La bioseguridad debe entenderse como una doctrina de comportamiento encaminado a

lograr actitudes y conductas que disminuyan el riesgo del alumno y docentes de adquirir
infecciones u accidentes físicos o químicos.
GÉNERO: Staphylococcus y Streptococcus. (GRAM +)
El nombre del género Staphylococcus - un racimo de uvas. La mayor parte de los
estafilococos tiene un diámetro de entre 0,5 y 1 m y son anaerobios facultativos (es decir,
crecen aerobia y anaerobiamente), inmóviles capaces de crecer en un medio con una
elevada concentración de sal (p. ej., cloruro sódico al 10%) y a temperaturas de 18-40 °C.
Por ejemplo, Staphylococcus aureus coloniza las narinas anteriores, Staphylococcus capitis
crece en regiones con glándulas sebáceas (como la frente) y Staphylococcus haemolyticus
y Staphylococcus hominis se hallan en zonas dotadas de glándulas apocrinas (como la
axila).
Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SARM) es importante porque produce
graves infecciones en pacientes hospitalizados. Las colonias de S. aureus son doradas
como consecuencia de los pigmentos.
Los estreptococos son descritos como bacterias que forman células ovoides o esféricas, de
menos de 2 µm de diámetro, grampositivas, catalasa negativas, anaerobias facultativas,
con tendencia a formar cadenas o parejas. Fermentan la glucosa produciendo ácido
láctico.
1. Grupo piogénico: formado por especies betahemolíticas, de colonias grandes.
2. Grupo mitis: incluye al patógeno neumococo (S. pneumoniae) y a otros estreptococos
habituales de la cavidad oral, que producen alfahemólisis en agar sangre.
3. Grupo anginosus o milleri: se encuentran en la cavidad oral humana, en el tracto
genital y gastrointestinal, con colonias de tamaño pequeño y característico olor a
caramelo.
4. Grupo salivarius: se encuentran en la cavidad oral humana: S. vestibularis, S. salivarius
y S. thermophilus. El último de ellos se relaciona con productos lácteos.
5. Grupo bovis: en el canal intestinal de los animales y que, en ocasiones, infectan a
humanos. Pertenecen al grupo D de Lancefield.
Medios de cultivo.
Agar sangre.
El agar sangre se prepara utilizando un medio base puede ser agar base sangre, agar
Mueller Hinton, o una combinación de nutritivo con agar soya tripticasa al cual después de
su preparación yesterilización hay que incorporarle en condiciones de esterilidad 5% de
sangre ovina.
Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el tipo de
hemólisis que genera, y estos pueden ser:

Alfa:
Beta:Halos
Gamma: verdosos
Halos incoloros
Staphylococcus aureus, presentan beta hemólisis en agar sangre, aunque algunas cepas Inexistencia de
(reducción
halos(hemólisis de
total).
(sin hemólisis). la
pueden carecer de hemolisinas, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus
hemoglobina de los
epidermidis no producen hemólisis en agar sangre.
glóbulos rojos a
Agar manitol salado. metahemoglobina en el
medio, formación de
Es un medio altamente selectivo
biliverdina).
debido a su alta concentración salina.
Los estafilococos coagulasa positivos
hidrolizan el manitol acidificando el
medio; las colonias aparecen
rodeadas de una zona amarilla
brillante. Los estafilococos coagulasa
negativos, presentan colonias
rodeadas de una zona roja o púrpura

COLORACIÓN GRAM

 Las células fijadas al calor sobre un portaobjetos se tiñen, primero con una solución de
cristal violeta y son lavadas después para quitar el exceso de colorante. En este estado,
 todas las células, tanto las grampositivas como las gramnegativas, están teñidas de
azul o violeta.
 El portaobjetos se cubre entonces con una solución de yodo-yoduro potásico (Lugol).
El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta.
De nuevo tanto las células grampositivas como las gramnegativas se encuentran en la
misma situación.
 Se lleva a cabo después la decoloración, usando una mezcla de alcohol-acetona,
sustancias en las que es soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos
(grampositivos) no se decoloran, mientras que otros (gramnegativos) lo hacen.

