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Universidad Central de Venezuela

Facultad de Medicina
Escuela Luis Razetti
Cátedra de Bioquímica

TEMA 4
ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE LAS PROTEÍNAS

@bioquimicarazetti @BQRazetti

Octubre 2021
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Objetivos generales del Tema 2

 Describir la estructura de las proteínas
 Explicar con ejemplos la relación que existe entre la estructura de las proteínas
y la función biológica que desempeñan.
 Explicar las propiedades ácido-base de las proteínas.
 Describir algunos métodos de separación de proteínas.

Objetivos Contenidos
Estructura y Función de las Proteínas
Mencionar algunas funciones de las Transporte, defensa, catálisis, estructura y
proteínas. receptores.
Participación de grupos alfa-amino y alfa-
Representar un enlace peptídico. carboxilo.
Describir las características del enlace
Carácter parcial de doble enlace.
peptídico.
Enlaces que estabilizan las estructuras
Describir los niveles de organización
primaria, secundaria, terciaria y
estructural de las proteínas.
cuaternaria.
Definir conformación nativa y dominio
Conformación nativa y dominio funcional.
funcional.
Ionización de las cadenas laterales de los
Explique el efecto del pH sobre la
aminoácidos que forman la proteína y de
estructura de las proteínas.
los grupos terminales.
Explicar en qué consiste la Efectos de la temperatura y el pH sobre la
desnaturalización de las proteínas. estructura de las proteínas.
La Hemoglobina y la mioglobina como ejemplos de proteínas globulares

Grupo hemo, subunidades proteicas,

Comparar la estructura general de la
puentes salinos, bolsillo del hemo,
mioglobina y de la hemoglobina.
histidinas proximal y distal.
Describir las curva de saturación de la
hemoglobina y la mioglobina por el Curvas sigmoidea e hiperbólica. P50.
oxígeno.
Efecto alostérico del oxígeno sobre las
subunidades de la hemoglobina.
Explicar las características de la unión del
Cooperatividad. Formación y rotura de
oxígeno a la hemoglobina.
puentes salinos. Formas desoxi y oxi de la
hemoglobina.
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Unión del CO2 a algunos grupos amino.

Explicar el papel de la hemoglobina en el Formación y rotura de puentes salinos.
transporte de CO2, indicando la Reacción catalizada por la anhidrasa
participación de la anhidrasa carbónica. carbónica, formación de bicarbonato,
liberación de protones.
Explicar a nivel molecular el efecto que
tienen los cambios de pH y de presión de Unión de CO2 y H+ a algunos grupos de la
CO2 sobre el aporte de oxígeno a los Hemoglobina. Formación y rotura de
tejidos por parte de la hemoglobina puentes salinos.
(Efecto Bohr).
Predecir el efecto que tienen los cambios
Desplazamiento de las curva a la izquierda
de pH y de presión de CO2 sobre la curva
y a la derecha a distintos pH y presiones
de saturación de la Hemoglobina por
de CO2.
oxígeno.
Mencionar el origen del 2,3
Precursor glicolítico.
bisfosfoglicerato en el eritrocito.
Sitio de unión del 2,3 bisfosfoglicerato,
Explicar el efecto de 2,3 bisfosfoglicerato estabilización de forma desoxigenada
en la afinidad de la hemoglobina por el O2. (tensa) de la Hemoglobina. Formación y
rotura de puentes salinos.
Predecir el efecto que tienen los cambios
Desplazamiento de las curva a la izquierda
de concentración de 2,3 bisfosfoglicerato
y a la derecha a distintas concentraciones
sobre la curva de saturación de la
de 2,3 bisfosfoglicerato.
Hemoglobina por el oxígeno.
Estructura, localización, función y curva de
Comparar la hemoglobina y la mioglobina.
saturación con el oxígeno.
Proteínas fibrosas
Describir la estructura general de las
α queratina (alfa queratina) y colágeno.
proteínas fibrosas.
Comparar la composición de las proteínas Contenido relativo de prolina,
fibrosas con las proteínas globulares. hidroxiprolina, glicina y cisteína. Puentes
disulfuro.
Relacionar la estructura y la localización
Tejido conectivo, formación de fibras,
de la α queratina y del colágeno con su
faneras.
función.
Métodos de separación de proteínas

Explicar el fundamento de los métodos de Separación de acuerdo a cargas eléctricas:

separación de las proteínas. electroforesis y cromatografía de
intercambio iónico. Separación de acuerdo
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al peso molecular: centrifugación,

cromatografía de exclusión molecular.
Explicar cómo la electroforesis y la Separación de aminoácidos y péptidos a
cromatografía de intercambio iónico se diferentes pH.
pueden utilizar para separar aminoácidos
y proteínas.

