestra de sangre tendrá cultivos
tratados con los siguientes clastógenos: 40 ng / ml de mitomicina C (MMC), 20 ng / ml de MMC y 100 ng / ml de diepoxibutano ( DEBUTANTE).
También hay una cultura no tratada.
El análisis de rotura de cromosomas para muestras de fibroblastos tendrá cultivos tratados con 15 ng / mL de MMC y 150 ng / mL de
DEB. También hay una cultura no tratada.
II. Método
1. Todos los casos de análisis estándar * deben tener 50 células en metafase puntuadas para rotura de cromosomas y formaciones radiales de
los cultivos tratados con MMC y DEB. El cultivo no tratado debe puntuarse en todos los casos en los que los cultivos tratados con MMC y DEB
produzcan resultados positivos o de “zona gris” (consulte la Nota 2, Análisis de la zona gris). El cultivo no tratado también puede puntuarse a
petición del médico remitente.
2. Las celdas que contienen de cero a siete roturas deben puntuarse en la columna correspondiente para las roturas en la hoja de análisis I (consulte el
Protocolo 13.5, Tabla para la interpretación de los resultados de los estudios de roturas). Cada celda que contiene ocho o más roturas, y / o contiene
formaciones radiales, debe puntuarse individualmente en la hoja de análisis para:
Número de radiales ( A)
Número de roturas que no están involucradas en la formación radial ( B)
Número total de roturas, incluidas las roturas de formaciones radiales ( C)
La nomenclatura para informar estas celdas es: A B C ( ver Nota 3, Ejemplos de análisis)
3. Para calcular el número de roturas, las siguientes anomalías estructurales se puntúan como tales: rotura de
cromosomas = 1 rotura
ruptura de cromátida más ancha que el ancho de cromátida = 1 ruptura
radial = 2 rupturas
cromosoma en anillo = 2 roturas

cromosoma dicéntrico = 2 roturas
4. Se debe capturar un mínimo de cuatro células de cada cultivo puntuado. Los casos que incluyen celdas con resultados complejos pueden
requerir la captura de más celdas. Si la puntuación de rotura y formación radial de una celda es incierta, se recomienda capturar esa celda
para la revisión del director.
5. Una vez que se han leído los cultivos, los datos relevantes deben informarse en la hoja de trabajo de rotura de cromosomas, que debe
documentar el tipo de muestra y la información del cultivo. Para cada cultivo, el número total de roturas de todas las células combinadas se
indica en la tabla. Este número total de roturas se divide por el número total de células puntuadas para cada cultivo para obtener la
proporción de roturas por célula. El informe cromosómico debe incluir la tabla de rotura de anemia de Fanconi y la interpretación adecuadas.
radial
radial
descanso
descanso
radial
informado como: 1/2/4 informado como: 2/0/4
Ejemplo 1 Ejemplo 2
descanso
descanso
radial descanso
descanso
descanso
descanso radial
descanso
informado como: 0/1/1 informado como: 2/6/10
Ejemplo 3 Ejemplo 4
Figura 13.5 reportó hallazgos de rotura.
III. Notas
1. Análisis estándar. El análisis estándar requiere que las muestras tengan un porcentaje de leucocitos y linfocitos suficiente para permitir
las cuatro culturas. Las muestras con porcentajes de leucocitos o linfocitos disminuidos pueden requerir una reducción en el número de cultivos debido
a que los inóculos requieren una mayor densidad de glóbulos blancos.
2. Análisis de zona gris. Los resultados de la "zona gris" son aquellos en los que el hemocultivo tratado con MMC de 40 ng / ml rinde ≥10% -20%
formaciones radiales.
3. Ejemplos de análisis. En la Figura 13.5 se muestran ejemplos de hallazgos de rotura informados.
Protocolo 13.5 Tabla para la interpretación de los resultados de los estudios de rotura
I. Método
A. Tabla de resultados de sangre
Paciente Clastogen Conc 0 1 2 3 4 5 6 7 >8 Radiales% Celdas con Total #

nombre (ng / mL) brk brk brk brk brk brk brk brk brk 1 Células
> 1 Radiales
MMC 40 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 50
Debutante 100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 50
Normal MMC 40 33 11 1 4 0 0 0 0 0 1 2 50
control S rango: 0–4 1

control S rango: 0-1 1
Fanconi MMC 40 2 2 1 1 1 1 0 0 0 42 84 50
control S distancia:
30-100 2
Fanconi DeB 100 15 10 8 5 2 1 1 1 1 6 12 50

