Guã A de Laboratorio Operaciones Fundamentales 202410
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GUÍA DE LABORATORIO
Resultados de aprendizaje
o Explicar las medidas de peso y volumen, haciendo énfasis en la precisión y en las cifras
significativas.
o Describir las diferencias entre los tipos de disoluciones y formas de expresar las
concentraciones.
Introducción
Los estudiantes deben reconocer y realizar con destreza las diferentes operaciones
fundamentales que se realizan a diario en un laboratorio de bioquímica. Estas incluyen pesada,
pipeteo, aforado, centrifugación y espectrofotometría, haciendo que el estudiante esté
preparado para posible trabajo futuro de laboratorio en la preparación de soluciones y
cuantificación e identificación de diferentes sustancias utilizando diferentes técnicas analíticas.
Marco Teórico
Se presentan a continuación la explicación de aspectos importantes correspondientes a Pesada,
pipeteo y aforado, centrifugación y magnitudes y unidades.
Pesada
Las balanzas son instrumentos destinados a determinar la masa de un cuerpo. Las balanzas se
caracterizan por su exactitud por su precisión y por su sensibilidad. La primera cualidad se
refiere a la propiedad que posee cualquier instrumento físico para suministrar el resultado de
una medida con un valor coincidente con el verdadero; ello implica que el error sea lo más
reducido posible. La sensibilidad está determinada por la capacidad de determinar con
exactitud resultados de valores muy reducidos, y puede expresarse como la diferencia entre
valores extremos de varias medidas de la misma magnitud.
En general en todos los métodos de análisis químicos es necesario determinar la masa (pesar)
exacta en alguna etapa, y para esto se utiliza una balanza analítica de precisión de 0,1 mg. En
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otras ocasiones no es necesario conocer la masa de una manera tan precisa, y entonces se
utilizan balanzas monoplato que son más resistentes y de menor precisión.
La balanza analítica
La balanza analítica tiene una capacidad máxima comprendida en general entre 120-200 g. La
exactitud o la fiabilidad de los resultados de pesada están muy relacionados con su
emplazamiento y por esto se ha de colocar en un lugar:
Antes de empezar a pesar asegurar que la balanza esté bien nivelada (la mayoría de las balanzas
tienen una burbuja de aire que permite comprobar su nivel). Es necesario verificar que la
balanza señale exactamente el cero; es caso de no ser así, hay que calibrarla nuevamente.
Procedimiento
Se pesa el recipiente idóneo que ha de contener a la muestra (esto se llama tarar). Se retira de
la balanza y una vez fuera se añade la sustancia que se quiere pesar con una espátula, si es un
sólido, o se adiciona con una pipeta, si es un líquido. Siempre se debe retirar el recipiente del
plato de la balanza para adicionar el producto, para evitar que se nos caiga un poco sobre el
plato y deteriore a la balanza. El recipiente con la muestra se vuelve a colocar en el centro del
plato de la balanza y se efectúa la lectura de pesada. Hay que anotar el peso exacto, indicando
todas las cifras decimales que dé la balanza utilizada. La diferencia entre este valor de pesada y
la tara nos dará el peso del producto.
Después de pesar se ha de descargar la balanza, es decir ponerla a cero (a menos que las
indicaciones del fabricante aconsejen otra cosa). La cámara de pesada y el plato de la balanza
se deben dejar perfectamente limpios. Entre dos pesadas independientes hay que lavar la
espátula con el disolvente adecuado, en general agua desionizada y secarla.
Errores de pesada
Al intentar pesar podemos encontrar que la lectura del peso sea inestable. Las causas más
frecuentes de este hecho y sus posibles soluciones son:
Tabla1.
graduados. Existen distintos tipos y cada uno requiere instrucciones concretas, aunque
sencillas, para su uso. Por ejemplo, en la mayoría de los casos la graduación corresponde al
líquido que cae espontáneamente al destapar el extremo superior, sin soplar, mientras que en
algunas BLOW OUT, se requiere expulsar la totalidad del líquido por soplado. Algunos
volúmenes pequeños, del orden de microlitros, se miden por medio de micropipetas y micro
jeringas, de las que hay numerosas variedades.