Implicaciones médicas

Afinidad de la Hemoglobina por el

Comparar la Hemoglobina normal del
oxígeno, unión el 2,3 bisfosfoglicerato,
adulto y la Hemoglobina fetal.
curva de oxigenación.
Afinidad de la Hemoglobina por el
Comparar la Hemoglobina normal del
oxígeno, estructura primaria,
adulto y la Hemoglobina S.
polimerización molecular.
Predecir el efecto del pH estomacal sobre Ionización de grupos disociables,
las proteínas de la dieta desnaturalización.
Explicar el fundamento del efecto de las
sustancias usadas para realizar desrizado y Formación y/o rotura de enlaces disulfuro.
permanente del cabello.

Bibliografía
:
Champe, P., Harvey, R. y Ferrier, D. (2005) Bioquímica. 3ra ed. México:
Editorial Mc Graw Hill.
Devlin, Thomas. (2004). Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas.
4ta ed. Editorial Reverté S.A.
Mathews-Van Holde-Ahern. (2003). Bioquímica. 3ra ed. Editorial Addison
Wesley.
McKee, T. y McKee, J.R (2009) Bioquímica. 4ta ed. Madrid: Editorial Mc Graw
Hill.
Murray, R.; Bender, D.; Botham, K.; Kennelly, P. Rodwell, V. y Weil, P. (2010)
HARPER, Bioquímica ilustrada. 28o ed. México: McGraw Hill.Nelson, D. y Cox, M.
(2005). Lehninger. Principios de Bioquímica. 4ta ed. Editorial Omega.
Smith, C; Marks, A. y Lieberman, M. (2006). Bioquímica básica de Marks. Un
enfoque clínico. 2da ed. McGraw Hill-Interamericana.
Voet, D.; Voet, J. y Pratt, C. (2007). Fundamentos de Bioquímica. La vida a
nivel molecular. 2da ed. Editorial Médica Panamericana.
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Actividad de Práctica

1) Enmarca en la siguiente figura los grupos químicos que forman los enlaces
peptídicos:

2) Dibuja un enlace de hidrógeno correspondiente a la estructura secundaria de las

proteínas, señalando los grupos químicos que intervienen en la formación de dicho
enlace.

3) Identifica lo señalado en la siguiente figura. ¿Contiene esta proteína un grupo

prostético?

4) Explica el concepto de dominio y de conformación en las proteínas.

5) Compara (establece semejanzas y diferencias) la estructura de la

Inmunoglobulina G y el colágeno. Identifica si son globulares o fibrosas.

6) Explica el efecto de la temperatura y el pH sobre la estructura de las proteínas.

¿Cuándo se dice que una proteína se ha desnaturalizado?
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7) Se realizó una electroforesis de proteínas plasmáticas en acetato de celulosa a

pH 8,6 y se obtuvo el siguiente resultado:

- ¿Cuál es el fundamento de la electroforesis?

- ¿Cómo se relaciona el valor del punto isoeléctrico (pI) de una proteína con
su migración en un campo eléctrico?
- Revisa estos enlaces: http://www.farestaie.com.ar/te/bc/326.htm
http://www.med.unne.edu.ar/catedras/bioquimica/pdf/proteinas.pdf y
discute - - ¿Cuál es su utilidad en el diagnóstico clínico?

8) Se tiene una mezcla de tres proteínas (X, Y, Z) cuyos puntos isoeléctricos (pI),
son los siguientes: X= 5,5; Y= 9,0 y Z= 7,1. Explique cómo podría obtener cada una
de ellas en forma pura utilizando una cromatografía de intercambio iónico.

9) Describa como podría separar la hemoglobina A (HbA) y de la hemoglobina

glicosilada (HbA1c) mediante una cromatografía de intercambio aniónico,
conociendo que los puntos isoeléctricos (pI) de la HbA y de la HbA1c son 6,9 y 6,3
respectivamente.
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Caso Clínico

A Rodrigo, un joven de 11 años de edad, proveniente de Curiepe, Estado Miranda,

se le diagnosticó en su pueblo anemia y lo envían a Caracas para estudiar cuál es
la causa de la misma. Interrogando a la madre se supo que en la infancia presentó
en 2 oportunidades dolor y edema (hinchazón) en manos y pies y necesitó
hospitalización por una neumonía. Durante la evaluación se aprecia déficit de peso,
palidez en piel y mucosas y cicatrices de úlceras en los tobillos.