B. Tabla de control de calidad y control de calidad de los resultados de Dana-Farber
Paciente Clastogen Conc 0 1 2 3 4 5 6 7 >8 Radiales % De celdas con número total de
nombre (ng / ml) brk brk brk brk brk brk brk brk brk radiales Células
1 >1
a ?? 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 50
B ?? 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 50
C ?? 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 50
Normal MMC 40 33 11 1 4 0 0 0 0 0 1 2 50
control S rango: 0-1 1
Fanconi MMC 40 2 2 1 1 1 1 0 0 0 42 84 50
30-100 2
Fanconi DeB 100 15 10 8 5 2 1 1 1 1 6 12 50

C.Tabla de resultados de fibroblastos
Paciente Clastogen Conc 0 1 2 3 4 5 6 7 >8 Radiales % De celdas con número total de
Nombre (ng / mL) brk brk brk brk brk brk brk brk brk 1 radiales Células
>1
MMC 15 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 50
Debutante 150 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 50
Normal MMC 15 45 3 1 0 0 0 0 0 0 1 2 50
Fanconi MMC 15 11 4 3 2 1 1 0 0 1 27 54 50
14–92 2
Fanconi DeB 150 14 5 1 2 1 1 1 0 1 24 48 50

22–72 2
1 Ni los cultivos tratados con mitomicina C (MMC) ni con diepoxibutano (DeB) mostraron un aumento de roturas o formas radiales. no hay evidencia para el diagnóstico de
anemia de Fanconi (Fa).

2 Los cultivos tratados con mitomicina C (MMC) y diepoxibutano (DeB) mostraron un exceso de rotura y formas radiales. esto es consistente con el diagnóstico
Protocolo 13.6 Anemia de Fanconi

Contribuido por Weisskopf Child Evaluation Center, Departamento de Pediatría, Facultad de Medicina, Universidad de Louisville, Louisville,
Kentucky
Principio
La anemia de Fanconi es un trastorno hematopoyético causado por una afección autosómica recesiva. Aunque muchos pacientes presentan una
alta proporción de roturas cromosómicas espontáneas, algunos no lo hacen. El agente alquilante, (±) ‐1,2: 3,4 ‐ diepoxibutano (DEB), se emplea en
esta prueba para determinar los pacientes con AF que pueden no expresar rotura espontánea y para diferenciar entre pacientes con AF verdadero
y aquellos con aplásico idiopático. anemia.
II. Materiales
Reactivos
1. (±) ‐1,2: 3,4 ‐ diepoxibutano (DEB). Aldrich # 20253‐3, 1 g. Almacenar a 0–5 ° C. Proteger de la luz.
Precaución: el diepoxibutano (DEB) es un veneno. Se absorbe fácilmente a través de la piel y puede ser dañino si se inhala. Use guantes y
abra solo debajo de la campana de flujo laminar cuando lo use.
2. DEB, solución madre. Agregue 1 ml de medio RPMI 1640 al vial que contiene 1 gramo de DEB. Deje que se disuelva completamente.
Extraiga 0,1 ml de DEB del vial. Diluir con 9,9 ml de RPMI 1640. Conservar en nevera. Proteger de la luz.
3. DEB, solución de trabajo. Diluir 2 ml de stock DEB con 24 ml de RPMI 1640. Conservar en el refrigerador; proteger de la luz. Amortiguador de
4. McIlvane. Mezcle 200 ml de ácido cítrico 0,1 M y 800 ml de fosfato de sodio 0,2 M. Mida el pH con un medidor de pH. Ajustar a pH 7,0
utilizando el componente necesario, es decir, si el pH es superior a 7,0 añadir solución de ácido cítrico. Si está por debajo de 7.0, agregue más
solución de fosfato de sodio.
5. Tinción de Giemsa (Harleco # 620 o Gurr # R66). Conservar en frigorífico. Desechar si la tinción es inadecuada.
6. Solución de tinción de Giemsa: 46 ml de agua destilada, 4 ml de tampón de McIlvane, 3 gotas de ácido cítrico 0,1 M, 2 ml de tinción de Giemsa. Agua,
7. destilada.
III. Método
1. Configure tres hemocultivos de 12 ml en el paciente que se está analizando. Marque una "sin adición" y dos "DEB".
2. Configure dos hemocultivos de 12 ml en un control normal que sea del mismo sexo que la persona que se está analizando. Etiquete uno como "sin
adición" y el otro como "DEB".
3. Después de 24 horas en cultivo, agregue 2 o la cantidad indicada de gotas de solución de trabajo DEB usando una jeringa de 1 ml, equipada
con una aguja de calibre 25, al paciente y los cultivos de control “DEB”.
4. Precaución: el diepoxibutano (DEB) es un veneno. Se absorbe fácilmente a través de la piel y puede ser dañino si se inhala. Use guantes y
abra solo debajo de la campana de flujo laminar cuando lo use.
5. Recolecte los seis cultivos después de un mínimo de 72 horas de cultivo (un mínimo de 48 horas después de la adición de los agentes) utilizando el procedimiento
habitual de extracción de sangre.
6. Prepare las diapositivas de la siguiente manera:
Paciente Control
Sin adición de productos 4 diapositivas 3 diapositivas
químicos DeB 10 diapositivas 5 diapositivas
7. Después de hacer los portaobjetos, entréguelos al director del laboratorio o su designado para que los codifique.
8. Después de codificar, enjuague con tampón de McIlvane.
9. Teñir los portaobjetos en Giemsa como indica la codificación. Por lo general, una o dos diapositivas tienen bandas GTG y las otras se tiñen sin
bandas.
10. Enjuague con agua destilada.
IV. Notas
1. El director técnico del laboratorio elabora nuevos lotes de DEB y los prueba en cultivo para determinar el número de gotas a
utilizar. La cantidad añadida debe ser suficiente para inducir roturas sin deprimir el crecimiento del cultivo.
V. Lectura adicional
1. Cervenka J, Hirsch BA. Diferenciación citogenética de la anemia de Fanconi, la anemia aplásica "ideopática" y la anemia de Fanconi
heterocigotos. Revista estadounidense de genética médica 1983; 15: 211-223.
Capítulo 14
Microscopía e imágenes
Margaret J. Barch 1 y helen J. Lawce 2
1*( fallecido) anteriormente, Laboratorio de Citogenética Frank F Yen, Centro de Evaluación Infantil Weisskopf, Universidad de Louisville,
Louisville, KY, EE. UU.
2 Laboratorio de diagnóstico Knight de la Universidad de Salud y Ciencias de Oregón, Portland, Oregón, EE. UU.
14.1 El microscopio estándar

