Microbiologia
Microbiologia
Microbiologia
LABORATORIO DE
MICROBIOLOGIA
PRÁCTICA 1
GRUPO: 221
SUBGRUPO: 2 I
NTEGRANTES DE
EQUIPO:
Carmona Ibañez Meilin - 2209559
Gavia Guillen Mariana Nicole -
2212204Hernandez López Yarelin -
2213449
Hernandez Villalpando Xavier Alexandro -
220870
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PRÁCTICA 3. VISUALIZACIÓN MICROSCÓPICA DE
BACTERIAS
Objetivo
Introducción
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4. Tinciones de Hifas y Levaduras: Estas tinciones permiten diferenciar entre
hifas (estructuras filamentosas) y levaduras (células redondeadas) en hongos.
Utilizando colorantes como la tinta china y la tinta india, se pueden revelar las
características morfológicas de diferentes tipos de hongos.
Las tinciones se clasifican en función de cómo interactúan los colorantes con las
estructuras celulares de los microorganismos. En general, se pueden dividir en dos
categorías principales:
Por otro lado, las bacterias gramnegativas tienen una pared celular más
delgada compuesta por una capa de peptidoglicano rodeada por una membrana
externa compuesta por lípidos y proteínas. Durante la decoloración, la membrana
externa se disuelve y la capa de peptidoglicano se daña, lo que permite que el cristal
violeta-iodo se disperse de las células. Luego, se aplica un colorante secundario o
de contraste, la safranina, que tiñe estas bacterias de rojo.
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color rojo. Esta diferenciación es crucial en microbiología, ya que proporciona
información importante sobre la estructura de la pared celular de las bacterias y es
un indicador inicial de su respuesta a los antibióticos.
Materiales
Procedimiento
Visualización en fresco:
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Visualización en frotis teñido con tinción de Gram:
1. Toma una placa de Petri con el cultivo bacteriano y seleccionar una colonia
fresca y aislada para la tinción. Es importante utilizar una colonia que tenga
menos de 24 horas de crecimiento para obtener mejores resultados.
2. Etiqueta el portaobjetos con el número 1 utilizando un plumón permanente.
Agrega una gota pequeña de agua en el portaobjetos.
3. Esteriliza el asa bacteriológica pasándola por la llama del mechero Bunsen
o la lámpara de alcohol hasta que se ponga al rojo vivo. Deja enfriar el asa
por unos segundos antes de utilizarla.
4. Con el asa bacteriológica esterilizada, toma una pequeña cantidad de la
colonia bacteriana seleccionada. Realiza una punción en el centro de la
colonia y recoger una pequeña cantidad de bacterias. Evita tocar otras
áreas de la placa para evitar contaminación cruzada.
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5. Extiende la muestra bacteriana sobre el portabojetos, haciendo
movimientos circulares sobre la gota de agua con el asa hasta disolver la
masa bacteriana.
6. Pasa el portaobjetos por encima de la llama del mechero Bunsen o la
lámpara de alcohol varias veces para fijar las bacterias al portaobjetos.
Evita calentar demasiado el portaobjetos para evitar dañar las bacterias.
7. Repite los pasos 1 al 6 cuatro veces más, etiquetando cada portaobjetos
con los numéros 2, 3, 4 y 5.
8. Aparta el portaobjetos #1 y continua trabajando con los demás.
9. Cubre completamente la muestra en los portaobjetos del 2 al 5 con la
solución de cristal violeta. Dejar actuar durante aproximadamente 1 minuto.
10. Lava los portaobjetos suavemente con agua destilada para eliminar el
exceso de cristal violeta. Es importante no frotar o dañar la muestra.
11. Aparta el portaobjetos #2 y deja secar al aire. Continua trabajando con los
numerados del 3 al 5.
12. Cubre completamente la muestra en los portaobjetos del 3 al 5 con la
solución de lugol o solución yodada. Deja actuar durante aproximadamente
1 minuto. Retira el exceso y lava con agua destilada.