En los exámenes de laboratorio se muestran unos valores de hemoglobina: 7 g (VN:

12 – 16 g) y hematocrito: 25% (VN: 35 – 45%). Se realizó un frotis de sangre
periférica y se observaron glóbulos rojos en forma de hoz, lo cual hizo sospechar la
presencia de anemia de células falciformes.

Se examinaron las propiedades fisicoquímicas de la hemoglobina normal y de la

hemoglobina del paciente y se realizaron pruebas electroforéticas, encontrándose
un punto isoeléctrico de la hemoglobina falciforme oxigenada de 7,09, ligeramente
superior al de la hemoglobina normal que es de 6,87. Esto indicó que existía una
variación del número o clase de grupos ionizables entre las dos hemoglobinas.

Responde las siguientes preguntas:

- Compara la estructura general de la mioglobina con la de la hemoglobina.

- Dibuja y compara las curvas de oxigenación de la mioglobina y la hemoglobina.
¿Por qué al hablar de la concentración de O2 nos referimos a presión parcial?
- Explica los cambios en la estructura cuaternaria de la hemoglobina al unir
oxígeno que explican el efecto cooperativo observado en la curva de
oxigenación.
- ¿Cómo está el pH en los tejidos hipóxicos y cómo influye este pH sobre la
estructura de la hemoglobina y el transporte de oxígeno?
- ¿Existe algún mecanismo mediante el cual se modifique la afinidad de la
hemoglobina por el oxígeno? ¿Qué pasa con los niveles de 2,3-
bisfosfoglicerato?
- Compara la estructura y la afinidad por el oxígeno de la Hemoglobinas A, F y S.
- ¿Cómo se modifica la estructura de la Hb S? ¿Cuáles niveles de organización
estructural se ven afectados?

- ¿Por qué se deforman los glóbulos rojos? ¿Cuáles son las consecuencias de
esta deformación?
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- Explique por qué el pI de la Hb S está aumentado con respecto al de la HbA.

- ¿Cómo harías para separar ambas proteínas en una electroforesis?

Investiga en línea

Es muy importante que revises los videos, ejercicios y animaciones que están en
el Campus Virtual de la asignatura dentro del tema 4.

Realiza la siguiente lectura:

Los glóbulos rojos son células que carecen de núcleo y de mitocondrias, cuya
función es el transporte de oxígeno a los tejidos. Están constituidos por grandes
proporciones de hemoglobina, una proteína conjugada que contiene una porción
proteica, las globinas y una porción no proteica, la ferroprotoporfirina o grupo hemo.
La hemoglobina tiene un peso molecular aproximado de 65.000 KDa, es un
tetrámero, que consta de 4 cadenas polipeptídicas, cada una de las cuales está
unida a un grupo hemo. Cada grupo hemo cuenta con un átomo de hierro, que fija
una molécula de oxígeno y la transporta desde los pulmones hasta los tejidos. Las
moléculas de hemoglobina se forman por combinación de cadenas peptídicas que
pueden ser de globina alfa, beta, gamma y delta (, ,  y . Las moléculas de
hemoglobina se forman por la combinación de dos cadenas  con dos  o . La
Hemoglobina de una persona adulta normal se designa por hemoglobina A1= 22
y de igual forma, la hemoglobina fetal se designa como hemoglobina F= 22
Estructura Primaria
Se refiere a la secuencia de aminoácidos, es decir, la combinación lineal de los
mismos mediante un enlace covalente tipo amida, el enlace peptídico. Las cadenas
de globina están constituidas por residuos de aminoácidos; la cadena  globina
contiene 141 residuos y 146 la cadena de globina . Existen otros dos tipos de
cadenas de globina,  y  que contienen 146 residuos de aminoácidos, que se
asemejan mucho a la estructura primaria de la  globina, presentando solo 39
residuos de aminoácidos diferentes con la globina y solo 10 con la cadena .
Estructura Secundaria
Es la disposición espacial local del esqueleto proteico, gracias a la formación
de puentes de hidrógeno. La orientación más frecuente de las cadenas
polipeptídicas puede ser alfa hélice (-hélice), hoja beta plegada (hoja  plegada) y
al azar.
El porcentaje de contenido de -hélice en las proteínas globulares es bastante
variable, en el caso de la hemoglobina su contenido de -hélices es de un 75%.
Existen principalmente dos factores que pueden interrumpir la orientación helicoidal:
la presencia del aminoácido prolina que provoca una torsión de la cadena y las
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fuerzas electrostáticas localizadas de repulsión debido a un conjunto de grupos -R

