Rev. Int. Contam. Ambie.

39, 95-103, 2023

https://doi.org/10.20937/RICA.54471

DESARROLLO DE UN MÉTODO ANALÍTICO PARA LA DETERMINACIÓN DE

LAS ESPECIES Cr(III) Y Cr(VI) EN MEDIO ACUOSO
Development of an analytical method for the determination of Cr(III) and Cr(VI) species in an aqueous medium

Charity ANDRADE1*, Ana CÁCERES2, Gabriela LÓPEZ2 y Ever MORALES3

1
Universidad del Zulia, Departamento de Química, Laboratorio de Química Ambiental, Apartado Postal 526,
Maracaibo-Zulia, República Bolivariana de Venezuela.
2
Universidad del Zulia, Departamento de Química, Laboratorio de Desarrollo de Métodos Analíticos, Apartado
Postal 526, Maracaibo-Zulia, República Bolivariana de Venezuela.
3
Carrera de Ingeniería Ambiental, Escuela Superior Politécnica Agropecuaria de Manabí Manuel Félix López,
Manabí, Ecuador.

* Autor para correspondencia: [email protected]

(Recibido: junio de 2021; aceptado: marzo de 2022)

Palabras clave: cromatografía iónica, especies de cromo, gradiente.

RESUMEN

El cromo está presente en la naturaleza principalmente como las especies Cr(III) y

Cr(VI). El Cr(III) se conoce como oligoelemento esencial, mientras que el Cr(VI)
presenta toxicidad aguda. Se desarrolló un método cromatográfico (HPLC-iónico) para
la determinación de ambas especies de cromo en medio acuoso contaminado durante
su tratamiento por fitorremediación. Para esto se requirió la formación previa del
complejo aniónico [Cr(III)-EDTA]–. Se evaluó en modo isocrático la fuerza iónica
de la fase móvil y en modo gradiente la velocidad de flujo y el tiempo de gradiente.
El Cr(VI) presentó una fuerte interacción con la fase estacionaria, siendo adecuada la
determinación con 9.0 mM Na2CO3/3.0 mM NaHCO3, de mayor fuerza iónica. Para
Cr(III) la determinación fue con 2.8 mM Na2CO3/3.4 mM NaHCO3. Mediante el uso
del gradiente de concentración se logró separar y cuantificar simultáneamente ambas
especies en las siguientes condiciones: fase móvil A: 2.8 mM Na2CO3/3.4 mM NaH-
CO3 con introducción gradual de B: 9.0 mM Na2CO3/3.0 mM NaHCO3, a t = 0.5 min,
velocidad de flujo de 1.5 mL/min y volumen de muestra de 50 μL. El uso de HPLC-
iónico representa una alternativa eficiente, rápida y con menor impacto ambiental que
las técnicas convencionales con la notable ventaja de la determinación simultánea de
estas especies.

Key words: ion chromatography, chromium species, gradient.

ABSTRACT

Chromium is present in nature mainly as Cr(III) and Cr(VI) species. Cr(III) is known as
an essential trace element, whereas Cr(VI) presents acute toxicity. A chromatographic
method (HPLC-ionic) was developed for the determination of both chromium species
in contaminated aqueous medium during their treatment by phytoremediation. For this,
the previous formation of the anionic complex [Cr(III)-EDTA]– was required. The ionic
96 C. Andrade et al.

strength of the mobile phase was evaluated in isocratic mode, while the flow velocity
and gradient time were evaluated in gradient mode. Cr(VI) showed a strong interac-
tion with the stationary phase and the determination with 9.0 mM Na2CO3/3.0 mM
NaHCO3 of greater ionic strength was adequate, whilst for Cr(III) determination was
performed with 2.8 mM Na2CO3/3.4 mM NaHCO3. The use of a concentration gradient
allowed for the separation and quantification of both species simultaneously with the
appropriate conditions: mobile phase A: 2.8 mM Na2CO32-/3.4 mM NaHCO3 with
the gradual introduction of B: 9.0 mM Na2CO3/3.0 mM NaHCO3, t = 0.5 min, flow
rate of 1.5 mL/min, and sample volume of 50 μL. The use of HPLC-ionic represents an
efficient, fast alternative with less environmental impact than conventional techniques
with the remarkable advantage of the simultaneous determination of these species.

INTRODUCCIÓN la fluorescencia de rayos X, la quimioluminiscencia

y los métodos colorimétricos (los más utilizados),
En los sistemas naturales, la especiación de los debido al menor tiempo de análisis y a los límites de
metales es de gran complejidad y determina su movi- detección (LOD) de hasta 0.1 μg/L (Dimitrakopoulos
lidad y biodisponibilidad en el ambiente; por lo tanto, et al. 2012, Wyantuti et al. 2015, Breslin y Branagan
la especiación de metales desempeña un papel clave 2019). Por ello, para lograr LOD más bajos, la ICP-
en la determinación de la bioacumulación potencial y MS suele ser preferida como método de detección
la toxicidad de los metales, siendo de interés la eva- debido a su sensibilidad superior y la falta de inter-
luación de sus riesgos ecológicos (Allen 1993). Entre ferencias significativas, con LOD comparables con
los métodos de determinación/especiación de cromo, el uso de métodos electrotérmicos cuyos LOD son de
las técnicas más utilizadas son la espectrometría 0.01μg/L (Milačič y Ščančar 2020, Spanu et al. 2021).
de absorción en la región ultravioleta-visible (UV- En la presente investigación se desarrolló un mé-
visible), seguida de la espectrometría de absorción todo analítico basado en la cromatografía líquida de
atómica (AAS) con fuente de llama o electrotérmica alta resolución de intercambio iónico (HPLC-iónico)
(Amaro et al. 2005). con detección por conductividad para la separación
En general, estas técnicas son sensibles y apropia- y cuantificación simultánea de las especies Cr(III)
das para la determinación de Cr(VI) y cromo total, y Cr(VI) en agua, con la finalidad de monitorear de
respectivamente, en aguas ambientales y residuales, manera rápida, eficiente y accesible la especie quí-
aunque presentan una selectividad limitada. La es- mica presente en aguas contaminadas.
pectroscopía atómica ofrece las mejores propiedades
analíticas, es decir, mayor intervalo lineal, menores
límites de detección y mayor reproducibilidad. Den- MATERIALES Y MÉTODOS
tro de estas técnicas la espectroscopía de emisión ató-
mica con fuente de plasma por inducción (ICP-AES) Reactivos
es la que presenta mejores características (Amaro et Se utilizaron, como sales de cromo, cloruro de
al. 2005). Sin embargo, es importante destacar que cromo (III) (CrCl3 • 6H2O, ultrapuro, Sharlau) y
el método por ICP-AES sólo puede utilizarse para la dicromato de potasio (K2Cr2O7, 99.8 %, Riedel de
determinación de cromo total, requiriendo de etapas Haën). Para la fase móvil se utilizaron carbonato de
previas de separación para obtener información so- sodio (Na2CO3) y bicarbonato de sodio (NaHCO3).
bre especiación. Los métodos cromatográficos son La sal disódica del ácido etilendiaminotetraacético
especialmente atractivos para la separación en estos (EDTA), grado reactivo, se utilizó para la formación
estudios debido a que pueden diferenciar entre varias del complejo aniónico de la especie de Cr(III).
formas químicas de algunos elementos (Hernández
et al. 2017, 2018). Sistema cromatográfico
Las técnicas cromatográficas asociadas a espectro- Se utilizó un sistema de cromatografía líquida
metría de masas con plasma acoplado inductivamente Shimadzu provisto de una columna aniónica AS9-SC
(ICP-MS) tienen mayor selectividad y, en general, (4 × 250 mm) Ion Pac Dionex, una columna de res-
permiten la separación de Cr(VI) de complejos de guardo AG9-SC (4 × 50 mm) Ion Pac Dionex, mem-
Cr(III). Además, son al menos de 10 a 100 veces más brana supresora de iones Dionex ASR 300, 4 mm
sensibles que las técnicas no cromatográficas como de autorregeneración y detector de conductividad
 DETERMINACIÓN DE LAS ESPECIES Cr(III) Y Cr(VI) EN MEDIO ACUOSO 97

controlado mediante el programa LCsolution. Las en función de la respuesta obtenida en los parámetros
condiciones generales de operación fueron: fase de calidad cromatográfica como área (A), eficiencia
móvil: Na2CO3/NaHCO3, velocidad de flujo entre (N), asimetría (As), anchura de pico (Wi), factor de
0.5 y 2.0 mL/min, volumen de inyección de 50 µL y retención (k`), resolución (Rs) y factor de separación
temperatura de 25 ºC. entre bandas adyacentes (α).
En cuanto a la separación de las especies Cr(III) y
Determinación de las especies Cr(III) y Cr(VI) Cr(VI) de manera simultánea, se analizó la variación
en medio acuoso de la respuesta en los parámetros cromatográficos de
Tratamiento de la muestra acuerdo con: (a) diferencia en la concentración y pH
La determinación de la especie Cr(VI) se realizó de la fase móvil, y (b) uso del gradiente de concen-
en forma de ion cromato (CrO42–) de manera directa tración en la fase móvil. Las concentraciones usadas
por inyección de soluciones estándares. Por su parte, en la fase móvil y sus correspondientes valores de
para la determinación mediante cromatografía anió- pH se muestran en el cuadro I.
nica del Cr(III) se realizó la complejación de este ion En cuanto al uso del gradiente de concentra-
con la sal disódica del ácido etilendiaminotetraacético ción, las corridas se iniciaron con la fase móvil A
(EDTA), ya que se presenta en medio acuoso con pH (2.8 mM Na2CO3/3.4 mM NaHCO3, pH = 10.50) con
ácido y ligeramente ácido en forma catiónica (Cr3+, introducción gradual de B (9.0 mM NaCO3/3.0 mM
Cr(OH)2+). La formación del complejo aniónico NaHCO3, pH = 10.90), hasta alcanzar el 100% de
[Cr(III)-EDTA]– se evaluó en cuanto al tiempo de esta última en el tiempo t. Para ello se evaluaron dos
calentamiento (5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 75 y factores, velocidad de flujo a tres niveles (1.0 1.5 y
90 min) a 50 ºC, el pH (2, 3 y 4) y la relación molar 2.0 mL/min) y tiempo de gradiente a ocho niveles
Cr(III):EDTA (1:1, 1:5, 1:10, 1:20, 1:30, 1:40 y 1:50). (0.1, 0.2, 0.3, 0.5, 0.75, 1.0, 1.5 y 2.0 min). El tiempo
En el caso de muestras de agua provenientes de entre corridas para garantizar la estabilidad de la fase
los ensayos de fitorremediación, se filtraron con móvil A fue de 5 min.
membranas de 0.45 µm antes de ser analizadas. La validación de los métodos se realizó mediante
la evaluación de los parámetros: precisión, exactitud,
Separación y cuantificación de las especies Cr(III) límite de detección y de determinación, sensibilidad
y Cr(VI) e intervalo de linealidad (Cámara et al. 2004).
Se analizó la respuesta ante la variación de la
fuerza iónica de la fase móvil (relación carbonato/ Análisis estadístico
bicarbonato) en modo isocrático, como se describe Las condiciones adecuadas para la separación y
en el cuadro I. cuantificación de las especies de cromo se selecciona-
La determinación de las condiciones adecuadas ron luego de la aplicación de un análisis de varianza
para la detección de las especies Cr(III) y Cr(VI) (ANDEVA) de dos vías con diseño factorial 3 × 8
en medio acuoso se realizó inicialmente de manera para velocidad de flujo y tiempo de gradiente, utili-
individual y luego se evaluó la separación de dichas zando el programa estadístico Minitab 17.0.
especies en soluciones estándares con mezclas de és- Para realizar la comparación entre métodos se
tas. La selección de condiciones adecuadas se realizó aplicó un ANDEVA de una vía con una prueba de

CUADRO I. FASES MÓVILES EMPLEADAS EN LA SEPARACIÓN ISOCRÁTICA DE LAS ES-

PECIES Cr(VI) Y Cr(III).

[HCO3–] [CO32–] Fuerza FM Especie evaluada

pH [HCO3–/CO32–]
(mM) (mM) (mM) Cr(VI) Cr(III) Ambas
10.24 6.0 3.0 9.0 2.00 No Si No
10.40 2.8 2.2 5.0 1.27 Si Si No
10.52 3.4 2.8 6.2 1.21 Si Si Si
10.33 1.7 1.8 3.5 0.94 Si No No
10.65 3.4 4.2 7.6 0.81 No No Si
10.76 4.0 6.0 10.0 0.67 No No Si
10.90 3.0 9.0 12.0 0.33 Si Si No

FM: fase móvil.

98 C. Andrade et al.

Tukey para la comparación de medias a un nivel de EDTA se obtuvo para valores de pH 2, 3 y 4, mostrando
significancia del 95%. dos máximos de absorbancia, uno a 556 y 565 nm y
otro de menor intensidad a 401 y 407 nm para pH 3 y
4, respectivamente. A pH 2 se registraron dos máximos
RESULTADOS Y DISCUSIÓN con una absorbancia significativamente menor a 595 y
410 nm. De manera similar, Fernández y Alonzo (1956)
Formación del complejo aniónico entre la especie reportaron que en el intervalo de pH comprendido entre
Cr(III) y el ácido etilendiaminotetraacético 1.5 y 4.0, se alcanza el máximo valor de absorción
La reacción de formación del complejo Cr(III)- y permanece prácticamente constante, decreciendo
EDTA se ha descrito como una reacción compleja progresivamente al aumentar el pH de 4 a 13.
que se realiza en dos etapas. La primera es una fase Por lo expuesto anteriormente, la formación del
lenta en la cual se realiza la preasociación y entrada complejo para la presente investigación se realizó
del EDTA a la esfera interna, y la segunda una fase adicionando una relación molar Cr(III):EDTA de
rápida que implica el desplazamiento de todos los 1:20, aplicando calentamiento a 50 ºC durante 1 h, en
ligandos de H2O y OH– por EDTA (Cerar 2015). un intervalo de pH de 3 a 4, midiendo la absorbancia
Experimentalmente, esta reacción logró comple- a 556 nm.
tarse luego de una semana a temperatura ambiente,
por lo que se hizo necesario evaluar la aplicación de Determinación de las especies Cr(VI) y Cr(III)
calentamiento para acelerar la obtención del com- mediante HPLC-iónico modo isocrático con de-
plejo, entre otros parámetros de importancia, como tección por conductividad
la relación molar metal:EDTA y el pH. Para la separación de las especies de cromo se par-
Al evaluar la influencia de los tiempos de ca- tió del uso de la fase móvil 1.8 mM Na2CO3/1.7 mM
lentamiento establecidos con una temperatura de NaHCO3 en condiciones isocráticas, realizando va-
50 ºC sobre la absorbancia del complejo Cr(III)-ED- riaciones en la concentración de la fase móvil para
TA se demostró que no existe diferencia significativa cada especie de manera individual y luego de forma
(p > 0.05) en los valores de absorbancia medidos con simultánea.
tiempos de calentamiento superiores a 60 min. Por En la determinación de cromo hexavalente Cr(VI)
otra parte, se demostró que no hay diferencia signi- como ion cromato (CrO42–), éste mostró una fuerte
ficativa (p > 0.05) al adicionar a la relación molar interacción con la fase estacionaria debido a que los
de reactivo para la formación del complejo EDTA iones polivalentes (como es el caso del oxianión cro-
en proporción 1:20 o superior. Algunos autores han mato) son retenidos con mucho mayor fuerza que las
reportado uso excesivo de EDTA, sin precisar la can- especies con una sola carga (Skoog et al. 2001). Esto
tidad (Susuki y Serita 1985), en tanto que otros (más provoca una retención alta en los sitios activos de la
recientes) han referido el uso de EDTA en relación columna, que se refleja en altos tiempos de retención
100 mg/L Cr:1.9 mM EDTA, lo que corresponde a (tR > 1.8 min) y en el aumento de éste a medida que
una relación molar 1:1 para la formación del com- disminuyen la fuerza iónica de la fase móvil o su pH
plejo (Coetzee et al. 2004). (Cuadro II).
Por su parte, el espectro de absorción en la región De acuerdo con los parámetros cromatográficos,
UV-visible del complejo formado entre el Cr(III) y el la fase móvil compuesta por 3.0 mM NaHCO3/

CUADRO II. PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS OBTENIDOS EN LA DETERMINACIÓN

DE Cr(VI) EN FUNCIÓN DE LAS FASES MÓVILES UTILIZADAS, EMPLEAN-
DO UNA DISOLUCIÓN ESTÁNDAR DE 4 mg Cr(VI)/L, FLUJO DE 2 mL/min,
VOLUMEN DE INYECCIÓN 50 µL EN MODO ISOCRÁTICO.

FM: Na2CO3/NaHCO3 Fuerza iónica pH tR Área Wi As N

1.8 mM/ 1.7 mM 0.0045 10.33 6.521 40512 0.756 1.304 1188
2.2 mM/ 2.8 mM 0.0058 10.40 5.185 40789 0.582 1.363 1270
2.8 mM/ 3.4 mM 0.0073 10.52 3.946 39365 0.548 1.095 831
9.0 mM/3.0 mM 0.0195 10.90 1.806 41285 0.211 1.262 1164

FM: fase móvil, tR: tiempo de retención (min), Wi: ancho de pico en la base (min), As: asimetría,
N: eficiencia.
 DETERMINACIÓN DE LAS ESPECIES Cr(III) Y Cr(VI) EN MEDIO ACUOSO 99

9.0 mM Na2CO3 favoreció la elución del ion cromato. permitió la retención efectiva del complejo monoa-
Debido a su alta carga negativa, este ion requiere de niónico [Cr(III)-EDTA]–, al igual que la fase móvil
una fase móvil con una alta fuerza iónica para ser 3.0 mM Na2CO3/6.0 mM NaHCO3 (Cuadro III). En
eluido. Es decir, un aumento del pH para disminuir cambio, con el el ion [Cr(III)-EDTA]– se logró una
la interacción del ion cromato como resultado de un mejor separación con menor fuerza iónica (2.8 mM
aumento en la concentración del contraión CO32–. Na2CO3/3.4 mM NaHCO3). Con esta fase móvil se
Esto propicia que el analito se eluya más rápidamente logra una menor anchura de pico y mayor eficiencia,
de la columna cromatográfica, observándose la dis- con resolución o separación entre los picos de Cr(III)
minución en el tiempo de retención, de manera que y EDTA mayor a 1.5, lo cual indica una separación
esta fase móvil provoca un aumento en el área del completa de los picos.
pico y disminuye de manera significativa su anchura En cuanto a la determinación simultánea de las
con alta eficiencia. dos especies, en la figura 1 se pueden observar,
En el caso de la especie Cr(III), se identificaron de izquierda a derecha: el pico 1, perteneciente al
inicialmente los tiempos de retención del pico per- ion cloruro (Cl–) correspondiente a la sal de cromo
teneciente al complejo aniónico [Cr(III)-EDTA]– y utilizada como estándar (CrCl3.6H2O); el pico2,
del pico correspondiente al exceso de EDTA. Para correspondiente al exceso de EDTA; el pico 3 del
la determinación del Cr(III), por su alta fuerza complejo [Cr(III)-EDTA]–, y el pico 4 correspon-
iónica la fase móvil 9.0 mM Na 2CO 3/3.0 mM diente al ion cromato. Las pruebas se realizaron
NaHCO3 usada en la determinación del Cr(VI) no con un estándar de concentración 4 mg Cr(III)/L y

CUADRO III. PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS EN LA DETERMINACIÓN DE Cr(III) POR

HPLC-IÓNICO UTILIZANDO DIFERENTES CONCENTRACIONES DE FASE MÓVIL
PARA UN ESTÁNDAR DE 4 mg Cr(III)/L EN MODO ISOCRÁTICO*.

Na2CO3/NaHCO3 Fuerza iónica tR Área Wi As R k` N

1.8 mM/ 1.7 Mm 0.0045 1.900 880617 0.105 1.265 1.902 0.845 1574
2.2 mM/ 2.8 Mm 0.0058 2.608 431230 0.343 1.660 2.064 2.477 938
2.8 mM/ 3.4 Mm 0.0073 1.596 593112 0.166 1.410 1.564 1.128 1474
3.0 mM/6.0 Mm 0.0090 0.917 5228082 0.165 1.281 NA NA 494
9.0 mM/3.0 Mm 0.0195 0.930 5945929 0.176 2.601 NA NA 446

*Condiciones cromatográficas: columna analítica AS9-SC, velocidad de flujo 2 mL/min, volumen de inyección
de 50 µL, tiempo total de corrida 5 min.
tR: tiempo de retención (min), Wi: ancho de pico en la base (min), As: asimetría, R: resolución, k´ factor de
retención, N: eficiencia.

Detector A
Conductividad (μS cm–1)

150
[Cr(III)-EDTA]–
CrO42–
100

50

0
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 min
Tiempo (min)

Fig. 1. Separación de las especies Cr(III) y Cr(VI) con la fase móvil 2.8 mM Na2CO3/3.4 mM NaHCO3, para un
estándar de 4 mg Cr(III)/L y 250 mg Cr(VI)/L. Condiciones cromatográficas: columna analítica AS9-SC,
velocidad de flujo 2 mL/min, volumen de inyección de 50 µL, tiempo total de corrida 5 de min, modo
isocrático. Pico 1: ion cloruro (Cl–), pico2: exceso de EDTA, pico 3: complejo [Cr(III)-EDTA]–, pico 4:
ion cromato.
100 C. Andrade et al.

250 mg Cr(VI)/L debido a la diferencia en cuanto la elución de la especie Cr(VI). Sin embargo, como
a intensidad de las especies. Esto se debe a que la se expuso anteriormente, este tipo de fase móvil
conductividad iónica molar depende de factores no favorece la retención de la especie Cr(III). Por
como la carga y dimensión del ion, la viscosidad ello se adoptó un nuevo enfoque en la búsqueda de
del medio y la temperatura, y es directamente pro- la separación de estas especies, como es el uso del
porcional a la carga del ion (Castellan 1998), por lo gradiente de concentración.
que se puede observar una mayor área bajo la curva
para el ion polivalente. Determinación de las especies Cr(VI) y Cr(III)
La separación de ambas especies con la mayoría mediante HPLC-iónico modo gradiente
de las fases móviles evaluadas se logró con una buena Los parámetros cromatográficos obtenidos para
resolución (R > 1.5; Cuadro IV). Sin embargo, el cada uno de los factores indicaron que con las dife-
ion cromato (CrO42–) mostró una fuerte interacción rentes velocidades se realizó una separación adecuada
con la fase estacionaria, la cual se ve reflejada en una de las especies: As < 1.5, R > 1.5, k’ en el intervalo
marcada simetría posterior (As > 4.0) que supera el de 0.8 a 3.0, además, de un factor de separación entre
valor adecuado en cuanto a parámetros de calidad bandas adyacentes (α) > 2.5. Sin embargo, se notaron
analítica (As < 1.5). Esta asimetría posterior exhibe la diferencias en cuanto a la eficiencia obtenida, por lo
dificultad del ion para abandonar la fase estacionaria que se realizó el análisis estadístico tomando como
y establece, por tanto, la necesidad de utilizar una variable de respuesta el número de platos teóricos
fase móvil con mayor fuerza iónica. (N). El ANDEVA de dos vías aplicado al diseño
La fuerte interacción del ion cromato con la fase factorial 3 × 8 para los factores velocidad de flujo
estacionaria también determina un mayor tiempo de y tiempo de gradiente, indicó que ambos factores
retención respecto a la especie Cr(III) como [Cr(III)- mostraron efectos significativos frente a la eficiencia
EDTA]–, separada en este caso en forma del complejo como respuesta. El factor tiempo de gradiente desde
monoaniónico, así como una baja eficiencia (79 y 0.1 hasta 0.5 min obtuvo la mayor eficiencia sin
119) para la determinación de este ion. Por otra parte, diferencia significativa (p > 0.05), en tanto que para
al utilizar una fase móvil con mayor fuerza iónica el factor velocidad de flujo la mayor significancia en
(4.2 mM CO32– y 6.0 mM CO32–) para la separación la eficiencia se observó con un nivel bajo de 1 mL/
de ambas especies, se obtuvo un factor de retención min. No obstante, tanto la velocidad de 1 mL/min
menor a la unidad, lo que implica una elución muy como la de 1.5 mL/min se encuentran por encima del
rápida de la especie Cr(III). promedio general, generando las mejores eficiencias,
Los resultados anteriores indican que se requiere con diferencias significativas (p < 0.05) respecto al
mayor fuerza iónica de la fase móvil para mejorar uso de una velocidad de 2 mL/min.

CUADRO IV. PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS EN LA SEPARACIÓN DE LAS ESPECIES Cr(VI) Y

Cr(III) POR CROMATOGRAFÍA IÓNICA MODO ISOCRÁTICO, UTILIZANDO DIFERENTES
CONCENTRACIONES DE LA FASE MÓVIL PARA UN ESTÁNDAR DE 4 mg Cr(III)/L Y 250
mg Cr(VI)/L*, VELOCIDAD DE FLUJO DE 2 mL/min, VOLUMEN DE INYECCIÓN DE 50 µL.

FM: Na2CO3/NaHCO3
Especie tR Área Wi As R k` α N
(Fuerza iónica)
1.8 mM/1.7 mM Cr(III) 1.85 1644546 0.132 1.17 3.902 0.845 1010
(0.0045) Cr(VI) 3.59 3125479 0.810 4.65 1.887 3.162 2.759 79

2.8 mM/3.4 mM Cr(III) 1.54 1093034 0.179 1.24 1.361 1.053 1184
(0.0073) 2.367
Cr(VI) 2.62 4091526 0.962 4.78 1.886 2.493 119
4.2 mM/3.4 mM Cr(III) 1.31 1265296 0.147 1.28 1.298 0.747 1273
(0.0101) Cr(VI) 2.17 4163030 0.729 4.51 1.949 1.893 2.534 142

6.0 mM/4.0 mM Cr(III) 1.16 1191209 0.130 1.33 1.679 0.547 1267
2.486
(0.0140) Cr(VI) 1.77 4344720 0.536 4.10 1.829 1.360 174

FM: fase móvil, tR: tiempo de retención (min), Wi: ancho de pico en la base (min), As: asimetría, R: resolución,
k`: factor de retención, N: eficiencia, α: factor de separación entre bandas adyacentes.
 DETERMINACIÓN DE LAS ESPECIES Cr(III) Y Cr(VI) EN MEDIO ACUOSO 101

Por tanto, para la elección de la mejor condición el primero del ion cloruro, el segundo correspon-
de separación para las especies Cr(III) y Cr(VI), es diente al complejo [Cr(III)-EDTA]– y el tercero de
necesario tomar en cuenta el tiempo total de corrida, CrO42–, el cual aparece después del cambio de la
que incluye el tiempo entre corridas de 5 min para fase móvil que se aprecia en la figura a partir de los
garantizar la estabilización de la fase móvil A o fase 2.5 min con un ligero aumento en la conductividad
móvil inicial. Por esta razón se seleccionó la veloci- de la línea base.
dad de 1.5 mL/min, con un tiempo de gradiente de En el cuadro V se muestran los parámetros de
0.5 min, cuyo tiempo total de corrida fue de 10 min. calidad analítica para el método que permite la
En la figura 2 se muestra la separación de las separación de ambas especies de cromo mediante
especies Cr(III) y Cr(VI) para las condiciones selec- cromatografía iónica con el uso de gradiente. Se
cionadas, es decir, usando gradiente, fase móvil (A) observa un amplio intervalo de linealidad para
de 2.8 mM Na2CO3/3.4 mM NaHCO3, fase móvil Cr(VI), significativamente mayor al reportado por
B de 9.0 mM Na2CO3/3.0 mM NaHCO3, velocidad el método colorimétrico convencional descrito en el
de flujo de 1.5 mL/min, volumen de inyección de de Análisis de aguas potables y residuales 3500-Cr B
50 µL, tgradiente de 0.5 min y tiempo de corrida de 5 publicado por APHA-AWWA-WEF (2017), que se
min. Se pueden observar tres picos bien diferenciados, ha establecido en 0.1-4.0 mg/L (Doria et al. 2013)

60 Detector A
Cl–
Conductividad (μS cm–1)

50
CrO42–
40

30
[Cr(III)-EDTA]–
20

10

0
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 min
Tiempo (min)

Fig. 2. Separación de las especies Cr(III) y Cr(VI) usando gradiente, fase móvil (A): 2.8 mM Na2CO3/3.4
mM NaHCO3 y fase móvil B: 9.0 mM Na2CO3/3.0 mM NaHCO3, para un estándar de 1 mg Cr(III)/L y
25 mg Cr(VI)/L. Condiciones cromatográficas: columna analítica AS9-SC, velocidad de flujo de 1.5 mL/
min, volumen de inyección de 50 µL, tgradiente de 0.5 min, tiempo total de corrida de 5 min. De izquierda
a derecha: pico 1: ion cloruro (Cl–), pico 2: exceso de EDTA, pico 3: complejo [Cr(III)-EDTA]–, pico
4: ion cromato.

CUADRO V. PARÁMETROS DE CALIDAD DEL MÉTODO ANALÍTICO PARA LA

DETERMINACIÓN SIMULTÁNEA DE LAS ESPECIES Cr(III) Y Cr(VI) EN
MEDIO ACUOSO MEDIANTE CROMATOGRAFÍA IÓNICA EN MODO
GRADIENTE.

Parámetro Cr(III) Cr(VI)

Intervalo de linealidad 0.10 a 2.50 mg/L 0.25 a 50.00 mg/L
Curva de calibración Y = 138000 X – 10100 Y = 15371 X + 893
Coeficiente de correlación 0.9991 0.9999
Límite de detección 0.002029 mg/L 0.07247 mg/L
Límite de cuantificación 0.006764 mg/L 0.2416 mg/L
Repetibilidad 0.493±0.012 mg/L (2.34) 0.252±0.010 mg/L (4.03)
Promedio ± DE (% CV) 2.510±0.857 mg/L (0.86) 10.220±0.106 mg/L (1.04)
Reproducibilidad 0.952±0.026 mg/L (2.71) 9.9798±0.340 mg/L (3.41)
Sensibilidad analítica 138000 intensidad L/mg 15371 intensidad L/mg

DE: desviación estándar; % CV: coeficiente de variación.

102 C. Andrade et al.

CUADRO VI. COMPARACIÓN DEL MÉTODO CROMATOGRÁFICO

DESARROLLADO CON EL MÉTODO COLORIMÉTRICO
DESCRITO ANTERIORMENTE PARA LA DETERMINA-
CIÓN DE LA ESPECIE Cr(VI).

Muestra Método HPLC-iónico* Método UV-visible*

Muestra 1 3.643 ± 0.122 mg/L (3.36) 3.620 ± 0.085 mg/L (2.34)
Muestra 2 6.258 ± 0.070 mg/L (1.12) 5.674 ± 0.056 mg/L (0.98)

*Promedio ± desviación estándar (% coeficiente de variación).

HPLC-iónico: cromatografía líquida de alta resolución en modo iónico;
UV-visible: ultravioleta visible.

con un coeficiente de correlación cercano a la uni- CONCLUSIONES

dad. El LD permite la detección de concentraciones
de 0.072 mg/L y cuantificación de 0.242 mg/L. Esto El método desarrollado utilizando HPLC-iónico
indica que el nivel máximo de contaminación de con detección de conductividad demostró su eficien-
0.10 mg/ L de cromo en agua, establecido por la cia y precisión para la separación y cuantificación de
Agencia de Protección Ambiental estadounidense las especies Cr(III) y Cr(VI) en medio acuoso, sin di-
(US-EPA) se puede determinar con una precisión ferencia significativa con el método estandarizado por
adecuada dada por un coeficiente de variación espectrometría de absorción molecular UV-visible,
(CV) menor a 5 %, al igual que los valores límite que es adoptado hasta ahora por la US-EPA. Las
permisibles para la descarga de aguas residuales a ventajas de los métodos cromatográficos radican en la
cuerpos de agua (2.0 mg/L) según la Gaceta Oficial determinación simultánea de ambas especies, además
venezolana (GO 1995), por lo que es adecuado del uso de reactivos poco agresivos para el ambiente
para el seguimiento de aguas contaminadas en con generación de bajos volúmenes de desecho.
tratamiento.
Se puede observar que la detección del Cr(III)
se realiza con límites de detección y cuantificación REFERENCIAS
significativamente menores (LD = 0.001967 mg/L y
LC = 0.00656 mg/L) a los presentados en la forma Allen H. (1993). The significance of trace metal speciation
hexavalente, además de una mayor sensibilidad para for water, sediment and soil quality criteria and stan-
la detección. dards. Science of the total Environment 134 (1), 23-45.
Para realizar la comparación de este método con https://doi.org/10.1016/S0048-9697(05)80004-X
el método colorimétrico normalizado establecido por Amaro R., Murillo M., Escalona A., Lucena R. y Verdú
APHA-AWWA-WEF (2017) se midieron muestras R. (2005). Seguimiento del proceso de conversión y
acuosas provenientes de ensayos de fitorremediación eliminación del Cr(VI) y Cr(III) en las aguas de una
por ambos métodos y a los resultados obtenidos se industria de cromado por HPLC-ICP-OES. Ciencia
aplicó un ANDEVA de una vía con prueba de Tukey 13 (1), 78-84.
a un nivel de significancia del 95 % (Cuadro VI). APHA-AWWA-WEF (2017). Standard methods for
Mediante el análisis estadístico se comprobó que no the examination of water and wastewater. 23rd ed.
existe diferencia significativa (p > 0.05) entre los American Public Health Association, American Water
resultados obtenidos por el método propuesto de Works Association, Water Environment Federation,
cromatografía iónica con gradiente, y los obtenidos Washington DC, 1325 pp.
por el método colorimétrico UV-visible para la de- Breslin D. y Branagan L. (2019). Electrochemical detection
terminación de Cr(VI). of Cr(VI) with carbon nanotubes decorated with gold
El método desarrollado resulta ser confiable, nanoparticles. Journal of Applied Electrochemistry 49,
preciso y sensible, con ventajas como la identifica- 195-205. https://doi.org/10.1007/s10800-018-1259-2
ción y cuantificación de ambas especies de manera Cámara C., Fernández P., Martín A. y Pérez C. (2004).
simultánea, con el uso de reactivos poco agresivos Toma y tratamiento de muestras. Editorial Síntesis,
para el ambiente (Na2CO3, NaHCO3) en volúmenes Madrid, España, 334 pp.
mínimos, con una reducción significativa en cuanto Castellan G. (1998). Fisicoquímica. 2ª ed. Pearson Edu-
al volumen de desechos peligrosos generados. cación, México, 1084 pp.
 DETERMINACIÓN DE LAS ESPECIES Cr(III) Y Cr(VI) EN MEDIO ACUOSO 103

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