NOTA: Nunca pipetee reactivos o muestras biológicas con la boca, utilice siempre
pipeteadores. Si no tiene uno a la mano solicite la colaboración de su docente. ¡Evite
accidentes!
Centrifugación
El mejor método para separar un sólido insoluble de un líquido es la filtración. También se
puede utilizar la técnica de decantación si el sólido se deposita fácilmente por gravedad en el
fondo del recipiente (sedimentación), o si permanece en la superficie del líquido (flotación). Un
sólido sedimenta o flota dependiendo de su densidad respecto a la del líquido. En otras
palabras, el sólido experimenta una fuerza ascendente debida al empuje que el líquido ejerce
sobre éste, cuya magnitud es igual a la del peso del líquido desplazado por el sólido (principio
de Arquímedes). El sólido sedimentará si esta fuerza es inferior a la fuerza que la gravedad
ejerce sobre el sólido; en caso contrario, flotará. Si las partículas son muy pequeñas, los
procesos de sedimentación o flotación pueden ser extremadamente lentos debido, por un lado,
a la resistencia al avance de las partículas provocada por la fricción que se establece entre éstas
y las del líquido, y, por otro, a los movimientos aleatorios de las partículas inducidos por las
turbulencias térmicas que se generan en el seno del líquido (difusión). En estos casos, hay que
recurrir a la centrifugación para separarlas.
Procedimiento
Magnitudes y Unidades
Magnitud es aquello que se puede medir. Medir es comparar una magnitud desconocida con
otra, que se toma como patrón, llamada unidad. Existen unas magnitudes fundamentales:
longitud, masa, tiempo, corriente eléctrica, temperatura y cantidad de sustancia.
Tabla 2.
Tipos de magnitudes.
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Además de estas unidades se emplean múltiplos y submúltiplos, con preferencia los factores de
1000 como se ve en la siguiente tabla:
Así, por ejemplo, el kilómetro (Km) es 103 metros y el nanómetro (nm), 10-9m. Para las
magnitudes derivadas se emplean unidades derivadas. Así, la unidad de velocidad es el metro
por segundo (m/s). Algunas unidades derivadas tiene nombre propio, la unidad de fuerza es el
Newton(N) que equivale a Kgms-2. Por último, algunas unidades se siguen utilizando a pesar
de no pertenecer al S.I. Así, por ejemplo, el Angstrom (Aº) equivale a 0.1 nm; la caloría (cal)
=4,187 j o el litro = 1dm3.
DILUCIONES Y DISOLUCIONES
Diluir es mezclar una disolución inicial, concentrada, con más diluyente para conseguir una
disolución final, diluida. Generalmente se tienen como referencia el agua como solvente
universal, pero puede utilizarse otro tipo de disolventes.
Las disoluciones son materiales homogéneos formados por dos o más especies químicas que
no reaccionan entre sí; cuyos componentes se encuentran en proporción que varía entre ciertos
límites.
Toda disolución está formada por una fase dispersa llamada soluto y un medio dispersante
denominado disolvente. Una disolución puede estar formada por uno o más soluto y uno o más
disolventes.
Por ejemplo, para preparar 100 ml de una solución de glucosa al 0.1%, a partir de una solución
patrón al 10%, basta tomar con una pipeta 1 ml de la solución concentrada, transferirla a un
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matraz, aforado de 100 ml y diluir con agua hasta la señal de aforo. El cálculo es elemental basta
aplicar en todos los casos la fórmula V X C= V’XC’, donde V y C son respectivamente volumen y
concentración inicial y V’ y C’ volumen y concentración final.
Para disolver un sólido se pesa la cantidad necesaria y se transfiere al aforado ayudándose con
disolvente. En los casos en que el soluto sea difícilmente soluble, se puede usar como recipiente
intermedio un vaso de precipitado, que permite tanto calefacción como agitación vigorosa
normal o magnética.
Para transferir cuantitativamente los solutos al balón aforado se usa una varilla de vidrio y se
arrastra el soluto con pequeñas cantidades de disolvente, que se van añadiendo al balón, antes
del aforo final.