CATALASA
La catalasa es una enzima que descompone el peróxido de hidrogeno (H2O2), en agua y
oxígeno, el desprendimiento de este último es evidenciado en la prueba mediante el
burbujeo.

COAGULASA
Permite diferenciar S. aureus, que posee coagulasa, de las otras especies de estafilococos
que generalmente se denominan coagulasa negativos. S. aureus posee dos tipos de
coagulas:
a. Una endonucleasa o coagulasa ligada que está unida a la pared celular. Esta actúa
directamente sobreelfibrinógeno provocando la formación decoágulos o grumoscuandose
mezcla una suspensión bacteriana con un plasma citratado (test en lámina). b. Una
exocoagulasa o coagulasa libre que actúa mediante la activación de un factor (CRF),
formándose un complejo coagulasa- FCR, el cual reacciona con el fibrinógeno
produciéndose un coágulo de fibrina (Test en tubo).

BACTERIAS ESPORULADAS
La posición y la morfología de la endospora en el interior de la bacteria constituyen un
carácter taxonómico útil para diferenciar especies dentro de un mismo género. Por
ejemplo, especies del género Clostridium poseen una endospora esférica con localización
terminal y deformante de la célula vegetativa, por lo que suele ser denominada en palillo
de tambor. Bacillus thuringiensis tiene localizada la endospora elipsoidal en el centro de la
célula vegetativa, lo que provoca un abombamiento característico denominado en huso.
 ENTEROBACTERIAS: PRUEBAS Y FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS
Lectura: se efectúa después de 18 a 24 horas de incubación a 37°C. Se lee un quebrado, la
reacción ocurrida en la superficie del medio corresponde al numerador (parte aerobia) y la
reacción ocurrida en la profundidad del medio corresponde al denominador (parte
anaerobia). La acidez se denomina con la letra A (color amarillo) y la alcalinidad con la
letra K (color rojo).
1. AGAR TSI
Fundamento: en este medio se leen las siguientes reacciones bioquímicas:
a. Fermentación de la glucosa (K/A).
b. Fermentación de glucosa, lactosa y/o sacarosa (A/A)
c. No fermentación de los carbohidratos (K/K), la bacteria no utiliza los hidratos de
carbono, produciendo aminas que alcalinizan el fondo y la superficie del medio.
d. Algunas bacterias no fermentadoras solamente utilizan la peptoanaeróbicamente
dando un TSI: K/N, es decir no hay cambio en el fondo del tubo.
e. Producción de gas: ruptura y/o elevación del medio.
f. Producción de H2S: ennegrecimiento del medio.
El agar TSI tiene tres azúcares: glucosa (1 g/L), lactosa (10 g/L) y sacarosa (10 g/L). Como
indicador de PH tiene ROJO DE FENOL el cual vira al color amarillo en presencia de acidez
y al color rojo en presencia de alcalinidad. Tiene como fuente de azufre el TIOSULFATO DE
SODIO, necesario para que las bacterias puedan producir H2S y como indicador de H2S,
SULFATO FERROSO el cual reacciona con el H2S produciendo un precitado negro e
insoluble de sulfato ferroso. Para que se produzca H2S, se requiere de un medio ácido por
lo que dicha producción generalmente está limitada al fondo del medio, razón por la cual
un fondo negro debe leerse como A (ácido), aunque el color amarillo usual esté tapado
por el color negro.
2. AGAR LIA
Principio: en agar LIA se determina la capacidad de un microorganismo para utilizar el
aminoácido LISINA como fuente de nitrógeno, descarboxilándolo o desaminándolo, la
fermentación de glucosa, la producción o no de gases (CO2), junto con la producción o no
de ácido sulfhídrico (H2S).
Lectura: Se efectúa después de 18 a 24 horas de incubación (48 horas si es necesario) a
37ºC. Se lee un quebrado, la reacción ocurrida en la superficie del medio corresponde al
numerador (parte aerobia) y la reacción ocurrida en la profundidad del medio
corresponde al denominador (parte anaerobia). La acidez se denomina con la letra A
(color amarillo) y la alcalinidad con la letra K (color púrpura).
Fundamento: en este medio se leen las siguientes reacciones bioquímicas:
a. Fermentación de la glucosa (K/A), la bacteria no utiliza el aminoácido solo fermenta la
glucosa.
b. Descarboxilación de la lisina: (K/K)
c. Desaminación de la lisina: (R/A) rojo/ amarillo
d. Producción de gas: ruptura o elevación del medio
e. Producción de H2S: ennegrecimiento del medio
El indicador del PH del medio es PÚRPURA DE BROMOCRESOL, el cual en acidez vira al
color amarillo y en alcalinidad al color púrpura. Por contener pequeña cantidad de
Glucosa (1 g/ L) al ser fermentada al fondo del tubo es amarillo y la superficie alcalina.
Lecturas posibles: R/A K/K K/K K/A.
Muchas bacterias poseen descarboxilasas que actúan sobre el aminoácido lisina, con
liberación de aminas de reacción alcalina y con producción de CO2. Para que actúen las
descarboxilasas se requiere pH ácido que se obtiene por la fermentación de la glucosa que
tiene el medio. La desaminación de la lisina es un proceso oxidativo que se manifiesta por
la aparición de color rojo en el tendido, siendo el fondo del tubo amarillo por
fermentación de la glucosa que posee el medio. Tiene como fuente de azufre el
TIOSULFATO DE SODIO, necesario para las bacterias puedan producir H2S y como
indicador H2S, CITRATO FERRICO DE AMONIO el cual reacciona con el H2S produciendo un
precipitado negro e insoluble de sulfato ferroso. Para que se produzca H2S se requiere de
un medio ácido por lo que dicha producción generalmente está limitada al fondo del
medio, razón por la cual un fondo negro debe leerse como A (ácido), aunque el color
amarillo usual esté tapado por color negro.
AGAR CITRATO DE SIMMONS
Principio: en agar CITRATO DE SIMNONS se determina la capacidad de un microorganismo
de emplear el citrato como única fuente de carbono en ausencia de fermentación de
azúcares o de producción de ácido láctico.
Lectura: se efectúa después de 18 a 24 horas de incubación (48 horas sí es necesario) a
37ºC.
Fundamento: Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensación de
acetilo con la coenzima A y oxalacetato para entrar en el ciclo de Krebs. El medio utilizado
contiene también sales de amonio inorgánicas. Un organismo capaz de utilizar el citrato
como única fuente de carbono también es capaz de utilizar las sales de amonio como
única fuente de nitrógeno. Las sales de amonio se desdoblan en amoniaco (NH) con la
consiguiente alcalinidad del medio. El indicador de pH es el AZUL DE BROMOTIMOL el
cual en presencia de alcalinidad vira al color azul indicando que la prueba es POSITIVA.
Cuando no hay cambio de color ni crecimiento se dice que la prueba es NEGATIVA. Si no
hay cambio de color, pero sí hay crecimiento la prueba es DUDOSA.
CALDO UREA
Principio: en el caldo UREA se determina la capacidad de un microorganismo de producir
UREASA y desdoblar la urea, formando 2 moléculas de amoniaco.
Lectura: Se efectúa después de 18 a 24 horas de incubación a 37ºC.
Fundamento: El sustrato urea es una diamina del ácido carbónico, denominada
carbamida. Todas las amidas (RCO- NH2) son rápidamente hidrolizadas. La hidrólisis de la
urea es catalizada por una enzima específica que es la ureasa, es una enzima microbiana
importante, relacionada con la descomposición de los compuestos orgánicos. Las enzimas
bacterianas se clasifican en adaptativas o constitutivas. Una enzima adaptativa o inducida
es aquella que es producida por una bacteria solamente cuando se encuentra presente su
sustrato específico. La ureasa es una enzima constitutiva ya que la sintetizan ciertas
bacterias sin tener en cuenta si hay o no el sustrato urea. El indicador de PH es rojo de
fenol, el cual en alcalinidad vira a un color violeta indicando una prueba POSITIVA. Si el
color es amarillo indica una prueba NEGATIVA.
MEDIO SIM
Principio: En el medio SIM se determina la capacidad e un microorganismo de moverse
(Presencia de flagelos), de producir INDOL y H2S.
Lectura: Se efectúa de 18 a 24 horas de incubación a 37ºC. Agregar 10 gotas de reactivo
de ERLICH.

