Informe 9 ANALITICA

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA
MOLINA
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA
CURSO: QUÍMICA ANALÍTICA-LABORATORIO

INFORME DE PRÁCTICA N°9
TÍTULO: Espectroscopia de absorción molecular UV-VIS

Determinación de Absortividad Molar y Longitud de Onda de máxima
absorbancia
Alumno Código
Bullón Lizama, Carlo 20170225
Lecca de la Fuente, 20170415
Marcelo
Salazar Sandi, Walter 20170261
Tasayco Goicochea, Luis 20161461
Horario de práctica: martes (11:00 am-1:00 pm)

Profesora: Melissa Rabanal
Fecha de práctica: 06/11/2018
Fecha de Entrega: 13/11/2018
LA MOLINA-LIMA-PERÚ
Objetivos
 Calcular la absortividad molar y longitud de máxima absorbancia de una
muestra a partir de un espectro de absorción.
 Construir una curva de calibración.
Resumen
Determinar la absortividad molar y longitud de máxima absorbancia de un
cromóforo a partir de un espectro de absorción y construir una curva de
valoración.
Para comenzar con la medición de la absortividad molar, se usará el reactivo o
solución madre de permanganato de potasio (KMnO 4) a una concentración molar
de 0.2M, el cual se tomará 10ml de este y se enrasará a una fiola de 100ml para
preparan una solución de concentración que cumpla con la ley de Lambert y Beer.
Posteriormente se tomarán 7 tubos de ensayo a los cuales se les verterá la
solución madre diluida, con volúmenes de 0.5, 1, 2, 3, 4, 5ml y un tubo blanco;
estos tubos se enrasan a 10ml con ácido sulfúrico (H 2SO4) a una concentración
molar de 0.25M, los 10ml del tubo blanco serán de este ácido. Por consiguiente, el
tubo blanco y las demás muestras se llevarán a un espectrofotómetro UV-VIS, el
cual tiene una capacidad de 3 tubos muestra. Lo siguiente que se hará, será llevar
el tubo blanco y otros 2 tubos de muestra al espectrofotómetro, en primer lugar, a
400nm de longitud de onda, luego cada 5nm y se apuntará en una tabla y se irá
graficando la curva de calibración, hasta más allá de llegar a λ óptimo. Podrían
aparecer en la curva pequeñas oscilaciones debido a la medición o alguna
contaminación. Finalmente, una vez obtenido el λ óptimo, cada muestra se llevará
a ese λ y se apuntará en otra tabla.
Con su respectivo cuidado al usar el espectrofotómetro UV-VIS, se llegó a conocer
que el λ óptimo fue de 525nm.
Introducción
La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados que mide la

respuesta de la interacción de la materia con la radiación electromagnética. Tal
respuesta puede ser una absorción, una emisión, una difracción, una refracción,
una dispersión o una rotación. (Palma, 2017), y se basa en la relación que existe
entre la absorción de luz por parte de un compuesto y su concentración. Cuando
se hace incidir luz monocromática (de una sola longitud de onda) sobre un medio
homogéneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el medio y otra
transmitida, como consecuencia de la intensidad del rayo de luz sea atenuada
desde Po a P, siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la intensidad del rayo
de luz transmitido. Dependiendo del compuesto y el tipo de absorción a medir, la
muestra puede estar en fase líquida, sólida o gaseosa. En las regiones visibles y
ultravioleta del espectro electromagnético, la muestra es generalmente disuelta
para formar una solución. La espectrofotometría de absorción molecular se basa
en la absorción, por parte del analito, de radiación electromagnética de la región
ultravioleta y visible del espectro. La radiación ultravioleta corresponde a
longitudes de onda desde 10 a 380 nm aproximadamente. (Bermejo, 2014)
La espectrometría UV-visible se refiere a técnicas donde se mide cuánta luz de