Figura 5: Disolución
Fuente: https://disoluciones.net/wp-content/uploads/2019/11/Ejemplos.jpg
Valoración volumétrica
Las reacciones químicas son cuantitativas cuando la totalidad de las sustancias de origen se
transforman íntegramente en los productos finales, y son estequiométricas cuando la
proporción de sustancias reaccionantes es perfectamente definida y constante.
La reacción: HCL+ NaOH NaCl +H2O es cuantitativa y estequiométrica porque una mol de
ácido clorhídrico reacciona exactamente con una mol de hidróxido de sodio para formar una
mol de cloruro de sodio y otra de agua.
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Indicadores, son sustancias que en el punto final de la reacción experimentan un cambio brusco
y ostensible. Por ejemplo, si valoramos un ácido con una base, y empleamos rojo de metilo como
indicador, observamos en el punto final un cambio de color rojo a amarillo.
Para medir, por ejemplo, la concentración de un ácido clorhídrico problema por valoración con
NaOH 0.1 N, se toman con una pipeta 10 ml de HCl problema en un erlenmeyer. Se añaden unas
gotas de indicador, por ejemplo, fenolftaleína, incolora en medio ácido y rojo- púrpura en medio
alcalino. Se llena una bureta con el NAOH de concentración conocida y se afora cuidadosamente.
El NaOH se deja caer gota a gota sobre el HCl, agitando constantemente, hasta coloración rosa
permanente. Se lee el volumen de NaOH gastado y se aplica la fórmula:
V X N = V’XN’
Figura 6. Disolución
Fuente:https://lidiaconlaquimica.files.wordpress.com/2015/07/valoracion-acido-base-
montaje.jpg
Investiga cómo preparar esta solución que aparece en la figura. Identifica sí harías
disolución o dilución. ¿Cuál sería el uso de la dextrosa en la parte clínica?
Materiales y Reactivos
• Balanza analítica • Glucosa
• Balón aforado de 100 mL • Cloruro de Sodio
• Vidrio Reloj • Solución de Glucosa 250 mg/dl
• Espátula • Ácido Sulfúrico
• Frasco lavador • Hidróxido de Sodio
• Pipeta graduada • Fenolftaleína
• Pipeteador • Agua destilada
• Bureta
Procedimiento
Disolución
1. Pesar 1.7 g de Glucosa. Agregar agua hasta completar 100 ml de solución en un balón aforado.
Responda:
a. ¿Cuál es la concentración de esta solución expresada en mg/100mL?
b. ¿Cuál es la concentración de esta solución expresada en Molaridad?
c. ¿Cuál es la concentración de glucosa expresada en mmol/L?
d. ¿Qué es la glucosa desde el punto de vista bioquímico?
2. Pesar 1.5 g de Cloruro de Sodio (NaCl). Agregar agua hasta completar 100 ml de solución en
un balón aforado.
Responda:
a. ¿Cuál es la Molaridad de esta solución?
b. ¿Cuál es la concentración expresada en porcentaje?
c. ¿Cuál es la concentración de la solución salina fisiológica?
d. ¿Cómo prepararía 350 ml de una solución salina fisiológica a partir de la preparada por
usted en el laboratorio?
Dilución
1. Teniendo una solución de Glucosa de 250 mg/dL, prepare una nueva solución en un balón
aforado de 100 ml cuya concentración final sea de 80 mg/dL.
Responda:
a. ¿Cuál es la concentración de ambas soluciones expresadas en porcentaje?
b. ¿Cuál es la Molaridad de estas soluciones?
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Valoración Volumétrica
1. Valorar 10 ml de una solución de Ácido Sulfúrico (H2SO4) con Hidróxido de Sodio (NaOH)
0.1 N empleando fenolftaleína como indicador adicionando dos gotas.
Responda:
a. ¿Qué es Normalidad?
b. ¿Qué se entiende por miliequivalente?
c. Defina que es una solución indicadora de pH
d. Cuál es el rango de viraje de la Fenolftaleína, investigue su estructura química.
e. Calcular la concentración del H2SO4 en N, %p/v y M.