Fundamento: El INDOL es uno de los productos del metabolismo del aminoácido

TRIPTOFANO. Las bacterias que poseen la enzima TRIPTOFANASA son capaces de
hidrolizar y desaminar el triptófano con producción de indol, ácido pirúvico y amoniaco. El
indol se puede detectar en un medio adecuado observando el desarrollo de un color
rojo después de agregar el reactivo de Erlich o de Kovacs indicando una prueba
POSITIVA, debido a que el indol reacciona con el grupo aldehído del p-
dimetilaminobenzaldehido. Si el color es amarillo indica una prueba NEGATIVA. EL SIM es
un medio semisólido sin hidratos de carbono que inhiban la producción deH2Sy tiene
TIOSULFATO DE SODIO fuente de azufre y HIERRO PEPTONADO como indicador de HS, lo
que lo hace más sensible en la detección de H2S por producción de un precipitado negro
de sulfuro ferroso. La MOVILIDAD BACTERIANA es otra característica importante en la
identificación final de especie, se realiza en medios semisólidos como el SIM, debiéndose
leer antes que la prueba de indol porque al agregar el reactivo de Kovacs ésta se puede
enmascarar. La prueba de motilidad se interpreta realizando un cuidadoso examen
macroscópico del medio para observar una zona de desarrollo difuso que parte de la línea
de inoculación.
CALDOS MR-VP
Principio: En el caldo MRVP se determina por qué vía metabólica fermenta la glucosa la
bacteria.
Lectura: Se efectúa después de 18 a 24 horas de incubación a 37ºC. Agregar 10 gotas de
ROJO DE METILO al tubo MR, la aparición inmediata de un color rojo indica que la prueba
es positiva para MR, la aparición de un color amarillo indica que la prueba es NEGATIVA.
Al tubo VP agregar 10 gotas de KOH al 40% y 5 gotas de ALFA NAFTOL al 5%, mezclar
fuerte después de la adición de cada reactivo, esperar 15 minutos y leer, la aparición de
un color rojo indica una prueba de VP POSITIVA, la aparición de un color amarillo o café
indica una prueba de VP NEGATIVA.
Fundamento: La bacteria puede fermentar la glucosa por la VIA ACIDA MIXTA con
producción de metabolitos como ácido láctico, fórmico y succínico, los cuales van a hacer
descender el pH inicial delmedio de 6.9 a 4.2, lo cual se visualiza al agregar el indicador de
pH ROJO DEMETILO, el cual a pH ácido vira a un color rojo. La bacteria puede fermentar la
glucosa por la VIA BUTILEN GLICOLICA con producción de productos neutros como el
ACETIL METIL CARBINOL (ACETOINA), el 2,3 BUTILEN GLICOL y el DIACETIL. El producto
final más frecuente es el 2,3 BUTILEN GLICOL, que es fácilmente oxidado a ACETIL METIL
CARBINOL y luego a DI-ACETIL. El VP realmente es una búsqueda de DI- ACETIL. El VP
realmente es una búsqueda de DI-ACETIL, ya que las condiciones de la prueba convierten
fácilmente los otros dos componentes en diacetil. Las 3 sustancias son neutras con el
resultado de que PH del medio no baja sensiblemente y por lo tanto la bacteria es MR
negativa y VP positiva. La bioquímica de la fermentación de la glucosa hace muy poco
probable encontrar cultivos MR y VP positivos. Lo sí es más probable es encontrar las 2
pruebas negativas en el caso de bacterias no fermentadoras.