cargados positivamente (lisina, arginina, histidina), o negativamente (ácidos
glutámico y aspártico). Del aminoácido 43 al 52, se forma una estructura de hoja 
plegada, la cual se identifica por no formar una hélice sino una cadena en forma de
zigzag.
Estructura Terciaria
Es el modo en el que la cadena polipeptídica se pliega en el espacio. Es la
disposición de los dominios proteicos en el espacio. Los grupos hemo de la
hemoglobina, están localizados en orificios hidrofóbicos y están anclados a la
cadena polipeptídica mediante un enlace coordinado del ión hierro con la histidina
proximal (His F8), mientras el otro enlace de coordinación del ión está disponible
para el transporte del oxígeno. Como en todas las proteínas existe una naturaleza
anfipática, la cual hace que se puedan identificar diferentes regiones que presenten
mayor o menor polaridad, esto depende de los tipos de residuos que compongan la
región. También existen fuerzas de Van der Waals, interacciones electrostáticas o
puentes salinos, que le confieren estabilidad a la estructura de la hemoglobina.
Estructura Cuaternaria
Deriva de la conjunción de varias cadenas peptídicas asociadas, conformando
un multímero, que posee propiedades distintas a la de sus
monómeros componentes. Dichas subunidades se asocian entre sí mediante
interacciones no covalentes, como pueden ser puentes de hidrógeno, interacciones
hidrofóbicas o puentes salinos.
La hemoglobina es una proteína globular, en la que las cuatro cadenas están
empaquetadas conjuntamente en disposición tetraédrica. La unidad funcional de la
hemoglobina es un tetrámero que consta de dos clases de cadenas polipeptídicas.
Cuando se produce la oxigenación de la hemoglobina, los dímeros 11 y 22
rotan aproximadamente 15 grados el uno respecto al otro. La estructura de la
hemoglobina completamente oxigenada es conocida como el estado R (Relajado),
ya que las interacciones entre sus subunidades se encuentran debilitadas (o
relajadas). La estructura cuaternaria observada en el estado desoxigenado de la
hemoglobina se conoce como el estado T (Tenso), ya que las interacciones entre
sus subunidades son fuertes.
Al desencadenar el paso del estado T al estado R, el enlace de un oxígeno aumenta
la afinidad de otros sitios de enlace. El ión ferroso arrastra a la histidina proximal
cuando se introduce en el plano de la porfirina. Este movimiento de la histidina F8
provoca una alteración de la estructura hélice F y en los acodamientos EF y FG.
Estos cambios conformacionales se transmiten a las interfaces de las subunidades
ocasionando la ruptura de los enlaces salinos intercatenarios lo que provoca que la
proteína cambie a la forma R.

¿Cómo se determinó la diferencia entre la hemoglobina normal y la

falciforme?
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Para estudiar la hemoglobina y determinar su estructura fue necesario utilizar

técnicas bioquímicas convencionales, tales como la electroforesis sobre acetato de
celulosa a pH alcalino y sobre citrato agar a pH ácido, cromatografía de intercambio
iónico y métodos de desnaturalización por álcalis.
La electroforesis, permitió determinar el punto isoeléctrico de la hemoglobina normal
oxigenada (pI=6,87), ya que a ese pH la carga neta de la proteína es cero y no
existe movilidad cuando se somete a un campo eléctrico. Cuando se estudió la
hemoglobina falciforme oxigenada se determinó que su pI=7,09. Esta diferencia
sugirió que existía una variación del número o clase de grupos ionizables entre las
dos hemoglobinas. En una disolución de hemoglobina el cambio de una unidad de
pH se asocia con el cambio de alrededor de 13 cargas de la proteína. La diferencia
entre los pI de ambas proteínas es de 0,23 y corresponde aproximadamente a unas
tres cargas por molécula de hemoglobina.