13. Aparta el portaobjetos #3 y deja secar al aire. Continua trabajando con los
portaobjetos 4 y 5.
14. Inclina los portaobjetos 4 y 5 y aplica cuidadosamente el alcohol etílico o
acetona al 95% en la parte superior de la muestra durante 15 segundos,
permitiendo que fluya hacia abajo. Es fundamental tener cuidado con este
paso, ya que la decoloración excesiva puede dar resultados incorrectos.
15. Lava el portaobjetos suavemente con agua destilada para eliminar el
exceso de decolorante.
16. Aparta el portaobjetos #4 y deja secar al aire.
17. Cubre completamente la muestra en el portaobjetos #5 con la solución de
safranina. Deja actuar durante aproximadamente 1 minuto.
18. Lava el portaobjetos suavemente con agua destilada para eliminar el
exceso de safranina. Luego, deja que el portaobjetos se seque
completamente al aire o usando papel absorbente.
19. Coloca uno a uno los portaobjetos preparados en el microscopio óptico y
observa las bacterias bajo diferentes aumentos.
20. Antes de llegar al objetivo de 100x (objetivo de inmersión), agrega unas
gotas de aceite de inmersión para una mejor resolución.
21. Realiza en cada uno de los portaobjetos la observación de 3 campos con el
objetivo 100x, intentando describir cada detalle de la muestra teñida.
22. Anota los resultados y resuelve la actividad siguiente.
Resultados
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Fijado Cristal violeta Lugol Decolorante Safranina
(Portaobjetos 1) (Portaobjetos 2) (Portaobjetos 3) (Portaobjetos 4) (Portaobjetos 5)
Conclusión
Actividad
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2. ¿Por qué es importante fijar las muestras antes de realizar la tinción de
Gram? Explica el propósito de la fijación y cómo afecta la observación
microscópica.
Para proteger las subestructuras celulares finas y la morfología de los microorganismos más
grandes.
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entran en el torrente
sanguíneo.
Estreptococcus Positiva Se contagian por secreciones
nasales o de la garganta de
personas infectadas con
lesiones cutáneas.
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Enterococos Positiva intraabdominales, prostatitis,
celulitis e infecciones de las
heridas
Pneumococos Positiva neumonía, meningitis,
sinusitis, otitis e infecciones
en los ojos
Bacilos Positiva infección urinaria, la
tuberculosis, la meningitis, la
gonorrea, la clamidia y la
sífilis
Bacillus anthacis jejuni Positiva Ántrax
Corynebacterium diphtheriae Positiva Lesiones en la vías
respiratorias, orofaringe, el
miocardio, el sistema
nervioso
Neisseria Negativa Gonorrea
Gonorrhoeae Negativa Infecciones atreves de
relaciones sexuales
Neisseria Negativa Gonorrea
Meningitidis Negativa Meningitis
Branhamella Negtaiva Infecciones del oído y las vías
aéreas superiores e inferiores
Catarrhalis Negativa Infección respiratoria baja en
adultos con enfermedad
pulmonar cronica
Acinetobacter sp Negativa Signos y síntomas de
neumonía
También en el sistema
urinario presenta dolor y
ardor
Bordetella pertusis Negativa Causante de tos ferina, tos
convulsa o coqueluche
Brucella sp Negativa Brucelosis, infección del
revestimiento interno del
corazón
Campylobacter Negativa Infecciones, endocarditis,
osteomielitis o artritis séptica
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Técnica de tinción diferencial Fucsina fenicada, decolorante
utilizada para identificación deBK Y Azul de metileno.
Tinción de Ziehl-Neelsen microorganismos patógenos.
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Se emplea al realizar un Suspensión de líquido
examen de microscopia directacefalorraquideo.
de la capsula de
Tinción con tinta china microorganismos variado.
Facilita la detección del
cryptococos neoformans, un
hongo que puede provocar
complicaciones medicas como
la meningitis.
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