El microscopio es una herramienta indispensable en citogenética. Los tecnólogos dedican muchas horas a utilizar este notable instrumento en el
análisis de cromosomas y FISH. Por lo tanto, un conocimiento práctico informado de la teoría del microscopio y la fotomicrografía es un activo que
roza la necesidad.
Los microscopios más simples y complejos contienen los siguientes componentes (ver Figura 14.1):
1. Ocular o lentes oculares. Los oculares amplían aún más la imagen del espécimen, ya sea para los ojos o para la cámara. Tubo de
2. microscopio o tubo corporal. Es posible que el cuerpo del microscopio no se parezca a un tubo en el microscopio actual, pero es la
sección que conecta el objetivo y los oculares.
3. Muserola. La mayoría de los microscopios tienen un revólver portaobjetivos que sostiene varios objetivos.
4. Lentes objetivas. Los objetivos enfocan y amplían la imagen de la muestra. Algunos están equipados con un collar de corrección para corregir las
aberraciones en el grosor de los cubreobjetos para obtener el mejor contraste y calidad de imagen.
5. De pie o en una extremidad. El soporte es la columna vertebral del microscopio y contiene todos los mecanismos del escenario, la subplaca y el tubo.
6. Etapa de muestra. El escenario sostiene el tobogán.
7. Condensador de sub-etapa. El condensador enfoca la luz sobre la muestra.
8. Diafragma de diafragma de diafragma de diafragma o diafragma. El tope de apertura se encuentra en el condensador de la subplaca.
9. Ajuste grueso. Este mecanismo de enfoque mueve las lentes o la platina hacia arriba y hacia abajo, según el modelo de
microscopio.
10. Ajuste fino. Esta perilla mueve la lente o el escenario una distancia corta para un enfoque fino.
11. Ajuste del condensador. Por lo general, hay un mecanismo de piñón y cremallera que mueve el condensador hacia arriba y hacia abajo en relación con el escenario.
12. Diafragma de tope de campo. El tope de campo se encuentra debajo del condensador, generalmente en la base del microscopio. Se puede colocar un
filtro aquí para aumentar el contraste.
13. Base de microscopio.
14. Fuente de luz.
En los primeros días de la microscopía, la luz del día era la fuente de luz y un espejo simplemente reflejaba la luz de una ventana cercana al
condensador. Con el tiempo, la luz artificial se convirtió en la fuente preferida porque es más brillante y no depende de la hora del día ni del clima.
Cuando se descubrieron las ventajas de la iluminación Köhler (iluminación mejorada mediante el ajuste del condensador de la subplaca), la
tendencia fue incorporar la fuente de luz en el microscopio para que la lámpara pudiera alinearse fácilmente. Los microscopios de luz modernos
generalmente contienen una lámpara eléctrica de filamento de tungsteno incorporada. Debido a que esta lámpara tiene un ligero
* Nota del editor: Perdimos a Margaret en las etapas finales de la producción de este libro. Que su espíritu brille y el lector se sienta conmovido por su amor por la ciencia
y su pasión por transmitirla.
El Manual de laboratorio de AGTCytogenetics, Cuarta edición. Editado por Marilyn S. Arsham, Margaret J. Barch y Helen J. Lawce. ©
2017 La Asociación de Tecnólogos Genéticos. Publicado en 2017 por JohnWiley & Sons, Inc.