una longitud de onda particular (color) es absorbida por una muestra. Ya que el
color a menudo puede correlacionarse con la presencia y/o la estructura de una
sustancia química particular, y ya que la absorbancia es una medida fácil y barata
de hacer, la espectrometría de absorbancia se usa ampliamente en cálculos
cualitativos, cuantitativos y estructurales. Por ejemplo, el ADN absorbe luz en el
rango ultravioleta (por eso la luz del sol es peligrosa), y por tanto la cantidad de
ADN en una muestra puede ser determinarse midiendo la absorbancia de la luz
ultravioleta.La relación entre el color visible y el color de absorbancia es
complicada; una muestra que parece roja no absorbe en el rojo, sino que absorbe
en otras longitudes de onda (colores) de modo que la luz que pasa por la muestra
se enriquece en rojo.
La palabra "color" se usa para indicar que la espectrometría de absorbancia no
sólo trata con la luz en rango visible (fotones con una longitud de onda de
aproximadamente 400 a 700 nanómetros), sino también con longitudes de onda
que están fuera del rango de la visión humana (infrarrojo, ultravioleta, rayos X). Sin
embargo, los principios son bastante similares tanto para la luz visible como para
la no visible.
Parte Experimental
Elaboración del espectro de absorción:
Para encontrar el λóp se hicieron medidas en el espectrofotómetro de la solución estándar,
estas medidas nos mostraban la absorbancia de cada longitud de onda, la longitud de
onda que tenga una mayor absorbancia sería la λóp.
Preparación de la solución estándar:
De una solución madre de KMnO 4 0.02M se toman 10mL y se enraza con H 2SO4 0.25M
en una fiola de 100mL.
0.02mol de KMnO4 ---------------- 1000mL

0.0002mol de KMnO4 ------------- 10mL
0.0002mol de KMnO4 ---------------- 100mL de solución en la fiola
0.002mol de KMnO4 ------------------ 1000mL
Entonces la concentración de la solución estándar = 0.002M
A λ A λ A λ
0.186 400 0.674 470 2.984 540
0.119 405 0.806 475 3.01 545
-0.076 410 0.96 480 2.451 550
0.053 415 1.21 485 2.154 555
0.043 420 1.449 490 1.89 560
0.047 425 1.59 495 1.808 565
0.061 430 1.87 500 1.726 570
0.082 435 2.152 505 1.376 575
0.115 440 2.3 510 0.913 580
0.156 445 2.507 515 0.594 585
0.22 450 3.01 520 0.423 590
0.299 455 3.24 525 0.358 595
0.376 460 3.01 530 0.325 600
0.493 465 2.99 535
3.5
2.5
Absorbancia (A)
1.5
0.5
0
350 400 450 500 550 600 650
-0.5
Longitud de onda λ (nm)
Construcción de la curva de calibración:

De la solución estándar sacaremos seis alícuotas de diferente volumen (0.5; 1; 2; 3; 4 y
5mL) para seis tubos de muestra distintos, estos tubos serán enrasados con H 2SO4 0.25M
hasta llegar a un volumen de 10mL de solución por cada tubo de muestra, las soluciones
de cada tubo serán medidas en el espectrofotómetro el cual nos mostrará su respectiva
absorbancia. Adicionalmente se prepara un tubo blanco (solo 10mmL de H2SO4 0.25M)
que también será llevado al espectrofotómetro.
Tubo 1:
0.002mol de KMnO4 ------------------ 1000mL
0.000001mol de KMnO4 -------------- 0.5mL (alícuota)
0.000001mol de KMnO4 -------------- 10mL (solución enrasada)
C1 = 0.0001M
Tubo 2
0.002mol de KMnO4 ------------------ 1000mL
0.000002mol de KMnO4 -------------- 1mL (alícuota)
C2 = 0.0002M
Tubo 3
0.002mol de KMnO4 ------------------ 1000mL
C3 = 0.0004M
Tubo 4
0.002mol de KMnO4 ------------------ 1000mL
C4 = 0.0006M
Tubo 5
0.002mol de KMnO4 ------------------ 1000mL
0.000008mol de KMnO4 -------------- 10mL (solución ya enrasada)
C5 = 0.0008M
Tubo 6:
0.002mol de KMnO4 ------------------ 1000mL
0.00001mol de KMnO4 -------------- 10mL (solución ya enrasada)
C6 = 0.001M
Tubo blanco
0.002mol de KMnO4 ------------------ 1000mL
0mol de KMnO4 ------------------------ 0mL (alícuota)
0mol de KMnO4 ------------------------ 10mL (solución ya enrasada)
CB = 0
Datos obtenidos del espectrofotómetro:
Tubo (mL de reactivo de Concentración mol/L Absorbancia a λÓP = 525nm
color)
1. (0.5mL) 0.0001 0.155
2. (1mL) 0.0002 0.329
3. (2mL) 0.0004 0.663
4. (3mL) 0.0006 1.009
5. (4mL) 0.0008 1.340
6. (5mL) 0.001 1.683
Blanco (0mL) 0 0
Curva de calibración:
1.8
1.6
1.4
1.2
Absorbancia
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 0 0 0 0 0 0
Concentración
Discusiones
Un objetivo principal fue graficar la curva de calibración en donde se observa la
relación entre el nivel de absorbancia y la longitud de onda de determinadas
muestras, las cuales fueron previamente preparadas utilizando distintos pesos de
permanganato de potasio de concentración conocida y enrasando hasta 10 ml con
ácido sulfúrico también de concentración conocida. En este proceso debemos
considerar un posible error al momento de agregar la cantidad determinada de
permanganato de potasio como también al enrasar cada tubo de ensayo hasta 10
ml con ácido sulfúrico
También debemos considerar la posibilidad de alguna impureza tanto en la
muestra de permanganato de potasio como en la de ácido sulfúrico con el que se
enrasó, estos factores pudieron influir en la lectura del espectrofotómetro UV-
visible alterando así la curva de calibración. Además, siempre se debe asegurar
que el espectrofotómetro UV – visible este libre de otras sustancias o polvo que
pueda actuar como una interferencia en la misma lectura
Por otro lado, una vez que el analista logra ser más observador con el
espectrofotómetro, hay situaciones en las que el analista se va a percatar que el
valor de la absorbancia que este equipo de laboratorio nos brinda, oscila entre dos
valores durante un tiempo lo suficientemente largo como para que el analista
tenga que tomar una decisión de cual valor tomar, debido a la posible aleatoriedad
de esta decisión, debemos tomar en cuenta esto en el error experimental de uno
de los datos
Finalmente, muchos cuidados de limpieza y precisión al agregar las sustancias,
jugaron un papel importante para que la curva de calibración saliera lo más
acertada posible, con el objetivo de verificar el cumplimiento de la ley de Beer y
obteniendo una regresión de 0.99.
Conclusiones
- La absortividad molar y la longitud de onda de máxima absorbancia
dependen de cada sustancia y varía la longitud de onda.
- la absorbancia varía de forma directamente proporcional con la
concentración de la sustancia absorbente a una determinada longitud de
onda.
- El λop nos salio 525 nm según la prueba con el espectrofotómetro que se
realizo
Bibliografía
 Bermejo Moreno, R. (2014). Análisis instrumental (1 ed.). Madrid: Sintesis.
 Bermejo J. G. (2003). Manual de Auxiliar de Laboratorio, Temario
General. MAD-Eduforma Sevilla.
 Titulaciones conductimetricas. Educacion química.
http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qa2/guias/2010-TP-08-
Titulaciones_Conductrimetricas.pdf
Cuestionario
9.1. ¿Cuál es el propósito e hipótesis de la práctica 9?
 Propósito: calcular la absortividamolar y longitud de máxima absorbancia de

un cromóforo a partir de un espectro de absorción y construir una curva de
calibración.
 Hipótesis: La absortividad molar y la longitud de onda máxima absorbancia
depende de cada sustancia y varía con la longitud de onda.La absorbancia
varía en forma directamente proporcional con la concentración de la
sustancia absorbente a una determinada longitud de onda.
9.2. ¿Cree usted que ha logrado esa competencia?
 Si, ya que se logró graficar la curva de valoración de la absorbancia y

reconocer que la absortividad molar y la longitud de onda depende de cada
sustancia.
9.3. Explique la espectroscopia de absorción molecular UV – VIS.
Aplicaciones.
 Esta técnica se basa en la absorción, por parte del analito, de radiación

electromagnética de y visible de la región ultravioleta (UV) y visible del
espectro. La radiación ultravioleta corresponde a longitudes de onda desde
10 a 380 nm aproximadamente. En la espectroscopia UV se hace uso
únicamente de la región denominada ultravioleta próximo, de 180 a 380 nm,
ya que la radiación UV entre 10 y 180 nm (UV lejano) es absorbida por el
oxígeno del aire, por lo que se hace necesario llevar a cabo las medidas en
ausencia de este gas, lo que resulta en un mayor grado de complejidad
instrumental. Por otro lado la región visible del espectro se extiende desde
los 380 a los 780 nm.
(Bermejo, Moreno, 2014).
 Aplicaciones:
Aplicable en muestras de disolución. También se aplica en muestras de
gaseosas, utilizando para ello celdas cilíndricas en las que el paso óptico es
mucho mayor que en las cubetas para líquidos, e incluso a muestras
solidas ( fibras, películas, solidos, pulverulentos o de superficie rugosa),
mediante la técnica de reflectancia difusa.
Transformación de especies no absorbentes en absorbentes, se utiliza para
la determinación directa de un gran número de especies orgánicas,
inorgánicas y bioquímicas. Mayor campo de aplicación se encuentra en el
análisis cuantitativo. (Bermejo, Moreno,2014)
9.4. ¿Qué son los colores complementarios?. Explique
 Indica la porción de radiación electromagnética que no absorbe la muestra
y que por tanto es transmitida a través de ella y puede ser captada por el
ojo humano ( color de la disolución).
9.5. Título, competencia e hipótesis de la presente práctica
 Título: Determinación espectrofotométrica de cromo y manganeso.
 Competencia: Determinar cromo y manganeso por espectrofotometría de
absorción molecular en el rango visible tanto en forma independiente como
en mezcla.
 Hipótesis: El cromo dicromato y el manganeso como permanganato
absorben radiación en el rango visible y puede determinarse por
espectrofotometría de absorción molecular y estos mismos en mezcla
pueden determinarse simultáneamente por la aditividad de las
absorbancias.
9.6. Explique la aditividad de absorbancias. Use ecuaciones.

 La ley de aditividad de absorbancias establece que la absorbancia total de
varios analitos en una mezcla es la suma de las absorbancias que tendrían
los analitos en disolución individuales con las mismas concentraciones que
las que tienen en mezcla.
Atotal=A1+A2+A3+...=E1bc1+E2bc2+E3bc3+...
9.7. Explique la Ley de Lambert y Beer. Defina Transmitancia y
absorbancia, ¿ Cuál es la relación entre ellos?
La ley de Lambert beer nos dice que la absorbancia es directamente proporcional a
la concentración responsable de la absorción en una radiación monocromática.
La absorbancia se define como:
A= log(1/T)
La Transmitancia se define como:
T= Ii/ I0
A medida que la energía se transfiere desde la radiación electromagnética a la
materia, se produce una disminución de la transmitancia y un aumento de la
absorbancia.
9.8. Dibuje los componentes generales de un espectrofotómetro de
absorción molecular. Indique cuál es la función de cada uno.
 Una Lámpara o fuente de radiación, con una potencia de emisión

suficientemente elevada como para poder detectar y medir con precisión la
radiación electromagnética. Las cubetas que contienen la muestra, un
detector de radiación para convertir la energía radiante en una señal
eléctrica visible y un colimador para homogeneizar los rayos emitidos por la
fuente que salen en todas las direcciones.
9.9. ¿ Qué es una curva de calibración y cómo se construye?¿ Cómo de

muestra si la relación es lineal o cumple con la ley de Lambert y Beer.
 Una curva de calibración es un gráfico que relaciona la absorbancia con la
concentración del analito. Se construye midiendo soluciones de
concentración conocida y midiendo las absorbancias a la longitud de onda
de máxima absorbancia. La relación es lineal si el coeficiente de regresión
es muy cercano a 1.

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La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados que mide la

La espectrometría UV-visible se refiere a técnicas donde se mide cuánta luz de

0.02mol de KMnO4 ---------------- 1000mL

Construcción de la curva de calibración:

 Propósito: calcular la absortividamolar y longitud de máxima absorbancia de

 Si, ya que se logró graficar la curva de valoración de la absorbancia y

 Esta técnica se basa en la absorción, por parte del analito, de radiación

9.6. Explique la aditividad de absorbancias. Use ecuaciones.

 Una Lámpara o fuente de radiación, con una potencia de emisión

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