La etapa siguiente del estudio consistió en fragmentar las proteínas por hidrólisis
con proteasas (enzimas capaces de romper enlaces peptídicos). Después, se
separaron estos fragmentos por electroforesis, pero existía mucho solapamiento
entre ellos (se superponían las bandas), por lo que se utilizó otro método de
separación: cromatografía de intercambio iónico. Se observó que la diferencia entre
las dos hemoglobinas se encontraba en un fragmento peptídico de 8 aminoácidos.
Se secuenció dicho péptido y se determinó que la diferencia entre las hemoglobinas
S y A se debía al cambio de un aminoácido en la posición 6, encontrándose que la
hemoglobina S contenía valina en lugar de glutamato.

La cadena lateral de la valina es apolar, por lo que con el cambio aparece un

“parche” hidrófobo en la superficie de la molécula, mientras que el glutamato es
polar. Esta alteración reduce marcadamente la solubilidad de la hemoglobina S
desoxigenada, pero tiene poco efecto sobre la solubilidad de la Hb S oxigenada.

Como resultado de estos estudios se determinó que los pacientes con anemia
falciforme tienen hemoglobina S pero no hemoglobina A, mientras que los pacientes
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con rasgos falciformes (portadores de un solo alelo), tienen ambas clases de

hemoglobina en cantidades aproximadamente iguales.

Fig. Determinación de las variantes de la hemoglobina por cromatografía.

Anemia Drepanocítica

La anemia de células falciformes, drepanocitosis o anemia drepanocítica, es una

enfermedad que afecta la hemoglobina, una proteína que forma parte de los
glóbulos rojos y se encarga del transporte de oxígeno. En esta enfermedad ocurre
una sustitución de un aminoácido, ácido glutámico por valina en la sexta posición
de la cadena beta globina 1 de la hemoglobina. El ácido glutámico tiene carga
negativa (aminoácido polar con carga) y la valina es hidrófoba, entonces al ocurrir
la sustitución se forman nuevos contactos entre la valina y otros aminoácidos
hidrófobos de la hemoglobina, lo que promueve la formación de polímeros cruzados
que deforman el glóbulo rojo, esto provoca que a menor presión de oxígeno, el
eritrocito se deforme y adquiera apariencia de una hoz. La nueva forma provoca
dificultad para la circulación de los glóbulos rojos, por ello se obstruyen los vasos
sanguíneos y se desencadenan síntomas como dolor en las extremidades, ya que
los glóbulos rojos no pueden pasar a través de los capilares y las vénulas y causan
obstrucciones en los vasos, lo que producirá esos episodios periódicos de dolor.

Los glóbulos rojos normales son bicóncavos y duran unos 120 días en la corriente
sanguínea, mientras que los hematíes falciformes tienen una vida media más corta,
duran sólo unos 10 a 20 días y tienen forma de hoz. Este acortamiento de la vida
media de los glóbulos rojos anormales explica la anemia que se produce en estos
pacientes ya que las células sanguíneas no pueden reponerse en tan corto tiempo.

La transformación del eritrocito se produce cuando no transporta oxígeno, pues con

oxihemoglobina, el glóbulo rojo tiene la forma clásica bicóncava. Después de que
estas moléculas de hemoglobina entregan su oxígeno, algunas de ellas se agregan
formando fibras poliméricas, que deforman el hematíe, de modo que pierde
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elasticidad y toma una forma alargada y encorvada (falciforme, en forma de hoz).

Durante mucho tiempo se ha reconocido que los niveles elevados de hemoglobina

fetal (Hemoglobina F) pueden mejorar los efectos clínicos de la anemia de células
falciformes. Esto es porque la hemoglobina fetal dificulta la formación de polímeros
de la hemoglobina falciforme dentro del eritrocito. Cuanto mayor sea la cantidad de
hemoglobina fetal, mayor será la inhibición.

Algunas personas tienen más Hemoglobina F que otras. Las personas que padecen
de la enfermedad de células falciformes y poseen niveles más altos de Hemoglobina
F generalmente sufren menos complicaciones de la enfermedad.

El tratamiento con hidroxiurea eleva los niveles de hemoglobina fetal en la anemia

falciforme, lo que ayuda a que los glóbulos rojos permanezcan redondos y flexibles.
Su uso parece conseguir varios efectos entre los que se encuentran:

 Aumento de la Hemoglobina F: es beneficioso por disminución compensatoria

de los otros tipos de Hemoglobina y porque los tetrámeros de Hemoglobina F se
pueden disociar a dímeros y formar híbridos con los dímeros de Hemoglobina S,
los cuales no tienden a polimerizarse.
 La hidroxiurea se descompone parcialmente en óxido nítrico, un potente
vasodilatador.
 Disminuye la adhesividad de los hematíes.