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Capítulo 13

13.1.1 Citogenética versus diagnóstico molecular

13.2 Anemia de Fanconi

13.2.1 Diagnóstico citogenético de la anemia de Fanconi

Sin roturas de cromosomas

13.2.2 Mosaicismo somático en la anemia de Fanconi

13.3 Síndrome de Bloom

fosforila p53 y otras proteínas en respuesta a la radiación ionizante [52].

13.5 Síndrome de rotura de Nijmegen

13.6 Síndrome de inmunodeficiencia, inestabilidad centromérica y anomalías faciales

13.7 síndrome de Roberts

13.8 síndrome de Werner

13.9 Síndrome de Rothmund-Thomson

13.10 Ensayos de aptitud

Agenesia: Ausencia o desarrollo incompleto de un órgano o parte del cuerpo.

Aplasia: Una falla en el desarrollo que resulta en la ausencia de un órgano o tejido.

Consultado el 16 de octubre de 2011 en http://en.wikipedia.org/wiki/Apraxia

su color marrón claro. También se les llama "manchas de jirafa".

2 Sigma Aldrich http://www.sigmaaldrich.com/ghs‐hazard

Hipertelorismo: Distancia anormal entre dos órganos emparejados.

intrones empalmadas incorrectamente.

Macrocitemia: Cantidad inusualmente grande de macrocitos en la sangre. También se llama macrocitosis.

Macrocitosis: ver macrocitemia

Microcefalia: Pequeñez anormal de la cabeza. También se llama nanocefalia.

Palidez: Palidez, como de la piel.

Testículos no descendidos: ver criptorquidia

257 (5526): 501–503.

35. Akkari Y, Olson S, datos no publicados.

Dev 1997; 98 (3): 239-254.

Sección de protocolo contribuido

las manos después de quitarse los guantes.

Medios de cultivo y reactivos madre

10. RPMI 1640 (Gibco ® # 11875‐051) Suero fetal bovino

50 ml de suero fetal bovino

15. Forma M de fitohemaglutinina (Gibco ® # 10576‐023)

19. El 10 de Hanks × (Gibco ® # 14180‐020)

Agregue 5 ml de agua destilada estéril al vial que contiene 2 mg de mitomicina C.

22. Diepoxibutano (DEB) - Diepóxido de 1,3-butadieno (Sigma # 20,253-3, 5 g)

Suma 10 μ L stock DEB a 10mL RPMI 1640.

Suma 50 μ L de diluido a 10 ml de RPMI 1640.

23. Tinción de Wright (MCB # WX005‐3)

III. Procedimiento de preparación y cultivo de sangre

Cultura B = sin clastógeno (control interno) (use cinta blanca)

Cultura B = sin clastógeno [use cinta blanca]

Número de celdas con: 3

Nombre del paciente Clastogen Conc 0 1 2 4 5 6 7 >8 Radiales% de celdas No total

Control fanconi MMC 40 2 2 1 1 1 1 0 0 0 42 84 50

Control Fanconi DeB 100 15 10 8 5 2 1 1 1 1 6 12 50

clínico de anemia de Fanconi.

Protocolo 13.2 Procedimiento suplementario; Separación Ficoll de sangre entera

1. Tubo de polipropileno Corning, 15 ml (tiendas de laboratorio n. ° 64.2005)

A. Procedimiento de separación de Ficoll

B. Cosecha de cultura Ficolled

las manos después de quitarse los guantes.

1. Placas de Petri de plástico Corning estériles, 35 cm 2

4. Mangos de bisturí estériles con cuchillas desechables estériles

8. Pipetas graduadas estériles, 1 mL, 5 mL y 10 mL

3. Solución hipotónica (calentar a 37 ° C antes de usar). Preparar: